HCVRIBA中文說明書教學(xué)文稿

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。HCVRIBA中文說明書-編碼抗原（重組蛋白C33C,NS5；合成多肽5-1-1，C100,C22）的丙肝病毒CHIRONRIBAHCV3.0SIA針對人血清或血漿中丙肝病毒抗體（anti-HCV）的條帶免疫印跡試驗(yàn)（SIA）適用于體外診斷編碼抗原（重組蛋白C33C,NS5；合成多肽5-1-1，C100,C22）的丙肝病毒CHIRONRIBAHCV3.0SIA針對人血清或血漿中丙肝病毒抗體（anti-HCV）的條帶免疫印跡試驗(yàn)（SIA）適用于體外診斷產(chǎn)品編號(hào)930600目錄頁碼命名和使用目的2試驗(yàn)概述和

2、說明2試驗(yàn)的生化原理3試劑4警告4試劑制備6儲(chǔ)存說明7試劑變質(zhì)指示8樣本收集和準(zhǔn)備8程序9提供材料(30人份試劑盒；產(chǎn)品編號(hào)930600)9需要但不供給的材料9主要陳述9試驗(yàn)程序9質(zhì)量控制程序11結(jié)果解釋11程序的局限性12預(yù)期結(jié)果13具體的性能特征17關(guān)鍵符號(hào)19參考文獻(xiàn)20發(fā)行日期：2007-12諾華疫苗和診斷試劑公司10012512命名和使用目的CHIRONRIBAHCV3.0SIA是一種針對人血清或血漿（來自為輸血或血液再造的捐贈(zèng)者）中丙肝病毒編碼的單個(gè)蛋白所對應(yīng)的抗體的體外定性酶免印跡測定，它主要是一種對經(jīng)類似ELISA等許可的抗HCV篩選步驟重復(fù)篩查的活性人血清或血漿樣本進(jìn)行輔助的

3、，更具體的測試手段。測定概述和說明正如Ebeling等人所描述的，條帶免疫印跡測試（SIA）已經(jīng)在闡明丙肝對應(yīng)的單個(gè)抗體方面展示出用性，通過SIA法對抗HCV的檢測是基于傳統(tǒng)的Western-blotting技術(shù)，在這項(xiàng)技術(shù)中，HCV基因組編碼的特異性抗原被固定在一個(gè)膜支持物上。因HCV編碼的單個(gè)蛋白而產(chǎn)生的抗HCV活性的可視化是通過使用酶標(biāo)記的抗人IgG對酶底物的比色實(shí)現(xiàn)的。CHIRONRIBAHCV3.0SIA是一種體外定性免疫印跡測定，它把重組HCV編碼抗原和合成HCV編碼多肽分別固定在測試條帶上。兩個(gè)重組抗原（C33C和NS5）及兩個(gè)合成多肽（C100P和5-1-1P）是源于推測的病毒

4、非結(jié)構(gòu)蛋白，然而第三個(gè)多肽(C22P)被推測對應(yīng)于病毒的核衣殼蛋白，由于重組HCVC33C和NS5抗原是以一種和人源過氧化物岐化酶(hSOD)融合表達(dá)的形成得到的重組蛋白，所以hSOD也被單獨(dú)表達(dá)作為條帶上的對照帶。這個(gè)對照條帶可以排除重組蛋白中本不屬于HCV本身編碼的hSOD部分所對應(yīng)的抗體。HCVC33C抗原產(chǎn)生于大腸桿菌（E.coli）基因重組表達(dá)，而HCVNS5抗原和hSOD產(chǎn)生于釀酒酵母（S.serevisiae）體系的基因表達(dá)。把基于早期重組抗原的RIBAHCVSIA結(jié)果值作為單抗原或多抗原的抗HCV篩選試驗(yàn)的補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)已經(jīng)出現(xiàn)在多篇已發(fā)表的論文當(dāng)中。然而，已通過多抗原篩選步驟重復(fù)驗(yàn)

5、證為部分活性樣本卻在RIBAHCV2.0SIA試驗(yàn)中成了不確定樣本。（推測的包含HCV抗原的HCV基因組定位如圖一所示）據(jù)報(bào)道，非A,非B（NANB）肝炎占據(jù)輸血后肝炎的80-90%，這類肝炎最顯著的特點(diǎn)是半數(shù)的感染病人會(huì)發(fā)展成慢性肝炎，其中的20%又有可能進(jìn)一步發(fā)展成肝硬化。接種過慢性NANB肝炎病人血清的黑猩猩會(huì)通過連續(xù)的病毒渠道傳染到其它黑猩猩體內(nèi)，這個(gè)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了可轉(zhuǎn)移的NANB媒介的存在。一個(gè)NANB肝炎的嚴(yán)格定義指除甲肝，乙肝，delta肝炎，巨細(xì)胞病毒感染和Epstein-Barr病毒感染，以及其它原因的肝臟發(fā)炎等之外的肝炎。一般NANB感染是溫和的，病例中的75%是無黃疽的，病例

