不同類型疫苗的作用機制課件(PPT 56頁)

1、1 第1頁，共56頁。21 弱毒疫苗基本概念： 弱毒疫苗，是一種病原致病力減弱但仍具有活力的完整病原疫苗，也就是用人工致弱或自然篩選的弱毒株，經培養(yǎng)后制備的疫苗。作用機制： 通過特殊途徑致弱后，其致病力減弱且免疫原性保持不變，經過首免、二免甚至三免后，畜禽不產生明顯損傷，卻能被刺激產生明顯的免疫保護力畜禽不再被感染。第2頁，共56頁。3 突出的特點表現在以下幾個方面 ：（1）誘導包括體液免疫、細胞免疫的免疫方式，具有較強保護作用。（2）由于是活病毒，病毒可以在體內增殖，長時間和機體細胞發(fā)生作用，誘導較強的免疫力。（3）需接種多次，即可以達到滿意的效果。（4）可以通過自然感染途徑接種（點眼、滴鼻

2、、口服等），這樣不僅可以產生全身免疫反應，而且可以誘導產生局部免疫反應。（5）可以通過病毒所有抗原（病毒包括多種抗原，其中一種或兩種就能引起反應）刺激機體產生反應。（6）一般采用真空凍干工藝，需冷凍保存（-15-20）。第3頁，共56頁。4 其主要缺點：(1)既然是活病毒制劑，有可能污染其它活的病原體；(2)一些減毒活疫苗仍保留有一定的毒力；(3)傳統(tǒng)的減毒活疫苗可能出現病毒毒力回復；(4)在一些免疫缺陷的個體中可能誘發(fā)嚴重疾??；(5)在某些時候，野毒株感染可以導致活疫苗效果降低；(6)缺損顆粒可以干擾疫苗的免疫效果；(7)對保存和運輸的要求較高。第4頁，共56頁。52 滅活疫苗基本概念： 滅

3、活疫苗是先對病毒或細菌培養(yǎng)，然后用加熱或化學劑（通常是福爾馬林）將其滅活。滅活疫苗即可由整個病毒或細菌組成，也可由它們的裂解片段組成為裂解疫苗。第5頁，共56頁。6 作用機制： 滅活疫苗常需多次接種，接種1劑不產生具有保護作用的免疫，僅僅是“初始化”免疫系統(tǒng)。必須接種第2劑或第3劑后才能產生保護性免疫。它引起的免疫反應通常是體液免疫，很少甚至不引起細胞免疫。接種滅活疫苗產生的抗體滴度隨著時間而下降，因此，一些滅活疫苗需定期加強接種。滅活疫苗通常不受循環(huán)抗體影響，即使血液中有抗體存在也可以接種（如在嬰兒期或使用含有抗體的血液制品后）；它在體內不能復制，可以用于免疫缺陷者。滅活疫苗使受種者產生以體

4、液免疫為主的免疫反應，它產生的抗體有中和、清除病原微生物及其產生的毒素作用，對細胞外感染的病原微生物有較好的保護效果。滅活疫苗對病毒、細胞內寄生的細菌和寄生蟲的保護效果較差或無效。第6頁，共56頁。7 其主要優(yōu)點：(1)由于不存在有感染性病毒存在，比較安全；(2)保存方便，無須凍干保存；(3)其它活病原體污染問題較少；(4)生產相對簡單。第7頁，共56頁。8 主要缺點：(1)免疫效果一般低于減毒活疫苗，雖然能夠誘導產生包括中和抗體在內的免疫反應，但不能誘導細胞毒T淋巴細胞反應。(2)誘導產生的免疫反應持續(xù)時間較短，需要多次接種。(3)滅活劑對病毒抗原有影響，而且對不同的抗原成分影響不同。(4)

5、由于誘導的免疫反應水平較低，以及各個抗原成分之間的疫苗應答不平衡，可能誘發(fā)疾病。(5)一般要求對疫苗進行濃縮純化。(6)一般不能通過自然途徑接種，不易產生局部免疫反應。(7)需要使用佐劑，制劑中存在滅活劑。第8頁，共56頁。93 類毒素基本概念： 細菌的外毒素經甲醛處理后，失去毒性而仍保留其免疫原性，能刺激機體產生保護性免疫的制劑。常用的甲醛溶液的濃度是0.30.4%。它可使細菌外毒素的電荷發(fā)生改變，封閉其自由氨基，產生甲烯化合物（CH2=N-）。其他基團（如吲哚異吡唑環(huán)）與側鏈的關系亦可改變，成為類毒素。常用的類毒素有白喉類毒素，破傷風類毒素。另外，若在類毒素中加入適量的磷酸鋁或氫氧化鋁，即

