深部真菌的研究進展2

1、郭兵申郭兵申緒論緒論一、真菌的概況二、該流行因素三、致病的機理四、真菌的基本知識五、試驗診斷方法六、真菌藥敏試驗 深部真菌感染是指由深部真菌或條件深部真菌感染是指由深部真菌或條件致病性真菌致病性真菌( (機會致病性真菌機會致病性真菌) )侵犯內臟侵犯內臟引起的感染。引起的感染。 近年來，深部真菌感染的發(fā)病率和近年來，深部真菌感染的發(fā)病率和死亡率呈持續(xù)上升趨勢，涉及到臨床各死亡率呈持續(xù)上升趨勢，涉及到臨床各個學科，如：肺部真菌感染，消化道真?zhèn)€學科，如：肺部真菌感染，消化道真菌感染，血液病伴發(fā)真菌感染，腫瘤伴菌感染，血液病伴發(fā)真菌感染，腫瘤伴發(fā)真菌感染，外科燒傷伴發(fā)真菌感染，發(fā)真菌感染，外科燒傷伴

2、發(fā)真菌感染，婦科真菌感染，泌尿系統(tǒng)真菌感染，免婦科真菌感染，泌尿系統(tǒng)真菌感染，免疫缺陷患者真菌感染，骨髓移植患者的疫缺陷患者真菌感染，骨髓移植患者的真菌感染以及艾滋病的真菌感染，。真菌感染以及艾滋病的真菌感染，。 真菌的概況真菌的概況深部真菌的流行因素深部真菌的流行因素廣譜抗生素廣譜抗生素皮質類固醇皮質類固醇用免疫抑制劑用免疫抑制劑化療的病人化療的病人HIV感染病人感染病人腫瘤的病人腫瘤的病人肺部疾病的人肺部疾病的人手術燒傷病人手術燒傷病人ICU的病人的病人血液透析病人血液透析病人導管、插管等導管、插管等1高危人群高危人群 對容易感染系統(tǒng)性真菌感染對容易感染系統(tǒng)性真菌感染的患者，應及時發(fā)現(xiàn)，及

3、早進行預的患者，應及時發(fā)現(xiàn)，及早進行預防，尤其是在住院病人中更防，尤其是在住院病人中更 應應該注意防止院內感染。該注意防止院內感染。2 2、高危因素、高危因素深部真菌的流行因素深部真菌的流行因素血液腫瘤血液腫瘤骨髓移植骨髓移植實質器官移植實質器官移植HIV感染感染其他免疫障礙其他免疫障礙骨髓移植骨髓移植：血液腫瘤：血液腫瘤：2、高危因素的詳解、高危因素的詳解白血病進行化療而引起粒細胞減少是引起真菌感染的一個重白血病進行化療而引起粒細胞減少是引起真菌感染的一個重要原因。文獻報導要原因。文獻報導20%-50%并發(fā)有侵襲性真菌感染。其中最常并發(fā)有侵襲性真菌感染。其中最常見的致病真菌是白念珠菌和曲霉菌

4、。其次成人易感染光滑念珠見的致病真菌是白念珠菌和曲霉菌。其次成人易感染光滑念珠菌，兒童易感染近平滑念珠菌。粒細胞減少并發(fā)深部真菌感染菌，兒童易感染近平滑念珠菌。粒細胞減少并發(fā)深部真菌感染是主要致死原因。是主要致死原因。 易發(fā)生侵襲性曲霉菌感染，主要是因為宿主移植反應而易發(fā)生侵襲性曲霉菌感染，主要是因為宿主移植反應而應用免疫抑制劑應用免疫抑制劑,皮質類固醇所引起。文獻報導，有皮質類固醇所引起。文獻報導，有84%的的病人是死于曲霉菌或其他霉菌（鐮刀菌，毛孢子菌，梨頭病人是死于曲霉菌或其他霉菌（鐮刀菌，毛孢子菌，梨頭霉）感染。霉）感染。實質器官移植實質器官移植：2、高危因素的詳解、高危因素的詳解由于

5、需要應用免疫抑制劑來防止排斥反應而易于導致真菌感由于需要應用免疫抑制劑來防止排斥反應而易于導致真菌感染。如肝臟移植受體發(fā)生侵襲性真菌感染的機率約為染。如肝臟移植受體發(fā)生侵襲性真菌感染的機率約為7-24%，其中其中80%以上是由于念珠菌和曲菌感染，常在移植術后頭以上是由于念珠菌和曲菌感染，常在移植術后頭2個月個月內發(fā)生，死亡率達內發(fā)生，死亡率達50%-70%。HIV感染感染：HIV感染的免疫缺陷患者，特別容易發(fā)生真菌感染，如感染的免疫缺陷患者，特別容易發(fā)生真菌感染，如感染莢膜組織胞漿菌，馬爾尼青霉、球孢子菌等，一些嚴感染莢膜組織胞漿菌，馬爾尼青霉、球孢子菌等，一些嚴重的致死性真菌。重的致死性真菌

