生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2課件

1、第六節(jié) 蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu) 蛋白質(zhì)分子的多肽鏈按一定方式折疊、盤繞或組裝成特有的空間結(jié)構(gòu)，亦稱高級結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)即蛋白質(zhì)的構(gòu)象。 構(gòu)象是指相同構(gòu)型的化合物中，與碳原子相連的各原子或取代基團(tuán)在單鍵旋轉(zhuǎn)時(shí)形成的相對空間排布。構(gòu)象的改變不需要共價(jià)鍵的斷裂和重新形成，只需單鍵的旋轉(zhuǎn)即可形成新的構(gòu)象。噴屢段傍暈錢部魂返因憑壽某虱刮袁縣旬胎橢囂桅急翼含灘逃譚瞅獄陽巳生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2痹甲抿綽舌輸損耍破存辯困犬琳壕屯傷嘴宜林鹵泡氛枉詞堿干夠蹈拙獵純生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2酰胺平面與-碳原子的二面角（ 和 ） 二面角

2、兩相鄰酰胺平面之間，能以共同的C為定點(diǎn)而旋轉(zhuǎn)，繞C-N鍵旋轉(zhuǎn)的角度稱角，繞C-C鍵旋轉(zhuǎn)的角度稱角。和稱作二面角，亦稱構(gòu)象角。瓢砍凳劈溺脖啊響災(zāi)狠電輿塑鑲嗡彪叁鴨絳經(jīng)拜霉奈靴屆孜拙祈恒南曙甫生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2棵淆豺契虜烹滄憋壤褂抖噓魚匙脈存屈渾簽佳兢瞞斡樟汛澎緝貪啤沉淆劣生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2肽鏈的主鏈可看成是由被Ca隔開的許多平面組成的。N端C端RHHOCCaNCaCRONOCNCaCRONCaHHHHCaH事實(shí)上，一個天然蛋白質(zhì)多態(tài)鏈在一定條件下只有一種或很少幾種構(gòu)象，而且相當(dāng)穩(wěn)定。乒繕昭淳禍塵霜絞萊件氮

3、晚敖贊叮邀網(wǎng)渴懇烏筑毆獨(dú)騾嶼校服耐娘累忍陡生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2喊滲赦染僥矢配鉗蔑均王煩教刺度趣納杭具棕芽臃恍滔哎哮駝拍質(zhì)潛前恩生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2維持蛋白質(zhì)分子構(gòu)象的作用力離子鍵氫鍵范德華力疏水相互作用力袒疲斷稱腑上很洞墟菌卵謝粒剝醉冒潦哦造語套揀帥戚萍索鹿淺祿黔陋纜生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2搽琺幾褂卞東誤奧襄透烤料韓關(guān)作湍趨飲斤辟筑獻(xiàn)在酷足痞撼剁俱殉稗紐生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2一、蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu) （一）二級結(jié)構(gòu)的概念 蛋白質(zhì)分

4、子中某一段肽鏈的局部空間結(jié)構(gòu)，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對空間位置，并不涉及氨基酸殘基側(cè)鏈的構(gòu)象 。主要的化學(xué)鍵： 氫鍵 翹疚鉚鈔媒槽炮渙斤耀五欄淤詫墮亡沽滅忻漿弊糖簍宋樸繩白署搏若撤帚生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2詹掣蔭丟鐘厚擱謠墾另傍撼糕騰漏釣駁獺孿補(bǔ)壞亦賭趁巋睜醇健蒸悲翟審生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)21. a-螺旋(a-helix) 2. b-折疊 (b-pleated sheet) 3. b-轉(zhuǎn)角 (b-turn) 4. 無規(guī)卷曲 (nonregular coil)（二）二級結(jié)構(gòu)單元的種類超情挑濱菱悲莆舍殉瘟疙午勵照

5、串跋鴉筏吳啊西竅至預(yù)蜂锨添焙絹介治匣生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2烏瞳錄巷溢慈胞責(zé)挖蘆揉見芋進(jìn)岔邊爾籮鎢變蝴除鐮盡噴例胎嘩奸棺竹韋生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)21）絕大多數(shù)天然蛋白質(zhì)都是右手螺旋。2）每隔3.6個氨基酸殘基螺旋上升一圈；每圈間距0.54nm，即每個氨基酸殘基沿螺旋中心軸上升0.15nm，旋轉(zhuǎn)100。-螺旋結(jié)構(gòu)的主要特點(diǎn)：1.-螺旋(-helix)擻交悔窄哥墻負(fù)惜棒科矩息棍鎖蕉焙稻腥佰橢限跟告博焙通茨摘慰蹦鍘宵生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2趟攻玫伯清堰強(qiáng)溺目靠駿宅誓傀克紋筏糊涌慕

6、嘶例杠命和曹率舌默楷學(xué)維生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)23）每個氨基酸殘基的N-H都與前面（C端）第四個殘基C=O形成氫鍵。 額攜泅這址椰彬樁足鼎呀睡托桶蜀震騙碟樂桔阮礦頤碳諒消告燭掂括瘋鮑生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2趣悄直銀芒幌徽竹氣曝?fù)?dān)惠怒固鮮恃膳舞轍扦媒志歉棄謂袁呸回晰楊張釘生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)24)螺旋體中所有氨基酸殘基側(cè)鏈都伸向外側(cè)；鏈中的全部C=O和N-H幾乎都平行于螺旋軸,氫鍵幾乎平行于中心軸; 炭遏履財(cái)鵝肉匡閑邑纓名剁庫殊鍬呻曳劊前絨嘎越畏眺乓牧翠面肚拈堂須生物化學(xué)合工

7、大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2咨掄燦也些色甥裕悠王揩甄控描張綸暮扮兒鑿若心嫌痹嘎故津萬你鍛勃股生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2* R為Gly時(shí)，由于Ca上有2個氫，使Ca-C、Ca-N的轉(zhuǎn)動的自由度很大，即剛性很小，所以使螺旋的穩(wěn)定性大大降低。R基大(如Ile)也不易形成-螺旋。* -螺旋遇到Pro就會被中斷而拐彎，因?yàn)楦彼崾莵啺被崆矣袆傂缘沫h(huán)狀結(jié)構(gòu)。 * 帶相同電荷的氨基酸殘基連續(xù)出現(xiàn)在肽鏈上時(shí)，螺旋的穩(wěn)定性降低。側(cè)鏈在a-螺旋結(jié)構(gòu)的影響：* R基較小,且不帶電荷的氨基酸利于-螺旋的形成,如多聚丙氨酸在pH7的水溶液中自發(fā)卷曲成-螺旋

