生化基礎(chǔ)知識(shí)介紹

1、生化基礎(chǔ)知識(shí)介紹主要內(nèi)容 ： 生化儀發(fā)展 分析方法介紹 幾個(gè)名詞 臨床意義生化分析儀的發(fā)展史：p 1957年Technicon公司(Auto Analyzer)，p 單通道連續(xù)流動(dòng)式，模仿手工。p 60年代后隨電子計(jì)算機(jī)技術(shù)迅速發(fā)展。 生化自動(dòng)分析在中國的發(fā)展分期 分分 期期 年年 代代 主主 要要 特特 征征 認(rèn)識(shí)時(shí)期 1972-1980 引進(jìn)了三臺(tái)連續(xù)流動(dòng)式生化分析儀，開始研制生化分析儀 從認(rèn)識(shí)到應(yīng)用自動(dòng)化的最初階段 1980-1984 1、引進(jìn)半自動(dòng)、全自動(dòng)生化分析儀約8種型號(hào)共幾十套。2、第一個(gè)中外（美）合作實(shí)驗(yàn)室建立，引進(jìn)一批自動(dòng)化儀器 和配套Kits，開展了室內(nèi)質(zhì)控。3、開始研制K

2、IT。4、開展了室間質(zhì)量調(diào)查EQA。 迅速發(fā)展時(shí)期 1984-1990 1、自動(dòng)分析儀被廣泛認(rèn)識(shí)，自動(dòng)化程度高，質(zhì)量好的儀器進(jìn) 入中國，半自動(dòng)半自動(dòng)推廣較快，型號(hào)達(dá)20多種近2000套。2、與自動(dòng)分析儀配套的KIT商品化被廣泛接受，酶法分析有 較大推廣。KIT已從研究步入工業(yè)生產(chǎn)。3、出現(xiàn)第二個(gè)中外（日）合作自動(dòng)化程度較高的實(shí)驗(yàn)室。 自動(dòng)化分析儀質(zhì)量越來越高，高速度智能化 1990-1996 1、全自動(dòng)推廣。與國際差距縮小。2、Kits國產(chǎn)和中外合作生產(chǎn)的已占有優(yōu)勢，先進(jìn)的方法學(xué)得 到更大普及，13種落后方法被法令淘汰。3、少數(shù)大醫(yī)院開始建立初級(jí)的LIS。 向可靠而高效的方向發(fā)展，TAL在中國

3、開始出現(xiàn) 1996- 1、LIS應(yīng)用增多。2、分析前自動(dòng)化系統(tǒng)分析前自動(dòng)化系統(tǒng)引進(jìn)。3、初級(jí)TAL出現(xiàn)。4、IQC，EQA在全國普遍有效開展。遠(yuǎn)程EQA系統(tǒng)啟用。 分分 期期 年年 代代 主主 要要 特特 征征 全自動(dòng)生化分析儀全自動(dòng)生化分析儀臨床應(yīng)用規(guī)范化臨床應(yīng)用規(guī)范化2001年以來1.與國外同步同步，國產(chǎn)化。2.流水線流水線逐漸推廣普及。3.2004年發(fā)布自動(dòng)生化分析儀應(yīng)用規(guī)范。4.準(zhǔn)確性溯源和檢測系統(tǒng)的概念增強(qiáng)。 生化儀的分類生化儀的分類 按反應(yīng)裝置結(jié)構(gòu)：連續(xù)流動(dòng)式、離心式和分立式。按反應(yīng)裝置結(jié)構(gòu)：連續(xù)流動(dòng)式、離心式和分立式。 按同時(shí)檢測項(xiàng)目與否：單通道、多通道。按同時(shí)檢測項(xiàng)目與否：單通

4、道、多通道。 按儀器的自動(dòng)化程度：全自動(dòng)、半自動(dòng)。按儀器的自動(dòng)化程度：全自動(dòng)、半自動(dòng)。 按儀器復(fù)雜程度：小型、中型和大型。按儀器復(fù)雜程度：小型、中型和大型。 （一）連續(xù)流動(dòng)式分析儀（一）連續(xù)流動(dòng)式分析儀 特點(diǎn)特點(diǎn)： 同一管道中進(jìn)行 一個(gè)接一個(gè) 速度慢( (二二) )離心式生化分析儀離心式生化分析儀特點(diǎn)： 圓盤內(nèi), 離心力混合， 高速旋轉(zhuǎn)中比色。 （三）、分立式分析儀（三）、分立式分析儀 特點(diǎn)： 在不同反應(yīng)杯中進(jìn)行， 不同的加樣器自動(dòng)加樣， 依次檢測 可有多個(gè)加樣臂，速度快。10前分光和后分光方式前分光和后分光方式 光柵分光有前分光和后分光兩種方式，光光柵分光有前分光和后分光兩種方式，光源首先經(jīng)

