酶促反應動力學實驗---第一小組

1、酶促反應動力學實驗實驗目的實驗目的通過完成一定的實驗方案設計，以分析研究各種因素對酶促反應速率的影響，學習鑒定溫度，抑制劑等影響酶促反應速率的方法和了解測定酶的KM值和VMAX值的方法。（一）溫度對于唾液淀粉酶活性的影響（一）溫度對于唾液淀粉酶活性的影響1.1.實驗原理實驗原理酶作為生物催化劑，在酶促反應開始時反應速率隨溫度升高而增快，達到最大反應速率時的溫度稱為某種酶的最適溫度。達到最適溫度后，隨著溫度的升高酶促反應速率下降。測定酶活性在最適溫度下進行。本實驗以唾液淀粉酶為例，利用淀粉水解過程中不同階段的產(chǎn)物與碘有不同的顏色反應，定性觀察唾液淀粉酶在不同溫度下的酶活性，并根據(jù)底物即淀粉水解的

2、快慢來判斷酶活性的高低。淀粉經(jīng)淀粉酶水解為葡萄糖的不同階段，與碘試試劑作用的顏色反應如下：淀粉（藍色）淀粉（藍色）-紫色糊精（紫色）-紅色糊精（紅色）-無色糊精（無色）-麥芽糖（無色）-葡萄葡萄糖（無色糖（無色）2.2.實驗實驗步驟步驟 首先首先按如圖所示在按如圖所示在1 1到到6 6號試管中加入試劑號試管中加入試劑3.3.實驗實驗結果記錄結果記錄試管試管1 1試管試管3 3試管試管5 5褪色時間褪色時間 s s4.4.實驗實驗討論討論實際意義實際意義: :探究探究溫度對酶的影響可方便提高酶活性溫度對酶的影響可方便提高酶活性,延長酶活有效期延長酶活有效期.生產(chǎn)生產(chǎn)或實驗中可使酶處于最適條件下能

3、提高產(chǎn)量和質量，或實驗中可使酶處于最適條件下能提高產(chǎn)量和質量，也可阻止一些不利生產(chǎn)的酶的繁殖，而將條件提升到適合也可阻止一些不利生產(chǎn)的酶的繁殖，而將條件提升到適合有益酶的條件，擇優(yōu)或者達到兩個酶都有益的條件，起到有益酶的條件，擇優(yōu)或者達到兩個酶都有益的條件，起到協(xié)同作用，增加效益。協(xié)同作用，增加效益。琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制一、實驗原理抑制劑和底物的結構相似，結合部位相同。 抑制效應與酶濃度有關，底物濃度不變時，酶活性的抑制程度隨 抑制劑濃度的增加而增加；抑制劑濃度不變時，酶活性隨底物濃度的增加而逐漸恢復。 琥珀酸脫氫酶的活性，在隔絕空氣的條件下，可從加入的甲烯藍的褪色情況來判斷。 琥珀酸琥珀

4、酸脫氫酶脫氫酶 琥珀酸琥珀酸+ +甲烯藍甲烯藍 延胡索酸延胡索酸+ +甲烯白甲烯白 二.實驗步驟1、酶提取液的制備：取大鼠骨骼肌適量，用冷水酶提取液的制備：取大鼠骨骼肌適量，用冷水洗洗3 3次，加入次，加入1/15MOL/L PH7.41/15MOL/L PH7.4的磷酸緩沖液，在高速的磷酸緩沖液，在高速組織搗碎機中進行搗碎，然后用紗布過濾，用干凈的組織搗碎機中進行搗碎，然后用紗布過濾，用干凈的燒杯收集過濾的備用。燒杯收集過濾的備用。2、取試管5支，編號，再按圖所示步驟操作：酶提取酶提取液液（ml）磷酸緩磷酸緩沖液沖液（ml）0.2mol/L琥珀酸琥珀酸（ml）0.02mol/L琥珀酸琥珀酸（

5、ml）0.2mol/L丙二酸丙二酸溶液（溶液（ml）0.02mol/L丙二酸丙二酸溶液（溶液（ml）甲基藍甲基藍（滴）（滴）石蠟（石蠟（滴）滴）褪色時間褪色時間（分鐘）（分鐘）試管111.50.5_35試管2110.50.535試管3110.50.535試管4110.50.535試管511.5 0.5353、各管均在最后加入琥珀酸,并立刻將各試管溶液混勻，沿試管壁加入 液體石蠟，約0.5cm，各試管置于37C的水浴中保溫，切勿搖動試管，隨時觀察比較各試管顏色的變化，記錄藍色消退時間。四、實驗結果記錄褪色時間（分鐘）褪色時間（分鐘）I/S試管1試管2試管3試管4試管5五、實驗討論實際意義:琥珀酸脫氫酶是唯一嵌入到線粒體內(nèi)膜的酶，是線粒體內(nèi)膜的一個重要部分，其它酶大多存在于線粒體的基質 ，作用于有氧呼吸過程。作為參與三羧酸循環(huán)的關鍵酶，琥珀酸脫氫酶是反