6、。2、高危因素的詳解、高危因素的詳解其他免疫障礙：其他免疫障礙： 免疫障礙時常并發(fā)真菌感染的危險，包括院內獲得免疫障礙時常并發(fā)真菌感染的危險，包括院內獲得性真菌感染。以念珠菌性真菌感染。以念珠菌,曲霉常見曲霉常見.其中曲菌是最嚴重的真其中曲菌是最嚴重的真菌感染之一。菌感染之一。曲菌有很多種可由空氣傳播，如可由醫(yī)院的通風設備傳播，曲菌有很多種可由空氣傳播，如可由醫(yī)院的通風設備傳播，醫(yī)務人員的手可傳播念珠菌引起院內感染，這也是一個重要醫(yī)務人員的手可傳播念珠菌引起院內感染，這也是一個重要的傳播途徑。所以洗手很重要，但尚未引起足夠的重視。的傳播途徑。所以洗手很重要，但尚未引起足夠的重視。深部真菌感染的

7、致病機理深部真菌感染的致病機理列列舉舉深部真菌感染的致病機理深部真菌感染的致病機理念珠菌致病機理：念珠菌致病機理：w 念珠菌為雙形態(tài)真菌（即酵母相和菌絲念珠菌為雙形態(tài)真菌（即酵母相和菌絲相），一般以芽生孢子的形式傳播，不引起相），一般以芽生孢子的形式傳播，不引起臨床癥狀。當機體局部防御能力減退情況下臨床癥狀。當機體局部防御能力減退情況下孢子大量繁殖，并轉化為菌絲相黏附于黏膜孢子大量繁殖，并轉化為菌絲相黏附于黏膜細胞上使之穿孔，通過所分泌的蛋白酶及水細胞上使之穿孔，通過所分泌的蛋白酶及水解酶而加重炎癥損傷，并進一步繁殖擴散引解酶而加重炎癥損傷，并進一步繁殖擴散引起一系列的病理變化。其毒力因子主要

8、是黏起一系列的病理變化。其毒力因子主要是黏附素，它是促進念珠菌黏附于宿主細胞的生附素，它是促進念珠菌黏附于宿主細胞的生物分子。物分子。深部真菌感染的致病機理深部真菌感染的致病機理曲霉菌致病機理：曲霉菌致病機理：231 煙曲菌可產生煙曲菌可產生煙曲菌素，粘帚煙曲菌素，粘帚霉素和煙曲霉酸霉素和煙曲霉酸以及內毒素，通以及內毒素，通過抑制免疫反應過抑制免疫反應或破壞局部組織或破壞局部組織引起疾病。引起疾病。 這些致病因子主要通過擾亂黏膜這些致病因子主要通過擾亂黏膜防御功能、抑制吞噬細胞功能，降防御功能、抑制吞噬細胞功能，降低調理作用，促進曲菌與組織黏附低調理作用，促進曲菌與組織黏附發(fā)揮作用。發(fā)揮作用。

9、 曲菌病臨床表現(xiàn)，如過敏性曲菌病、曲菌病臨床表現(xiàn)，如過敏性曲菌病、肺真菌球空洞、急性或慢性致死性侵入、肺真菌球空洞、急性或慢性致死性侵入、眼部感染、鼻曲菌病以及皮膚感染。眼部感染、鼻曲菌病以及皮膚感染。真菌的基本知識真菌的基本知識1、真菌的定義、真菌的定義2、真菌的分類及特性、真菌的分類及特性3、真菌的形態(tài)分類、真菌的形態(tài)分類真菌的定義：真菌的定義：真菌的基本知識真菌的基本知識 真菌屬生物界，是微生物學的一個重要組成部分，其種類繁多，真菌屬生物界，是微生物學的一個重要組成部分，其種類繁多，數(shù)量達上萬種，體積大的如蘑菇、小的幾微米需借助顯微鏡才能看數(shù)量達上萬種，體積大的如蘑菇、小的幾微米需借助顯