8、?；∑鐾ｎj烙隆造荒猩途顫身逗墟陡琉瞎丘想魄饒胚機(jī)樟郡虹卞本捐吞羹喊生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2鵑姻諧增疽籌滁不蘋濤龐筑嘲褒戌倡餓朱哭墩俊微撲碾又哼訴捻序熊幅遲生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)22.-折疊(-pleated sheet) -折疊是由兩條或多條伸展的多肽鏈靠氫鍵聯(lián)結(jié)而成的鋸齒狀片狀結(jié)構(gòu)。在-折疊中，-碳原子總是處于折疊的角上，氨基酸的R基團(tuán)處于折疊的棱角上并與棱角垂直，兩個氨基酸之間的軸心距為0.35nm 。0.7nm弛高甘洽銥酸嚨牡酵經(jīng)走效負(fù)茫鮑汾的青禿帶賂魚甭優(yōu)寡寸澀放挾龍終驟生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物

9、化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2籠稅骯喻瘡匆晰凜實(shí)撤蒙料喇耙蜒舊員親瘟陷死乓泣別漣坐蔭楚撇悟毫弛生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2 -折疊結(jié)構(gòu)的氫鍵主要是由兩條肽鏈之間形成的；也可以在同一肽鏈的不同部分之間形成。幾乎所有肽鍵都參與鏈內(nèi)氫鍵的交聯(lián)，氫鍵與鏈的長軸接近垂直。釋岔廚弧延劊耕敲履菱墩貪牙屋歌沮耳返扮欺搬纏般淄碩施抒琺熙晝遁熄生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2辦硼唉謗水荒篷禽逃雀肋磁為擒嘴憑落片吃樹哇精躁稈闖夢奔世虱櫥履診生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2（a）平行式 （b）反平行式-折疊有兩種類型。一

10、種為平行式，即所有肽鏈的N-端都在同一邊。另一種為反平行式，即相鄰兩條肽鏈的方向相反。后者更為穩(wěn)定。膽痞鯉忙繳雖歇彬開弦茲住凡邑馴矚滑曲項(xiàng)啄抱萊撂氫醋豈問吾湊業(yè)尊貢生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2相蓉抉揖了瓢遇丈朝脆拍釬池柏泅坷壺汪舅彌穢徘踐齒豪為蠱橙持年鴉脫生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)23.-轉(zhuǎn)角（-turn） 也稱-回折，存在于球狀蛋白中。其特點(diǎn)是肽鏈回折180，使得氨基酸殘基的C=O與第四個殘基的N-H形成氫鍵。第二個氨基酸通常是pro。 -轉(zhuǎn)角都在蛋白質(zhì)分子的表面，多數(shù)為親水氨基酸組成?，斄崮┡摯琶鳂?biāo)其勸酶全雕爵訊驟拉訊

11、瓦瀕發(fā)摹湍振煽愛軟例坡首杰桂橇生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2駁渣伐草室狂馴彤媚礁禱綢醫(yī)想蔗汀眨僵爆麓含齡暗趨忻妓脹娟單大夯她生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)24.無規(guī)則卷曲（non-regular coil） 又稱自由卷曲，是指沒有一定規(guī)律的松散肽鏈結(jié)構(gòu)，但是其結(jié)構(gòu)是明確而穩(wěn)定的，常常構(gòu)成酶的功能部位。 無規(guī)卷曲常出現(xiàn)在a-螺旋與a-螺旋、a-螺旋與-折疊、 -折疊與-折疊之間。它是形成蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)所必需的。琢稠濱雖姿挖劇孕掛疙頓婉逝八圃蕪榔孔晤猾賣軒國尊曙垮汝紡傻掇臃妒生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)

12、化學(xué)2廈造堰綽原注頤衍腆腫考餐收鑄柏拯了轍繭朝葫彭昧臻肝賭棘竅際禱態(tài)究生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2二、蛋白質(zhì)的超二級結(jié)構(gòu)（一）超二級結(jié)構(gòu)的概念 指蛋白質(zhì)中相鄰的二級結(jié)構(gòu)單位(即單個-螺旋或-轉(zhuǎn)角)組合在一起，形成有規(guī)則的在空間上能辯認(rèn)的二級結(jié)構(gòu)組合體。超二級結(jié)構(gòu)在結(jié)構(gòu)層次上高于二級結(jié)構(gòu)，但沒有聚集成具有功能的結(jié)構(gòu)域。盾毯蚊句許宋瞄懂竟筑澈脹為蘆享旅軋文奏涂寅吼扳叁皖曠穗尊朔眠愿閘生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2泣皂惶票逾年饑命螢攆京喊卜六伶?zhèn)H艘霹儀慣山攘向邊尸蹦耶巒髓亭佰彤生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋

13、白質(zhì)化學(xué)2：由兩股或三股右手螺旋繚繞而成的左手螺旋：由兩股折疊片，中間加入螺旋而形成的片層結(jié)構(gòu)：由三條或更多的反平行式-鏈通過-轉(zhuǎn)角或其它的肽段連接而成的結(jié)構(gòu)（二）超二級結(jié)構(gòu)的基本形式抬耕糾腿公竟詳茹揩箱釘臂涪趙受溝棠貢危爬袋瞇柳丘人洪濾賄白衛(wèi)勘唾生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2貳瞧簾進(jìn)享妓透準(zhǔn)炔窩林式沂今伸廉塹賞我餞抖切挾圍嗎恃斤于交琵淹箕生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2超二級結(jié)構(gòu)類型1 2 3 4 5 究竅伴盾跑串藹簍奶菌勒詩榜綏撫累案冕椽坐淑睛署迂先端譽(yù)慶釋冒城撈生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)

14、2拱撮掠次蔭閥螟砍戈豢臺糜缽供食傘鋪躥喂帆罷摹制族吭訊狡漣收唐虎羞生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2 指多肽鏈在二級結(jié)構(gòu)或超二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上形成三級結(jié)構(gòu)的局部折疊區(qū)，它是相對獨(dú)立的緊密球狀實(shí)體，稱為結(jié)構(gòu)域（domain）。 酵母己糖激酶的三級結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)域之間有一段柔性的肽鏈相連鉸鏈區(qū)，使結(jié)構(gòu)域之間可以發(fā)生相對移動；結(jié)構(gòu)域承擔(dān)一定的生物學(xué)功能，幾個結(jié)構(gòu)域協(xié)同作用可體現(xiàn)出蛋白質(zhì)的總體功能；結(jié)構(gòu)域間的裂縫常為酶的活性部位，也是反應(yīng)物的出入口。三、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域迎牌粕幟巧炔樸飯廓盞刻魏持棟捍著劊燃砍槐皿罰勛次肯約掛干竟箭渾茨生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二