6、中病癥溫和的比例甚至更高。但是NANB肝炎也具爆發(fā)性。Mathiesen等已經(jīng)揭示出所有爆發(fā)性肝炎病例中，36%被診斷為NANB感染者。NANB肝炎媒介的基因組已經(jīng)從帶有高滴度媒介的受感染的黑猩猩血漿中被克隆得到，這個(gè)媒介已經(jīng)被指定為丙肝病毒。重組的HCV編碼蛋白已經(jīng)被利用發(fā)展為檢測人血清和血漿中抗HCV的第一代（單抗原）和第二代（多抗原）檢測篩選測定。具有顯著特征的NANBpanel數(shù)據(jù)表明了HCV抗體與輸血后和社區(qū)型獲得NANB肝炎間的具體關(guān)系。RIBAHCV3.0SIA，whenusedasdirectedinthisinsert，可以檢測人血清或血漿中HCV的抗體。呈現(xiàn)在測試紙帶上的單

7、個(gè)的抗原帶可以確認(rèn)抗特異的假定病毒抗原的抗體活性。測試的生化原理RIBAHCV3.0SIA是一個(gè)利用固定在測試條帶上的重組HCV抗原或合成多肽形成的單一帶進(jìn)行的三步試驗(yàn)。第一步，樣本和試驗(yàn)對照被稀釋并于條帶上孵育。假若有的話，那么其中的特異的HCV抗體將結(jié)合到對應(yīng)的重組抗原或者合成多肽條帶位置。血清或血漿中未結(jié)合組分通過抽吸和沖洗被去除掉。第二步，條帶被孵育在含過氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG結(jié)合物中，這個(gè)結(jié)合物被結(jié)合到抗原抗體復(fù)合物的人IgG部位，未結(jié)合的結(jié)合物的去處通過傾倒和清洗步驟來完成。第三步，包含有過氧化氫和4-氯-1-萘酚的可借酶進(jìn)行反應(yīng)底物顯色系統(tǒng)被加入，如果結(jié)合物是存在的，那么在特異

8、性的抗原，多肽或者對照帶位置，酶促反應(yīng)后將產(chǎn)生一種可溶性的藍(lán)黑背景的產(chǎn)物，顯色反應(yīng)與過氧化氫對過氧化物酶的二價(jià)氧化有關(guān)，接著氧化狀態(tài)的過氧化物酶分別靠兩個(gè)共價(jià)鍵與4-氯-1-萘酚反應(yīng)而恢復(fù)到正常狀態(tài)，并導(dǎo)致產(chǎn)生可溶性的藍(lán)黑色的反應(yīng)產(chǎn)物。條帶上的顏色產(chǎn)生以后，反應(yīng)通過反應(yīng)物的去除和洗滌而終止。肉眼可見的出現(xiàn)在條帶上的帶型是結(jié)合在條帶上單個(gè)重組抗原或合成多肽所對應(yīng)抗體的直接反映，對應(yīng)每個(gè)抗原帶的樣本活性通過肉眼對條帶上的低濃度的IgG和高濃度的IgG產(chǎn)生的隱性和陽性對照而被確定。如圖三所示。4試劑RIBAHCV3.0SIA是一個(gè)30人份試劑盒（產(chǎn)品編號(hào)930600）組分描述供量STRIPHCV編碼

9、抗原（重組C33C和NS5抗原，合成的C5-1-1,C100,C22多肽）覆蓋的條帶：每個(gè)條帶包含4個(gè)HCV編碼抗原/多肽帶，1個(gè)重組人SOD帶，2條IgG對照帶30個(gè)連續(xù)號(hào)的條帶：提供在6個(gè)密閉袋中；每個(gè)袋中含有5個(gè)條帶，并各自被置于軟管中SD樣本稀釋液：帶有牛蛋白穩(wěn)定劑和去污劑的磷酸鹽緩沖液（PBS）。包含有0.1%疊氮化鈉和0.05%慶大霉素硫酸鹽作為防腐劑含100ml溶液的瓶子CON結(jié)合物：過氧化酶標(biāo)記的抗人IgG（重鏈和輕鏈），含有牛蛋白穩(wěn)定劑，含有0.01%硫汞撒作為防腐劑含65ml溶液的瓶子4CN底物溶液：4-氯-1-萘酚的甲醇溶液含12ml溶液的瓶子SB底物緩沖液：過氧化氫的磷

10、酸緩沖液含60ml溶液的瓶子WB洗液濃度(50):含有0.01%硫汞撒防腐劑的和去污劑的磷酸緩沖液含80ml溶液的瓶子PC陽性對照（人源）：滅活的包含有抗HCV抗體的人血清或血漿；并通過FDA認(rèn)證實(shí)驗(yàn)測試對HbsAg,抗HIV-1,抗HIV-2，抗HTLV-1和HTLV-2抗體無反應(yīng)活性，包含有0.1%疊氮化鈉和0.05%慶大霉素硫酸鹽作為防腐劑含0.3ml溶液的小瓶NC陰性對照（人源）：經(jīng)FDA認(rèn)證實(shí)驗(yàn)測試對HbsAg,抗HIV-1,抗HIV-2，抗HTLV-1和HTLV-2抗體無反應(yīng)活性的人血清或血漿，包含有0.1%疊氮化鈉和0.05%慶大霉素硫酸鹽作為防腐劑含0.3ml溶液的小瓶注意：所