6、成吸附精制類毒素。第9頁，共56頁。10 作用機制：該類制劑在體內吸收較慢，能較長時間刺激機體，使機體產生高滴度抗體，增強免疫效果。類毒素也可與死疫苗混合制成聯合疫苗。如百白破三聯疫苗，就是由百日咳死菌苗、白喉類毒素、破傷風類毒素混合制成的。主要用于兒童，注射后可同時預防兒童易發(fā)的白喉、百日咳、破傷風三種疾病。類毒素在預防由外毒素引起的傳染病中起重要作用，可用于人和動物的免疫接種，使其通過人工自動免疫獲得抗病能力；還可用來免疫動物，再從動物血液中提取含抗毒素的血清，將此抗血清注入人體后，可使人體通過被動免疫的方式，立即獲得相應的特異性免疫力。第10頁，共56頁。11 其優(yōu)點：與滅活菌疫苗相同，

7、不具持續(xù)力，所以必須經常追加接種。其缺點：制備簡單，成本低廉。第11頁，共56頁。124 亞單位疫苗基本概念： 亞單位疫苗是將致病菌主要的保護性免疫原存在的組分制成的疫苗.在大分子抗原攜帶的多種特異性的抗原決定簇中，只有少量抗原部位對保護性免疫應答起重要作用。通過化學分解或有控制性的蛋白質水解方法使天然蛋白質分離，提取細菌、病毒的特殊蛋白質結構，篩選出具有免疫活性的片段制成的疫苗，稱為亞單位疫苗。第12頁，共56頁。13 作用機制：亞單位疫苗僅有幾種主要表面蛋白質，因而能消除許多無關抗原誘發(fā)的抗體，從而減少疫苗的副反應和疫苗引起的相關疾病。A群腦膜炎球菌多糖疫苗、傷寒Vi多糖疫苗是比較早的亞單

8、位疫苗，該類疫苗減少了全菌疫苗使用中所出現的不良反應；此外，流感裂解疫苗的免疫效果及安全性已在國內外的廣泛應用中得到了肯定。亞單位疫苗的不足之處是免疫原性較低，需與佐劑合用才能產生好的免疫效果，所以，若全菌（病毒）疫苗不存在嚴重不良反應，仍應以全菌（病毒）疫苗為首選。其優(yōu)點：易制備，價格低廉。其缺點：需追加免疫，制備疫苗有局限性。第13頁，共56頁。14生物技術疫苗第14頁，共56頁。151結合疫苗基本概念： 結合（以蛋白為載體的細菌多糖類）疫苗是指采用化學方法將多糖共價結合在蛋白載體上所制備成的多糖-蛋白結合疫苗，用于提高細菌疫苗多糖抗原的免疫原性，如b型流感嗜血桿菌結合疫苗、腦膜炎球菌結合

9、疫苗和肺炎球菌結合疫苗等。第15頁，共56頁。16 作用機制：病原菌中的抗原性多糖通常是由一相同結構單位重復組成的線性聚合體，這一結構單位稱之重復單位（repeat unit,RU),一個RU常有2-8個單糖，其中的O-乙?；?、丙酮?；?、糖苷鍵和磷酸酯（Hib莢膜多糖中有此結構）等成分是多糖抗原的主要決定簇。具有這種重復決定簇結構的多糖抗原能專一性地被B細胞表面抗原識別受體而與之牢固結合，并引起足夠數量的受體發(fā)生交聯，產生成帽現象，從而可單獨觸發(fā)B細胞分化。因此單一多糖抗原在刺激機體產生免疫應答時，不需要T輔助性細胞（TH 細胞）的輔助就能直接激活B細胞，是一種T細胞不依賴性抗原（Ti-Ag）