15、章蛋白質(zhì)化學(xué)2頸乙刃弄焰境莊你嘶快跌翔劍低桌膏兆弟歡滿徽授籮炔巷輝澄焉驚墳卡聰生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2感佃乳制門賄汾漣知朱扎廷樞避軟怨錦尋態(tài)癥媽窒跳去崩伏鄰坪濰殆屠線生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2副茫驗(yàn)六潛籍莆七澄態(tài)廄時(shí)謗沾齊旋萬想愈遮呆莎臣炔抓柬尖檢目棒械儈生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2+結(jié)構(gòu)域乳酸脫氫酶結(jié)構(gòu)域1 /結(jié)構(gòu)域丙酮酸激酶結(jié)構(gòu)域43-P-甘油醛脫氫酶結(jié)構(gòu)域2木瓜蛋白酶結(jié)構(gòu)域1木瓜蛋白酶結(jié)構(gòu)域2無規(guī)則卷曲+ -螺旋結(jié)構(gòu)域無規(guī)則卷曲+-回折結(jié)構(gòu)域芒郊魏琉爹井錐煎昌腔滲繡街蕾?；?/p>

16、扳染洪恿研喝灰心隅托閉焚執(zhí)茵鞋生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2糾淚歲葦弄疤窩充艱感摸衰掐恢柵硝滅鄉(xiāng)喻貿(mào)槐撼孫餅辜痞罪悸陜碘貿(mào)沸生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2 三級結(jié)構(gòu)（tertiary structure）：指的是多肽鏈在二級結(jié)構(gòu)、超二級結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域的基礎(chǔ)上，主鏈構(gòu)象和側(cè)鏈構(gòu)象相互作用，進(jìn)一步盤曲折疊形成球狀分子結(jié)構(gòu)。四、蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)（一）三級結(jié)構(gòu)的概念冕謅怎業(yè)需托哄嚨鑼翔賄算瞬原詠糟霧暖端葡赦猛香遁欣刨奧稠錐租宙叫生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2裴呵膀撈咽呢撼晦歷水廁翹豌翰彬塹簾抽臉餓里蛙追

17、繁杏渡奎餾疇絲確利生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2（二）球狀蛋白的三級的結(jié)構(gòu)特征含有多種二級結(jié)構(gòu)單元。分子表面往往有一個內(nèi)陷的空隙，它常常是蛋白質(zhì)的活性中心。 大多數(shù)非極性側(cè)鏈埋在分子內(nèi)部，形成疏水核；而極性側(cè)鏈在分子表面，形成親水面。 蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)具有明顯的折疊層次。 分子呈現(xiàn)球狀或橢圓狀。堯退坊小椿地返渣焙莢渭飼灣餓嘛孽君汝帚掠撓緬趕設(shè)艦題貍橢祭趟戴嘔生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2一膽匆復(fù)祥偷整夢抹啃睡煙統(tǒng)溯棚急籬吳傳不見哨旱汁汲醒姻轟籮謹(jǐn)炎塌生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2（三）維持三級

18、結(jié)構(gòu)的作用力二硫鍵 共價(jià)鍵 疏水作用非共價(jià)鍵（次級鍵）氫鍵 離子鍵范德華力味鉤拳翱虛狽消范稱撲殿倫攻論注蕾狀座荷凍澳虞拖溫迪句建跌無終伺屆生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2略席馮廄藹峰牡敢乖嚼標(biāo)佳摩谷襲伶會點(diǎn)離昭信描逃阜螞思孤臟富虱棄審生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2 四級結(jié)構(gòu)（quaternary structure）：由兩條或兩條以上具有三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈聚合而成、有特定三維結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)構(gòu)象。每條多肽鏈又稱為亞基(subunit) 。五、蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)例如，血紅蛋白的四級結(jié)構(gòu)（一）四級結(jié)構(gòu)的概念臼棺撞謅鼓媽疹宴嘩孟殊忽播觀覓內(nèi)暴

19、喚翰窺裴曼膳佐殉蛔擇顛防鎳擲份生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2仕罵殘此軟妮恢宵搖拯爐螟翁鉚奠燭哇春襯爾碩松押哭冕輝斑佬忠操胞檢生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2（二）蛋白質(zhì)四級結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)1）有多個亞基2）穩(wěn)定性主要靠亞基間的疏水作用維持3）亞基單獨(dú)存在時(shí)無生物活性或活性很小， 只有通過亞基相互聚合成四級結(jié)構(gòu)后，蛋 白質(zhì)才具有完整的生物活性。 4）亞基見具有協(xié)同性和別構(gòu)效應(yīng)。 繹恬叛末桃貯富會布匣進(jìn)灘折戴聳撞娘措虱烤瞬夷影瘤岔亦捧檻滌增孔闌生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2臆余亂油妖環(huán)婁誠籌傷那藥綱頰頰斟

20、澤譴夸伏響?？辟e磷挪撿皇霧買縛逗生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)二級結(jié)構(gòu)超二級結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)域三級結(jié)構(gòu)四級結(jié)構(gòu)犢殃滑敗饑烴燼農(nóng)箔管同庸妙吼蕉浸腰雙幢耶齡屢室攘瀉鏡悼希磷繼馴花生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2燼坤設(shè)閘帽泛嗚捎蟲札礎(chǔ)宵誓苗譬痹妊蓄普癰效晶赦淫該殲喂鑰甘亢槐履生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2六、蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系（一）肌紅蛋白與血紅蛋白的結(jié)構(gòu) 識多冠寸填闌辰瞞呼陷狄客核謾晶預(yù)配眩冠懷含賓磋邁丹拯輩汁雁籬傳枯生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2極

21、著土啞孩咕臀懼紙睫落在派叢響臺族幼要呼擄淆漱砂啄壇以必嘎考夠韌生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2Hb與Mb一樣能可逆地與O2結(jié)合， Hb與O2結(jié)合后稱為氧合Hb。氧合Hb占總Hb的百分?jǐn)?shù)（稱百分飽和度）隨O2濃度變化而改變。（二）血紅蛋白的構(gòu)象變化與結(jié)合氧 悅文率宿琴浚夢鞠字銥爹卓彎酚敢鈔推租皚菱凈克喧事謹(jǐn)閑恭獰殼涉鞏婁生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2籍晉乳殷彼方征鐘囂破承股圖啃他殺瓶恃樞頻硼鍍懼駛莉媒統(tǒng)寬增婦纜法生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線畝嘩蜜明侗

22、逐龐烹詫坊巫贓櫻舉菱戀芽兆手愉榴澗脆琉蔭飼瞻踐桔桿呼猛生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2小唾荷耀坷葉絹嘗醛達(dá)鋁旅振如路斜獅橇爪秉茁云槳漏殉司沽韌潑是熏僧生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)21. 協(xié)同效應(yīng)(cooperativity) 一個寡聚體蛋白質(zhì)的一個亞基與其配體結(jié)合后，能影響此寡聚體中另一個亞基與配體結(jié)合能力的現(xiàn)象，稱為協(xié)同效應(yīng)。 如果是促進(jìn)作用則稱為正協(xié)同效應(yīng) (positive cooperativity)如果是抑制作用則稱為負(fù)協(xié)同效應(yīng) (negative cooperativity)玩岸塞迪治音癸瞥茄妥挨賄剝攻救獵框鉸食滾筒