5、過單色器分光，然后透射到比色溶液源首先經(jīng)過單色器分光，然后透射到比色溶液的方式為的方式為前分光前分光。目前以后分光方式為多見，。目前以后分光方式為多見，其優(yōu)點(diǎn)是單色器中沒有轉(zhuǎn)動(dòng)部分，雙波長在同其優(yōu)點(diǎn)是單色器中沒有轉(zhuǎn)動(dòng)部分，雙波長在同一時(shí)刻檢測，因而提高了檢測的精度和速度。一時(shí)刻檢測，因而提高了檢測的精度和速度。11 光源先透過比色杯中的反應(yīng)液再照射到光柵上光源先透過比色杯中的反應(yīng)液再照射到光柵上，經(jīng)色散后所有固定單色光同時(shí)通過各自的光纖，經(jīng)色散后所有固定單色光同時(shí)通過各自的光纖傳輸?shù)綄?duì)應(yīng)的檢測器，微處理器按該分析項(xiàng)目的傳輸?shù)綄?duì)應(yīng)的檢測器，微處理器按該分析項(xiàng)目的分析參數(shù)，分析參數(shù)，后分光方式后分

6、光方式 選擇其中一個(gè)選擇其中一個(gè)或兩個(gè)波長（雙或兩個(gè)波長（雙波長方式）的吸波長方式）的吸光度值，用于分光度值，用于分析結(jié)果的計(jì)算。析結(jié)果的計(jì)算。12分析方法分類分析方法分類（一）終點(diǎn)法（一）終點(diǎn)法（end assayend assay） 被測物質(zhì)在反應(yīng)過程中完全被轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物，到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)，根據(jù)終被測物質(zhì)在反應(yīng)過程中完全被轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物，到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)，根據(jù)終點(diǎn)吸光度的大小求出被測物濃度，稱為終點(diǎn)法點(diǎn)吸光度的大小求出被測物濃度，稱為終點(diǎn)法。 該法稱為平衡法更為恰當(dāng)。從該法稱為平衡法更為恰當(dāng)。從時(shí)間時(shí)間- -吸光度曲線吸光度曲線來看，到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)來看，到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)或平衡點(diǎn)時(shí)，吸光度將不再變化。終點(diǎn)法參數(shù)

7、設(shè)置簡單，反應(yīng)時(shí)間一般或平衡點(diǎn)時(shí)，吸光度將不再變化。終點(diǎn)法參數(shù)設(shè)置簡單，反應(yīng)時(shí)間一般較長，精密度較好。較長，精密度較好。 13終點(diǎn)時(shí)間的確定終點(diǎn)時(shí)間的確定根據(jù)時(shí)間根據(jù)時(shí)間- -吸光度曲線來確定，吸光度曲線來確定，根據(jù)被測物反應(yīng)終點(diǎn)，結(jié)合干擾物的反應(yīng)根據(jù)被測物反應(yīng)終點(diǎn)，結(jié)合干擾物的反應(yīng)情況來確定。情況來確定。14一點(diǎn)終點(diǎn)法一點(diǎn)終點(diǎn)法（one point end assayone point end assay） 在反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)，即在時(shí)間在反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)，即在時(shí)間- -吸光度曲線上吸光吸光度曲線上吸光度不再改變時(shí)選擇一個(gè)終點(diǎn)吸光度值，用于計(jì)算度不再改變時(shí)選擇一個(gè)終點(diǎn)吸光度值，用于計(jì)算結(jié)果。結(jié)果。結(jié)果

8、計(jì)算公式：待測物濃度結(jié)果計(jì)算公式：待測物濃度C CU U= =（待測吸光度待測吸光度A AU U試劑空白吸光度試劑空白吸光度A AB B）K KK K為校準(zhǔn)系數(shù)為校準(zhǔn)系數(shù) 15一點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)曲線一點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)曲線 A單試劑一點(diǎn)終點(diǎn)法 B雙試劑一點(diǎn)終點(diǎn)法16兩點(diǎn)兩點(diǎn)終終點(diǎn)法點(diǎn)法（ （two point end assay） ） 在被測物反應(yīng)或指示反應(yīng)尚未開始時(shí)，選擇第一在被測物反應(yīng)或指示反應(yīng)尚未開始時(shí)，選擇第一個(gè)吸光度，在反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)或平衡時(shí)選擇第二個(gè)吸個(gè)吸光度，在反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)或平衡時(shí)選擇第二個(gè)吸光度，此兩點(diǎn)吸光度之差用于計(jì)算結(jié)果。光度，此兩點(diǎn)吸光度之差用于計(jì)算結(jié)果。 計(jì)算公式為：計(jì)算公式為：

9、C CU U= =（待測吸光度待測吸光度A A2 2待測吸光度待測吸光度A A1 1）K K。 17 兩點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)曲線兩點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)曲線 A單試劑兩點(diǎn)終點(diǎn)法 B雙試劑兩點(diǎn)終點(diǎn)法 18 該法能有效地消除溶該法能有效地消除溶血血( (hemolysishemolysis) )、黃疸（黃疸（icterusicterus）和脂濁（和脂濁（lipolipo- -turbidturbid）等樣品本身光等樣品本身光吸收造成的干擾。吸收造成的干擾。 血紅蛋白、膽紅素和脂濁的血紅蛋白、膽紅素和脂濁的光吸收曲線光吸收曲線 19（二）固定（二）固定時(shí)間時(shí)間法法（fixed-time assay） 指在時(shí)間指在時(shí)間