11、有樣本要當(dāng)做含有可傳染性的媒介成分進(jìn)行處理。儲(chǔ)存在2-8（不要冰凍）針對體外診斷使用CHIRONRIBAHCV3.0SIA滿足FDA要求5.提醒1.所有實(shí)驗(yàn)樣本要當(dāng)做含有可傳染性的媒介成分進(jìn)行處理。產(chǎn)生陽性對照物的血清或者血漿被處理以滅活其中的丙肝病毒。另外，使用的血清或者血漿要通過FDA認(rèn)證實(shí)驗(yàn)測試驗(yàn)證對HbsAg,抗HIV-1,抗HIV-2，抗HTLV-1和HTLV-2抗體無反應(yīng)活性。然而，還沒有哪種滅活過程或者試驗(yàn)方法可以完全保證來自人血液的產(chǎn)物不會(huì)轉(zhuǎn)移感染性媒介。因此，這些成分必須當(dāng)做具備轉(zhuǎn)染性媒介進(jìn)行操作。建議所有試劑和樣本均按已確立的最佳實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程進(jìn)行操作。2.不要用嘴吸液。3

12、.不要在操作過樣本或試劑盒的地方吃喝，抽煙，或者使用化妝品。4.測試過程中戴一次性手套，之后要徹底洗手。手套要作為醫(yī)療垃圾丟棄。5.對濺液要迅速地用0.5%次氯酸鈉溶液進(jìn)行消毒（利用家用消毒劑1：10稀釋）或者等效其它消毒劑。污染物體應(yīng)該被視為醫(yī)療垃圾丟棄。6.任何潛在的污染物，包括陰陽對照，人樣本以及相關(guān)與之接觸過的物體都應(yīng)該按照當(dāng)?shù)貜U棄物處理要求被處理并作為醫(yī)療垃圾丟棄。遵照當(dāng)?shù)貜U棄物處理要求，包括試驗(yàn)中的抽吸液在內(nèi)的液體醫(yī)療垃圾應(yīng)該在排放到下水道之前用0.5%次氯酸鈉進(jìn)行消毒。（家用消毒劑按1:10體積比進(jìn)行稀釋）7.包含甲醇和硫汞撒組分的試劑盒組分以及含有該類物質(zhì)的廢液可能潛在的被分類

13、為醫(yī)療垃圾。因此，因此它們也應(yīng)該參照當(dāng)?shù)貜U棄物處理要求被丟棄。8.陰性和陽性對照以及稀釋的樣本都含有防腐劑疊氮化鈉，疊氮化鈉已經(jīng)被報(bào)道會(huì)和鉛及銅探測器潛在的形成爆炸性的金屬疊氮化物。因此，不要使用金屬管物作為實(shí)驗(yàn)室容器，同時(shí)要一直沖洗足夠體積的水以金屬的疊氮化物堆積在探測系統(tǒng)。9.避免眼睛，皮膚或者衣物與底物溶液（4-氯-1-萘酚）接觸。假如底物溶液與眼睛或者皮膚有接觸的話，應(yīng)徹底用水沖洗。警告：底物溶液中的4-氯-1-萘酚是一種危險(xiǎn)物質(zhì)，所以它的棄除應(yīng)按當(dāng)?shù)匾?guī)章制度進(jìn)行。警告：底物溶液包含甲醇。高度易燃。吸入吞咽的話有毒。應(yīng)保持容器緊緊密閉。遠(yuǎn)離燃源。不要抽煙。避免與皮膚接觸。萬一有意外發(fā)生

14、，或者身感不適，應(yīng)立即尋找醫(yī)療幫助。（可以的話要標(biāo)上瓶簽）10.使用之前，要把所有的試劑盒試劑成分和樣本置于室溫（15-30）大約30分鐘，不使用的試劑要放回到2-8.11.不同試劑盒間的試劑（試劑盒組分）和/或和條帶不要交叉使用。不同生產(chǎn)批號(hào)的試劑盒組分和條帶禁止一起使用。12.不要替換用于試劑盒中的陰性陽性對照。13.不要剪條帶。更窄的條帶可能導(dǎo)致錯(cuò)判。任何針對條帶上的的人為操作都可能會(huì)出錯(cuò)或者可能阻止道反應(yīng)帶的識(shí)別。14.超過有效期后不要再使用該試劑盒。具體日期被印刷在試劑盒盒體上。15.測試條帶和試驗(yàn)軟管只能使用一次。一旦已經(jīng)用于試驗(yàn)不要再使用測試條帶和軟管。16.不要交換小瓶或瓶子的

15、塞子和蓋子；否則會(huì)導(dǎo)致試劑的交叉污染。17.條帶操作過程中不允許條帶干掉。（試驗(yàn)全部18個(gè)步驟步驟中5個(gè)步驟）18.為防止褪色，保持操作過程中的條帶避光（例如，陽光直射）和避熱（高于30）。19.試驗(yàn)過程中禁止有氯消毒劑容器或者其它源頭中的次氯酸鈉蒸汽接觸到條帶，因?yàn)轭伾磻?yīng)可能會(huì)因此終止。20.溫和處理?xiàng)l帶。整個(gè)操作過程戴手套并使用鑷子以防止對條帶的污染。21.工作洗液要用蒸餾水或去離子水。臨床實(shí)驗(yàn)室試劑用水，型或型也可以被使用。儲(chǔ)水和洗液都應(yīng)該在非金屬容器中。22.試驗(yàn)之前要確保工作洗液和工作底物都是足夠的。假如發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)操作當(dāng)中上述溶液是不夠的話，試驗(yàn)操作將是無效的，需要在再次準(zhǔn)備好工作溶

