-基因毒性雜質控制課件

1、關于基因毒性雜質的控制華海藥業(yè)原料藥研發(fā)部王鵬目錄一、基因毒性雜質的相關概念什么是基因毒性雜質基因毒性雜質的風險可接受風險的攝入量（TTC）二、TTC值的風險評估有實驗依據的TTC值的確認無實驗依據的TTC值的確認含有多個基因毒性雜質的評估藥學評估毒理學評估風險評估流程TTC值的應用什么是基因毒性雜質？對于基因毒性雜質的定義主要是指：在以DNA反應物質為主要研究對象的體內/體外試驗中，如果發(fā)現(xiàn)它們對DNA有潛在的破壞性，那可稱之為基因毒性。對沒有進行體內實驗的情況下，也可以根據關聯(lián)系做一些相關的體外實驗去評估該物質在體內的毒性。如果沒有關聯(lián)評估的，體外基因毒性物質經常被考慮為假定的體內誘變劑和

2、致癌劑。GUIDELINE ON THE LIMITS OF GENOTOXIC IMPURITIES （EMEA/CHMP/QWP/251344/2019） 基因毒性雜質的風險按照目前的法規(guī)來說，（體內）基因毒性物質在任何攝入量水平上對DNA都有潛在的破壞性，這種破壞可能導致腫瘤的產生。因此，對于基因毒性致癌物，不能說“不存在明顯的閥值，或是任何的攝入水平都具有致癌的風險”。 可接受風險的攝入量對于那些可以與DNA進行反應的化合物，由于在較低的劑量時機體保護機制可以有效的運行，按照攝入量由高到低所造成的影響進行線性推斷是很困難的。目前，對于一個給定誘變劑，我們很難從實驗方面證明它的基因毒性存

3、在一個閥值。特別是對某些化合物，它們可以與非DNA靶點進行反應，或一些潛在的突變劑，在與關鍵靶位結合之前就迅速失去了毒性。由于缺乏支持基因毒性閥值存在的有力證據，而使得我們很難界定一個安全的服用量。所以有必要采取一個新觀點：確定一個可接受其風險的攝入量?？山邮茱L險的攝入量可接受其風險的攝入量一般通用的被定義為 Threshold of Toxicological Concern (TTC) 。具體含義為：一個“1.5ug/day”的TTC值，即相當于每天攝入1.5ug的基因毒性雜質，被認為對于大多數藥品來說是可以接受的風險（一生中致癌的風險小于100000分之1）。按照這個閥值，可以根據預期的

4、每日攝入量計算出活性藥物中可接受的雜質水平。在特定的條件下一些基因毒性雜質也可以有較高的閾值。如接觸時間比較短等，這個需要根據實際情況再進行推算。必須要強調的是TTC是一個風險管理工具，它使用的是概率方法，意思為：假如有一個基因毒性雜質，并且我們對它的毒性大小不太了解，如果它的每日攝入量低于TTC值，那么它的致癌的風險將不會高于110-5的概率。所以TTC不能被理解為絕對無風險的保障。有實驗依據的TTC值的確認有足夠的（實驗性的）證據來支持閥值界定的基因毒性雜質對于這類有足夠的證據來表明其基因毒性閥值的化合物，可以參考“Q3C Note for Guidance on Impurities:

5、Residual Solvents.”中2級溶劑的規(guī)定，計算出了一個“允許的日攝入量”（PDE）。無實驗依據的TTC值的確認沒有足夠的（試驗性的）證據來支持閥值界定的基因毒性雜質不能進行閥值鑒定的基因毒性雜質的可接受劑量評價應該包括藥學的和毒理學的評價。一般來說，如果避免毒性是不可能的，那么藥學的評價措施應該以ALARP的 （ as low as reasonably practicable）控制水平為指導原則。含有多個基因毒性雜質的評估EMEA CHMP結構不同的單個雜質的限度應該小于1.5ug/day結構相似的雜質總和的限度應該小于1.5ug/dayFDA（和EMEA類似）單個雜質造成的癌

6、癥風險機率應該小于10-5有相同作用機制的結構相似的雜質，其含量總和應該參考1.5ug/day的限量進行評估。含有多個基因毒性雜質的評估單個基因毒性雜質可以參考文獻來確定。多個基因毒性雜質（3個以下）積累的風險相對于單個雜質的風險上升不大，可以忽略。藥物中含有3個基因毒性雜質，不管結構是否相似，在法規(guī) 中是允許的（只要有充分的數據）。存在四個以及以上的基因毒性雜質的時候，需要根據實際情況考慮。藥學評價 應該根據現(xiàn)有的配方選擇和生產技術，提供生產方法的合理性。申請人應該指明涉及到的所有具有基因毒性或有致癌性的化學物質，如所用試劑、中間體、副產品等。更進一步，在藥物活性物質中沒有出現(xiàn)的基因毒性反應