10、- -吸光度曲線上選擇兩個(gè)測光點(diǎn)，此吸光度曲線上選擇兩個(gè)測光點(diǎn)，此兩點(diǎn)既非反應(yīng)初始吸光度亦非終點(diǎn)吸光度，這兩兩點(diǎn)既非反應(yīng)初始吸光度亦非終點(diǎn)吸光度，這兩點(diǎn)的吸光度差值用于結(jié)果計(jì)算。有時(shí)也稱此法為點(diǎn)的吸光度差值用于結(jié)果計(jì)算。有時(shí)也稱此法為兩點(diǎn)法兩點(diǎn)法 。 計(jì)算公式與兩點(diǎn)終點(diǎn)法相同，計(jì)算公式與兩點(diǎn)終點(diǎn)法相同， C CU U=(A=(A2 2-A-A1 1) )K K。20固定固定時(shí)間時(shí)間法反法反應(yīng)應(yīng)曲曲線線 A單試劑固定時(shí)間法 B雙試劑固定時(shí)間法該分析方法有助于解決某些反應(yīng)的非特異性問題。該分析方法有助于解決某些反應(yīng)的非特異性問題。 21連續(xù)監(jiān)測法連續(xù)監(jiān)測法（continuous monitorin

11、g assaycontinuous monitoring assay） 又稱又稱速率法速率法（rate assayrate assay），），是在測定酶活性或用是在測定酶活性或用酶法測定代謝產(chǎn)物時(shí)，連續(xù)選取時(shí)間酶法測定代謝產(chǎn)物時(shí)，連續(xù)選取時(shí)間- -吸光度曲吸光度曲線中線性期（各兩點(diǎn)間吸光度差值相等）的吸光線中線性期（各兩點(diǎn)間吸光度差值相等）的吸光度值，并以此線性期的單位吸光度變化值（度值，并以此線性期的單位吸光度變化值（A/minA/min）計(jì)算結(jié)果。計(jì)算結(jié)果。22 連續(xù)監(jiān)測連續(xù)監(jiān)測法反法反應(yīng)應(yīng)曲曲線線 A單試劑連續(xù)監(jiān)測法 B雙試劑連續(xù)監(jiān)測法 23酶酶促反促反應(yīng)應(yīng)的的線線性段性段 1 1及及5

12、 5值偏小，而值偏小，而2 23 34 4，故故A A1 1點(diǎn)至點(diǎn)至A A4 4點(diǎn)屬線性段點(diǎn)屬線性段 24連續(xù)監(jiān)測連續(xù)監(jiān)測法的法的優(yōu)優(yōu)點(diǎn)點(diǎn) 可以確定線性期并計(jì)算可以確定線性期并計(jì)算A/minA/min，根據(jù)此值再根據(jù)此值再準(zhǔn)確地計(jì)算酶活性，因而使自動(dòng)生化分析儀在酶準(zhǔn)確地計(jì)算酶活性，因而使自動(dòng)生化分析儀在酶活性測定方面顯著地優(yōu)于手工法。連續(xù)監(jiān)測法也活性測定方面顯著地優(yōu)于手工法。連續(xù)監(jiān)測法也可用于測定呈線性反應(yīng)的代謝物濃度，一般是某可用于測定呈線性反應(yīng)的代謝物濃度，一般是某些基于酶法測定的代謝物。些基于酶法測定的代謝物。 酶活性（酶活性（U/LU/L） A/minA/min理論（或校準(zhǔn)）理論（或校

13、準(zhǔn)）K K值。值。 代謝物濃度代謝物濃度C CU U=A/min=A/min校準(zhǔn)校準(zhǔn)K K值。值。 25理理論論K K值值 多用于酶活性測定中，因酶活性尚無公認(rèn)的多用于酶活性測定中，因酶活性尚無公認(rèn)的校準(zhǔn)品可用。根據(jù)酶活性的國際單位定義得出酶校準(zhǔn)品可用。根據(jù)酶活性的國際單位定義得出酶活性的計(jì)算公式為：活性的計(jì)算公式為：酶活性酶活性 ( (U/L)=A/minU/L)=A/min將此式中將此式中 以以K K來表示，即為來表示，即為理論理論K K值值可作為分析參數(shù)輸入到分析儀中?？勺鳛榉治鰠?shù)輸入到分析儀中。 dSTTV310dSTTV31026采用理采用理論論K K值值的前提的前提 應(yīng)當(dāng)是樣品和

14、試劑的加量準(zhǔn)確、比色杯光徑應(yīng)當(dāng)是樣品和試劑的加量準(zhǔn)確、比色杯光徑準(zhǔn)確、溫度控制精確以及波長準(zhǔn)確等。但事實(shí)上準(zhǔn)確、溫度控制精確以及波長準(zhǔn)確等。但事實(shí)上由于各型分析儀在注射器容積步進(jìn)電機(jī)精度、濾由于各型分析儀在注射器容積步進(jìn)電機(jī)精度、濾光片帶寬等方面的差異，可造成樣品和試劑加量光片帶寬等方面的差異，可造成樣品和試劑加量以及吸光度檢測的偏差，溫度的影響有時(shí)也非常以及吸光度檢測的偏差，溫度的影響有時(shí)也非常大。大。 27實(shí)際摩爾吸光系數(shù)和實(shí)際摩爾吸光系數(shù)和K K值測定值測定 由于摩爾吸光系數(shù)受比色杯光徑、波長等的影響，書本上或試劑廠家提供的理論摩爾吸光系數(shù)可能與實(shí)際所用分析儀所測的不同，因而有必要獲得實(shí)