16、液后重復(fù)進(jìn)行。23.所有的移液設(shè)備均應(yīng)按照廠商提供的說明書仔細(xì)校準(zhǔn)過。24.對每個(gè)樣本要使用單個(gè)槍頭，以防止交叉污染。25.最大操作次數(shù)是30次。每步操作均應(yīng)按照指定過程完成，不許有中斷。26.每個(gè)試驗(yàn)過程都要含有陰性陽性對照。整個(gè)試驗(yàn)過程陰陽性對照要像病人/捐獻(xiàn)者樣本一樣進(jìn)行操作（詳見第10部分）27.試驗(yàn)過程中要沒按指定的那樣加等份樣本的話，無論最初的樣本是陰性還是陽性，都將會(huì)導(dǎo)致樣本條帶被解釋為陰性。28不遵照說明書的操作將會(huì)導(dǎo)致一個(gè)錯(cuò)誤的試驗(yàn)結(jié)果。29.參照歐洲委員會(huì)指令1999/45/EC和ISO15223：2000標(biāo)準(zhǔn)，試劑盒中的一些試劑帶有危險(xiǎn)和安全標(biāo)志并應(yīng)該相應(yīng)的進(jìn)行處理。30

17、.已經(jīng)要求，我們可以提供材料的安全數(shù)據(jù)單。A以下試劑包含甲醇：底物R11高度易燃R23吸入有毒R25吞食有毒S7保持容器密閉S16遠(yuǎn)離火源-禁止吸煙S24避免皮膚接觸S45萬一有意外或身體不適，請立即尋找醫(yī)療幫助（在允許的地方示以標(biāo)簽）B下列試劑有生物危險(xiǎn)陽性對照（人）陰性對照（人）6.試劑的準(zhǔn)備使用之前，所有的試劑應(yīng)在室溫（15-30）中恢復(fù)溫度，并通過溫和顛倒容器數(shù)次以徹底混勻試劑，避免產(chǎn)生氣泡。程序1.工作洗液的準(zhǔn)備：在一個(gè)干凈的玻璃或聚丙烯容器中，按照表1說明準(zhǔn)備足夠的工作洗液。室溫下（15-30）工作洗液在一周內(nèi)事穩(wěn)定的。容器上注明工作洗液的配置時(shí)間及有效期。注意：洗液的濃儲(chǔ)液含有去

18、污劑。清洗過程中，殘留的泡沫還會(huì)留在洗桶中，然而殘留泡沫的存在不會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。表1：工作洗液準(zhǔn)備各種不同數(shù)量的條帶所需試劑量條帶數(shù)量濃儲(chǔ)液體積稀釋所用水+的體積3-512ml588ml6-1013ml637ml11-2015ml735ml21-3017ml833ml+:蒸餾水或去離子水2.工作底物的準(zhǔn)備：在一個(gè)干凈的玻璃或者聚丙烯容器中，參照表2說明為試驗(yàn)準(zhǔn)備足夠的工作底物（每個(gè)樣本最少1ml,每個(gè)洗滌容器最少10ml,一個(gè)洗滌容器可以放置20個(gè)條帶）。工作底物可以在使用前一個(gè)小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備；并置于黑暗環(huán)境中。任何未使用的工作底物不能被存儲(chǔ)為后續(xù)試驗(yàn)用。底物中4-氯-1-萘酚是一種危險(xiǎn)物質(zhì)必須

19、根據(jù)當(dāng)?shù)匾?guī)章制度予以丟棄。記錄容器中工作底物的配置日期和準(zhǔn)確時(shí)間以及有效期時(shí)間。表2：工作底物準(zhǔn)備各種不同數(shù)量的條帶所需試劑量條帶數(shù)量底物溶液的體積底物緩沖液體積3-101.7ml8.5ml111.9ml9.5ml122.1ml10.5ml132.2ml11.0ml142.4ml12.0ml152.6ml13.0ml162.7ml13.5ml172.9ml14.5ml183.1ml15.5ml193.2ml16.0ml20+3.4ml17.0ml+:每個(gè)洗滌容器能盛放的最大量7.儲(chǔ)存說明1.儲(chǔ)存試劑盒或者單份試劑（如試劑盒組分）于2-8.不能冰凍。2.不要使用過期的試劑盒或者單個(gè)試劑，具體日期

20、被印刷在試劑盒上以及單個(gè)試劑組分的標(biāo)簽上。3.打開小袋后條帶應(yīng)該在兩周內(nèi)被使用。不使用的條帶應(yīng)該被放置于原先的軟管中，并重新封閉在內(nèi)含干燥劑的錫紙袋，置于2-8保存。在小袋上記錄好開袋及條帶的有效期。4.室溫下（15-30）工作洗液一周內(nèi)是穩(wěn)定的。5.工作底物當(dāng)處于黑暗環(huán)境中時(shí)，室溫（15-30）下1小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。8.試劑變質(zhì)跡象1.包被好的條帶被密封在帶有濕度指示干燥劑的保護(hù)性小袋中，假如有過多的水分進(jìn)入小袋的話，正常狀態(tài)下是藍(lán)的或者紫色的干燥劑將會(huì)變成粉紅色。如果干燥劑是粉紅色的，這個(gè)條帶將不能再使用。2.底物溶液應(yīng)該是無色的。如果它呈現(xiàn)黃色，那么它已經(jīng)被氧化，不能再被使用。3.使用試劑物理

