論弧菌科和氣單胞菌科的常規(guī)檢查PPT通用課件

1、第十章 弧菌科和氣單胞菌科的常規(guī)檢查 石河子人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 王樂弧菌科包括弧菌屬和發(fā)光桿菌屬，是一大群菌體短小、彎曲成弧形、具有單端鞭毛、運(yùn)動活潑、氧化酶試驗(yàn)陽性的革蘭陰性菌。該類細(xì)菌廣泛分布于自然界，以水中居多，人體腸道中偶有此類細(xì)菌存在。弧菌屬、氣單胞菌屬、鄰單胞菌屬鑒別要點(diǎn) 試驗(yàn) 弧菌屬 氣單胞菌屬 鄰單胞菌屬 甘露醇 +/- + - 鳥氨酸 +/- - + 精氨酸 +/- +/- + O/129敏感 S R S TCBS生長 + - - 嗜鹽性 +/- - -第一節(jié) 弧菌屬是一群氧化酶陽性，發(fā)酵葡萄糖，對弧菌抑制劑O/129敏感的細(xì)菌，鈉離子能刺激其生長，其中有些菌株具有嗜鹽特點(diǎn)（在無

2、鹽時不能生長）。目前發(fā)現(xiàn)本屬細(xì)菌共有36個種，其中12種已被證明能引起人類感染或可從臨床標(biāo)本中分離得到。最重要的是： 霍亂弧菌 副溶血弧菌一、霍亂弧菌（一）分類與特征 霍亂弧菌是引起烈性傳染病霍亂的病原體。該菌分為古典生物型和埃爾托（Eltor）生物型。 霍亂發(fā)病急，傳染性強(qiáng)，死亡率高。 自1817年以來，已發(fā)生過7次世界性霍亂大流行，前6次均由霍亂弧菌古典生物型引起，1961年開始的第7次大流行由霍亂弧菌Eltor生物型引起。1992年在印度、孟加拉等國發(fā)現(xiàn)一個新的流行株O139。形態(tài)與染色 從患者體內(nèi)新分離的霍亂弧菌形態(tài)典型，菌體彎曲呈弧形或逗點(diǎn)狀，革蘭染色陰性，菌體的一端有長為菌體3-5

3、倍的單鞭毛，在米泔水樣糞便標(biāo)本中排列呈魚群狀。該菌運(yùn)動活潑，呈穿梭樣或流星狀。 G- ，逗點(diǎn)狀，1 根鞭毛，有菌毛。 病人糞便作懸滴標(biāo)本，可見“魚群樣穿梭”。 無芽胞，無莢膜?；魜y弧菌的革蘭染色霍亂弧菌米泔樣糞便直接涂片鏡檢培養(yǎng)和生化反應(yīng)兼性厭氧，最適生長溫度35，耐堿不耐酸，在PH7.4-9.6范圍內(nèi)能生長，尤其在PH8.8-9.0堿性蛋白胨水或堿性瓊脂平板上生長良好。營養(yǎng)要求不高，在普通營養(yǎng)瓊脂上生長良好。初次分離時常用堿性蛋白胨水增菌，由于其他雜菌受到抑制，而霍亂弧菌經(jīng)6-9小時可在液體表面大量繁殖，形成菌膜。在堿性瓊脂平板上，經(jīng)18-24小時培養(yǎng)，形成較大、圓形、扁平、無色透明或半透明

4、似水滴狀的菌落。在選擇性培養(yǎng)基硫代硫酸鹽-枸櫞酸鹽-膽鹽-蔗糖瓊脂平板（TCBS）上，霍亂弧菌可形成較大的菌落，因發(fā)酵蔗糖產(chǎn)酸而使菌落黃色。在含亞碲酸鉀的瓊脂平板上，因還原亞碲酸鉀成金屬碲，形成中心呈灰褐色的菌落，較易辨認(rèn)。在血瓊脂平板上形成的菌落較大，Eltor生物型可產(chǎn)生溶血環(huán)。在SS瓊脂平板上通常不長，麥康凱瓊脂平板上多可生長?；魜y弧菌在TCBS平板上菌落形態(tài)霍亂弧菌在亞碲酸鉀平板上菌落形態(tài)抗原結(jié)構(gòu)與分型霍亂弧菌具有耐熱的O抗原和不耐熱的H抗原。H抗原為弧菌屬所共有，無特異性。O抗原特異性高，根據(jù)O抗原的不同可把霍亂弧菌分成200多個血清群。其中O1群霍亂弧菌包括霍亂弧菌的古典生物型和E