15、際的摩爾吸光系數(shù)，然后來計(jì)算理論K值。 28NADH（ （NADPH） ）摩摩爾爾吸光系數(shù)的吸光系數(shù)的測測定定 NADH NADH（NADPHNADPH）沒有標(biāo)準(zhǔn)純制品，而且沒有標(biāo)準(zhǔn)純制品，而且配成溶液后穩(wěn)定性又較差，不能直接用配成溶液后穩(wěn)定性又較差，不能直接用NADH NADH 或或NADPHNADPH標(biāo)準(zhǔn)液來校正儀器，須通標(biāo)準(zhǔn)液來校正儀器，須通過有過有NADNAD+ +(NADP(NADP+ +) )參與的反應(yīng)途徑。參與的反應(yīng)途徑。 29 用已糖激酶用已糖激酶 ( (HK)HK)或葡萄糖脫氫酶或葡萄糖脫氫酶( (GD)GD)方法測定方法測定葡萄糖時(shí)，葡萄糖的消耗與葡萄糖時(shí)，葡萄糖的消耗與N

16、ADHNADH的生成呈等摩的生成呈等摩爾關(guān)系。葡萄糖有標(biāo)準(zhǔn)純制品。爾關(guān)系。葡萄糖有標(biāo)準(zhǔn)純制品。 根據(jù)公式根據(jù)公式A=A=bCbC，已知比色杯光徑已知比色杯光徑b b和葡萄糖標(biāo)和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度，測得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度準(zhǔn)液濃度，測得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度A A后便可后便可計(jì)算出計(jì)算出NADHNADH（NADPHNADPH）的摩爾吸光系數(shù)的摩爾吸光系數(shù) 為為 A/A/bCbC。 30測定方法測定方法 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度為1 1Ommo1/L(0.01mol/L)Ommo1/L(0.01mol/L)，標(biāo)準(zhǔn)液加入量標(biāo)準(zhǔn)液加入量為為3.53.5LL，酶試劑加入量為酶試劑加入量為33533

17、5LL，比色杯光徑為比色杯光徑為0.70.7cmcm，在在340340nmnm測得吸光度為測得吸光度為0.4650.465，則實(shí)測，則實(shí)測NADHNADH摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù) = = 64246424，即在此臺(tái)分析儀上，即在此臺(tái)分析儀上340340nmnm波長處測得波長處測得NADHNADH（NADPHNADPH）的摩爾吸光系數(shù)為的摩爾吸光系數(shù)為64246424，而理論上而理論上NADHNADH（NADPHNADPH）的的 為為62206220。 5 .33355 .301.07 .0465.031校準(zhǔn)校準(zhǔn)K K值值 酶活性校準(zhǔn)品經(jīng)校準(zhǔn)操作后由分析儀自動(dòng)計(jì)算得酶活性校準(zhǔn)品經(jīng)校準(zhǔn)操作后由分析

18、儀自動(dòng)計(jì)算得出。在進(jìn)行酶學(xué)測定時(shí)，如果分析條件的變化如溫出。在進(jìn)行酶學(xué)測定時(shí)，如果分析條件的變化如溫度、樣品試劑加量和吸光度檢測偏差可同等程度地度、樣品試劑加量和吸光度檢測偏差可同等程度地影響校準(zhǔn)物和待測樣品，則使用校準(zhǔn)品能進(jìn)行補(bǔ)償影響校準(zhǔn)物和待測樣品，則使用校準(zhǔn)品能進(jìn)行補(bǔ)償。一般來說以使用。一般來說以使用校準(zhǔn)校準(zhǔn)K K值值為好，但必須有兩個(gè)先為好，但必須有兩個(gè)先決條件：必須使用配套的試劑；必須使用配套決條件：必須使用配套的試劑；必須使用配套的高質(zhì)量的校準(zhǔn)品，該校準(zhǔn)品應(yīng)具有的高質(zhì)量的校準(zhǔn)品，該校準(zhǔn)品應(yīng)具有溯源性溯源性。 32（四）透射比濁法（四）透射比濁法 抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合形成的抗原與相應(yīng)

19、的抗體結(jié)合形成的免疫復(fù)合物免疫復(fù)合物，在，在反應(yīng)液中具有一定的濁度，可由一般分光光度法進(jìn)反應(yīng)液中具有一定的濁度，可由一般分光光度法進(jìn)行行透射比濁透射比濁（transmission transmission turbidimetryturbidimetry）測定，可用測定，可用于某些蛋白質(zhì)和藥物濃度等的測定。該法須做于某些蛋白質(zhì)和藥物濃度等的測定。該法須做多點(diǎn)多點(diǎn)校準(zhǔn)校準(zhǔn)，再經(jīng)，再經(jīng)非線性回歸非線性回歸，求出抗原或抗體的含量。，求出抗原或抗體的含量。 33常用生化檢測項(xiàng)目分析方法舉例常用生化檢測項(xiàng)目分析方法舉例 1 1終點(diǎn)法檢測終點(diǎn)法檢測 常用的有總膽紅素（氧化法或重氮法）、結(jié)合常用的有總膽紅素