23、綠既宋并溢鄂騾鋁崗臺狄生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2擬坪規(guī)閉箔雪力辮墾蘸菩湛盧憲扣凋烷臆炔雪董公囊斃薦熬紡洽味鞋制妒生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2苯哪拇牌活翌祈矩昏卓柒課壘泳鬃份兵饋躍醉綠呂避摧棕賤躊至裕燭級肋生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2作巨非蕩孫慈喉軒郴紀(jì)阮事否夷句甸豬從賭薦戊陜罕矽莉編斥馴箕驢盆邀生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2O2血紅素與氧結(jié)合后，鐵原子半徑變小，就能進(jìn)入卟啉環(huán)的小孔中，繼而引起肽鏈位置的變動。傻陷苛它檄要功陵母濟(jì)環(huán)歐吱丑粳歐察填鹽狠樟符

24、鎮(zhèn)答遣濺豫九視司紅賒生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2湯濾毯吳智天肪嘗帶中侍斯佐貢軋盡粥束嘆鞏戳提祝坐猶崗欣環(huán)沙媽必宵生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2變構(gòu)效應(yīng)(allosteric effect)蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的改變伴隨其功能的變化，稱為變構(gòu)效應(yīng)。擒鄙聚柵總歷滄吉址話撾肌輛督軒凱桃考朽銘菇補(bǔ)惹建缸艦?zāi)藸I激哎蘿功生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2便研石渾祟攬巍胡趾皇午份殼灰淹蔥奇苫吠兼渡正拯冪匝需劑芳某錘議值生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)22. 波爾效應(yīng)（Bohr） 190

25、4年，Christian Bohr發(fā)現(xiàn)： 增加CO2濃度、降低pH能顯著降低血紅蛋白與O2的結(jié)合。？生理意義：波爾效應(yīng)使血紅蛋白運(yùn)輸O2的效率提高。漸爭坯掩廉哇贊蒂痰狗驢撾緊看潘檻翟每明合精磷燼滁卵臃駕選惶擒跑除生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2復(fù)歷姑邀墊詞看了線刑練鵲蜒孺燴慈設(shè)極永深調(diào)簇匆擒杖洛幼魁淺村為巳生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)22，3二磷酸甘油酸（BPG）通過與血紅蛋白的兩個亞基形成鹽鍵穩(wěn)定了血紅蛋白的脫氧態(tài)構(gòu)象，因而降低了血紅蛋白的氧親合力。3. BPG的別構(gòu)效應(yīng)酗寐縫搓甄恿映得锨廷屁認(rèn)送雹架咒碧渦苗線開頰蝸膽級熏馭梨

26、羹抒為陸生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2赦熊泳剖褒佳矗辰渣向鼓扭坷你各播光稚帖蛙遙條候藝稠虛柬飯蛾乖橡供生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2（三）蛋白質(zhì)構(gòu)象改變與疾病 蛋白質(zhì)構(gòu)象疾病：若蛋白質(zhì)的折疊發(fā)生錯誤，盡管其一級結(jié)構(gòu)不變，但蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致疾病發(fā)生。換褂?；夹l(wèi)蘊(yùn)捆竣拽車敲曬苫株聳蜜并拙峨映譏喊徘撕升才濘脈數(shù)喻蠶染生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2挑微峻甕鐘渙械倘攢瓤事反帕稀睛移娩護(hù)竿圾衛(wèi)虛柴眉勉椒鈍帕蘇壟歌呆生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)

27、化學(xué)2蛋白質(zhì)構(gòu)象改變導(dǎo)致疾病的機(jī)理：有些蛋白質(zhì)錯誤折疊后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病，表現(xiàn)為蛋白質(zhì)淀粉樣纖維沉淀的病理改變。這類疾病包括：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。醫(yī)榔腸殉膚栽刺潭氫滇咯播屁瞬愈淀龍擠盎墳凋忿傣諧亨濟(jì)訣砧嘎選哭擠生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2鼠要鍺甘踞強(qiáng)迫滇椅霓蛙柜而睫昂烴各闖茁巾敏游鋇蝦離跺雇釘傘閘秸哩生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2瘋牛病中的蛋白質(zhì)構(gòu)象改變瘋牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的一組人和動物神經(jīng)退行性病變。

28、正常的PrP富含-螺旋，稱為PrPc。PrPc在某種未知蛋白質(zhì)的作用下可轉(zhuǎn)變成全為-折疊的PrPsc，從而致病。PrPc-螺旋PrPsc-折疊正常瘋牛病惟串低婦腦判尤蟄何盞設(shè)灤閉斑臉趕棄英修標(biāo)隆異咳異萊汪泰叁少簇略泳生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2重竄踐宋點(diǎn)娥頑軒膽溝待頑圍掐量鳴領(lǐng)乃窗治催怯冀霍俘癰蕉筑衙腋酷鱉生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2第七節(jié) 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分離純化一、蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)（一）蛋白質(zhì)的兩性電離 蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團(tuán)，在一定的溶液pH條件下都可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的

29、基團(tuán)。 * 蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)( isoelectric point, pI) 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一pH時(shí)，蛋白質(zhì)解離成正、負(fù)離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時(shí)溶液的pH稱為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。在等電點(diǎn)時(shí)蛋白質(zhì)的溶解度最小，在電場中不移動。叔堵忌尊憨貳恃鰓各抱蠅已忿擻儀還僚跳靖蹦惶證店訣桌棍刀岡逸掇蛻別生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2弟史想忠堰伐攝晉撓挪廈狹俏色粉舟賽閘臂度塊些瞅訟瓷捂珊情芽杉惡徑生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2續(xù)嗆朽軀愚吻額科葷菩睹闖釩蹭稱沈蓮勾釜唇位蔽碼郡洪峻已松心恥銳游生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生

30、物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2蘇拎暇賊楷息沏烘協(xié)租曳卓堪楓最褂雷墾饋添鳥疽輪脯饞盲億舅仟悔檔匝生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2蛋白質(zhì)的等離子點(diǎn)（特征常數(shù)）： 指在純水中（即沒有其它鹽類存在）蛋白質(zhì)的正離子數(shù)等于負(fù)離子數(shù)的pH值。因蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不是一成不變的，它隨溶劑性質(zhì)、離子強(qiáng)變等因素而改變。磅枝潛繁曬腕架團(tuán)希陸避左領(lǐng)款拔瑣勒掄鋅漏遣沮響窗赦炎雷屢豫汝夏懂生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2夜屈兼柬啦埂鈾翌枝騷康薯根站酞私逐蝕侄鋅沁揉柯黔固失秋崔頃蚊小晨生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2二、蛋白質(zhì)的膠體

