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文檔簡(jiǎn)介
1、20XX 年免疫細(xì)胞的名詞解釋簡(jiǎn)介分離技術(shù)免疫細(xì)胞的名詞解釋免疫細(xì)胞是指參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答相關(guān)的細(xì)胞。包括淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、單核/ 巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等。免疫細(xì)胞可以分為多種,在人體中各種免疫細(xì)胞擔(dān)任著重要的角色。免疫細(xì)胞(immunecell)俗稱白細(xì)胞,包括先天性淋巴細(xì)胞、各種吞噬細(xì)胞等和能識(shí)別抗原、產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的淋巴細(xì)胞等。免疫細(xì)胞的簡(jiǎn)介免疫細(xì)胞 (immune cell) 俗稱白細(xì)胞,包括淋巴細(xì)胞和各種吞噬細(xì)胞等,也特指能識(shí)別抗原、產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的淋巴細(xì)胞等。淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的基本成分,在體內(nèi)分布很廣泛,主要是T 淋巴細(xì)胞、 B 淋巴細(xì)胞受抗原刺激而被活化
2、 (activation) ,分裂增殖、發(fā)生特異性免疫應(yīng)答。除T 淋巴細(xì)胞和 B 淋巴細(xì)胞外,還有K 淋巴細(xì)胞和 NK 淋巴細(xì)胞,共四種類型。 T 淋巴細(xì)胞是一個(gè)多功能的細(xì)胞群。除淋巴細(xì)胞外,參與免疫應(yīng)答的細(xì)胞還有漿細(xì)胞、粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞及單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的細(xì)胞。免疫細(xì)胞的分離技術(shù)免疫細(xì)胞淋巴細(xì)胞的分離取肝素抗凝血1ml 加 Hanks 液 1m1 稀釋后,沿管壁徐徐滴流疊加盛有 2ml 淋巴細(xì)胞分離液的試管內(nèi)(注意勿與分離液混合,然后20XX 年r/min 水平離心 20min ,管內(nèi)分為 4 層,自上而下依次為血漿,單個(gè)核細(xì)胞,顆粒白細(xì)胞、紅細(xì)胞(圖 2 1) 。用毛細(xì)管伸至
3、單個(gè)核細(xì)胞層中(位于細(xì)胞分離液與血漿的界面上),沿管壁輕輕吸出全部細(xì)胞。然后用Hanks液洗兩次,每次20XX年r/min離心10min ,最后用RPMI 1640培養(yǎng)液將細(xì)胞配成2X106/m1的細(xì)胞懸液備用。免疫細(xì)胞 T 細(xì)胞及 B 細(xì)胞的分離將淋巴細(xì)胞懸液通過尼龍棉柱, B 細(xì)胞粘附于尼龍棉上, T 細(xì)胞則不粘附,先用 RPMI 1640 培基洗脫尼龍棉柱,流下的細(xì)胞懸液含有豐富的 T細(xì)胞。然后用力反復(fù)擠壓尼龍柱、擠出粘附在尼龍棉上的 B 細(xì)胞,并用少量的 RPMI 1640 培基洗脫,此細(xì)胞懸液含有豐富的 B 細(xì)胞。尼龍柱(塑料管 )的長(zhǎng)短和尼龍棉的多少,視分離細(xì)胞的多少而定。免疫細(xì)胞
4、 CD4 及 CD8 細(xì)胞的分離 CD4 細(xì)胞的分離:將一定量的T 細(xì)胞懸液通過一根SephDdexC10 柱,然后用少量的 RPM11640 培養(yǎng)洗滌,收獲的細(xì)胞懸液約含85%的CD4 細(xì)胞。CD8細(xì)胞分離:用Tris緩沖液稀釋羊抗鼠IgG(濃度為10以g/m1庖被一平皿表面,然后放置4 過夜,沒有包被上的抗體用PBS 洗凈。然后將已標(biāo)記有抗 CD8單克隆抗體的T細(xì)胞(細(xì)胞濃度為1xi07/m1)3m1加入上述的平皿內(nèi),4 放置 2 小時(shí),用 PBS 輕輕洗凈末粘附的細(xì)胞,然后用毛細(xì)管加入10m1 PBS 吹打。收集的脫落細(xì)胞經(jīng)洗滌后懸浮在RPMI 1640 培基中備用。 CD4 細(xì)胞亦可用此法分離。免疫細(xì)胞單核巨噬細(xì)胞的分離單核巨噬細(xì)胞有粘附塑料或玻璃表面的特性,而淋巴細(xì)胞則無此特性,借此可將這兩類細(xì)胞分開,其方法簡(jiǎn)述如下。將待分離的細(xì)胞懸液(如實(shí)物動(dòng)物的腹腔液)加入適當(dāng)大小的塑料或玻璃平皿內(nèi),置于37 C02溫箱內(nèi)溫育1 小時(shí),然后用 RPMI 1640 培基輕輕漂洗平皿
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