20、（氧化法或重氮法）、結(jié)合膽紅素（氧化法或重氮法）、血清總蛋白（雙縮脲膽紅素（氧化法或重氮法）、血清總蛋白（雙縮脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、總膽汁酸（酶法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、總膽汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、總膽固醇（膽固醇氧化酶法）、甘油三酯（法）、總膽固醇（膽固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白膽固醇（直磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白膽固醇（直接測定法）、鈣（偶氮砷接測定法）、鈣（偶氮砷法）、磷（紫外法）、法）、磷（紫外法）、鎂（二甲苯胺藍(lán)法）等。鎂（二甲苯胺藍(lán)法）等。 342

21、 2固定時(shí)間法固定時(shí)間法苦味酸法測定肌酐采用此法?？辔端岱y定肌酐采用此法。 353 3連續(xù)監(jiān)測法連續(xù)監(jiān)測法 對(duì)于酶活性測定一般應(yīng)選用連續(xù)監(jiān)測法，如丙對(duì)于酶活性測定一般應(yīng)選用連續(xù)監(jiān)測法，如丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、酶、堿性磷酸酶、 谷氨氨?；D(zhuǎn)移酶、淀粉酶和肌谷氨氨酰基轉(zhuǎn)移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代謝物酶法測定的項(xiàng)目如：脲酶偶酸激酶等。一些代謝物酶法測定的項(xiàng)目如：脲酶偶聯(lián)法測定尿素等，也可用連續(xù)監(jiān)測法聯(lián)法測定尿素等，也可用連續(xù)監(jiān)測法 。364 4透射比濁法透射比濁法 透射比濁法透射比濁法可用于測定產(chǎn)生濁度反應(yīng)的

22、項(xiàng)目，多數(shù)可用于測定產(chǎn)生濁度反應(yīng)的項(xiàng)目，多數(shù)屬屬免疫比濁法免疫比濁法，載脂蛋白、免疫球蛋白、補(bǔ)體、抗，載脂蛋白、免疫球蛋白、補(bǔ)體、抗“O”O(jiān)”、類風(fēng)濕因子，以及血清中的其他蛋白質(zhì)如前類風(fēng)濕因子，以及血清中的其他蛋白質(zhì)如前白蛋白、結(jié)合珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等均可用此法。白蛋白、結(jié)合珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等均可用此法。 37單波長和雙波長方式單波長和雙波長方式 （一）概念（一）概念 采用一個(gè)波長檢測物質(zhì)的光吸收強(qiáng)度的方式稱為采用一個(gè)波長檢測物質(zhì)的光吸收強(qiáng)度的方式稱為單波長方式單波長方式。當(dāng)反應(yīng)液中含有一種組分，或在混合。當(dāng)反應(yīng)液中含有一種組分，或在混合反應(yīng)液中待測組分的吸收峰與其它共存物質(zhì)的吸收反應(yīng)液中待測組

23、分的吸收峰與其它共存物質(zhì)的吸收波長無重疊時(shí)，可以選用。波長無重疊時(shí)，可以選用。 使用一個(gè)主波長和一個(gè)次波長的稱使用一個(gè)主波長和一個(gè)次波長的稱雙波長方式雙波長方式。當(dāng)反應(yīng)液中存在干擾物的較大吸收、從而影響測定當(dāng)反應(yīng)液中存在干擾物的較大吸收、從而影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性時(shí)，采用雙波長方式更好。結(jié)果的準(zhǔn)確性時(shí)，采用雙波長方式更好。 38（二）雙波長的作用（二）雙波長的作用消除噪音干擾消除噪音干擾; ;減少雜散光影響減少雜散光影響; ;減少樣品本身光吸收的干擾：當(dāng)樣品中存在非化學(xué)減少樣品本身光吸收的干擾：當(dāng)樣品中存在非化學(xué)反應(yīng)的干擾物如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素等時(shí)反應(yīng)的干擾物如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素

24、等時(shí)，會(huì)產(chǎn)生非特異性的光吸收，雙波長方式可以部分，會(huì)產(chǎn)生非特異性的光吸收，雙波長方式可以部分消除這類光吸收干擾。消除這類光吸收干擾。 39（三）次波長的確定方法（三）次波長的確定方法 當(dāng)被測物的主波長確定之后，根據(jù)干擾物吸收光譜當(dāng)被測物的主波長確定之后，根據(jù)干擾物吸收光譜特征選擇次波長，使干擾物在主、次波長處有盡可特征選擇次波長，使干擾物在主、次波長處有盡可能相同的光吸收值，而被測物在主、次波長處的光能相同的光吸收值，而被測物在主、次波長處的光吸收值應(yīng)有較大的差異。吸收值應(yīng)有較大的差異。 一般來說，次波長應(yīng)大于主波長一般來說，次波長應(yīng)大于主波長100100nmnm。以主波以主波長與次波長吸光度