5、ltor生物型?；魜y弧菌的兩種生物型的鑒別 生物型 生物學(xué)特性 古典生物型 Eltor生物型 V-P試驗(yàn) - + 溶血性（羊紅細(xì)胞） - + 50U多粘菌素B紙片 S R 雞紅細(xì)胞凝集 - + 噬菌體組裂解 + - 噬菌體組裂解 - +霍亂弧菌古典生物型對多粘菌素B敏感霍亂弧菌Eltor生物型雞紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)陽性非O1血清群的霍亂弧菌廣泛分布于地面水中，可引起人類胃腸炎，但從未引起過霍亂流行。因這些血清群的細(xì)菌均不與O1群抗血清發(fā)生凝集，故稱為非O1群霍亂弧菌，以往又稱為不凝集弧菌。O139群既不被O1群抗血清所凝集，亦不被O2-O138群抗血清凝集，目前認(rèn)為它可能是霍亂弧菌Eltor生物型菌

6、株O抗原變異株。抵抗力對熱、日光、干燥、酸、消毒劑敏感，但耐堿力較強(qiáng)。100煮沸1-2分鐘可殺滅細(xì)菌。在正常胃酸中僅可存活4分鐘，以1份含氯石灰加4份水處理患者的排泄物或嘔吐物1小時可達(dá)消毒的目的。Eltor生物型在自然界生存能力較古典生物型強(qiáng)，其在河水、井水及海水中科存活1-3周。對鏈霉素、氯霉素和四環(huán)素敏感，但Eltor生物型對一定濃度的多粘菌素B及慶大霉素有耐受性。二、臨床意義霍亂弧菌引起烈性腸道傳染病霍亂，霍亂為我國法定的甲類傳染病。人類是唯一易感者。傳染源是患者和帶菌者。致病機(jī)制細(xì)菌通過污染的水或食物經(jīng)口進(jìn)入機(jī)體而感染，進(jìn)入人體小腸內(nèi)的霍亂弧菌，借助其鞭毛的運(yùn)動及弧菌黏蛋白溶解酶和黏

7、附素的作用穿過黏液層，并通過菌毛黏附于腸黏膜上皮細(xì)胞上，大量繁殖產(chǎn)生霍亂腸毒素，該毒素作用于腸黏膜表面受體，使腸黏膜細(xì)胞的分泌功能亢進(jìn)，造成腸液的大量分泌，致使患者出現(xiàn)劇烈腹瀉與嘔吐，瀉出物與嘔吐物呈米泔水樣，可致嚴(yán)重脫水，電解質(zhì)紊亂和代謝性酸中毒。如治療不及時，患者常因腎衰竭和休克而死亡，若及時補(bǔ)充液體和電解質(zhì)，則大多數(shù)患者可在數(shù)日內(nèi)恢復(fù)。霍亂弧菌古典生物型所致疾病較Eltor生物型嚴(yán)重。近年來，由O139群霍亂弧菌所引起的霍亂暴發(fā)流行有上升的趨勢，應(yīng)給予高度重視?；魜y病后可獲得牢固免疫力，主要是體液免疫。改善衛(wèi)生條件，加強(qiáng)水源、食品、糞便的衛(wèi)生管理，不生食貝殼類水產(chǎn)品等是預(yù)防霍亂弧菌感染和

8、霍亂流行的重要措施。加強(qiáng)國境檢疫。同時有計(jì)劃得進(jìn)行疫苗接種，提高人群免疫力。及時發(fā)現(xiàn)、隔離、治療患者。治療的關(guān)鍵是補(bǔ)液，糾正水、電解質(zhì)紊亂，預(yù)防大量失水導(dǎo)致的低血容量休克和酸中毒。同時使用有效抗菌藥物進(jìn)行治療。（三）微生物學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)標(biāo)本的采集與運(yùn)送 發(fā)病早期及使用抗菌藥物前采集標(biāo)本 采集米泔水樣糞便或嘔吐物或肛拭等標(biāo)本 標(biāo)本及時接種，不能及時接種者，可將標(biāo)本置于文-臘氏保存液內(nèi)或卡-布保存液內(nèi)運(yùn)送。帶菌者可用無菌棉簽挑取糞便標(biāo)本或肛拭標(biāo)本置于堿性蛋白胨水或卡-布運(yùn)送培養(yǎng)基，35增菌6-8小時。檢驗(yàn)程序 標(biāo)本 增菌培養(yǎng) 快速診斷 直接涂片 （堿性蛋白胨水） 動力、制動試驗(yàn) 6-8小時 分離培養(yǎng)（

