食品中2-羥基丙基去甲他達(dá)拉非的測定高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法

1、食品中2-羥基丙基去甲他達(dá)拉非的測定（高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法）1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品（含保健食品）基質(zhì)中2-羥基丙基去甲他達(dá)拉非的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于酒類、飲料、茶類及其制品、糖果類食品（含保健食品）中2-羥基丙基去甲他達(dá)拉非的檢測。其他食品及原料可參照本方法定性檢測。2 原理試樣經(jīng)甲醇超聲提取，過濾后，濾液供高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測。3 試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。3.1 試劑3.1.1 乙腈（C2H3N）:色譜純。3.1.2 甲酸（HCOOH）色譜純。3.1.3 甲醇（CH3OH）。3.2 試劑配制3.2.1

2、0.1%甲酸水溶液:取甲酸1mL用水稀釋至1000mL。3.2.2 0.1%甲酸乙腈溶液:取甲酸1mL用乙腈稀釋至1000mL。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品2-羥基丙基去甲他達(dá)拉非對照品或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量見附錄A表A.1，純度98%。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制341標(biāo)準(zhǔn)儲備液（100卩g/mL：精密稱定2-羥基丙基去甲他達(dá)拉非lO.Omg,用甲醇溶解并稀釋至100mL,搖勻，制成濃度為100卩g/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，-20C保存，保存期1個(gè)月。3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)中間工作液（5卩g/mL:準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲備液（3.4.1）0.5mL，用甲醇稀釋至10mL，搖勻，制成5卩g/

3、mL的標(biāo)準(zhǔn)中間工作液。3.4.3標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取標(biāo)準(zhǔn)中間工作液（3.4.2）0.5mL于25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，制成100ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液，臨用新制或依儀器響應(yīng)情況配制適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)使用液。4 儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源（ESI源）。4.2 超聲波清洗器。4.3 電子天平：感量分別為0.0001g和0.01g。5 分析步驟5.1 試樣制備5.1.1 固態(tài)試樣固態(tài)試樣取適量粉碎混勻，稱取1g試樣（精確至0.01g,膠囊稱重包括囊殼）于具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確加入甲醇50mL,稱定重量，超聲提取10min，放至室溫，再次稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量（

4、若樣品中含有油脂，可將樣品提取液在-20C條件下放置2448h,時(shí)間可視樣品是否澄清而定），搖勻，用0.22ym有機(jī)相型濾膜過濾，取續(xù)濾液作為待測液。5.1.2 液態(tài)試樣取適量搖勻，精確吸取1.0mL于容量瓶中，加入甲醇40mL，超聲提取10min，放至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，用0.22yn有機(jī)相型濾膜過濾，取續(xù)濾液作為待測液。5.1.3 空白試驗(yàn)不加試樣按試樣同法處理，制得空白溶液。5.2 儀器參考條件5.2.1液相色譜條件a) 色譜柱：C18柱，2.1mmx100mm1.8，或性能相當(dāng)者。b) 流動(dòng)相：A為0.1%甲酸水溶液(321),B為0.1%甲酸乙腈溶液(322)。梯度洗脫程序

5、見表1。c) 流速：300卩L/mind) 柱溫：40C。e) 進(jìn)樣量：2卩。表1梯度洗脫程序時(shí)間(min)流動(dòng)相A(%)流動(dòng)相B(%)09550.59553.51090610906.19559.09555.2.2質(zhì)譜條件a) 離子源：電噴霧離子源(ESI源)。b) 檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)ic) 掃描方式：正離子模式掃描。d) 毛細(xì)管電壓(CapillaryVoltage):3.0kV;e) 源溫度(SourceTemp):120C；f) 脫溶劑溫度(DesolvationTemp)：500C；g) 脫溶劑氣流量(GasFlow/Desolvation)：1000L/h;h) 錐孔氣流

6、量(GasFlow/Cone):150L/h;i) 碰撞能量(Collision)：25。j) 定性離子對、定量離子對和質(zhì)譜分析參數(shù)詳見表2i表22翌基丙基去甲他達(dá)拉非定性、定量離子對和質(zhì)譜分析參數(shù)分析物保留時(shí)間(min)母離子質(zhì)何比(m/z)子離子質(zhì)荷比(m/z)電離萬式2-羥基丙基去甲ES+3.02434.1312.1*他達(dá)拉非3.02168.9*定量離子對。5.3定性判定按照上述條件測定待測液和標(biāo)準(zhǔn)使用液，如果試樣待測液中色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)使用液中該組分保留時(shí)間一致（變化范圍在土2.5%之內(nèi)），試樣待測液中色譜峰定性離子對的相對豐度與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)使用液相對豐度一致，相對豐度（k）偏

7、差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定為試樣中存在該成分。表3定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度（k）k50%50滄k20%20滄k10%k10%允許的最大偏差20%25%30%50%6檢出限當(dāng)稱樣量為1g或1mL,定容體積為50mL時(shí)，本方法中2-羥基丙基去甲他達(dá)拉非的檢出限為50卩g/k或50卩g/L定量限為100卩g/k或100卩g/L7其他空白試驗(yàn)應(yīng)無干擾。2-羥基丙基去甲他達(dá)拉非的化合物相關(guān)信息表A.1化合物的中文名稱、英文名稱、分子式、相對分子質(zhì)量中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子量結(jié)構(gòu)式2-羥基丙基去甲他達(dá)拉非2-Hydroxypropylnortadalafil-85-5C24H23N3。5433.46BA對照品的提取離子色譜圖1MWJT4Chne5七駐圖B.12-羥基丙基去甲他達(dá)拉特征離子的提取離子色譜