21、表觀上的改變預(yù)示著這些物質(zhì)的變質(zhì)。假若這個(gè)的現(xiàn)象（如顏色上的改變或者帶有微生物污染的濁度上的改變）被觀察到的話，它們不能再被使用。9.樣本收集和準(zhǔn)備工作樣本收集前對病人或者捐贈(zèng)者沒有具體的準(zhǔn)備工作，然而，利用RIBAHCV3.0SIA試驗(yàn)的樣本收集要遵循以下原則：1.血液采集應(yīng)該通過良好的醫(yī)療技術(shù)。2.使用的樣本要在56條件下熱處理1小時(shí)。3.血清或血漿可以在2-8儲(chǔ)存一周。為防止可能的污染，庫存的樣本（如儲(chǔ)存時(shí)間超過一周的）應(yīng)該被儲(chǔ)存至冰凍（-20甚至更低）。樣本不要反復(fù)凍融。冰凍的樣本應(yīng)該首先被徹底融化（室溫），然后充分混勻。如果有必要去掉其中的肉眼可見的顆粒成分，要進(jìn)行離心。測試之前，樣

22、本要恢復(fù)至室溫。避免樣本的反復(fù)凍融。4.應(yīng)該首選干凈的，非溶血的樣本，有沉淀的樣本要通過離心去除。5.經(jīng)過測試，以下物質(zhì)對陰性和陽性樣本的反應(yīng)活性沒有影響：血紅蛋白（高至80mg/dl），甘油三酯（高達(dá)1600mg/dl），膽紅素（高達(dá)60mg/dl）。多達(dá)五次的反復(fù)凍融或者spiked和白色念珠菌，葡萄球菌表皮菌素，假單胞桿菌銅綠菌素（最終濃度都達(dá)103CFU/mL）于2-8放置八天都對抗HCV陰性和陽性樣本反應(yīng)活性沒有影響。6.經(jīng)較好醫(yī)療技術(shù)采集的血清（被收集在血清分離管或者真空樣本收集管）或者血漿，含有EDTA的鉀鹽（15%），肝素的鈉鹽，ACD（B溶液），CPDA-1，或者4%檸檬酸鈉

23、可以被使用。為了確證樣本抗凝劑的準(zhǔn)確比例，被抽進(jìn)真空管的樣本應(yīng)該被評估forfilladequacy基于NCCLS標(biāo)準(zhǔn)或者血液試管制造商的說明書。7.針對如下樣本，例如尸體的體液（包括血清和血漿），胸積液，唾液，尿液，或者非人類樣本還沒有經(jīng)過試驗(yàn)評價(jià)，所以不應(yīng)該被采用。8.所有的血液樣本應(yīng)該被視作含有可轉(zhuǎn)染媒介存在而操作。推薦所有的血液或血液組分操作應(yīng)于OSHA血源病原體標(biāo)準(zhǔn)一致。如果樣本要被運(yùn)輸，它們必須遵照聯(lián)邦章程針對運(yùn)輸材料和運(yùn)輸模式標(biāo)以“診斷樣本”“感染物質(zhì)”/“病原介質(zhì)”字樣進(jìn)行包裹。在一個(gè)周圍溫度為30甚至更低的條件下樣本可以被運(yùn)輸6天，2-8冰冷條件下可以運(yùn)輸七天，也可以干冰環(huán)境

24、中運(yùn)輸。避免樣本的反復(fù)凍融。到達(dá)實(shí)驗(yàn)室以后，在周圍溫度環(huán)境中或者2-8環(huán)境中運(yùn)輸?shù)臉颖?，假如它們在一周?nèi)被測試，所有樣本可以放置2-8保存。被干冰環(huán)境運(yùn)輸?shù)臉颖緫?yīng)該在一個(gè)-20甚至更低的不用除冰的冷藏庫中保存，直至它們被用去測試。10.步驟A.提供的材料（30人份，產(chǎn)品編號(hào)930600）每個(gè)CHIRONRIBAHCV3.0SIA試劑盒包含有以下成分STRIP30個(gè)條帶6個(gè)袋子SD1瓶100mlCON1瓶65ml4CN1瓶12mlSB1瓶60mlWB1瓶80mlPC1小瓶0.3mlNC1小瓶0.3ml帶蓋洗滌容器-每盒兩個(gè)每個(gè)試劑盒包含一個(gè)最多可以操作6次的足夠量的試劑。（見第4部分，對每個(gè)提供

25、的試劑都有一個(gè)完整的描述）B.需要但不提供的材料1.搖床（可分量混合器）：能夠維持一個(gè)傾斜度在20度-30度之間的每分鐘16-20循環(huán)搖速。2.能夠維持1105rpm轉(zhuǎn)速的旋轉(zhuǎn)搖床。3.為準(zhǔn)備工作洗液緩沖液以洗滌條帶的蒸餾水或去離子水。4.一次性手套。5.確定的或校準(zhǔn)過的能夠移去20ul和1000ul的移液裝置，且精密性達(dá)到至少5%。6.干凈的玻璃或者聚丙烯帶有刻度的量筒（10ml,25ml,50ml,100ml）.7.血清學(xué)的移液管（5ml或者10ml）。8.為處理?xiàng)l帶的金屬或者塑料鑷子。9.抽氣裝置和維持抽氣狀態(tài)的空間。試驗(yàn)中的抽出物潛在的具有感染性，丟棄前應(yīng)該被消毒。液體的次氯酸鈉（例如