25、差來計(jì)算結(jié)果。長與次波長吸光度差來計(jì)算結(jié)果。 40單試劑和雙試劑方式單試劑和雙試劑方式 反應(yīng)過程中只加一次試劑稱反應(yīng)過程中只加一次試劑稱單試劑方式單試劑方式，加兩次試，加兩次試劑便為劑便為雙試劑方式雙試劑方式。 雙試劑方式分析的優(yōu)點(diǎn)是：雙試劑方式分析的優(yōu)點(diǎn)是： 可提高試劑的保存穩(wěn)定性；可提高試劑的保存穩(wěn)定性； 能設(shè)置兩點(diǎn)終點(diǎn)法；能設(shè)置兩點(diǎn)終點(diǎn)法； 在某些項(xiàng)目檢測時(shí)能消除非特異性化學(xué)反應(yīng)在某些項(xiàng)目檢測時(shí)能消除非特異性化學(xué)反應(yīng) 干擾。干擾。 41雙試劑方式消除非特異性化學(xué)雙試劑方式消除非特異性化學(xué)反應(yīng)干擾舉例反應(yīng)干擾舉例 血清血清ALTALT測定時(shí)，血清中原有酮酸也可與試劑測定時(shí)，血清中原有酮酸也

26、可與試劑LDHLDH起反應(yīng)，使結(jié)果偏高。若先加入缺乏起反應(yīng)，使結(jié)果偏高。若先加入缺乏- -酮戊二酮戊二酸的第一試劑，使原有酮酸與酸的第一試劑，使原有酮酸與LDHLDH反應(yīng)，之后加入反應(yīng)，之后加入含有含有- -酮戊二酸的第二試劑，啟動(dòng)酮戊二酸的第二試劑，啟動(dòng)ALTALT酶促反應(yīng)生酶促反應(yīng)生成丙酮酸，這些丙酮酸與成丙酮酸，這些丙酮酸與LDHLDH反應(yīng)消耗的反應(yīng)消耗的NADNAD能能真正反映真正反映ALTALT活性，從而消除以上副反應(yīng)的影響?；钚?，從而消除以上副反應(yīng)的影響。 42底物消耗的監(jiān)測底物消耗的監(jiān)測 在連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性時(shí)，如果在監(jiān)測期內(nèi)吸在連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性時(shí)，如果在監(jiān)測期內(nèi)吸光度上升

27、或下降超過其底物耗盡值，則說明該樣品光度上升或下降超過其底物耗盡值，則說明該樣品酶活性非常高，底物將被耗盡，監(jiān)測期的吸光度將酶活性非常高，底物將被耗盡，監(jiān)測期的吸光度將偏離線性，使測定結(jié)果不可靠。此監(jiān)測對(duì)于采用負(fù)偏離線性，使測定結(jié)果不可靠。此監(jiān)測對(duì)于采用負(fù)反應(yīng)分析酶活性的方法甚為重要反應(yīng)分析酶活性的方法甚為重要。 43 底物消耗底物消耗監(jiān)測監(jiān)測 44 校準(zhǔn)校準(zhǔn) 分析儀在樣品分析之前要對(duì)該分析項(xiàng)目進(jìn)行分析儀在樣品分析之前要對(duì)該分析項(xiàng)目進(jìn)行校準(zhǔn)校準(zhǔn)（也稱定標(biāo)），得出一個(gè)該項(xiàng)目的也稱定標(biāo)），得出一個(gè)該項(xiàng)目的校準(zhǔn)系數(shù)（校準(zhǔn)系數(shù)（K K）。校準(zhǔn)前校準(zhǔn)前首先必須在反應(yīng)程序里設(shè)定有關(guān)校準(zhǔn)的參數(shù)，如校準(zhǔn)液的首

28、先必須在反應(yīng)程序里設(shè)定有關(guān)校準(zhǔn)的參數(shù)，如校準(zhǔn)液的代碼、位置及濃度值等。執(zhí)行校準(zhǔn)程序，檢測得到該校準(zhǔn)代碼、位置及濃度值等。執(zhí)行校準(zhǔn)程序，檢測得到該校準(zhǔn)品的吸光度值，再根據(jù)校準(zhǔn)濃度計(jì)算校準(zhǔn)系數(shù)（品的吸光度值，再根據(jù)校準(zhǔn)濃度計(jì)算校準(zhǔn)系數(shù)（K=K=校準(zhǔn)校準(zhǔn)品濃度品濃度/ /校準(zhǔn)品吸光度）。校準(zhǔn)品吸光度）。 45校準(zhǔn)方式校準(zhǔn)方式 有單點(diǎn)校準(zhǔn)、兩點(diǎn)校準(zhǔn)和多點(diǎn)校準(zhǔn)有單點(diǎn)校準(zhǔn)、兩點(diǎn)校準(zhǔn)和多點(diǎn)校準(zhǔn)單點(diǎn)校準(zhǔn)單點(diǎn)校準(zhǔn)：校準(zhǔn)曲線呈直線且通過原點(diǎn)，用單個(gè)濃度：校準(zhǔn)曲線呈直線且通過原點(diǎn)，用單個(gè)濃度 的校準(zhǔn)液即可的校準(zhǔn)液即可兩點(diǎn)校準(zhǔn)兩點(diǎn)校準(zhǔn)：若校準(zhǔn)曲線呈直線但不通過原點(diǎn)，則需用：若校準(zhǔn)曲線呈直線但不通過原點(diǎn)，則需用 兩個(gè)濃