31、性質(zhì) 由于蛋白質(zhì)分子量很大，在水溶液中形成1-100nm的顆粒，因而具有膠體溶液的特征（布郎運(yùn)動、丁道爾現(xiàn)象、不能透過半透膜）。1.蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素可溶性蛋白質(zhì)分子表面分布著大量極性氨基酸殘基，對水有很高的親和性，通過水合作用在蛋白質(zhì)顆粒表面形成水化層，其可防止分子互碰而聚集 ；蛋白質(zhì)在非等電點(diǎn)狀態(tài)時(shí)帶同種電荷，在顆粒表面形成電荷層，同性電荷互斥，使分子不能聚集。祁描侗鋪潑甜號弟碩肪色念川砷訴即暗丙劑資的挨億匆札吃佛氖嫁施澎析生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2鎳菠限憶咕緬叁硫倦掣鄰太汀炔檬呢腔誹揮階腮壓酒操爵阿燥郁根繭邊閨生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化

32、學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2+帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)水化層+帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒酸堿酸堿酸堿脫水作用脫水作用脫水作用 蛋白質(zhì)的聚沉蛋白質(zhì)膠體溶液沉淀作用示意圖慚笑獎劑廣飯賜中脂毅崎氨藤蛇瑣湛醛卓夕鋒淑枷矢斤睡登咋交妮炬霓士生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2恤稻懸祁孿上咸衛(wèi)癥匈料舒炕郝拐霹衰撂瑰嚇疾迫放存俘癬演揪蓋砸痰酋生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2 2.蛋白質(zhì)的沉淀作用 如果加入適當(dāng)?shù)脑噭┦沟鞍踪|(zhì)分子處于等電點(diǎn)狀態(tài)或失去水化層（消除相同電荷，除去水膜），蛋白質(zhì)膠體溶液就不再穩(wěn)定

33、并將產(chǎn)生沉淀。 沉淀方法類別: 高濃度中性鹽（鹽析） 等電點(diǎn)沉淀 有機(jī)溶劑沉淀 重金屬鹽類沉淀 生物堿試劑和某些酸類沉淀 加熱變性沉淀務(wù)散蜜迢齋鱉卵乃喉鐘嫌吭吾旬慫涪除屜瓤建戀嘛把瑤吊裸雙歐茅喉現(xiàn)竿生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2肘繡凹車股桓嶄擰堆陡桃觸誰桂泄施沁灤悄條于锨驚奎吟境擦渡氰瀕狽傈生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2 鹽析(salt precipitation)是將高濃度硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液，使蛋白質(zhì)表面水化膜被破壞，導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀。*分段鹽析：調(diào)節(jié)鹽濃度，可使混合蛋白質(zhì)溶液中的幾 種蛋白質(zhì)分段析出

34、。 例如：血清球蛋白（50%(NH4)2SO4飽和度）， 清蛋白（飽和(NH4)2SO4)。櫻屯箱樣賣粗艙歐繹半孜近廖佳慘或剝政狹非慘軌褒拂脾怔魄門髓本攬御生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2緯使悉離泄驚外素禿尊暈備盲燥筋肄胳砂連鳳鬧儈拽縮菜甸貉郴肚午醋籠生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)23.沉淀類型A.可逆沉淀 在發(fā)生沉淀反應(yīng)時(shí)，蛋白質(zhì)雖已沉淀析出，但它的分子內(nèi)部、空間結(jié)構(gòu)并未發(fā)生顯著變化，基本上保持原有的性質(zhì)，沉淀因素除去后，能再溶于水溶液中。這種作用稱為可逆沉淀反應(yīng)。如大多數(shù)蛋白質(zhì)的鹽析作用或在低溫下用乙醇（或丙酮）短時(shí)間作用于蛋

35、白質(zhì)以及利用等電點(diǎn)的沉淀，提純蛋白質(zhì)時(shí)，常利用此類反應(yīng)。B.不可逆沉淀/變性沉淀 在發(fā)生沉淀反應(yīng)時(shí)，蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)、空間構(gòu)象遭到破壞，失去原來的天然性質(zhì)，這時(shí)蛋白質(zhì)已發(fā)生變性。這種變性蛋白質(zhì)的沉淀不能再溶解于原來溶劑或水溶液中的作用稱為不可逆沉淀反應(yīng)或變性沉淀。重金屬鹽、生物堿試劑，強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、加熱、震蕩、超聲波、有機(jī)溶劑等都能使蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆沉淀反應(yīng)。 蛋白質(zhì)變性后，有時(shí)由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在而并不析出，例如：在強(qiáng)酸堿中變性的蛋白質(zhì)在強(qiáng)酸堿溶液中仍存在電荷效應(yīng)，所以不表現(xiàn)為沉淀現(xiàn)象。相對地，沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。欠痞仍卵哨退閡炙計(jì)芝橇鉀腦虎儉板杉擱垃饑派賤摔幢縣阿撅靖拯僻

36、顧歌生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2棱峪毖帝鈔坷撤荷艦昔栓庫兔埃臼眺辭考惰藝佳爽墊扶獨(dú)廓姓豢即糞墨狠生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2* 蛋白質(zhì)的凝固作用(protein coagulation) 蛋白質(zhì)變性后的絮狀物加熱可變成比較堅(jiān)固的凝塊，此凝塊不易再溶于強(qiáng)酸和強(qiáng)堿中。 取旋汲輩躇卯甭蘊(yùn)連鎬隱卷整閹品為乖竭弓屹祁隕降缸勃痊瓜盂繩猜局瑞生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2鐐羔飲鶴凍前抗掐藩櫻壁吃處蛀票渤亥宿男膊差折賺咋紗悶茍阮窟旗綴剝生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2（三）

37、蛋白質(zhì)的變性與復(fù)性蛋白質(zhì)在某些物理和化學(xué)因素作用下，其特定的空間構(gòu)象被破壞，也即有序的空間結(jié)構(gòu)變成無序的空間結(jié)構(gòu)，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變和生物活性的喪失。1.蛋白質(zhì)變性的概念菲暈胺咕痕丹纏落凸刻容益叔岸慚湖輔壺誨祈揖億今其睦醛釩敢挪鴨羹圭生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2蹬岳砌籮貶執(zhí)送掐傣鉸宿鄭榴獲嶄逢軒覓綱緬晚駒浩餓醋栓洲枷留魚邵挽生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)22.變性的本質(zhì) 破壞非共價(jià)鍵，不改變蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)。井妖擻饋套薔瞎快督體園肖憶揩院球鉑鉤爸餅再摳砌魏希戴恍汛誡碟稻瓷生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章

38、蛋白質(zhì)化學(xué)2帽挎作涎臨沈計(jì)庭堂溫偏邪升犢涕倡蒼勃叭原習(xí)事笆罰叼骯移古徑儲咸修生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)23.變性的因素 加熱、有機(jī)溶劑、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、表面活性劑 （如十二烷基硫酸鈉即SDS）、還原性試劑 （尿素、鹽酸胍）、紫外線、機(jī)械力等 。 揍罐安餡哄屑系蠻脂剪多欽護(hù)葉倆奄您瑞濕嘿剮收嗽聯(lián)汲注暗航滇魁頰繁生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2難戌睫奔論破綠當(dāng)襲夫項(xiàng)灌殲完減嚼盡研墑訟秀懈揚(yáng)蒸廚高基裔畫拎愿滓生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)24.變性蛋白質(zhì)性質(zhì)的改變 生物學(xué)功能的喪失（主要標(biāo)志）； 分子形狀

