生物工程分析的基礎(chǔ)知識

1、（三）采用的一般程序（三）采用的一般程序采樣工具2.2.3 樣品的保存樣品的保存 防吸水或失水、霉變、高溫分解、失活、細(xì)菌等1.1.鮮樣如不能立即測定，則須放在冰箱中鮮樣如不能立即測定，則須放在冰箱中(-5)(-5)短期冷短期冷藏保存，以抑制其生理變化。藏保存，以抑制其生理變化。2.2.新鮮的動物樣品取樣后，一般采取冷凍保存（新鮮的動物樣品取樣后，一般采取冷凍保存（2020），或采用超低溫保存（），或采用超低溫保存（7070），或采用液氮冷），或采用液氮冷凍保存，以防止蛋白質(zhì)及脂肪發(fā)生變化。凍保存，以防止蛋白質(zhì)及脂肪發(fā)生變化。( (一）蒸餾法一）蒸餾法利用液體混合物中各組分揮發(fā)度的不同分離為純

2、組分利用液體混合物中各組分揮發(fā)度的不同分離為純組分的方法叫蒸餾。的方法叫蒸餾。（1 1）常壓蒸餾）常壓蒸餾當(dāng)被蒸餾的物質(zhì)受熱后不發(fā)生分解或在沸點(diǎn)不太高的當(dāng)被蒸餾的物質(zhì)受熱后不發(fā)生分解或在沸點(diǎn)不太高的情況下，可在常壓進(jìn)行蒸餾。情況下，可在常壓進(jìn)行蒸餾。（2）減壓蒸餾當(dāng)常壓蒸餾容易使蒸餾物質(zhì)分解，或其沸點(diǎn)太高時，可以采用減壓蒸餾。減壓裝置可用水泵或真空泵。（3）水蒸汽蒸餾將水和與水互不相溶的液體一起蒸餾，這種蒸餾的方法就成為水蒸汽蒸餾。（4）分餾分餾是蒸餾的一種，是將液體混合物在一個設(shè)備內(nèi)同時進(jìn)行多次部分汽化和部分冷凝，將液體混合物分離為各組分的蒸餾過程。這種蒸餾方法用于這種混合液體，即它的兩種或

3、兩種以上組分是可以互溶而且沸點(diǎn)相差很小的。 在高溫或強(qiáng)氧化條件下，使樣品中有機(jī)物質(zhì)分解，并在加在高溫或強(qiáng)氧化條件下，使樣品中有機(jī)物質(zhì)分解，并在加熱過程中成氣態(tài)而逸散掉?？煞譃闊徇^程中成氣態(tài)而逸散掉?？煞譃楦煞ɑ一煞ɑ一秃蜐穹ㄏ瘽穹ㄏ瘍纱箢?。兩大類。 2.3.3.1 2.3.3.1 干法灰化干法灰化: :是一種用高溫灼燒的方式破壞樣品中的有是一種用高溫灼燒的方式破壞樣品中的有機(jī)物的方法，又稱灼燒法。樣品在灰化爐中（一般機(jī)物的方法，又稱灼燒法。樣品在灰化爐中（一般550550攝氏度）攝氏度）被充分氧化。為了避免測定物質(zhì)的散失，往往加入少量堿性或被充分氧化。為了避免測定物質(zhì)的散失，往往加入少

4、量堿性或酸性物質(zhì)（固定劑），通常稱為堿性干法灰化或酸性干法灰化。酸性物質(zhì)（固定劑），通常稱為堿性干法灰化或酸性干法灰化。 （二）有機(jī)物破壞法（二）有機(jī)物破壞法具體預(yù)處理方法（三）溶劑提取法在任一溶劑中，不同的物質(zhì)具有不同的溶解度，利用混合物中各物質(zhì)的溶解度的不同，將混合物組分完全或部分地分離，此過程叫萃取，也稱提取。（1）溶劑分層法（2）浸泡法從固體混合物或有機(jī)體中提取某種物質(zhì)時，一般采用浸泡法，所以這種方法稱為浸提。常用的是索克斯特式提取器（簡稱索氏提取器）。 （3）鹽析法向溶液中加入某一物質(zhì)，使溶質(zhì)溶解在原溶劑中的溶解度大大降低，從而從溶液中沉淀出來，這個方法叫作鹽析。（四）色層分離法柱層