10、微鏡才能看到。醫(yī)學真菌都屬于微小真菌，是由菌絲和孢子組成的。菌絲呈微到。醫(yī)學真菌都屬于微小真菌，是由菌絲和孢子組成的。菌絲呈微細的管狀，表面光滑，粗細一致，彎曲自然，菌絲兩端整齊，無色細的管狀，表面光滑，粗細一致，彎曲自然，菌絲兩端整齊，無色或有色、分隔或不分隔。是由孢壁、孢漿、孢核、多細胞組成的菌或有色、分隔或不分隔。是由孢壁、孢漿、孢核、多細胞組成的菌絲體。孢子是真菌繁殖的最小單位，為單細胞、可芽生，具有孢壁、絲體。孢子是真菌繁殖的最小單位，為單細胞、可芽生，具有孢壁、孢漿、孢核。孢漿、孢核。真菌的基本知識真菌的基本知識真菌的分類及特性：真菌的分類及特性： 真菌包括的范圍很廣：醫(yī)學真菌、藥

11、用真真菌包括的范圍很廣：醫(yī)學真菌、藥用真 菌、菌、工業(yè)真菌、食用真菌。工業(yè)真菌、食用真菌。我們接觸的主要是醫(yī)學真菌它包括：我們接觸的主要是醫(yī)學真菌它包括： （1）致病性真菌（病原性真菌）致病性真菌（病原性真菌）： 淺部真菌淺部真菌引起各種皮膚真菌病。引起各種皮膚真菌病。 深部真菌深部真菌引起各種原發(fā)性或繼發(fā)性的引起各種原發(fā)性或繼發(fā)性的 深部真菌?。ńM織胞漿菌、深部真菌?。ńM織胞漿菌、 條件致病真菌一引起各種深部真菌感染條件致病真菌一引起各種深部真菌感染 （2）致敏性真菌：）致敏性真菌： 真菌過敏癥真菌過敏癥哮喘、過敏性肺炎、過敏哮喘、過敏性肺炎、過敏 性鼻炎、過敏性結膜炎、性鼻炎、過敏性結膜炎

12、、 過敏性皮炎等。過敏性皮炎等。（3）致毒性真菌：）致毒性真菌： 真菌中毒癥真菌中毒癥真菌污染或儲藏在食物內（如真菌污染或儲藏在食物內（如甘蔗）產生的代謝產物即真菌毒素，可引起甘蔗）產生的代謝產物即真菌毒素，可引起 嚴重嚴重的急性或慢性中毒。的急性或慢性中毒。（4）致癌性真菌：）致癌性真菌： 黃曲霉菌等多種真菌可產生致癌因子，引起黃曲霉菌等多種真菌可產生致癌因子，引起肝癌等。肝癌等。 (5)條件致病性真菌條件致病性真菌: 念珠菌、曲霉菌、毛霉菌、鐮刀菌、青霉菌念珠菌、曲霉菌、毛霉菌、鐮刀菌、青霉菌等。主要引起深部（系統(tǒng)等。主要引起深部（系統(tǒng) 性）真菌感染。性）真菌感染。 真菌的的病原學形態(tài)分類

13、：真菌的的病原學形態(tài)分類：（1）酵母菌）酵母菌： 酵母菌是一些單細胞真菌，并非系統(tǒng)演化分類的單酵母菌是一些單細胞真菌，并非系統(tǒng)演化分類的單元；酵母菌是人類文明史中被應用得最早的微生物；可元；酵母菌是人類文明史中被應用得最早的微生物；可在缺氧環(huán)境中生存。目前已知有在缺氧環(huán)境中生存。目前已知有1000多種酵母。多種酵母。 （2）酵母樣菌（條件致病菌）酵母樣菌（條件致病菌）：真菌的的病原學形態(tài)分類：真菌的的病原學形態(tài)分類： 念珠菌屬（白念珠菌、（熱帶念珠念珠菌屬（白念珠菌、（熱帶念珠菌、克柔氏念珠菌、光滑念珠菌等）菌、克柔氏念珠菌、光滑念珠菌等） （3）霉菌（條件致病菌）霉菌（條件致病菌）：真菌的的

14、病原學形態(tài)分類：真菌的的病原學形態(tài)分類： 曲霉屬（煙曲霉、黃曲霉屬（煙曲霉、黃 曲霉）、青曲霉）、青霉屬（馬內菲青霉）、鐮刀菌屬（串霉屬（馬內菲青霉）、鐮刀菌屬（串珠鐮刀菌、茄病鐮刀菌）珠鐮刀菌、茄病鐮刀菌）（4）雙相菌雙相菌：真菌的的病原學形態(tài)分類：真菌的的病原學形態(tài)分類： 37呈酵母或孢子型，呈酵母或孢子型，25呈菌絲呈菌絲型、組織胞漿菌型、組織胞漿菌（5）細菌樣真菌細菌樣真菌：真菌的的病原學形態(tài)分類：真菌的的病原學形態(tài)分類：放線菌類（肺放線菌?。┓啪€菌類（肺放線菌病）深部真菌感染的實驗室診斷方法深部真菌感染的實驗室診斷方法真菌感染已成為嚴重危及高?；颊叩牟⒄婢腥疽殉蔀閲乐匚＜案呶；颊叩?/p>