7、物和有基因毒性結構（alerting structure）的物質，都應該被考慮。實際生產中盡量避免使用該類物質。藥學評價如果在合成路線、起始物料方面沒有更好選擇，則需要提供一個正當的理由。就是物質中能引起基因毒性和致癌性的結構部分在化學合成是不可避免的。假如基因毒性雜質被認為是不可避免的，那么應該采取技術手段盡可能的減少基因毒性雜質在產品中的含量，使其符合安全的需要或使其降低到一個合理的水平。對于活性中間體、反應物、以及其它化合物的化學穩(wěn)定性都應該進行評估。應該有合理的分析方法去檢測和量化這些雜質的殘留量?；蚨拘噪s質磺酸鹽的風險評估 臨床研究發(fā)現(xiàn)甲磺酸酯的DNA 烷基化作用會導致誘變效應 ，

8、其中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯已有這方面報導，因此有理由懷疑其它低分子量磺酸（如對甲苯磺酸）的烷基酯可能也存在著類似的毒性影響。盡管無數據表明這些酯對人的毒性影響，然后依然有上述基因毒性物質以雜質的形式存在于含磺酸酯類藥物活性成分的藥品中的潛在風險。 EMEA/44714/2019 基因毒性雜質磺酸鹽的風險評估甲磺酸烷基酯，如甲磺酸甲酯（MMS）和甲磺酸乙酯（EMS），是甲磺酸與甲醇，乙醇，或其它低級醇形成的酯。特別是在以甲磺酸鹽或甲磺酸酯形式存在的藥物活性成分中或其合成過程中用到了甲磺酸的藥物活性成分中，甲磺酸烷基酯會被視為潛在雜質。 在以羥乙基磺酸鹽，苯磺酸鹽和對甲苯磺酸鹽形式存在的藥物活性成

9、分中也會發(fā)現(xiàn)類似的磺酸烷基酯或芳基酯污染。需說明出現(xiàn)這些污染的風險。 藥物活性成分的生產是否涉及到在甲磺酸（或羥乙基磺酸，苯磺酸，對甲苯磺酸）或相應的酰氯存在的情況下，使用了低級脂肪酯，如甲醇，乙醇，正丙醇或異丙醇的情況？如果是這種情況的話，甲磺酸烷基酯或類似苯磺酯烷基酯和對甲苯磺酸烷基酯的形成可能性是否已被降至最低？是否存在有效的精制步驟？設備（特別是接觸到磺酸試劑的設備）的清洗程序是否涉及到低級脂肪醇的使用？是否有適宜的質量標準和已驗證的分析方法可以證實藥物活性成分中的磺酸烷酯或磺酸芳基酯雜質處于TTC以下？是否檢查了起始物料，如甲磺酸鹽（苯磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽，羥乙基磺酸），中的烷基磺酸

10、酯或芳基磺酸酯雜質（如甲磺酸中的EMS 和MMS）及相應的酰氯？是否有這些雜質的適宜標準和驗證過的方法？當被磺酸酯或相關物質所污染了的磺酸作為起始物料用于藥物活性成分時，是否能保證藥物活性成分中潛在基因毒性雜質不超過其TTC值？應當要考慮各種烷基或芳基取代磺酸酯雜質的累加風險。如在藥物活性成分生產的最后一步合成步驟用到了磺酸衍生物，應將其納入風險分析。是否對回收溶劑中磺酸酯類雜質（如，乙醇中的EMS，甲醇中的MMS，異丙醇中的IMS） 的富集和殘留進行了控制？是否能排除以甲磺酸鹽，羥乙基磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽或苯磺酸鹽形式存在的藥物的活性成分，或其相關制劑，在儲存過程中形成烷基或芳基磺酸酯？是否

11、能排除以甲磺酸鹽，羥乙基磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽或苯磺酸鹽形式存在的藥物活性成分在制成最終制劑的過程中形成烷基或芳基磺酸酯，如在制粒過程中使用了醇？是否有足夠靈敏的的方法可以檢測到制劑中的（處于TTC水平的）這些雜質？ 基因毒性雜質鹵代烴的風險評估有數據表明氯乙烷、氯甲烷為基因毒性雜質，因此有理由懷疑其他低分子鹵代烴類也有類似的作用。在生產中應該對其進行相應的控制。在氨基物鹽酸鹽使用醇類溶劑精制的時候，基本都會產生鹵代烴。產生的條件和溫度、水分、濃度、時間等有關系。對于控制低級鹵代烴的方法可以參考控制甲磺酸酯的相關建議?；蚨拘噪s質鹵代烴的風險評估毒理學評價 為一個不存在閥值的基因毒性致癌物定義一