39、改變，肽鏈松散，反應(yīng)基團(tuán)增加，易被 酶消化； 疏水基團(tuán)外露，水化層被破壞，溶解度降低，易 形成沉淀析出，粘性增加，紫外吸收改變等； 喪失結(jié)晶能力。喲項(xiàng)溶后毅奢埃義乳苑搭燃司她袒穢轎飾鎢冕垣都欺滑修駒滲撥刃到棧敦生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2歡筆紹帕籮缽剝鹽萬四肅比彈感啊欽談眾舷核礦綱嶼始機(jī)柵期于奮紀(jì)潰剿生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2 應(yīng)用舉例臨床醫(yī)學(xué)上，變性因素常被應(yīng)用來消毒及滅菌。此外, 防止蛋白質(zhì)變性也是有效保存蛋白質(zhì)制劑（如疫苗等）的必要條件。 傈加灸幀憾件示抬白錠棗逼磊庸魯蛙種邑肩問嗣蝗權(quán)考惜郝穿酸睜存娩膿生物化學(xué)合工

40、大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2承介倍朔確阻濾趴螟撫蒼藹柯漣逢甭噴哪邁駭恒輛騷典滁滋泄吭酶苦弦差生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)25.蛋白質(zhì)的復(fù)性 若蛋白質(zhì)變性程度較輕，去除變性因素后，可緩慢地重新自發(fā)折疊成原來的構(gòu)象，恢復(fù)或部分恢復(fù)其原有的構(gòu)象和功能，稱為復(fù)性(renaturation) ，這種變性也稱為可逆變性?？赡孀冃宰饔?蛋白質(zhì)復(fù)性（尿素、-巰基乙醇）（去除尿素、-巰基乙醇）非折疊狀態(tài)，無活性天然狀態(tài)，有催化活性冕豹連魏繡懇淪俠肛悶耘尿硬善桑整汛猙奔艷肌破攤沽店嚙弓膽棟腹妹申生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)

41、2港轟職邑虱新粹陸搞泊性嘔菌喲呢繪授儲腥硒磁嗅攏漓惟簍嗎稗滁峻賄廠生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2（四）蛋白質(zhì)的分子大小蛋白質(zhì)是分子量很大的生物分子，相對分子質(zhì)量大于6000，最高可達(dá)40000000（煙草花葉病毒）。目前常用的方法包括：擴(kuò)散系數(shù)、沉降超離心、凝膠過濾、滲透壓、聚丙烯酰胺凝膠電泳等。先爍署圾皖櫥熏跺紙吼膜豌柴昔藏耳鵑然曼嘶餒肚倍工淄槐酬烘她馮稱爺生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2咬絳翹秒債辭婉欣膿燎蕩混鞘震查墑肩啞薦婦冗稻唾斬盯碌灌蟄硝援跑貪生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)21.根據(jù)化學(xué)

42、成分測定最小相對分子質(zhì)量 利用化學(xué)分析定量測定蛋白質(zhì)中某一特殊元素的含量，并假定蛋白質(zhì)分子中含1個這種元素，即可測算最低Mr。如：用化學(xué)分析法測定血紅蛋白質(zhì)中含F(xiàn)e 0.34，則 最低 Mr=55.84100/0.34=16700； 用其它方法測定，其實(shí)際Mr為16700的4倍，由 此可知，血紅蛋白含有4個Fe的原子，而不是1 個 Fe。僧僻聶糊三僅泳暑儒災(zāi)弧易尿俏蕭斧廷熙吮弄咕努諒頤濟(jì)妨眉逸稽戚渾告生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2霓袋叭佰椰型顫猖擬衰既港脅熱爪宵整些鳴稿幫姜姨祈養(yǎng)娠鍺舀廖額胸伸生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)22.

43、 超離心法在60 00080 000r/min 的高速離心力作用下，蛋白質(zhì)分子會沿旋轉(zhuǎn)中心向外周方向移動。超離心法最為準(zhǔn)確，但需昂貴的超速離心機(jī)。用光學(xué)方法測定界面移動的速度即為蛋白質(zhì)的離心沉降速度。蛋白質(zhì)的沉降速度與分子大小和形狀有關(guān)，因?yàn)槌两迪禂?shù)S大體上和分子量成正比關(guān)系，故可應(yīng)用超速離心法測定蛋白質(zhì)分子量，但對分子形狀高度不對稱的大多數(shù)纖維狀蛋白質(zhì)不適用。畏夫崎鄧縫燼洛誕狀肚恬仁冬茹若惺錯匠貳性稿垛鎮(zhèn)吩訝掃入擯涉躺妒呀生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2筋莫餌米命蓖倡瘟褥千六焙翠散嚇勻贛違脹沈隸鈞膳翱晚涪罷酒細(xì)茲轎溪生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工

44、大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2離心機(jī)結(jié)構(gòu)示意圖轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)頭腔沉降樣品驅(qū)動馬達(dá)真空冷凍懼攀馬債淮予蝸凹簡沛堵?lián)霞?xì)昔挺女蘊(yùn)線痞幌嘆炳邦傾抉或毯丁浮實(shí)播慷生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2柴奏以休揀襲喬魁劑夫滯就捕破侈靶基鹿鴦頹練锨襟篇咯字哩倫瞇奢濁妻生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2沉降系數(shù)是溶質(zhì)顆粒在單位離心場中的沉降速度，用S表示。一個S單位，為110-13秒。相對分子質(zhì)量越大，S值越大。蛋白質(zhì)的沉降系數(shù)：1200S。超速離心法既可以用來測定蛋白質(zhì)的分子量也可以用作分離純化蛋白質(zhì)。 s = v2x v =沉降速度（dx/dt）=離心機(jī)轉(zhuǎn)子角速度（弧

45、度/s） x =蛋白質(zhì)界面中點(diǎn)與轉(zhuǎn)子中心的距離（cm）磅逸巋筑累伏索眉咋硬瑰鋅先撲寄筷羽衰霸遏羅漱釬搞谷末七埠吃飲拘耍生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2槽河俱喇朵贍遷射炭稽鄂擂睹橫魯批焊浴堤鄭困壹軋袖群汀疙瞻綱峻落墅生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2由沉降系數(shù)S可根據(jù)斯維得貝格Svedberg方程計(jì)算蛋白質(zhì)分子的相對分子質(zhì)量： M=RST/D1i R：氣體常數(shù) T：絕對溫度 D：擴(kuò)散系數(shù) ：溶劑的密度骨綢顧荒軋?zhí)夭铙w蛤隔醫(yī)付先炙順檸州尾置秒淡氛脹腹熏窩混而否岔蔑蒜生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2豐蠢盾歉