15、并發(fā)癥。艾滋病最常見的感染也是真菌感染，發(fā)癥。艾滋病最常見的感染也是真菌感染，發(fā)病率在發(fā)病率在80-90%80-90%，致死率很高。，致死率很高。深部真菌或條件致病性真菌感染的診斷、深部真菌或條件致病性真菌感染的診斷、治療和預防已引起世界各國醫(yī)學工作者的高治療和預防已引起世界各國醫(yī)學工作者的高度重視，也是我們醫(yī)學領域的重點研究課題。度重視，也是我們醫(yī)學領域的重點研究課題。深部真菌感染的實驗診斷，顯得更加重深部真菌感染的實驗診斷，顯得更加重要，它是治療和預防深部真菌感染的前提。要，它是治療和預防深部真菌感染的前提。深部真菌感染的實驗室診斷方法深部真菌感染的實驗室診斷方法真菌學檢查的手段：真菌學檢

16、查的手段：1.直接鏡檢直接鏡檢2.真菌培養(yǎng)真菌培養(yǎng)3.組織病理學檢查組織病理學檢查4.血清學方法：具有簡便、快速、血清學方法：具有簡便、快速、敏感性和特異性相對較高的特點。敏感性和特異性相對較高的特點。常用方法有半乳甘露聚糖實驗，常用方法有半乳甘露聚糖實驗，可以特異、定量檢測曲霉菌可以特異、定量檢測曲霉菌 。5. PCR技術：近年來隨著分子生物技術：近年來隨著分子生物學技術發(fā)展，應用學技術發(fā)展，應用PCR技術對深部真技術對深部真菌病快速診斷已成為關注的焦點。方菌病快速診斷已成為關注的焦點。方法有：分子探針、限制性酶切片段長法有：分子探針、限制性酶切片段長度多態(tài)性分析（度多態(tài)性分析（RFLP）、

17、）、DNA指紋指紋圖譜、隨機擴增圖譜、隨機擴增DNA多態(tài)性（多態(tài)性（RAPD）用于深部念珠菌感染的診斷研究。用于深部念珠菌感染的診斷研究。真菌學檢查的手段：真菌學檢查的手段：真菌感染實驗診斷步驟：真菌感染實驗診斷步驟：深部真菌感染的實驗室診斷方法深部真菌感染的實驗室診斷方法標本采集標本采集鏡檢鏡檢培養(yǎng)培養(yǎng)標本采集方法：標本采集方法：念珠菌念珠菌 痰標本：取清晨的痰液，必須先刷牙，清洗口腔，痰標本：取清晨的痰液，必須先刷牙，清洗口腔，應取深入氣管或支氣管的分泌物。鼻咽分泌物，唾液或應取深入氣管或支氣管的分泌物。鼻咽分泌物，唾液或口腔分泌物均不適宜作檢查。所取標本應放在滅菌的容口腔分泌物均不適宜作

18、檢查。所取標本應放在滅菌的容器內。器內。 便標本：取清晨第一次便，挑取不成形及帶有粘液便標本：取清晨第一次便，挑取不成形及帶有粘液樣的便。樣的便。 尿標本：外陰清洗后，取中段尿。根據(jù)感染累及的尿標本：外陰清洗后，取中段尿。根據(jù)感染累及的部位不同采集不同的標本，血液科部位不同采集不同的標本，血液科血液，神經內科血液，神經內科腦脊液，或活檢組織。腦脊液，或活檢組織。 曲霉菌感染是由多種曲霉引起，常侵犯肺、腦、眼、曲霉菌感染是由多種曲霉引起，常侵犯肺、腦、眼、耳、鼻、皮膚粘膜、神經系統(tǒng)或骨骼，引起急慢性炎耳、鼻、皮膚粘膜、神經系統(tǒng)或骨骼，引起急慢性炎癥或肉芽腫等，嚴重者可發(fā)生曲霉敗血癥，甚至死亡，癥

19、或肉芽腫等，嚴重者可發(fā)生曲霉敗血癥，甚至死亡，近年來又證明一些曲霉毒素可引起急性中毒和致癌。近年來又證明一些曲霉毒素可引起急性中毒和致癌。 曲霉屬有曲霉屬有18個群個群132個種，絕大部分為非致病菌。個種，絕大部分為非致病菌。致病性的曲霉有：煙曲霉、黃曲霉、黑曲霉、土曲霉、致病性的曲霉有：煙曲霉、黃曲霉、黑曲霉、土曲霉、構巢曲霉和棒曲霉、雜色曲霉、米曲霉、灰綠曲霉、構巢曲霉和棒曲霉、雜色曲霉、米曲霉、灰綠曲霉、聚多曲霉、亮白曲霉、日本曲霉、阿姆斯丹曲霉、焦聚多曲霉、亮白曲霉、日本曲霉、阿姆斯丹曲霉、焦曲霉、局限曲霉、黃柄曲霉、多育曲霉。而以煙曲霉曲霉、局限曲霉、黃柄曲霉、多育曲霉。而以煙曲霉和