12、個安全的攝入量水平（零風險觀點）是不可能的，并且從活性藥物成分中完全的除去基因毒性雜質經常是很難做到。這樣就要求我們建立一個可接受的風險水平，例如對一個低于可忽略風險的每日攝入量進行評價。但是這些方法都需要有足夠的長期致癌性研究數據。毒理學評價對于可接受風險水平的推導過程參見Q3C Note for Guidance on Impurities: Residual Solvents for Class 1 solvents。 附件三。Decision TreeTTC的應用有幾個結構基團被認定為具有非常高的基因毒性，它們即使被攝入低于TTC值的量也會面臨非常高的基因毒性風險。這一類高基因毒性的致

13、癌物由黃曲霉毒素類 , N-亞硝基物類, 偶氮苯類等化合物構成，它們不能用TTC值的方法來進行評價。對這些種類的物質需要進行特殊的風險評價。TTC的應用在某些特定情況下，TTC值高于1.5 g/day 也是可以接受的，比如藥品的短期接觸，即治療某些生命預期在5年以下的某些嚴重疾病，或者這種雜質是一種已知物質，人類在其他方式上對它的攝入會更高（比如在食品上）。有些基因毒性雜質同時也是一種體內代謝產物，對它的評價也要以對代謝產物的接受性為基礎。基因雜質的濃度限度以ppm為單位，公式如下：Concentration limit (ppm) = 1.5 g/daily dose原料藥質量研究部2019

14、2019年度基因毒性雜質限度驗證列表：序號基因毒性雜質名稱雜質限度產品名稱1保護基溴化物15ppm氯沙坦鉀2鄰氨基甲苯7.5ppm托拉塞米3間氨基甲苯7.5ppm托拉塞米4對氨基甲苯7.5ppm托拉塞米5鄰硝基甲苯7.5ppm托拉塞米6疊氮酸10ppm坎地沙坦酯7疊氮酸10ppm纈沙坦8溴代異丙烷15ppm氯吡格雷氫溴酸鹽9聯(lián)苯溴化物3.4ppm纈沙坦10聯(lián)苯溴化物四氮唑4ppm纈沙坦115-氰基苯酞25ppm西酞普蘭氫溴酸鹽125-氨基苯酞25ppm西酞普蘭氫溴酸鹽13硝基化合物25ppm西酞普蘭氫溴酸鹽14氨基化合物25ppm西酞普蘭氫溴酸鹽15硫脲30ppm鹽酸吡格列酮16對氟硝基苯30

15、ppm鹽酸吡格列酮17硝基吡格30ppm鹽酸吡格列酮原料藥質量研究部20192019年度基因毒性雜質限度驗證列表：18酞嗪二酮0.04%RP-氯沙坦鉀19聯(lián)苯溴化物10ppmRP-氯沙坦鉀20二甲海因0.05%RP-氯沙坦鉀21保護基二溴物15ppmRP-氯沙坦鉀22氯沙坦鉀二氯物15ppmRP-氯沙坦鉀23二溴二甲海因15ppm氯沙坦鉀保護基溴化物24聯(lián)苯溴化物10ppm氯沙坦鉀25聯(lián)苯溴化物四氮唑12ppm氯沙坦鉀26游離肼10ppmRP-氯沙坦鉀27疊氮酸15ppm氯沙坦鉀28四丁基溴化銨25ppm鹽酸帕羅西汀29疊氮酸10ppm厄貝沙坦30對甲苯磺酸異丙酯8ppm氯沙坦鉀31溴離子22

16、9ppm艾他培南32對甲苯磺酸乙酯25ppm西酞普蘭33氟苯15ppm西酞普蘭34氯丙胺鹽酸鹽120ppm西酞普蘭35對氟溴苯50ppm西酞普蘭36甲磺酸乙酯75ppmS-西酞普蘭原料藥質量研究部20192019年度基因毒性雜質限度驗證列表：38N-甲基吡咯烷酮53ppm厄貝沙坦39N，N-二甲基苯胺2ppm奎硫平40對甲苯磺酸乙酯37.5ppm奎那普利41對甲苯磺酸乙酯150ppm雷米普利42對甲苯磺酸乙酯37.5ppm依那普利43異亞丙基丙酮100ppm羅匹尼羅44間氯苯胺15ppm氫氯噻嗪45甲磺酸甲酯2ppm依普洛沙坦甲磺酸鹽46甲磺酸乙酯2ppm依普洛沙坦甲磺酸鹽473-硝基-2-叔丁氧甲酰氨基苯甲酸乙酯47ppm坎地沙坦酯482-氰基-4-溴甲基聯(lián)苯47ppm坎地沙坦酯492-(2-氰基聯(lián)苯基)-4-基甲基氧基-3-硝基苯甲酸乙酯47ppm坎地沙坦酯503-硝基鄰苯二甲酸47ppm坎地沙