26、家用消毒劑）被1：10稀釋在抽出物中，或者等價(jià)的其它消毒劑也可以在丟棄前對抽出物進(jìn)行消毒。10.試驗(yàn)管架和洗滌容器（RIBA啟動(dòng)試劑盒，強(qiáng)生臨床診斷公司，產(chǎn)品編號(hào)930590）。每個(gè)洗滌容器最多可容20個(gè)條帶。C.主要陳述1.最大的操作數(shù)量是30個(gè)條帶（包括陰陽性對照條帶）；最少的操作數(shù)量是3個(gè)條帶（包含有陰陽性對照條帶）。每個(gè)試劑盒包含一個(gè)可操作6次的足夠量的試劑。每次操作必須順利進(jìn)行，不能有中斷，正如測驗(yàn)步驟中指明的那樣。2.對每一系列的病人或者捐贈(zèng)者樣本，要測試陰性陽性對照。和病人或捐贈(zèng)者樣本一樣要準(zhǔn)確的處理陰陽性對照。3.在試驗(yàn)步驟中使用試劑前，要確認(rèn)已經(jīng)準(zhǔn)備好工作洗液和工作底物的量充

27、足，如果測試過程中發(fā)現(xiàn)上述量不足，那么試驗(yàn)操作被認(rèn)為是無效的，需要再次準(zhǔn)備試劑重復(fù)進(jìn)行。4.為防止褪色，保持操作過程中的條帶避光（例如，陽光直射）和避熱（高于30）。5.伴隨著試驗(yàn)步驟的完成，要對洗滌容器用三倍體積的蒸餾水或去離子水進(jìn)行洗滌。使用六次后洗滌容器可以棄掉。D.試驗(yàn)步驟1.開始測試之前大約三十分鐘，從2-8拿出試劑盒，并允許試劑盒成分恢復(fù)室溫（15-30）。使用前請溫和搖轉(zhuǎn)容器數(shù)次以徹底混勻試劑。避免氣泡產(chǎn)生。2.如果還沒有準(zhǔn)備，那么請準(zhǔn)備工作洗液（見第6部分中表1，試劑準(zhǔn)備部分）3.從密封的錫袋中取出所需數(shù)量的條帶，并放置于各自軟管的試驗(yàn)軟管支架上。一個(gè)樣本軟管和陰陽性試劑盒對照

28、軟管是必需的。注意：樣本被測試時(shí)，試劑盒供給的陰陽性對照每次必須被包含。開袋后，條帶必須在兩周內(nèi)被使用。不用的條帶應(yīng)該于原先軟管中2-8放置，并處于含有干燥劑的密閉錫袋中。使用膠帶去封閉小袋，并在小袋標(biāo)簽上記錄小袋被打開的日期和小袋的使用期限。4.根據(jù)樣本確認(rèn)數(shù)量確定條帶使用的數(shù)量。5.移去軟管的蓋子，并在每個(gè)軟管中加1ml樣本稀釋液（確保整個(gè)條帶被液體覆蓋）。6.加20ul的適量樣本或者對照到對應(yīng)標(biāo)記的軟管中。蓋上軟管的蓋子并顛倒混勻。注意：對每份樣本或者對照要使用移液器7.請把軟管架在搖床上（見圖2），并用橡膠帶或膠帶系緊；室溫下（15-30）搖動(dòng)（每分鐘16-20轉(zhuǎn)）4-4.5小時(shí)。記錄

29、好樣本孵育步驟的起始時(shí)間和終止時(shí)間。注意：搖床介導(dǎo)的稀釋的樣本或者對照與條帶的反應(yīng)對達(dá)到試驗(yàn)的最佳性能是非常重要的。整個(gè)孵育過程中定期檢查以確保搖床運(yùn)動(dòng)是否持續(xù)?？赡苡绊懙娇贵w結(jié)合的搖床不正確運(yùn)行將使測試結(jié)果無效而且需要重復(fù)進(jìn)行試驗(yàn)。8.打開軟管的蓋子并完全吸出液體到一個(gè)合適的廢液容器中（見第5部分，第6項(xiàng)的警告）。每個(gè)軟管中加1ml的樣本稀釋液。9.蓋上軟管，并把軟管支架放到搖床上，室溫（15-30）搖動(dòng)30-35分鐘，然后再次吸出液體。10.加1ml工作洗液（見表1）到每個(gè)軟管中，然后倒液體和條帶到含有10ml工作洗液的洗滌容器中（每個(gè)洗滌容器最多20個(gè)條帶）。如果操作數(shù)量少于20個(gè)條帶，