10、。與Ti-Ag發(fā)生應答的是B1細胞，其細胞膜表面的抗原識別受體（即膜表面免疫球蛋白SmIg)為IgM單位，故應答中僅產生IgM抗體，無記憶B細胞(Bm)形成，不產生加強應答，因而免疫原性弱。第16頁，共56頁。17 將多糖分子經化學共價結合到蛋白質上，由于蛋白質是一個大分子載體，其分子表面存在多種不同的決定簇，能專一性地被TH細胞表面抗原識別受體識別，從而激活TH細胞，使之參與免疫應答，因此多糖-蛋白結合物注射機體后誘發(fā)T細胞依賴性免疫應答，應答過程中存在著TH-B2細胞間的協同作用，其中TH細胞專一地識別多糖（抗原）決定簇，是產生抗體的效應細胞。由于B2細胞（成熟的B淋細胞）表面的抗原識別受

11、體為IgG和IgM,故應答中產生這兩種抗體，且能形成記憶細胞，出現加強應答，使結合物中多糖的免疫原性大大提高。同單一多糖疫苗相比，多糖蛋白結合疫苗具有許多免疫優(yōu)勢，即它屬于Td-Ag,有TH細胞參與，刺激機體產生的抗體主要為IgG，另有少量的IgM，能產生細胞免疫和加強應答，免疫原性強，免疫接種范圍廣。第17頁，共56頁。18 其優(yōu)點：由于結合疫苗中兩種抗原經化學共價結合后其各自的免疫原性均得以增強,如此不僅起到了聯合接種的目的,還同時提高了免疫接種效果,帶來一定 的 社會效益和經濟效益。其缺點：作為一個在單一多糖疫苗基礎上進一步化學結合的疫苗, 其制備成本較高,在某些特殊情況下其發(fā)展受到一定

12、限制；在具體化學合成中還存在許多問題,其中如多糖和載體蛋白質在結合中均存在自身交聯而變形,產生一種新抗原( 副反應物)的可能。 第18頁，共56頁。192 合成肽疫苗基本概念： 合成肽疫苗是一種僅含免疫決定簇組分的小肽, 即用人工方法按天然蛋白質的氨基酸順序合成保護性短肽, 與載體連接后加佐劑所制成的疫苗,是最為理想的安全新型疫苗,也是目前研制預防和控制感染性疾病和惡性腫瘤的新型疫苗的主要方向之一。第19頁，共56頁。20 作用機制：合成肽疫苗能否產生對B細胞表位的特異性免疫應答以及應答水平的高低主要取決于設計的幾種抗原表位的組成和組合方式。一般而言,作為理想的免疫原,抗原分子中要同時包含目的

13、抗原B細胞表位和自身或外源T細胞表位,可誘導出高度特異性的體液或細胞免疫反應,從體液免疫和細胞免疫水平起到預防或治療作用,使機體產生較強的保護性。另外,通過設計隱藏于抗原分子內部的表位可增強抗原的免疫原性, 因為泛 D R 輔助T細胞表位( pan - DR helper T cell ep itopes , PADRE )或通用T表位( universal T ep itope)以高親和力與機體內常見的HLADR分子結合,較少受MHC限制。第20頁，共56頁。21 其優(yōu)缺點：合成肽疫苗能克服常規(guī)疫苗的缺點，很早就被認為是動物傳染病預防用的終極疫苗。然而多年的研究結果表明，合成肽疫苗免疫動物后

14、所起的免疫保護作用并沒有象人們當初設想的那樣理想，同時證明了構建的合成肽疫苗的抗原性及其免疫原性要受到其自身組成及宿主免疫系統(tǒng)等多種因素的影響。在誘導機體產生免疫的過程中，單一的中和抗原表位是遠遠不夠的，增加中和抗原表位的數目和引入細胞抗原表位將起到必不可少的輔助協同作用。第21頁，共56頁。223 基因工程疫苗使用DNA重組生物技術，把天然的或人工合成的遺傳物質定向插入細菌、酵母菌或哺乳動物細胞中，使之充分表達，經純化后而制得的疫苗。應用基因工程技術能制出不含感染性物質的亞單位疫苗、穩(wěn)定的減毒疫苗及能預防多種疾病的多價疫苗。包括基因亞單位疫苗、基因工程活載體疫苗、DNA疫苗、轉基因植物疫苗、