29、度的校準(zhǔn)液做兩點(diǎn)校準(zhǔn)；兩個(gè)濃度的校準(zhǔn)液做兩點(diǎn)校準(zhǔn)；多點(diǎn)校準(zhǔn)多點(diǎn)校準(zhǔn)：當(dāng)校準(zhǔn)曲線不呈直線而為真正的曲線時(shí)，：當(dāng)校準(zhǔn)曲線不呈直線而為真正的曲線時(shí)， 應(yīng)做多點(diǎn)校準(zhǔn)，并按其線形選擇不同的曲應(yīng)做多點(diǎn)校準(zhǔn)，并按其線形選擇不同的曲 線方程進(jìn)行擬和，如雙曲線、拋物線、冪線方程進(jìn)行擬和，如雙曲線、拋物線、冪 函數(shù)、指數(shù)函數(shù)、對(duì)數(shù)函數(shù)等方程等。函數(shù)、指數(shù)函數(shù)、對(duì)數(shù)函數(shù)等方程等。 46對(duì)校準(zhǔn)的要求對(duì)校準(zhǔn)的要求 （1 1）選擇合適（配套）的校準(zhǔn)品）選擇合適（配套）的校準(zhǔn)品 （2 2）如有可能校準(zhǔn)品應(yīng)溯源到參考方法或）如有可能校準(zhǔn)品應(yīng)溯源到參考方法或 參考物質(zhì)。參考物質(zhì)。 （3 3）確定校準(zhǔn)的頻度。）確定校準(zhǔn)的頻度。（

30、4 4）如有下列情況發(fā)生時(shí)，必須進(jìn)行校準(zhǔn)：）如有下列情況發(fā)生時(shí)，必須進(jìn)行校準(zhǔn)： 改變?cè)噭┑姆N類或批號(hào)；改變?cè)噭┑姆N類或批號(hào)； 儀器或者檢驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行一次大的預(yù)防性維護(hù)或者更換了重儀器或者檢驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行一次大的預(yù)防性維護(hù)或者更換了重 要部件；要部件； 質(zhì)控反映出異常的趨勢或偏移，或者超出了實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的質(zhì)控反映出異常的趨勢或偏移，或者超出了實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的 接受限。接受限。47質(zhì)控品測定質(zhì)控品測定 質(zhì)控是保證檢測結(jié)果可靠性的一個(gè)重要手段，質(zhì)控是保證檢測結(jié)果可靠性的一個(gè)重要手段，因此每批樣品的分析測定均應(yīng)該有質(zhì)控樣品同時(shí)因此每批樣品的分析測定均應(yīng)該有質(zhì)控樣品同時(shí)監(jiān)測。關(guān)于監(jiān)測。關(guān)于分析儀的批測定分析儀的批測

31、定，是指一批樣品從開，是指一批樣品從開始測定到完成測定后停止的整個(gè)過程。其中如果始測定到完成測定后停止的整個(gè)過程。其中如果進(jìn)行了添加或更新試劑、進(jìn)行了有可能改變吸光進(jìn)行了添加或更新試劑、進(jìn)行了有可能改變吸光度的維護(hù)等操作，均應(yīng)進(jìn)行一次質(zhì)控樣品的檢測，度的維護(hù)等操作，均應(yīng)進(jìn)行一次質(zhì)控樣品的檢測，以便及時(shí)監(jiān)測到分析系統(tǒng)的改變。以便及時(shí)監(jiān)測到分析系統(tǒng)的改變。 48 所有分析儀都已設(shè)定或固化了有關(guān)質(zhì)控的分析程序所有分析儀都已設(shè)定或固化了有關(guān)質(zhì)控的分析程序 設(shè)定有關(guān)設(shè)定有關(guān)質(zhì)控參數(shù)質(zhì)控參數(shù)，如每個(gè)質(zhì)控品的批號(hào)、靶值和標(biāo)，如每個(gè)質(zhì)控品的批號(hào)、靶值和標(biāo) 準(zhǔn)差；準(zhǔn)差； 選擇質(zhì)控圖的方式，如均值標(biāo)準(zhǔn)差質(zhì)控圖；選

32、擇質(zhì)控圖的方式，如均值標(biāo)準(zhǔn)差質(zhì)控圖； 質(zhì)控結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析，分析儀會(huì)保存每次測定的質(zhì)控質(zhì)控結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析，分析儀會(huì)保存每次測定的質(zhì)控 結(jié)果，并對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，以列表及質(zhì)控圖的形式在屏結(jié)果，并對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，以列表及質(zhì)控圖的形式在屏 幕上顯示。幕上顯示。 可根據(jù)質(zhì)控結(jié)果在質(zhì)控圖上的位置判斷其是否在控可根據(jù)質(zhì)控結(jié)果在質(zhì)控圖上的位置判斷其是否在控。如果判為。如果判為失控失控則應(yīng)從試劑、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品和分析儀則應(yīng)從試劑、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品和分析儀等幾方面尋找原因。通過對(duì)質(zhì)控結(jié)果的分析，可以了解等幾方面尋找原因。通過對(duì)質(zhì)控結(jié)果的分析，可以了解某項(xiàng)目的分析精密度和準(zhǔn)確度的改變。某項(xiàng)目的分析精密度和準(zhǔn)確度的改變。49