20、黃曲霉最多。和黃曲霉最多。 系統(tǒng)性曲霉菌感染：系統(tǒng)性曲霉菌感染：標本采集方法：標本采集方法： 直接鏡檢：直接鏡檢：A、氫氧化鉀法、氫氧化鉀法 將標本置于在玻片上，加一滴將標本置于在玻片上，加一滴10%KOH浮載液，蓋上蓋浮載液，蓋上蓋玻片放置玻片放置510分鐘后或直接在火焰上快速通過分鐘后或直接在火焰上快速通過23次微加熱，次微加熱，輕壓蓋玻片驅逐氣泡并將標本壓薄后置于顯微鏡下檢查。先輕壓蓋玻片驅逐氣泡并將標本壓薄后置于顯微鏡下檢查。先在低倍鏡下觀察有無菌絲和孢子，然后用高倍鏡觀察孢子和在低倍鏡下觀察有無菌絲和孢子，然后用高倍鏡觀察孢子和菌絲的形態(tài)特征、大小和排列等。對于角質標本，必要時可菌絲

21、的形態(tài)特征、大小和排列等。對于角質標本，必要時可在在10%KOH溶液中，加入終濃度為溶液中，加入終濃度為40%二甲亞砜，促進其溶二甲亞砜，促進其溶解。此法適用于皮屑、甲屑、毛發(fā)、痂皮、痰、組織、耵聹、解。此法適用于皮屑、甲屑、毛發(fā)、痂皮、痰、組織、耵聹、糞便等標本的直接涂片檢查。糞便等標本的直接涂片檢查。 直接鏡檢：直接鏡檢：B、膠帶粘貼法、膠帶粘貼法 用透明膠帶直接貼于取材部位，數(shù)分鐘用透明膠帶直接貼于取材部位，數(shù)分鐘后揭下，充分展平后，直接置貼于加有一后揭下，充分展平后，直接置貼于加有一滴浮液的載玻片上此液可以是滴浮液的載玻片上此液可以是10%20%的的KOH，也可以采用乳酸酚棉藍染液（易

22、于，也可以采用乳酸酚棉藍染液（易于觀察）。該法常用于花斑癬患處的直接檢觀察）。該法常用于花斑癬患處的直接檢查。查。 真菌的培養(yǎng)：真菌的培養(yǎng)：A、念珠菌培養(yǎng)、念珠菌培養(yǎng)沙氏培養(yǎng)法沙氏培養(yǎng)法: 取標本接種于沙氏瓊脂培養(yǎng)基上，分別放置于取標本接種于沙氏瓊脂培養(yǎng)基上，分別放置于25和和37恒溫箱內恒溫箱內4872h，即有奶油色酵母樣菌落生長。將菌落移種，即有奶油色酵母樣菌落生長。將菌落移種到吐溫瓊脂基（小培養(yǎng)條件下）于到吐溫瓊脂基（小培養(yǎng)條件下）于2524h可產生頂端厚壁孢可產生頂端厚壁孢子子,即診斷為白念珠菌。未見厚壁孢子只有假菌絲為念珠菌屬，即診斷為白念珠菌。未見厚壁孢子只有假菌絲為念珠菌屬，進一

23、步作發(fā)酵實驗和同化實驗，可鑒定為哪一種念珠菌。進一步作發(fā)酵實驗和同化實驗，可鑒定為哪一種念珠菌。 科瑪嘉顯色培養(yǎng)法：科瑪嘉顯色培養(yǎng)法： 將標本接種于念珠菌顯色培養(yǎng)基將標本接種于念珠菌顯色培養(yǎng)基(科瑪嘉顯色培養(yǎng)基）的科瑪嘉顯色培養(yǎng)基）的表面，表面，372448h，可有酵母樣菌落生長，根據(jù)菌落產生，可有酵母樣菌落生長，根據(jù)菌落產生的不同顏色來鑒定念珠菌。的不同顏色來鑒定念珠菌。 真菌的培養(yǎng)：真菌的培養(yǎng)：B、系統(tǒng)性曲霉菌培養(yǎng)、系統(tǒng)性曲霉菌培養(yǎng) ? 如果鏡檢見到曲霉菌的特點，培養(yǎng)可以如果鏡檢見到曲霉菌的特點，培養(yǎng)可以直接選用察氏培基，分別放在直接選用察氏培基，分別放在25和和37恒恒溫培養(yǎng)箱內，溫培養(yǎng)