15、基因缺失疫苗。第22頁，共56頁。233.1 基因工程亞單位疫苗 基本概念：基因工程亞單位疫苗（Subunit vaccine）又稱生物合成亞單位疫苗或重組亞單位疫苗，是指將保護性抗原基因在原核或真核細胞中表達，并以基因產物蛋白質或多肽制成疫苗。第23頁，共56頁。24 作用機制： 例如FMDV基因工程亞單位疫苗主要是利用各種表達系統(tǒng)表達VP1蛋白，制成疫苗。Kupper等（1981）等克隆了FMDVVP1基因，將其插入到原核表達載體PL啟動子的下游，實現VP1基因的原核表達，并通過間接ELISA和放射免疫試驗證實了其表達產物具有抗原性，從而為FMDV基因工程亞單位疫苗的研制提供了理論依據。同

16、年Kield用大腸桿菌表達的A型FMDVVP1蛋白免疫豬和牛，都可誘導中和抗體的產生，用高濃的VP1蛋白或重復接種牛，可使牛抵抗FMDV強毒的攻擊。第24頁，共56頁。25Morgan證實：用A12-32二聚體多次接種豬，豬也可產生高水平的中和抗體，可以保護豬免受強毒的攻擊，但是該技術不適合O型FMDV。目前，已經發(fā)現FMDV結構基因和非結構基因2A、3C串聯起來表達，可以產生76S的類病毒粒子，提純該病毒粒子，用來免疫動物，其免疫效果類似于全病毒，可產生高水平的中和抗體，能抵抗強毒的攻擊，并徹底解決了FMDV常規(guī)疫苗散毒的危險。除此以外，酵母和桿狀病毒系統(tǒng)也用來表達VP1蛋白，解決VP1蛋白

17、在原核表達系統(tǒng)中不被修飾加工等問題，以期提高其免疫原性。第25頁，共56頁。26 其優(yōu)點：安全性高；純度高，穩(wěn)定性好；產量高；用于病原體難于培養(yǎng)或有潛在致癌性，或有免疫病理作用的疫苗研究。其缺點：與傳統(tǒng)亞單位疫苗相比，免疫效果較差。增強其免疫原性的方法：調整基因組合使之表達成顆粒性結構。是在體外加以聚團化，包入脂質體或膠囊微球。加入有免疫增強作用的化合物作為佐劑（adjuvant）。第26頁，共56頁。27 用于亞單位疫苗生產的表達系統(tǒng)主要有大腸埃希氏菌、枯草桿菌、酵母、昆蟲細胞、哺乳類細胞、轉基因植物、轉基因動物。比較成功的基因工程亞單位疫苗是乙型肝炎表面抗原疫苗。第27頁，共56頁。283

18、.2 基因工程活載體疫苗基本概念： 活載體疫苗(Live recombinant vaccine)可以是非致病性微生物通過基因工程的方法使之表達某種特定病原物的抗原決定簇基因,產生免疫原性,也可以是致病性微生物通過基因工程的方法修飾或去掉毒性基因,但仍保持免疫原性。在這種疫苗中,抗原決定簇的構象與致病性病原體抗原的構象相同或者非常相似,活載體疫苗克服了常規(guī)疫苗的缺點,兼有死疫苗和活疫苗的優(yōu)點,在免疫效力上很有優(yōu)勢,主要有基因突變疫苗和復制性活載體疫苗。已報道的活病毒載體研究包括痘病毒、腺病毒、皰疹病毒、腺聯病毒、反轉錄病毒、甲病毒、脊髓灰質炎病毒和門戈病毒、登革熱病毒、流感病毒、水皰性口炎病毒

19、。第28頁，共56頁。29作用機制：痘病毒載體疫苗： NYVAC株痘病毒是來自哥本哈根疫苗株的高毒致弱毒，不能夠在多數人類細胞系中增值，在動物體內也表現出高度致弱的特征。ALVAC株是來自金絲雀的疫苗株痘病毒，廣泛用作都病毒載體，只限于在禽類中復制，而不能在哺乳動物體內和細胞中增殖。這倆株非復制型痘病毒載體都能用于表達外源基因，刺激機體產生保護性的免疫反應。第29頁，共56頁。30 腺病毒載體疫苗： 重組腺病毒載體的構建相對容易，重組腺病毒可以達到很高的滴度，可以通過肌肉、鼻腔或口服進行免疫，可以感染很多類型的分裂或靜止期細胞，進入細胞的效率很高。通過基因工程的方法可以構建3種類型的重組腺病毒