9、TCBS、堿性瓊脂平板）18-24小時 血清學(xué)鑒定 初步報(bào)告 生化鑒定、分型 確診報(bào)告檢驗(yàn)方法1.直接鏡檢（1）直接涂片：取標(biāo)本直接涂片，干燥固定 后革蘭染色，油鏡下可見魚群狀排列的 革蘭陰性弧菌。（2）動力及制動試驗(yàn)：取米泔水樣糞便制備懸滴（或壓滴）標(biāo)本，觀察細(xì)菌動力，可見穿梭及流星狀運(yùn)動的細(xì)菌。同法另制備一標(biāo)本片，加入1滴O1群霍亂弧菌多價診斷血清（效價64倍），可見運(yùn)動活潑的細(xì)菌停止運(yùn)動，并發(fā)生凝集，此為制動試驗(yàn)陽性。 2.快速診斷 免疫熒光菌球法、SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)、溶原性噬菌體檢查等3.分離培養(yǎng) 35增菌培養(yǎng)6-8小時 常用TCBS瓊脂和堿性瓊脂平板4.鑒定 三個步驟1）確定血清群：

10、與O1群抗血清作凝集試驗(yàn)O1群、非O1群2）確定血清型：與分型血清A、B、C凝集3）生物分型:作生化試驗(yàn)古典生物型、Eltor生物型 O1血清分群 生物學(xué)分型 血清學(xué)分型 非O1群霍亂弧菌霍亂弧菌 小川型 古典生物型 稻葉型 彥島型 O1群霍亂弧菌 小川型 Eltor生物型 稻葉型 彥島型 霍亂弧菌的主要鑒定依據(jù)（1）若細(xì)菌的菌落及形態(tài)典型，涂片為革蘭陰性弧菌或桿菌，運(yùn)動活潑，氧化酶試驗(yàn)、靛基質(zhì)試驗(yàn)和黏絲試驗(yàn)陽性，與O1群霍亂弧菌的多價診斷血清發(fā)生明顯的凝集。可診斷為霍亂弧菌。（2）若細(xì)菌的菌落、形態(tài)及生化反應(yīng)與霍亂弧菌相似，但與O1群霍亂弧菌多價診斷血清不凝集，應(yīng)作進(jìn)一步鑒定，以確定是否為非

11、O1群霍亂弧菌或其他類似弧菌。（3）根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查的需要，可進(jìn)一步用霍亂弧菌的單價診斷血清作血清學(xué)分型。必要時還可作噬菌體分型和生物分型。二、副溶血性弧菌一種嗜鹽性弧菌廣泛分布于近海的海水、海底的沉積物和魚類、貝類海產(chǎn)品中主要引起食物中毒（一）主要特征形態(tài)與染色 革蘭陰性桿菌，隨培養(yǎng)基不同菌體形態(tài)差異較大，有卵圓形、棒狀、球桿狀、梨狀、弧形等多種形態(tài)。 該菌兩極濃染，有周鞭毛或極端鞭毛，運(yùn)動活潑。 無芽胞，無莢膜。培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)需氧或兼性厭氧營養(yǎng)要求不高，在3.5%氯化鈉的培養(yǎng)基中生長良好，無鹽或氯化鈉的濃度高于8%不生長最適PH7.7-8.0，但PH9.5時仍可生長最適生長溫度為35在

12、堿性蛋白胨水中經(jīng)35、6-9小時培養(yǎng)后呈均勻渾濁生長，并形成菌膜。在TCBS平板上形成0.5-2.0mm大小、不發(fā)酵蔗糖的綠色或藍(lán)綠色菌落。在3.5%食鹽瓊脂平板上菌落圓形、隆起、邊緣不整齊、光滑濕潤不透明，并呈蔓延生長。在血液瓊脂平板上形成較大（直徑2-3mm）圓形隆起、濕潤并略帶灰色或黃色的菌落。某些菌株可呈溶血。在SS瓊脂上，部分菌株不生長，能生長的菌落較?。?-2mm）、扁平、無色半透明、蠟滴狀，有辛辣味，不易挑起。初次分離時，該菌不能在伊紅美藍(lán)瓊脂或中國藍(lán)瓊脂上生長，部分菌株可在麥康凱平板上生長，菌落呈圓形、邊緣整齊、半透明或混濁狀。副溶血性弧菌的生化反應(yīng)培養(yǎng)基中需加入3.5%NaC