5、析法是凈化抽提液中雜質(zhì)的最通用的方法。在使用此法時調(diào)整吸附劑的活性及選用極性強(qiáng)弱適宜的溶劑是凈化成敗的關(guān)鍵。柱層析法有吸附柱層析法和分配柱層析法。吸附柱層析法常用氧化鋁、活性碳和硅膠等作吸附劑；分配柱層析法常用硅藻土和弗羅里矽土等做擔(dān)體。薄層層析1. 1. 精密度精密度：是指對同一樣品多次測定，每是指對同一樣品多次測定，每次測定結(jié)果與均值的符合程度。次測定結(jié)果與均值的符合程度。是表示測是表示測定結(jié)果中定結(jié)果中隨機(jī)誤差隨機(jī)誤差大小的指標(biāo)。表示精密大小的指標(biāo)。表示精密度的指標(biāo)有標(biāo)準(zhǔn)偏差（度的指標(biāo)有標(biāo)準(zhǔn)偏差（S S）、變異系數(shù)）、變異系數(shù)（CVCV）、平均偏差等。評價精密度的方法）、平均偏差等。評價

6、精密度的方法有有平行試驗平行試驗和和重復(fù)性重復(fù)性試驗。試驗。2. 2. 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度：指測定值與真值之間的符合程指測定值與真值之間的符合程度。度。往往以不準(zhǔn)確度來衡量，即重復(fù)測定往往以不準(zhǔn)確度來衡量，即重復(fù)測定的均值與真值之差。準(zhǔn)確度主要受的均值與真值之差。準(zhǔn)確度主要受系統(tǒng)誤系統(tǒng)誤差差支配，也受支配，也受隨機(jī)誤差隨機(jī)誤差的影響。評價準(zhǔn)確的影響。評價準(zhǔn)確度的方法有度的方法有回收試驗、干擾實驗、對比試回收試驗、干擾實驗、對比試驗驗。3.3.靈敏度：靈敏度：是指分析方法所能是指分析方法所能檢出的最低量。檢出的最低量。4.4.特異性：指分析測定中對某一成分起反應(yīng)，其特異性：指分析測定中對某一成分起反應(yīng)

7、，其他物質(zhì)對反應(yīng)無影響或基本無影響。他物質(zhì)對反應(yīng)無影響或基本無影響。評價特異性評價特異性的方法有干擾試驗。的方法有干擾試驗。5.5.線性范圍：是指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性范圍：是指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性前提下，測試方法所適應(yīng)的高、低濃度或量線性前提下，測試方法所適應(yīng)的高、低濃度或量的區(qū)間。的區(qū)間。通過線性試驗確定。通過線性試驗確定。6.6.耐用性耐用性: :指在測定條件下有小的變動時指在測定條件下有小的變動時, ,分析相分析相同的樣品所測得試驗結(jié)果的重現(xiàn)程度。同的樣品所測得試驗結(jié)果的重現(xiàn)程度。1100%100%100%iniiiirXXXXXnEXXEr-相對偏差d平均偏差d絕對

8、誤差相對誤差(1)（3 3）變異系數(shù)（）變異系數(shù)（CVCV）( (相對標(biāo)準(zhǔn)偏差相對標(biāo)準(zhǔn)偏差) ): :是樣本標(biāo)準(zhǔn)偏差與是樣本標(biāo)準(zhǔn)偏差與樣本均數(shù)的百分比值。樣本均數(shù)的百分比值。用于比較各組數(shù)據(jù)間的變異情況，用于比較各組數(shù)據(jù)間的變異情況，不受單位影響，不受單位影響，CVCV值越大，說明測定值離散度越大，精密值越大，說明測定值離散度越大，精密度越差。度越差。 100XS%CV（2）標(biāo)準(zhǔn)偏差(均方根偏差)，用S表示。是表示精密度的較好指標(biāo)。2211iXXdSnn-2 -3 +3+2回歸曲線回歸曲線yaxbab為直線的斜率,與方法的靈敏度有關(guān);為直線的截距,與系統(tǒng)誤差大小有關(guān).22111()()()()

9、iinniiiixxyyxxyyni=1但這個方程是否有意義得由相關(guān)系數(shù)r來確定當(dāng)r=1時,兩變量完全線性相關(guān);當(dāng)r=0時,兩變量毫無相關(guān)關(guān)系;0 r時,兩變量有一定的相關(guān)性.r=continue3.對照實驗: 標(biāo)樣與測樣結(jié)果對照;不同人員檢驗結(jié)果對照 可檢測方法的系統(tǒng)誤差4.空白試驗：不加入待測樣品，其它的測定過程、方法和試劑均與測定樣品相同的試驗。可抵消由于試劑中雜質(zhì)的干擾等因素造成的系統(tǒng)誤差。回收試驗回收試驗: :目的是目的是衡量分析方法的準(zhǔn)確度。衡量分析方法的準(zhǔn)確度。 1.1.方法方法: :在樣品中加入一定量被測物質(zhì)，然在樣品中加入一定量被測物質(zhì)，然后用同樣方法測定，測得值與理論值之比乘后用同樣方法測定，測得值與理論值之比乘以以100%100%即為回收率即為回收率，合格的回收率應(yīng)為，合格的回收率應(yīng)為100%100%5 %5 %。2.2.計