20、：一種是可以復制的重組腺病毒；二是不需要輔助病毒的復制缺陷型的重組腺病毒，需要有特定的包裝細胞系；三是需要輔助病毒的復制缺陷型的重組腺病毒。缺失E1/E3區(qū)的復制缺陷型的重組腺病毒可以插入約7.5kb的外源基因片段；外源基因插入E3和E4缺失區(qū)可以產生可復制的重組腺病毒,插入的外源基因可達5-6kb。第30頁，共56頁。31 在增殖E1缺失的重組體的時候存在一個問題，是容易通過重組產生一定比例的可復制的腺病毒，現在已經研制出一種包裝細胞可以解決這一問題。盡管可復制腺病毒疫苗應用已經有許多年了，但已經發(fā)現了Ad4弱毒在人群中水平傳播的例子。不需要輔助病毒的復制缺陷型重組腺病毒在應用中可能更安全，

21、但復制缺陷型的重組腺病毒的免疫效果卻沒有可復制的重組腺病毒好，表達偽狂犬病毒gD糖蛋白的復制缺陷型重組腺病毒的保護劑量至少是可復制型重組腺病毒的250倍。第31頁，共56頁。32 活載體疫苗的優(yōu)點：可以將外源抗原基因有效地導入機體，而不需要動用原始活毒，因而相對安全；而且，不同的抗原可以使用一種載體傳遞系統(tǒng)，一次性免疫就可以達到保護機體抵抗幾種疾病2?；钶d體疫苗的缺點：宿主會產生強大的針對病毒載體的免疫反應，如果機體已經存在對病毒載體的免疫力，那么初次免疫會受到影響，再次免疫會激起機體強大的排斥反應。第32頁，共56頁。333.3 DNA疫苗 基本概念：基因疫苗（gene vaccine),也

22、稱DNA疫苗、核酸疫苗，即將編碼外源性抗原的基因插入到含真核表達系統(tǒng)的質粒上，然后將質粒直接導入人或動物體內，讓其在宿主細胞中表達抗原蛋白，誘導機體產生免疫應答。第33頁，共56頁。34DNA疫苗的作用機理 DNA疫苗能像病毒的活疫苗一樣，進入宿主細胞的細胞核中轉錄為信使RNA，再在細胞漿中翻譯成蛋白質。其中一部分蛋白質在降解后與MHC的類分子結合；而另一部分蛋白質也可以分泌出去，再像外源蛋白質一樣被APC攝取后，在吞噬溶酶體中降解成的多肽和MHC的類分子結合(圖7.3)。所以DNA疫苗既能誘導細胞免疫，又能刺激產生體液免疫。第34頁，共56頁。35DNA疫苗誘導免疫反應的原理 (1)肌細胞的

23、直接參與 攝取了DNA的肌細胞可直接對表達的蛋白質抗原進行加工、處理和呈遞。DNA疫苗在肌細胞內表達蛋白質抗原，然后被細胞內的水解酶降解成8-12個氨基酸的短肽，它們和MHC的類分子結合，并呈遞到細胞表面被CD8 T細胞的受體識別而誘發(fā)免疫反應。第35頁，共56頁。36DNA疫苗誘導免疫反應的原理 (2)以樹突狀細胞為主的抗原呈遞細胞以樹突狀細胞為主的抗原呈遞細胞，即采源于骨髓的APC也可被DNA轉染。DNA疫苗在APC中表達抗原，蛋白質被水解酶降解成多肽后與MHC的類分子結合，再呈遞給CD8 T細胞而導致體內CTL的免疫應答。另外，肌細胞在攝取DNA以后，DNA疫苗的基因在質粒所攜帶的強啟動

24、子的作用下，在肌細胞內表達相應的蛋白質抗原。此時的肌細胞不能自己加工處理抗原，而是將蛋白質抗原釋放出去，然后被來源于骨髓的APC捕捉和攝取。第36頁，共56頁。37DNA疫苗誘導免疫反應的原理 (3)肌細胞和APC共同參與都能攝取DNA ，并能對表達的蛋白質抗原進行加工和處理，降解后的多肽與MHC的類分子結合，并呈遞給CD8 T細胞而產生CTL的免疫應答。第37頁，共56頁。383.5 轉基因植物疫苗 基本概念： 轉基因植物疫苗是指用植物基因工程技術與機體免疫機理相結合，生產出的能使機體獲得特異性抗病能力的疫苗。第38頁，共56頁。39 作用機制： 動物及人體的呼吸道、消化道及生殖道黏膜與病原