30、再加工作洗液以補(bǔ)足到30ml。旋轉(zhuǎn)洗滌容器中的條帶。11.再加30ml的工作洗液（總共60ml），然后傾倒洗液，并確保條帶仍留在洗滌容器中。為了留下條帶，傾倒時(shí)一般溫和地滾動(dòng)洗滌容器。12.加30ml工作洗液，旋轉(zhuǎn)，再加30ml工作洗液，然后傾倒洗液并如步驟11描述的那樣確保條帶仍留在洗滌容器中。13.洗滌容器中的每個(gè)條帶要加1ml結(jié)合物（一個(gè)洗滌容器最少10ml）。14.室溫條件下（15-30）在一個(gè)轉(zhuǎn)速為1105rpm的旋轉(zhuǎn)搖床上旋轉(zhuǎn)洗滌容器9-11分鐘。注意：偶爾要檢查和搖動(dòng)洗滌容器以防止條帶聚集堆疊。搖床的循環(huán)運(yùn)動(dòng)對試驗(yàn)的成功是關(guān)鍵的。15.準(zhǔn)備工作底物（第6部分，表2，試劑的準(zhǔn)備部分

31、）。16.結(jié)合物孵育完成后，傾倒結(jié)合物。用30ml的工作洗滌液洗條帶，旋轉(zhuǎn)，并再加30ml工作洗液。傾倒洗液并再重復(fù)該操作兩次。17.洗滌容器中每個(gè)條帶加1ml的工作底物（一個(gè)洗滌容器最少10ml）。18.室溫條件下（15-30）在一個(gè)轉(zhuǎn)速為1105rpm的旋轉(zhuǎn)搖床上旋轉(zhuǎn)洗滌容器15-20分鐘。19.傾倒工作底物，然后通過加60ml的蒸餾水或去離子水旋轉(zhuǎn)洗滌條帶。倒去洗液并再重復(fù)該操作一遍。為了留住條帶，傾倒時(shí)一般溫和地滾動(dòng)洗滌容器。20.使用鑷子，轉(zhuǎn)移條帶到一個(gè)吸水紙上以吸取多余水分。室溫條件下黑暗空氣中干燥條帶至少30分鐘。3個(gè)小時(shí)內(nèi)解釋條帶（見第12部分，結(jié)果解釋）。注意：為防止褪色，保

32、持操作過程中的條帶避光（例如，陽光直射）和避熱（高于30）。11.質(zhì)量控制程序試劑盒中的試驗(yàn)對照每次操作都必須被包括，無論測試的樣本數(shù)或條帶數(shù)是多少。注意：一個(gè)試劑盒的陰性陽性對照需要每次操作時(shí)都包括在內(nèi)，但如果操作中不只一個(gè)洗滌容器的話話，沒必要每個(gè)洗滌容器中都要陰陽性對照。被覆蓋在條帶上的抗原確認(rèn)和定位如圖3所示。每個(gè)條帶上的兩種水平的人IgG（水平，低濃度對照；水平，高濃度對照）被作為內(nèi)部對照。通過和水平，水平人IgG內(nèi)部對照條帶對照，個(gè)體HCV反應(yīng)活性被確定。詳見第12部分對結(jié)果解釋的描述。針對試劑盒的陰陽性對照，以下結(jié)果被期望得到：a.在陰性和陽性對照條帶上，內(nèi)部IgG對照水平和水平

33、對應(yīng)條帶必須是通過肉眼可以清晰的辨別的。而且IgG對照水平必須是明顯更淺的比IgG對照水平。b.相對所有的HCV條帶，陽性對照條帶必須是2+甚至更高的陽性（參看結(jié)果解釋部分）。hSOD對應(yīng)的條帶必須是視覺上更淺的相對IgG對照水平來說（如-或者+/-）。c.陰性對照條帶必須對每個(gè)HCV和肉眼判斷要淺于IgG對照水平的hSOD條帶展示一個(gè)對應(yīng)。（如-或者+/-）如果試劑盒對照不能滿足以上標(biāo)準(zhǔn)的話，這個(gè)操作就是無效的，同時(shí)應(yīng)該被重新進(jìn)行。另外，針對所有的病人或捐贈(zèng)者樣本條帶IgG對照水平和IgG對照水平條帶必須是肉眼清晰可辨的，且IgG對照水平必須更淺相對IgG對照水平條帶來說。如果這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)不能滿

34、足某個(gè)病人或捐贈(zèng)者樣本，那么針對這個(gè)樣本的試驗(yàn)必須被重復(fù)。注意：如果帶型不完整，或者有任何假象干擾病人或者捐贈(zèng)者樣本條帶解釋，即使試劑盒的陰性陽性對照條帶仍然是可解釋的，這個(gè)樣本條帶同樣是無效的，試驗(yàn)應(yīng)該被重復(fù)操作。12.結(jié)果解釋樣本的抗HCV活性通過比較條帶上人IgG（水平，水平）的條帶強(qiáng)度對照加以確定?？贵w確認(rèn)被通過HCV帶上的特異條帶位置而確認(rèn)。如第11部分的質(zhì)量控制程序的圖3所示。根據(jù)內(nèi)部對照IgG條帶的密度，HCV條帶的強(qiáng)度被打分如下：條帶強(qiáng)度得分無帶-低于IgG對照水平的帶強(qiáng)度+/-等同于IgG對照水平的帶強(qiáng)度1+高于IgG對照水平的帶強(qiáng)度，但低于IgG對照水平的帶強(qiáng)度2+等同于I