24、箱內，3-5天即可生長出完整的菌落。天即可生長出完整的菌落。根據(jù)菌落的顏色和分生孢子頭的結構特征，根據(jù)菌落的顏色和分生孢子頭的結構特征，鑒定曲霉菌種。鑒定曲霉菌種。 ? 結構特征：分生孢子梗、頂囊、產孢結結構特征：分生孢子梗、頂囊、產孢結構（瓶?；蛐」＃?、分生孢子、有性期（殼構（瓶?；蛐」＃⒎稚咦?、有性期（殼細胞、閉囊殼、子囊孢子）細胞、閉囊殼、子囊孢子） 白色念珠菌白色念珠菌熱帶念珠菌熱帶念珠菌光滑念珠菌光滑念珠菌克柔念珠菌克柔念珠菌黃曲霉黃曲霉煙曲霉煙曲霉黑曲霉黑曲霉新型隱球菌新型隱球菌墨汁涂片墨汁涂片組織相組織相毛霉屬毛霉屬根毛霉根毛霉毛毛霉霉犁頭霉犁頭霉鐮刀菌鐮刀菌 真菌感染，不論

25、淺部真菌或深部真菌感真菌感染，不論淺部真菌或深部真菌感染，幾乎全部依賴于臨床標本的真菌學檢查，染，幾乎全部依賴于臨床標本的真菌學檢查，病原真菌的鑒定主要依靠其形態(tài)學。病原真菌的鑒定主要依靠其形態(tài)學。 方法：顯微鏡直接檢查（鏡檢）、真菌方法：顯微鏡直接檢查（鏡檢）、真菌培養(yǎng)及鑒定、組織學檢查。其他特殊方法，培養(yǎng)及鑒定、組織學檢查。其他特殊方法，有血清免疫學及分子生物學基因檢測法等。有血清免疫學及分子生物學基因檢測法等。 歸納小結歸納小結真菌藥敏試驗及真菌藥真菌藥敏試驗及真菌藥抗真菌藥敏抗真菌藥敏 近年來，深部真菌感染的發(fā)病率明顯增高，新研制的抗近年來，深部真菌感染的發(fā)病率明顯增高，新研制的抗真菌

26、藥物也不斷涌現(xiàn)，而耐藥菌株在臨床上也不斷發(fā)生。真菌藥物也不斷涌現(xiàn)，而耐藥菌株在臨床上也不斷發(fā)生。因此，開展抗真菌藥物敏感實驗，選擇敏感的抗真菌藥物因此，開展抗真菌藥物敏感實驗，選擇敏感的抗真菌藥物是實驗室中一個重要的工作環(huán)節(jié)。是實驗室中一個重要的工作環(huán)節(jié)。 抗真菌藥物敏感實驗主要是測定抗真菌藥物對致病真抗真菌藥物敏感實驗主要是測定抗真菌藥物對致病真菌的抑菌或殺菌作用。在最低藥物濃度下可抑制全部病原菌的抑菌或殺菌作用。在最低藥物濃度下可抑制全部病原真菌者稱為最低抑菌濃度（真菌者稱為最低抑菌濃度（MICMIC），有時還判定），有時還判定MIC50MIC50（5050真菌的真菌的MICMIC）及）及

27、MIC90MIC90（9090真菌的真菌的MICMIC）。在最低濃度下）。在最低濃度下可殺死全部真菌者為最低殺菌濃度（可殺死全部真菌者為最低殺菌濃度（F F）。）。 真菌藥敏試驗及真菌藥真菌藥敏試驗及真菌藥抗真菌藥敏抗真菌藥敏液基稀釋法：液基稀釋法：液基稀釋法是美國國家臨床試驗標液基稀釋法是美國國家臨床試驗標準委員會（準委員會（NCCLSNCCLS）分別于）分別于19971997年和年和20032003年推出了年推出了致病酵母菌抗真菌藥物敏感試驗方案致病酵母菌抗真菌藥物敏感試驗方案M27-AM27-A和產孢和產孢絲狀真菌抗真菌藥物敏感試驗方案絲狀真菌抗真菌藥物敏感試驗方案M38-AM38-A。