25、體接觸后會引起機體的黏膜免疫反應，在黏膜的微環(huán)境中產生分泌型IgA抗體和特異的免疫淋巴細胞，從而構成機體防御病原體感染的第一道屏障?？诜呙缇褪且晕改c道黏膜為接種免疫部位，從而是機體在胃腸道黏膜產生局部免疫應答進而獲得全身性的免疫保護。第39頁，共56頁。40 許多文獻報道，轉基因口服疫苗不僅誘導了機體系統(tǒng)免疫反應，而且還誘導了黏膜免疫反應。誘導黏膜免疫是從M細胞識別抗原開始的。黏膜免疫反應過程如下：（1）抗原與M細胞表面尚未明確的部位結合。（2）抗原被攝入M細胞的吞飲泡。（3）M細胞將識別的抗原傳遞給巨噬細胞，巨噬細胞和其他抗原呈遞細胞再將抗原展示給Th細胞。（4）當Th細胞識別外源的蛋白質

26、片段后，Th細胞協助激活B細胞，活化的B細胞轉移到腸系淋巴結，并在那成熟分化為IgA漿細胞。第40頁，共56頁。41 （5）IgA在漿細胞內產生，由J鏈連接成雙聚體分泌出來。當IgA通過黏膜或漿膜上皮細胞向外分泌時，與上皮細胞產生的分泌片連接成完整的分泌型IgA（sIgA),釋放到分泌液中，分布在黏膜或漿膜表面發(fā)揮作用。當疾病因子出現時，記憶Th細胞一方面刺激胞毒T細胞攻擊受感染的細胞；另一方面迅速刺激記憶B細胞分泌中和抗體，消滅入侵的病原體。其優(yōu)點：安全性好、生產成本低。其缺點是：免疫原性差。第41頁，共56頁。423.6 基因缺失疫苗基本概念： 通過缺失與病毒力相關的基因，減弱其毒力但不喪

27、失其免疫原性而制成的疫苗。該類疫苗中最有代表性的例子是豬偽狂犬病毒(PRV)糖蛋白E基因 (原稱gT基因)缺失(gE-)及胸腺核苷酸激酶基因突變失活(TK-)株的活疫苗。gE 和TK基因產物的缺失使野毒PRV的致病性顯著減弱, 其免疫力不僅與常規(guī)的弱毒苗相當,而且由于gE基因的缺失,使其成為一種標記性疫苗。即接種該疫苗免疫的豬在產生免疫力的同時不產生抗gE抗體,而自然感染的帶毒豬具有抗gE抗體。第42頁，共56頁。43 作用機制： 第一代基因缺失疫苗 PRV的TK基因是主要的毒力基因,對其進行缺失便成為第一代基因缺失疫苗。TK 基因缺失株經生物學和動物試驗證明對 Balb/c小白鼠有較高的安全

28、性,接種豬能產生很強的免疫力并能抵抗PRV強毒的攻擊,而且免疫豬后還可以通過PCR的方法將免疫接種豬與自然感染豬區(qū)分開來。但是,由于 TK基因屬于酶蛋白基因,在體內不能產生其相應的抗體, 因此僅缺失TK基因不能用血清學方法區(qū)別開免疫接種豬與自然感染豬,要將此區(qū)別開來必須缺失相應 的糖蛋白基因。此外,僅缺失TK基因的弱毒株對犢牛還有較低的毒力, 對狗、 貓毒力更強。第43頁，共56頁。44 第二代基因缺失疫苗 第二代基因缺失疫苗是在TK缺失疫苗的基礎上發(fā)展起來的,比僅僅TK缺失的疫苗更加優(yōu)越。第一代TK缺失疫苗只能夠采用核酸雜交,限制性內切酶圖譜, 空斑放射自顯影同野毒株相區(qū)別, 第二代基因缺失

