k動物細胞融合與單克隆抗體課時學習教案

1、會計學1k動物細胞融合與單克隆抗體課時動物細胞融合與單克隆抗體課時第一頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。第1頁/共21頁第二頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。一、動物細胞融合：一、動物細胞融合：1、概念：也稱、概念：也稱 ，是指，是指 或或 動物細胞結合形成一個動物細胞結合形成一個細胞的過程。形成的單細胞的過程。形成的單核細胞稱為核細胞稱為 。2、過程：不同、過程：不同 的兩的兩個細胞個細胞 細胞細胞細胞雜交細胞雜交兩個兩個多個多個雜交細胞雜交細胞DNA雜交雜交第2頁/共21頁第三頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。物理法物理法化學法化學法生物法生物法遠緣遠緣滅活的病毒對細胞沒有感染能力。

2、滅活的病毒對細胞沒有感染能力。第3頁/共21頁第四頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。動物細胞融合動物細胞融合雜種細胞雜種細胞愈傷組織愈傷組織雜種植株雜種植株植物細胞植物細胞A植物細胞植物細胞B 原生質體原生質體A原生質體原生質體B植物體細胞雜交植物體細胞雜交去壁去壁融合融合組培組培物理法物理法化學法化學法生物法：生物法：滅活的病毒滅活的病毒動物細胞動物細胞A動物細胞動物細胞B雜種細胞雜種細胞第4頁/共21頁第五頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。比較比較項目項目融合融合原理原理融合融合方法方法誘導手段誘導手段用法用法植物植物體細體細胞雜胞雜交交細胞膜的細胞膜的流動性流動性去壁后誘去壁后誘導原

3、生質導原生質體融合體融合物理法物理法（離心、（離心、振動、電激）振動、電激）化學法化學法（聚乙（聚乙二醇二醇獲得雜獲得雜種植株種植株動物動物細胞細胞融合融合細胞膜的細胞膜的流動性流動性使細胞分使細胞分散后誘導散后誘導細胞融合細胞融合上法上法 + 生物法生物法制備制備單單克隆抗克隆抗體體第5頁/共21頁第六頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。提提問問？第6頁/共21頁第七頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。抗體的傳統(tǒng)生產方法抗體的傳統(tǒng)生產方法從從血血清清中中分分離離抗抗體體該法制備抗體的特點：該法制備抗體的特點： 產量低、純度低，且抗產量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低體的特異性差、靈敏度

4、低。多多種種效效應應B細細胞胞動動物物體體內內多多種種抗抗體體抗抗原原 第7頁/共21頁第八頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。第8頁/共21頁第九頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。動物細胞動物細胞A動物細胞動物細胞B雜種細胞雜種細胞用動物細胞融合的方法制備單克隆抗體用動物細胞融合的方法制備單克隆抗體試一試試一試聚乙二醇或滅活的病毒聚乙二醇或滅活的病毒雜交瘤細胞雜交瘤細胞細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)提取抗體提取抗體效應細胞效應細胞腫瘤細胞腫瘤細胞第9頁/共21頁第十頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。注射抗原注射抗原效應效應B B細胞細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞融合融合多種雜多種雜交細胞交細胞選擇性培養(yǎng)基選

5、擇性培養(yǎng)基 篩選篩選1 1抗原抗原- -抗體抗體雜交法雜交法克隆化克隆化單克隆單克隆抗體抗體 篩選篩選2 23.若細胞兩兩融合后，有若細胞兩兩融合后，有幾種融合情況？幾種融合情況？單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程第10頁/共21頁第十一頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。注射抗原注射抗原效應效應B B細胞細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞融合融合多種雜多種雜交細胞交細胞選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 篩選篩選1 1抗原抗原- -抗體抗體雜交法雜交法克隆化克隆化單克隆單克隆抗體抗體 篩選篩選2 24.第一次篩選出的雜交瘤細胞第一次篩選出的雜交瘤細胞為何需進行克隆化培養(yǎng)和專一為何需進行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測

6、？抗體檢測？第11頁/共21頁第十二頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。效應效應B B細胞細胞B B淋巴細胞淋巴細胞注射抗原注射抗原骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞融合融合B-BB-B細胞細胞雜交瘤細胞雜交瘤細胞瘤瘤- -瘤細胞瘤細胞選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 篩選篩選1 1多種雜交瘤細胞多種雜交瘤細胞符合要求的雜交符合要求的雜交瘤細胞瘤細胞抗原抗原- -抗體抗體雜交法雜交法 篩選篩選2 2克隆化克隆化體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)小鼠腹腔內增殖小鼠腹腔內增殖單克隆抗體單克隆抗體雜交瘤細胞特點：雜交瘤細胞特點：既可以產生特異性抗體，既可以產生特異性抗體，又可以大量增殖又可以大量增殖第12頁/共21頁第十三頁，編輯于星期六

7、：十七點 四十四分。注射特定的抗原蛋白注射特定的抗原蛋白五種（五種（B淋巴細胞、骨髓瘤細胞、淋巴細胞、骨髓瘤細胞、B-B、骨骨、雜交瘤細胞）、骨骨、雜交瘤細胞） 其中三種融合細胞。其中三種融合細胞。繁殖繁殖專一的抗體專一的抗體特定的選擇性培養(yǎng)基特定的選擇性培養(yǎng)基第13頁/共21頁第十四頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。讀下面一段文字資料，讀下面一段文字資料，找出單克隆抗體的概念找出單克隆抗體的概念 人們發(fā)現，在動物發(fā)生免疫反應的過程中，體內的人們發(fā)現，在動物發(fā)生免疫反應的過程中，體內的B B細胞可細胞可以產生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個以產生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個B B

8、細胞只分泌細胞只分泌一種化學性質單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，一種化學性質單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個必須用單個B B細胞進行無性繁殖，即克隆。細胞進行無性繁殖，即克隆。2.單克隆抗體的概念單克隆抗體的概念單單: : 單個細胞單個細胞 克隆克隆: : 無性繁殖無性繁殖單克隆單克隆抗體抗體: :單個細胞克隆產生的單個細胞克隆產生的化學性質單一特異化學性質單一特異性強性強的抗體的抗體第14頁/共21頁第十五頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。特異性特異性靈敏度靈敏度產量產量抗原抗原一定抗原發(fā)生特異性一定抗原發(fā)生特異性準確準確 高效高效 簡易簡易 快速快速

9、癌癥癌癥生物導彈生物導彈第15頁/共21頁第十六頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。BB第16頁/共21頁第十七頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。CA第17頁/共21頁第十八頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。不能不能 沒有將抗原注入小鼠體內，無法獲沒有將抗原注入小鼠體內，無法獲得產生單一抗體的得產生單一抗體的B淋巴細胞淋巴細胞.細胞融合細胞融合 滅活病毒滅活病毒 雙親細胞的遺傳物質雙親細胞的遺傳物質 特異性抗體特異性抗體 在體外培養(yǎng)條件下大量增殖在體外培養(yǎng)條件下大量增殖 制備單克制備單克隆抗體隆抗體 第18頁/共21頁第十九頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。作業(yè)：作業(yè)： 1、動物細胞融合與植物體細、動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較。胞雜交的比較。 2、單克隆抗體制備過程。、單克隆抗體制備過程。第19頁/共21頁第二十頁，編輯于星期六：十七點 四十四分。教學目標：教學目標： 1、了解并能簡述動物細胞培養(yǎng)、了解并能簡述動物細胞培養(yǎng)的過程、條件及應用的過程、條件及