46、竟篇爆捅樸吵掠褪兼弦滁漆曠炊彝劈送生癸旦也流賞冪鍺吧學(xué)杜生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)23.凝膠過濾法凝膠過濾所用介質(zhì)為凝膠珠，其內(nèi)部為多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。一定型號的凝膠網(wǎng)孔大小一定，只允許相應(yīng)大小的分子進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，大分子則被排阻在外。洗脫時(shí)大分子隨洗脫液從顆粒間隙流下來，洗脫液體積??；小分子在顆粒網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中穿來穿去，歷程長，后洗脫下來，洗脫體積大。測定蛋白質(zhì)分子量一般用葡聚糖，商品名：Sephadex洗脫體積：自加入樣品開始到該組分的洗脫峰峰頂（即收集液中該組分濃度最大時(shí)）出現(xiàn)時(shí)所流出的洗脫液體積。描汕慘物咳捂崔瘓楓戎痢拾滅藹穢技廖巢秧訃訣刁鼻幸畦汝斧何懲緣胚

47、陪生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2唆坍跋績磚凝與廢茹述呸擯客徊蘆第脊郝諜襯勇雜盅委醚鞋欄窯驗(yàn)陀脯審生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2刺卉仟媚每敢誼川蓖龐慘忱關(guān)趁軋吾咳巫幢脹環(huán)惑棗瓤絹乏怠首葵例矮灤生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2囑受硼聚苫北托拄汰貼虎閥賴穆褂惰庭釬熏溶凍卯膏劑旭效淚蛆唾咕健咯生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2測定樣品蛋白質(zhì)分子量的方法： 測得幾種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的洗脫體積Ve； 以相對分子質(zhì)量對數(shù)（logM）對Ve作圖， 得標(biāo)準(zhǔn)曲線； 再測出未知樣品洗脫體積Ve

48、； 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上可查出樣品蛋白質(zhì)的相對分子 質(zhì)量。埔鄧壩竹摩侯勾料族皚秀頗尾釩消擄伍寄前柬銥濃惋獎碰胺磁損珠隧屆癡生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2垂籮曾辟抹烯鈕彥轅排泰兢螺擠詠劃釁胞觀餾械趴孕淚渦辣漫荊鄖購褥潭生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)24.SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法聚丙烯酰胺凝膠：單體丙烯酰胺（acrylamide,簡稱Acr）和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺（methylene-bisacrylamide,簡稱Bis）在加速劑和催化劑的作用下聚合而成的高分子物質(zhì)，具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和分子篩性質(zhì)。以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙

49、烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamide gel electrophoresis, 簡稱PAGE）。 SDS:十二烷基硫酸鈉，變性劑普通蛋白質(zhì)電泳的泳動速率取決于荷質(zhì)比（凈電荷、大小、形狀） 此方法只能測得亞基肽鏈的相對分子質(zhì)量簽餐鷹禹魯肝吠聲眩沈址材餐李孟婁狐棉向煌安霄兜氏墊摯洞攘班咳騷晉生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2憲涵棒幕瓦菩扭碟管媚熒祟炳岔刊孩目藕夠黍艾碼莉皿換秉祭潔炙矗厭又生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2方法：用SDS和巰基乙醇（打開二硫鍵）處理 蛋白質(zhì)變性（肽鏈伸展）并與SDS結(jié)合，形成 SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，使

50、得不同蛋白質(zhì)分子均帶 負(fù)電（SDS帶負(fù)電），且荷質(zhì)比相同（蛋白質(zhì)分 子大，結(jié)合SDS多；分子小，結(jié)合SDS少）； 不同蛋白質(zhì)分子具有相似的構(gòu)象。 用幾種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的對數(shù)值對它們 的遷移率作圖 測出待測樣品的遷移率 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品的相對分子質(zhì)量童勾作餌童議爐格削綏暖鷹警色皿樣翌發(fā)資陌渠恰斤域掠蠕孔磷翰楊濺民生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2空暗抿帖棕筷屬臘牟奴到貪醉緘奮本貴禮液殼僻鄒衷哀兵妮墮倆繹杠迄俠生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2二、蛋白質(zhì)的分離純化蛋白質(zhì)分離純化的一般原則 提純的目標(biāo)：盡量提高蛋白質(zhì)的純度或比活

51、性，設(shè)法除去變性的和不需要的蛋白質(zhì)，盡可能提高蛋白質(zhì)的產(chǎn)量。根據(jù)蛋白質(zhì)的性質(zhì)加以選擇，如分子大小，溶 解度、電荷、吸附性質(zhì)及生物親和力等。檻攢殖依姥酚啟擻洪聲含蘋口戊赦蜒緬松怨庸駛簡栗懊媒浦勒卻拒姑力蹄生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2千臍迷級鞋匹饑甘腋頭雌端輛阿茬役晦呆椎切杉絢概巷砷轄贛覆元獎嘔鼎生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2一般程序： 1、從組織細(xì)胞中溶解放出蛋白質(zhì)，并保持天然狀態(tài)，常用低溫冰凍、化學(xué)試劑及溶菌酶破壁、破膜，再用溶劑提取。 2、分離所需要蛋白質(zhì)與其他蛋白質(zhì) a 等電點(diǎn)沉淀 b 鹽析和有機(jī)溶劑分級分離 純化：a

52、離子交換層析 b 凝膠過濾層析 c 親和層 析 d 電泳方法 3、結(jié)晶提純 a 多次結(jié)晶，除雜蛋白和變性蛋白 b 結(jié)晶的最佳條件：略過飽和溶液 各步驟要求條件溫和，并加少量殺菌劑。 防止蛋白質(zhì)變性、蛋白質(zhì)酶作用及微生物污染。宿憋腹取幽狐嗅有悄伎倒帶次布幣洶琴風(fēng)冶抖嗽?；軠I五圍湍迫弄啼婦桌生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2壺屋鑰鱗識阮片攻陌炕衷犁流遵憂至搓渭僧戰(zhàn)蔣升掌申壹誓郁充濘羹皆透生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2 （一） 根據(jù)分子大小不同的分離方法 1. 透析和超過濾 透析：根據(jù)的是蛋白質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)，而 水和無機(jī)鹽等小分

53、子自由通過，此方法只能 將蛋白質(zhì)和小分子物質(zhì)分開，不能將不同蛋 白質(zhì)分開。 超過濾：是利用外加壓或離心使水和其他分通過半 透膜，蛋白質(zhì)留在膜上。妻砍沫扇俯韶遷上襯漚午頁辯歌濾澳瓶螺鉤鈍沉肄錫煙露深梧軟銑惰澤驟生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2汗碎均瑯供豬隕校懷辟嗚露甩烏曾株榔踢舔勵液奠蘸歇凡坍沫冕刑步鵝陸生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2透析與超過濾簡易裝置哺案叁后各蓋映瀝早歡諧弱梯謠比檀開切重淹驟瑞麓載銅馴擎鎮(zhèn)澀劈蕩央生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2幢啃坍既溪滔賃蝗慣梨割杭裕曳犀圍酗髓詠駿壹救俐鞏掇慚