33、生化常規(guī)檢測項(xiàng)目及臨床意義生化常規(guī)組合 ：（1）肝功能系列 （2）糖尿病系列（3）腎功能系列 （4）血脂系列（5）心肌酶譜系列 501.丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷丙）：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷丙）：ALT ALT 、GPT GPT 【常規(guī)檢測項(xiàng)目】參考值范圍：040U/L ALT 大量存在于肝臟中，血清中含量極少，如果肝臟損傷，ALT 會(huì)大量釋放入血清中。2 2 天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷草轉(zhuǎn)氨酶谷草）：天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷草轉(zhuǎn)氨酶谷草）：ASTAST、GOT GOT 【常規(guī)檢測項(xiàng)目】參考值范圍：040U/LAST大量存在于肝臟及心肌中，血清中含量極少，如果肝臟損傷或心肌損傷，AS

34、T就會(huì)大量釋放入血清中（1）肝功能系列51（1）肝功能系列3 3 堿性磷酸酶：堿性磷酸酶：ALPALP、AKPAKP【常規(guī)檢測項(xiàng)目】參考值范圍：42141U/L 血清中的ALP主要來自于肝臟和骨骼，當(dāng)肝臟受損或骨骼疾病時(shí)，ALP會(huì)大量釋放入血清中。升高：肝臟損傷。降低：較少見，慢性腎炎、貧血。4.-谷氨谷氨酰轉(zhuǎn)酰轉(zhuǎn)移移酶酶： ：-GT、 、GGT【 【常常規(guī)檢測項(xiàng)規(guī)檢測項(xiàng)目目】 】參考值范圍：050U/L 血清中的-GT主要來自肝臟，如果肝臟損傷，-GT會(huì)大量釋放入血清中。升高：肝臟損傷。52（1）肝功能系列5.總總膽膽紅紅素：素：TB、 、T.Bili 、 、TBIL【 【常常規(guī)檢測項(xiàng)規(guī)檢測

35、項(xiàng)目目】 】（總膽紅素直接膽紅素間接膽紅素）參考值范圍：成人：220mol/L/新生兒：20200mol/L 正常情況下，膽紅素在體內(nèi)產(chǎn)生后，由肝細(xì)胞通過攝取、轉(zhuǎn)化和結(jié)合來清除膽紅素，使膽紅素在血清中維持一個(gè)較低的水平，如果肝細(xì)胞發(fā)生病變，不能有效清除膽紅素，則膽紅素會(huì)在血清中升高則膽紅素會(huì)在血清中升高。6.直接膽直接膽紅紅素（素（結(jié)結(jié)合膽合膽紅紅素）：素）：DB 、 、D.Bili 、 、DBIL【 【常常規(guī)檢測項(xiàng)規(guī)檢測項(xiàng)目目】 】參考值范圍：成人：06mol/L 升高：肝臟損傷。53（1）肝功能系列7.總總蛋白：蛋白：TP【 【常常規(guī)檢測項(xiàng)規(guī)檢測項(xiàng)目目】 】（總蛋白白蛋白球蛋白） 參考值范

36、圍：6083 g/L 總蛋白包括：白蛋白、前白蛋白、蛋白酶、糖蛋白、結(jié)合珠蛋白、巨球蛋白、銅藍(lán)蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、C-反應(yīng)蛋白。升高：常見于脫水、多發(fā)性骨髓瘤造成總蛋白合成增加、慢性肝臟疾病等。降低：常見于腎臟疾病、肝功能衰竭。8.白蛋白：白蛋白：ALB【 【常常規(guī)檢測項(xiàng)規(guī)檢測項(xiàng)目目】 】參考值范圍：3753 g/L 白蛋白由肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成，在體內(nèi)起著極其重要的作用:運(yùn)輸作用、維持滲透壓、緩沖酸堿、營養(yǎng)蛋白。下列情況會(huì)造成白蛋白降低：1）白蛋白合成不足：主要見于肝臟疾病，營養(yǎng)不良。2）白蛋白丟失：腎病、腸道疾病、燒傷及滲出性皮炎。3）白蛋白分解代謝增加：外科手術(shù)、創(chuàng)傷、炎癥。54（2）、糖尿病系列

37、9.葡萄糖葡萄糖GLU【 【常常規(guī)檢測項(xiàng)規(guī)檢測項(xiàng)目目】 】參考值范圍：3.96.1 mmol/L血糖是指血液中的糖，在正常人血液中主要是葡萄糖。在多種激素的調(diào)節(jié)下血糖濃度維持在定范圍內(nèi)降低血糖的激素有：胰島素。升高血糖的激素有：胰高血糖素、腎上腺素、皮質(zhì)醇、生長激素。所以分泌上述激素的器官發(fā)生病變時(shí)，就會(huì)造成血糖濃度超出范圍。升高：發(fā)生于糖尿病、靜脈輸入含葡萄糖液體。降低：可見于胰島瘤、胰島素用藥、禁食。55（3）、腎功能系列10.尿素（尿素（urea ）、尿素氮（）、尿素氮（BUN） ）【 【常常規(guī)檢測項(xiàng)規(guī)檢測項(xiàng)目目】 】參考值范圍：2.56.3 mmol/L 尿素是人體蛋白質(zhì)代謝的終末產(chǎn)物，血清中的尿素可全部從腎小球?yàn)V過，當(dāng)腎小球病變影響濾過率時(shí)，就會(huì)造成血清中尿素升高。升高：見于腎功能障礙。降低：很少見，見于嚴(yán)重肝病。11.肌肌酐酐： ：CRE、 、Cr【 【常常規(guī)檢測項(xiàng)規(guī)檢測項(xiàng)目目】 】參考值范圍：50120 mol