29、疫苗除 了在TK基因引入了一個缺失外,在非編碼必需糖蛋白的基因內引入了一個新的缺失,或插入一個報告基因,這樣得到的突變株就不能產生被缺失的糖蛋白,從而免疫動物就不能產生相應的抗體, 且可以通過血清學方法將免疫接種豬與自然感染野毒的豬相區(qū)別, 這也是第二代基因缺失疫苗的最顯著特點。此外, 某些糖蛋白的缺失,可以進一步降低毒力。第44頁，共56頁。45 其優(yōu)缺點： 基因缺失疫苗的突出優(yōu)點是疫苗株不易返祖而重新獲得毒力。由于基因缺失疫苗株病毒的復制能力并不明顯降低, 其所導致的免疫應答不低于常規(guī)的弱毒活疫苗。在單基因缺失的基礎上成功構建的雙基因缺失或多基因缺失疫苗會更為安全可靠。基因缺失疫苗的生產工

30、藝與相應的弱毒疫苗相同,在生產過程和生產成本上都不存在投入過高的問題。盡管存在實際應用中的安全性問題, 特別是病毒在自然狀態(tài)下可能與野毒株發(fā)生重組, 或者發(fā)生核酸修補,使疫苗株原來缺失的基因恢復而重新獲得毒力,以及部分基因缺失疫苗對孕畜和仔畜的毒力偏高問題。 第45頁，共56頁。464 抗原-抗體復合物疫苗基本概念：抗原-抗體復合物疫苗是由特異性高免血清按照恰當的比例與抗原混合而制成。第46頁，共56頁。47 作用機制：使用抗原抗體復合物疫苗可增強雞和哺乳動物免疫反應，加強保護性免疫，其作用機制和方式尚不明了。以下是倆種常見的解釋。（1）與濾泡樹狀細胞結合 ： 許多抗原以抗原遞呈細胞（APCs

31、)如單核細胞、巨噬細胞表面的Fc受體為中介，而被捕獲、加工和遞呈。病毒與抗體形成復合物以后，由于抗體分子的Fc片段與APC的Fc受體有很高的親和性，因而使得與抗體的病毒更易更有效地與APC結合，一旦抗原-抗體復合物被APC吞噬和內化，即可激活B淋巴細胞和T淋巴細胞，刺激B淋巴細胞成為抗體分泌細胞，從而引起強烈的體液免疫和細胞免疫應答。并且，樹突狀細胞（DC）位于次生淋巴器官，可轉運抗原-抗體復合物至淋巴結。第47頁，共56頁。48 Boursne等研究表明。接種IBDV-Ab疫苗后,導致脾臟產生更多的生發(fā)中心。他們推測, 復合物疫苗的作用機理可能與脾臟、法氏囊的濾泡樹突狀細胞的結合有關。另外,

32、Wen曾報道小鼠腹腔巨噬細胞(M5) 、脾臟及骨髓樹突狀細胞(DC)體外攝取IC的量明顯多于單純抗原,同時等研究發(fā)現機體抗原遞呈細胞(APC)對IC的攝取量主要通過以下兩種途徑: 抗 H BsIgG可通過Fc段與APC膜上的Fc受體交聯結合而大量攝入IC; 通過抗HBs對HBsA g的聚集作用,形成較大顆粒,易被APC內化攝入刪除。第48頁，共56頁。49 （2）通過Fc受體與APC結合,增強APC的遞呈能力,促進APC分泌細胞因子： Fc受體廣泛分布于APC等免疫效應細胞表面, 抗體通過與 Fc 受體結合,能夠介導免疫效應細胞對抗原的攝取等作用,參與對抗原誘生的免疫應答調節(jié)作用。APC細胞被

33、激活而攝入大量顆粒性抗原異物,不僅可增強依賴抗體的細胞殺傷活性(antibody dependent cell mediated cytotoxicity,ADCC)作用,而且還可使激活的M5等APC通過分泌白細胞介素 1(interleukin-1,IL-1)、白細胞介素12(interleukin-12,IL-12)等細胞因子調節(jié)機體免疫應答,并增強對T細胞應答的剌激作用。第49頁，共56頁。50 另據報道，HBsAg與ant-iHBs結合成免疫復合物后,可增強鼠巨噬細胞、樹突狀細胞攝取抗原,并且通過對脾T細胞的抗原遞呈試驗顯示,可使脾T細胞產生更強的淋巴細胞增殖反應及釋放細胞因子。比單純抗原刺激機體產生免疫反應的作用更強大,且免疫復合物本身還可起佐劑作用,增加抗原的免疫原性, Zheng 等研究通過HBsAg轉基因小