13、l。幾乎所有自患者糞便中分離的致病性菌株都能溶解人和兔紅細(xì)胞，不溶解馬紅細(xì)胞，稱神奈川現(xiàn)象。而從海水及海產(chǎn)品中分離的非致病菌株多不能溶解人和兔紅細(xì)胞?？乖瓨?gòu)造副溶血性弧菌有菌體(O)抗原、莢膜(K)抗原及鞭毛(H)抗原。O抗原共有13種，是副溶血性弧菌分群的依據(jù)。K抗原有68種，可根據(jù)K抗原和O抗原的組合進(jìn)行定型。抵抗力對氯、苯酚（石炭酸）、甲酚皂（來蘇爾）等消毒劑敏感，不耐熱，65 30分鐘即被殺死。在淡水中生存不超過2日，但在海水中能生存47天以上，鹽漬醬菜中存活30天以上。耐堿不耐酸，在2%冰醋酸或食醋中5分鐘死亡。對氯霉素敏感，對新霉素、鏈霉素、多粘菌素、呋喃西林、吡哌酸中度敏感，對青

14、霉素、磺胺嘧啶耐藥。 二、臨床意義從致病性副溶血弧菌中分離出兩種致病因子： 1、耐熱直接溶血素，其作用是通過增加上皮細(xì)胞內(nèi)的Ca2+而引起Cl-的分泌，實(shí)驗(yàn)表明，該溶血素還具有細(xì)胞毒和心臟毒作用。 2、耐熱相關(guān)溶血素，其作用與耐熱直接溶血素相似。 此外，黏附素與黏附素酶也與致病性有關(guān)。人因食入被副溶血性弧菌污染而烹飪不當(dāng)?shù)暮．a(chǎn)品，如海蜇、海魚、海蝦、海貝等，或鹽漬食物，如咸菜、咸肉、咸魚等而引起食物中毒。潛伏期平均24小時，患者可出現(xiàn)腹痛、腹瀉、嘔吐、發(fā)熱等癥狀，糞便多為水樣或糊狀，少數(shù)為血水樣。多發(fā)于夏秋季節(jié)，一般恢復(fù)較快。病后免疫力不強(qiáng)。該菌偶爾引起腸道外感染，如中耳炎、傷口感染等。（三）

15、微生物學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)標(biāo)本采集 常規(guī)標(biāo)本為患者糞便、肛拭子、可疑食物。 該菌對干燥敏感，標(biāo)本采集后立即送檢，如不能及時送檢，應(yīng)將標(biāo)本置于1%NaCl的堿性蛋白胨水或含3.5%NaCl蛋白胨水中，35增菌培養(yǎng)6-8小時。挑取菌膜或表面生長物進(jìn)一步分離培養(yǎng)。檢驗(yàn)程序 標(biāo)本 增菌培養(yǎng)（3.5%NaCl蛋白胨水） 分離培養(yǎng)（TCBS或3.5%NaCl瓊脂） 可疑菌落（蔗糖陰性的綠色菌落） 純培養(yǎng)（營養(yǎng)瓊脂或KIA） 毒素鑒定 鑒定（生化、血清學(xué)試驗(yàn)）檢驗(yàn)方法1.增菌培養(yǎng) 將標(biāo)本接種到含1%NaCl的堿性蛋白胨水或含3.5%NaCl蛋白胨水中，35增菌培養(yǎng)6-8小時。挑取菌膜或表面生長物進(jìn)一步分離培養(yǎng)。2.分

16、離培養(yǎng) 將標(biāo)本或上述增菌液接種于TCBS平板、3.5%NaCl瓊脂平板或SS瓊脂平板上，35培養(yǎng)18-24小時后，觀察菌落特征。3.鑒定 副溶血性弧菌在不含NaCl和含10%NaCl的蛋白胨水中不生長，在含3%NaCl和含7%NaCl的蛋白胨水中生長；賴氨酸和鳥氨酸脫羧酶試驗(yàn)陽性，精氨酸雙水解酶試驗(yàn)陰性，脲酶多為陰性，少數(shù)為陽性。從腹瀉患者中分到的多數(shù)菌株神奈川現(xiàn)象陽性。4.與溶藻弧菌鑒別 由于從食物和糞便中經(jīng)常能分離到溶藻弧菌，該菌在海水和海產(chǎn)品中分布也較多。溶藻弧菌主要引起傷口感染和中耳炎，也可引起食物中毒和敗血癥。溶藻弧菌和副溶血性弧菌同屬弧菌屬6群，其生化反應(yīng)非常相似，應(yīng)注意兩者之間的