35、gG對照水平的帶強(qiáng)度3+強(qiáng)于IgG對照水平的帶強(qiáng)度4+陰性，不確定性，陽性解釋是基于呈現(xiàn)在條帶上的反應(yīng)類型。對于有效操作，以下標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該被用于解釋：抗原帶型解釋沒有1+或者更高強(qiáng)度反應(yīng)活性的HCV帶呈現(xiàn)，或者，僅僅hSOD帶呈現(xiàn)1+或者更高強(qiáng)度的反應(yīng)活性陰性任何單一的1+或者更高強(qiáng)度反應(yīng)活性的HCV帶呈現(xiàn)，或者，hSOD帶呈現(xiàn)1+或者更高強(qiáng)度的反應(yīng)活性，同時(shí)有一條或多條HCV帶呈現(xiàn)1+或者更高強(qiáng)度的反應(yīng)活性不確定性至少有兩條HCV帶呈現(xiàn)1+或者更高強(qiáng)度的反應(yīng)活性陽性在這個(gè)試驗(yàn)中低于IgG對照水平（例如+/-）就是低于反應(yīng)活性的cutoff值。一個(gè)陽性條帶解釋僅僅可以在hSOD帶反應(yīng)活性不存在的情

36、況下成立（例如-，+/-）。一個(gè)陽性測試結(jié)果意味著抗HCV的存在和目前或者曾經(jīng)有HCV的感染。一個(gè)不確定性的結(jié)果意味著抗HCV可能或不可能出現(xiàn)，因此是否有HCV感染存在并不能確定。因?yàn)槿魏螚l帶上病毒編碼抗原的1+或者更高強(qiáng)度的反應(yīng)活性是目前或者過去HCV感染的可能證據(jù)，所有不確定性個(gè)體應(yīng)該6-12個(gè)月以后被重新測定以確認(rèn)是否有反應(yīng)活性增加跡象。建議六個(gè)月后使用對個(gè)體的新鮮抽取樣本進(jìn)行重測。經(jīng)過許可的抗HCV篩選步驟呈反應(yīng)活性而RIBAHCV3.0SIA測定結(jié)果為陰性的不排除HCV感染的可能性。在感染早期，抗HCV水平可能是檢測不到的。偶然情況下，條帶可能有一個(gè)深色的背景。假如相對于背景IgG水

37、平和IgG水平內(nèi)部對照條帶是可辨別的（例如更深于背景，且IgG水平的顏色深于IgG水平），那么這個(gè)條帶是可解釋的，而且?guī)У膹?qiáng)度同上述內(nèi)部對照進(jìn)行比較。條帶上沒有一個(gè)或者多個(gè)抗原對應(yīng)抗體呈現(xiàn)的抗HCV陰性樣本，抗原帶可能會(huì)比背景顏色更淺，這樣的帶應(yīng)該作為無反應(yīng)活性解釋。（例如-，+/-）13程序的局限性為了獲得最佳結(jié)果，試驗(yàn)必須嚴(yán)格按照這些說明進(jìn)行。盡管丙肝病毒是已知血源NANB肝炎的首要病原介質(zhì)，但是也有可能存在HCV以外的其它NANB病原途徑。RIBAHCV3.0SIA僅限于人血清或血漿中抗HCV的檢測。尸體的體液（包括血清和血漿），胸積液，唾液，尿液，或者非人類樣本還沒有經(jīng)過試驗(yàn)評價(jià)，所以

38、不應(yīng)該被采用。14預(yù)期結(jié)果RIBAHCV3.0SIA的性能通過對低危人群，高危人群，NANBH人群的臨床研究加以評價(jià)。特異性通過三種人群予以評價(jià)：（1）來自正常志愿者的血液捐贈(zèng)，各自在三個(gè)血液中心收集并測定；（2）已經(jīng)通過許可的多抗原篩選系統(tǒng)重復(fù)驗(yàn)證有反應(yīng)活性的來自延緩血液捐贈(zèng)者的庫存樣本；（3）來自患有肝臟疾病但為非NANBH病人個(gè)體的樣本。靈敏度通過以下樣本被評估：NANBH病人的樣本（血清轉(zhuǎn)陽名單）；臨床確認(rèn)的NANBH病人樣本；可獲得HAHBH的高危人群樣本，例如血友病患者，長期血透析病人以及靜脈毒品注射者。所有樣本分別用RIBAHCV3.0SIA和RIBAHCV2.0SIA平行測試。A.隨機(jī)志愿者的捐贈(zèng)血液反應(yīng)活性（低危人群）B.已經(jīng)通過許可的多抗原篩選系統(tǒng)重復(fù)驗(yàn)證有反應(yīng)活性的來自延緩血液捐贈(zèng)者的庫存樣本反應(yīng)活性C.針對來自其它肝臟疾病患者或者含有高水平免疫球蛋白的個(gè)體樣本的特異性研究。D.血清轉(zhuǎn)陽患者的靈敏度。E.急性或慢性NANBH病人的靈敏度。F.高危人群的靈敏度。15.具體的性能特征A.潛在的干擾物質(zhì)和條件使用抗HCV陽性樣本和陰性樣本通過RIBAHCV3.0SIA對較高水平的甘油三酯，膽紅素，血紅蛋白影響進(jìn)行評估。使用白色念珠菌，產(chǎn)表皮菌素葡萄球菌，產(chǎn)銅綠菌素假單胞桿菌（最終濃度都達(dá)103CFU/mL）最為微