28、 這兩個方案對于致病性真菌的培養(yǎng)基這兩個方案對于致病性真菌的培養(yǎng)基pHpH值，培值，培養(yǎng)基的成分，接種濃度，孵育溫度，時間，終點養(yǎng)基的成分，接種濃度，孵育溫度，時間，終點判斷等因素作了明確的規(guī)定，使得不同實驗室之判斷等因素作了明確的規(guī)定，使得不同實驗室之間的結果客觀，具有可比性，因此被稱為標準試間的結果客觀，具有可比性，因此被稱為標準試驗方案。驗方案?？拐婢幟艨拐婢幟?1.酵母樣真菌藥物敏感試驗：酵母樣真菌藥物敏感試驗： (1)微量液體稀釋法：微量液體稀釋法： 美國國家臨床試驗標準委員會推薦方法（美國國家臨床試驗標準委員會推薦方法（）用）用96孔微孔板孔微孔板(U型型)，每板第一排各孔，每

29、板第一排各孔(12孔孔) 內內分別加入培養(yǎng)基分別加入培養(yǎng)基180ul，第，第11孔為陰性對照，第孔為陰性對照，第12孔為孔為陽性對照；加入系列稀釋濃度的待測藥液陽性對照；加入系列稀釋濃度的待測藥液10ul依次加入依次加入相應藥液于各孔內，陰性對照中加入相應藥液于各孔內，陰性對照中加入20ul；加入菌懸液；加入菌懸液10ul，（陰性對照孔不加）；置于振蕩板上振蕩，（陰性對照孔不加）；置于振蕩板上振蕩5分鐘分鐘，使各液混勻，放入濕合內，于，使各液混勻，放入濕合內，于3524h。觀察結果。觀察結果。 本方法也可加入指示劑于培養(yǎng)基內，菌生長后由本方法也可加入指示劑于培養(yǎng)基內，菌生長后由蘭色轉為紫紅色，

30、以無色澤變化為。蘭色轉為紫紅色，以無色澤變化為。 (2)瓊脂擴散法：瓊脂擴散法： 將待測的真菌摻入瓊脂基內，將藥敏片置于培將待測的真菌摻入瓊脂基內，將藥敏片置于培養(yǎng)基表面，孵育養(yǎng)基表面，孵育48h48h后，根據(jù)紙片周圍真菌生長后，根據(jù)紙片周圍真菌生長被抑制的范圍來確定該抗菌劑對此真菌的抑制作被抑制的范圍來確定該抗菌劑對此真菌的抑制作用。如同時應用系列濃度藥敏片可測出。用。如同時應用系列濃度藥敏片可測出。(3)紙片擴散法：（試劑盒）紙片擴散法：（試劑盒） 似細菌藥敏的方法。將菌株劃線接種于培養(yǎng)似細菌藥敏的方法。將菌株劃線接種于培養(yǎng)基表面，放入不同的藥物紙片，培養(yǎng)基表面，放入不同的藥物紙片，培養(yǎng)4

31、8h48h，觀察抑，觀察抑菌環(huán)的大小。同時用不同濃度的紙片，可觀察菌環(huán)的大小。同時用不同濃度的紙片，可觀察。此種方法簡單易行，不需要復雜設備，可。此種方法簡單易行，不需要復雜設備，可作為抗真菌藥物的初篩方法作為抗真菌藥物的初篩方法。 抗真菌藥敏抗真菌藥敏(4)鑒定藥敏法：（改良法）鑒定藥敏法：（改良法） 采用科瑪嘉念珠菌培養(yǎng)基，將臨床標本用采用科瑪嘉念珠菌培養(yǎng)基，將臨床標本用生理鹽水稀釋，用棉拭子將標本稀釋液劃線于生理鹽水稀釋，用棉拭子將標本稀釋液劃線于培養(yǎng)基表面，再放入藥敏片，培養(yǎng)基表面，再放入藥敏片，48h48h后，產生不后，產生不同顏色的菌株，同時出現(xiàn)抑菌環(huán)，根據(jù)抑菌環(huán)同顏色的菌株，同時

32、出現(xiàn)抑菌環(huán)，根據(jù)抑菌環(huán)的大小，確定藥物敏感程度，也可進行的大小，確定藥物敏感程度，也可進行的測定。的測定。抗真菌藥敏抗真菌藥敏2.霉菌（絲狀真菌）藥敏試驗：霉菌（絲狀真菌）藥敏試驗： (1)試管藥基法試管藥基法： 將藥物倍比稀釋的方法加入培養(yǎng)基內，將藥物倍比稀釋的方法加入培養(yǎng)基內，然后接種菌種，觀察。然后接種菌種，觀察。 (2)紙片法：紙片法： 將培養(yǎng)出的絲狀菌（曲霉菌）制成菌懸將培養(yǎng)出的絲狀菌（曲霉菌）制成菌懸液，劃線接種于培養(yǎng)基表面，放入藥敏片，觀液，劃線接種于培養(yǎng)基表面，放入藥敏片，觀察藥物敏感情況。察藥物敏感情況。 抗真菌藥敏抗真菌藥敏藥敏藥敏(微量法微量法)藥敏藥敏(瓊脂擴散法瓊脂擴