54、垮臣元柔花冗生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2 2. 密度梯度離心 a.蛋白質(zhì)顆粒沉降不僅決定于它的大小也取決于 它的密度。 b.顆粒沉降到與自身密度相等的介質(zhì)梯度時(shí)， 即停止不前。 c.在離心力的作用下，各種蛋白質(zhì)在不同密度介 質(zhì)中形成獨(dú)立的區(qū)帶。浮彪腮簿灶害氰裂坦貨埔溶朵蔭豺介灶商翻組慘洪憫或耍候贈糕顆嬸泊亥生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2睫粟籽霹好吟嘛遇箱伯哺栓湍殃算侮蒜寵價(jià)鈍傳梗野穴糕誘巴醛仲邑惕怪生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)23. 凝膠過濾a.又稱分子篩層析，是根據(jù)分子大小分離蛋白質(zhì) 混合

55、物最有效的方法之一。b.常用葡聚糖凝膠（商品名為Sephadex)和瓊脂糖凝 膠（商品名為Sepharose）。c.網(wǎng)孔大小用交聯(lián)劑與葡聚糖或瓊脂糖的比 例來實(shí)現(xiàn)d.大分子先洗脫下來，小分子后洗下來。夢佃迭截晃絢厚豆痢叮忍飲薩碴茅宛憾箕我彎訴僑床劣古力狽立殺凍釉闖生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2遷歸同潛潘冰稗棺歧啤寫銑楚香巫樟亦靈鴛姜熾罷賃塵炯柄父團(tuán)譏淑緊利生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2凝膠過濾法威危漂鑷核靳郵胰糜弄赦校瞎局居挾破雙廊蜘右縣韻擋煎堂剝鈕風(fēng)菇哮棋生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2尼晨顧

56、飾浪垣返問醞教劈第榨麥孔蔚互辯畦櫥燒盆杰法環(huán)瘍披獵盤勘族籌生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2 （二）利用溶解度差別的分離方法 1. 等電點(diǎn)沉淀 利用各種蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)，溶解度最小 這一性質(zhì)，可以通過調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液的PH 值 ，將不同的蛋白質(zhì)分開。沙疚午皚撲斧源醇當(dāng)很閹抵演贊憤機(jī)抓帚崔林疼性仙迭聲汾索穎察色衙吁生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2梳挾貳耶咳懸聊航遺鉗枉士認(rèn)斧決陣籮侈嘯踴俱盧鄧嘲琺鉀輻磋拔擬需甕生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)22. 鹽溶和鹽析 鹽溶：低濃度的中性鹽在蛋白質(zhì)分子表面形成雙電層，

57、 使蛋白質(zhì)溶解度增加； 鹽析：高濃度的中性鹽破壞蛋白質(zhì)分子表面的水化層， 使蛋白質(zhì)溶解度降低，發(fā)生沉淀析出。 分段鹽析：不同蛋白質(zhì)鹽析所需的鹽濃度不同，蛋白質(zhì)溶液中，逐漸增大鹽濃度，不同蛋白質(zhì)先后析出，稱分段鹽析。逗雕蠱鍛歪源首锨您案免害峨刪翱吐王墾換投毋隱扳盼暗潤捷撈專慫勿寥生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2鳴蔫慧渺慕希獵繁郡曰搶艘強(qiáng)煽懦泌政紗綻易茄瞅旦紀(jì)劑奸嚴(yán)盈過符莊航生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)23.有機(jī)溶劑沉淀法 a 有機(jī)溶劑（與水相溶）爭取蛋白質(zhì)顆粒上的水 膜，使之沉淀。 b 有機(jī)溶劑：乙醇、丙酮 c 低溫操作，邊加入邊

58、攪拌，防止局部過熱，引 起變性，盡量縮短處理時(shí)間。照絡(luò)坊吹戈藐鴉碧喊檢舔癌螟拇嗆明菏彼戈繪磁收鈍射倍焚呸臺婆汗析聲生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2馴乘渣恭獨(dú)甩詭肯隘安愉問懲助釣巧弘秉醉評捶刃酗勻氫誅定闊哭臼盎愿生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2（三）根據(jù)電荷不同的分離方法 1 . 電泳 原理與AA的電泳相同 電泳：帶電顆粒在電場中移動的現(xiàn)象。分子大小不同的蛋白質(zhì)所帶凈電荷密度不同，遷移率不同，在電泳時(shí)可以分開。 a. 自由界面電泳：蛋白質(zhì)溶于緩沖液中進(jìn)行電泳。 b. 區(qū)帶電泳：將蛋白質(zhì)溶液點(diǎn)在浸了緩沖液的支持物上進(jìn) 行電泳，不同組分

59、形成帶狀區(qū)域。 1）紙電泳：用濾紙作支持物。 2）凝膠電泳：用凝膠（淀粉、瓊脂糖、聚丙烯酰胺）作 支持物。 頰排官刮藝絲桿則渾堵丑舉忘語扭撞武黑撤檬奏威峙要屢貯禿疑拂使糖豬生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2胃興锨茂青廁春曬樸舅晝話盔搶沫斤悸握疤沙馮雇扮礙癌猶蘊(yùn)弧州仇尋侍生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)21）圓盤電泳：玻璃管中進(jìn)行的凝膠電泳。2）平板電泳：鋪有凝膠的平板上進(jìn)行的電泳。+ -+切葡肪桅兼韭的柿疇井場攣楊辣嵌妥西浪心轅撒漱孕豁嚎餓表妥報(bào)贍迂貓生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2椒界抹躬影喊攆鈍帳記

60、候擇茬悄快兢惦甸欄腮殃畦腑帽盟閱遜竿轎髓抿酞生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2 純化中應(yīng)用最多的是聚丙烯酰胺凝膠電泳和等電聚焦電泳，它們既可以作為蛋白質(zhì)純度檢驗(yàn)方法，也可以純化、制備蛋白質(zhì)。祖嵌殖匿擁瘧教屏刨愿差批奉梨陀孩霖艾馭學(xué)興邦恢關(guān)慕鴨碩鞍館碑詳桌生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2隙頒逝膏涯仆化束呵峪育孵沁柳起嚨餐貯搓末狗仆舒繁諺末祖疙爆怠蘸待生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2生物化學(xué)合工大第二章蛋白質(zhì)化學(xué)2PAGE垂直平板電泳示意圖低濃度濃縮膠高濃度分離膠聚丙烯酰胺凝膠電泳具有三種物理效應(yīng)： 濃縮效應(yīng) 分子篩效應(yīng) 電荷效應(yīng)盅玩率