17、鑒別。 溶藻弧菌 副溶血性弧菌 蔗糖發(fā)酵試驗(yàn) + - VP試驗(yàn) + - 7%NaCl中生長 + + 10%NaCl中生長 + -溶藻弧菌在TCBS平板上的菌落特征溶藻弧菌在麥康凱平板上的菌落特征第二節(jié) 氣單胞菌屬和鄰單胞菌屬一、氣單胞菌屬（一）分類與特征氣單胞菌屬隸屬氣單胞菌科，廣泛存在于自然界，可從土壤、水源及人的糞便中分離出來，與人類疾病相關(guān)的主要有豚鼠氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、簡氏氣單胞菌、維氏氣單胞菌、舒氏氣單胞菌和易損氣單胞菌等。冷血動物為其重要宿主，是人類感染的主要來源。以往認(rèn)為氣單胞菌屬是毒力較弱的條件致病菌，但目前已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)該菌屬與人類疾病有關(guān)，尤其當(dāng)機(jī)體防御機(jī)能減退時，更易引起

18、機(jī)體嚴(yán)重感染。本屬細(xì)菌為革蘭陰性直桿菌，也可呈球桿狀或絲狀，除殺蛙氣單胞菌外，均有單端鞭毛，呈穿梭狀運(yùn)動，無莢膜，有芽孢。生物學(xué)特征1培養(yǎng)特性 生長溫度范圍較寬，嗜中溫菌為045，嗜低溫菌生長溫度為10-15，35 不生長。需氧或兼性厭氧。 營養(yǎng)要求不高，能在普通培養(yǎng)基上生長，TCBS培養(yǎng)基不生長。在血瓊脂平板上經(jīng)3524-48小時的培養(yǎng)，形成白色、光滑、稍凸起、直徑約2mm左右的菌落，嗜水氣單胞菌可形成溶血環(huán)。在麥康凱及SS平板上形成扁平無色、稍渾濁、無臭味的乳糖不發(fā)酵菌落。生物學(xué)特征2殺蛙氣單胞菌在含有苯丙氨酸或酪氨酸的瓊脂平板上產(chǎn)生棕色或黑色色素。氨芐血瓊脂（羊血瓊脂中加入氨芐西林30g

19、/ml）可作為此菌選擇性培養(yǎng)基，其中氨芐西林可抑制雜菌生長，對氣單胞菌有刺激生長的作用，其菌落為2mm大小，灰白色，濕潤狀。本屬細(xì)菌氧化酶、觸酶陽性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，在含6%NaCl培養(yǎng)基中不生長。（二）臨床意義腸道內(nèi)感染以溫和生物變種所致感染最多見。主要表現(xiàn)為急性腹瀉。常見5歲以下兒童和成人，夏季腹瀉的第二、三位病原菌主要致病物質(zhì)為溶血毒素和細(xì)胞毒素等腸道外感染主要為傷口感染和菌血癥。亦可引起心內(nèi)膜炎、腦膜炎、肺炎、骨髓炎、腹膜炎、關(guān)節(jié)炎、血栓性靜脈炎和膽囊炎等。皮膚和軟組織感染，主要由親水氣單胞菌和維隆氣單胞菌引起。90%以上菌血癥由親水氣單胞菌和維隆氣單胞菌引起，通常發(fā)生在免疫低下人群。（三）微生物學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)標(biāo)本采集 根據(jù)感染部位不同，采集膿汁、分泌物、糞便、尿液及 血液等。檢驗(yàn)程序 標(biāo)本 增菌培養(yǎng)（堿性蛋白胨水） 分離培養(yǎng) 3518-24小時 純培養(yǎng) 初步生化反應(yīng) 全面生化反應(yīng) 腸毒素測定（氧化酶、TCBS生長、O/129、耐鹽試驗(yàn)）檢驗(yàn)方法1.直接涂片 取濃汁、分泌物及尿沉渣等標(biāo)本作直接涂片，可查見