33、散法)抗真菌藥物抗真菌藥物（1 1）氟康唑：）氟康唑： 是三唑類抗真菌藥物，有口服劑，靜脈注是三唑類抗真菌藥物，有口服劑，靜脈注射劑。目前治療系統(tǒng)性真菌感染應用最廣的一射劑。目前治療系統(tǒng)性真菌感染應用最廣的一種藥物，其優(yōu)勢有靜脈注射劑?？咕饔脤头N藥物，其優(yōu)勢有靜脈注射劑。抗菌作用對酵母菌（新型隱球菌）、酵母樣菌（念珠菌屬）母菌（新型隱球菌）、酵母樣菌（念珠菌屬）有抗菌作用，對霉菌組、雙相菌組作用較低。有抗菌作用，對霉菌組、雙相菌組作用較低。對克柔氏念珠菌、光滑念珠菌無明顯的抗菌作對克柔氏念珠菌、光滑念珠菌無明顯的抗菌作用，雖然對白念珠菌有很好的抗菌作用，但近用，雖然對白念珠菌有很好的抗菌作

34、用，但近年來對白念珠菌產生耐藥的菌株也逐漸增多。年來對白念珠菌產生耐藥的菌株也逐漸增多?？拐婢幬锟拐婢幬铮?）伊曲康唑（斯皮仁諾）伊曲康唑（斯皮仁諾） 是一種具有廣譜活性的三唑類抗真菌藥是一種具有廣譜活性的三唑類抗真菌藥物，有口服劑，靜脈注射劑。對酵母菌（新物，有口服劑，靜脈注射劑。對酵母菌（新型隱球菌）、酵母樣菌（念珠菌屬）、霉菌型隱球菌）、酵母樣菌（念珠菌屬）、霉菌（曲霉屬）、雙相菌（組織胞漿菌），有廣（曲霉屬）、雙相菌（組織胞漿菌），有廣譜的抗菌作用，廣泛用于治療系統(tǒng)性念珠菌譜的抗菌作用，廣泛用于治療系統(tǒng)性念珠菌和系統(tǒng)性曲霉菌的感染。和系統(tǒng)性曲霉菌的感染。 抗真菌藥物抗真菌藥物（3）

35、伏力康唑）伏力康唑 是新型的廣譜三唑抗真菌藥，對念珠菌的活是新型的廣譜三唑抗真菌藥，對念珠菌的活性比氟康唑高性比氟康唑高8-13倍，并且對氟康唑耐藥的菌株倍，并且對氟康唑耐藥的菌株克柔氏念珠菌和光滑念珠菌有效。在與伏力康唑，克柔氏念珠菌和光滑念珠菌有效。在與伏力康唑，氟康唑，伊曲康唑和兩性霉素氟康唑，伊曲康唑和兩性霉素B對比研究中發(fā)現(xiàn)，對比研究中發(fā)現(xiàn)，伏力康唑具有更廣的抗菌譜，它對新型隱球菌的伏力康唑具有更廣的抗菌譜，它對新型隱球菌的抗菌活性優(yōu)于氟康唑和伊曲康唑，并且對臨床上抗菌活性優(yōu)于氟康唑和伊曲康唑，并且對臨床上的難以治療的煙曲霉感染的患者具有較好的療效。的難以治療的煙曲霉感染的患者具有較

36、好的療效?？拐婢幬锟拐婢幬铮? 4）特比奈芬：）特比奈芬： 丙稀胺類抗真菌藥物，僅有口服劑，為丙稀胺類抗真菌藥物，僅有口服劑，為新型的殺真菌藥物，對霉菌組作用強，新型的殺真菌藥物，對霉菌組作用強， 療效療效好，但對念珠菌屬抗菌作用較低。好，但對念珠菌屬抗菌作用較低。（5）棘白菌素類抗真菌藥）棘白菌素類抗真菌藥 卡泊芬凈（商品名：科賽斯）為殺菌劑，卡泊芬凈（商品名：科賽斯）為殺菌劑，與兩性霉素與兩性霉素B B相似，對各種曲霉（煙曲霉，黃相似，對各種曲霉（煙曲霉，黃曲霉，土曲霉，黑曲霉）均有較強的抗菌活曲霉，土曲霉，黑曲霉）均有較強的抗菌活性，對白念珠菌和非白念珠菌及克柔氏念珠性，對白念珠菌和非白念珠菌及克柔氏念珠菌和光滑念珠菌也有較好的抗菌活性。對新菌和光滑念珠菌也有較好