免疫檢測(cè)技術(shù)課件課件

1、現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六頁，共53頁網(wǎng)格學(xué)說網(wǎng)格學(xué)說（lattice theory）抗體過?？贵w過?？乖^剩抗原過?？贵w抗體比例合適抗體抗體比例合適抗原抗原抗體抗體現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八頁，共53頁1.沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)2.凝集反應(yīng)凝集反應(yīng)3.補(bǔ)體參與的反應(yīng)補(bǔ)體參與的反應(yīng)4.中和反應(yīng)中和反應(yīng)5.免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十頁，共53頁絮狀沉淀絮狀沉淀環(huán)狀沉淀環(huán)狀沉淀免疫濁度沉淀免疫濁度沉淀現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十

2、一頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十二頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十三頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十四頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十五頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十六頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十七頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十八頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十九頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十頁，共53頁免疫電泳原理圖解免疫電泳原理圖解現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十一頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十二頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十三頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十四頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十五頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十六頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十七頁，共53頁 加入標(biāo)準(zhǔn)量補(bǔ)體加入標(biāo)準(zhǔn)量補(bǔ)體 加入包被抗體的紅細(xì)胞加入包被

3、抗體的紅細(xì)胞 檢測(cè)紅細(xì)胞溶解情況檢測(cè)紅細(xì)胞溶解情況AgPatientsserum AbNo AbAg現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十八頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十九頁，共53頁常見標(biāo)記免疫技術(shù)常見標(biāo)記免疫技術(shù)放射免疫技術(shù)放射免疫技術(shù)酶免疫技術(shù)酶免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù) 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十一頁，共53頁放射免疫分析基本原理放射免疫分析基本原理競爭性結(jié)合反應(yīng)的競爭性結(jié)合反應(yīng)的經(jīng)經(jīng)典標(biāo)記抗原（典標(biāo)記抗原（AgAg* *）和）和非標(biāo)記抗原（非標(biāo)記抗原（AgAg）與限）與限量抗體量抗體(Ab)(Ab)競爭性結(jié)合競爭性結(jié)合AgAg* *和和AgAg具有等同的具有等同的與與AbAb

4、結(jié)合能力結(jié)合能力現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十二頁，共53頁 Ag* Ab Ag 標(biāo)記抗原標(biāo)記抗原 特異性抗體特異性抗體 待測(cè)抗原待測(cè)抗原( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗體復(fù)合物抗原抗體復(fù)合物分離分離Ag*-Ab 和游離和游離Ag*從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀知含量從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀知含量 測(cè)定測(cè)定Ag*-Ab和游離和游離Ag*放射性放射性 放射免疫測(cè)定法放射免疫測(cè)定法(RIA)示意圖示意圖現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十三頁，共53頁 7550 30 100110100 1000未標(biāo)記抗原濃度（未標(biāo)記抗原濃度（ng/mL)結(jié)合結(jié)合/未結(jié)合的放射活性（未結(jié)合的放射活性（%）Ag*-AbAg*現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十四頁，共53頁現(xiàn)

5、在學(xué)習(xí)的是第三十五頁，共53頁Ag熒光素標(biāo)記的熒光素標(biāo)記的特異性抗體特異性抗體組織切片組織切片現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十六頁，共53頁Ag熒光素標(biāo)記熒光素標(biāo)記的抗抗體的抗抗體組織切片組織切片待測(cè)抗體待測(cè)抗體現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十七頁，共53頁免免 疫疫 熒熒 光光 染染 色色 顯顯 示示 細(xì)細(xì) 胞胞 骨骨 架架 免疫熒光染色是利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，免疫熒光染色是利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，用經(jīng)用經(jīng)熒光染料標(biāo)記的抗體熒光染料標(biāo)記的抗體對(duì)細(xì)胞或組織內(nèi)的蛋白質(zhì)對(duì)細(xì)胞或組織內(nèi)的蛋白質(zhì)進(jìn)行定性或定量研究的方法。該技術(shù)與熒光顯微鏡觀察進(jìn)行定性或定量研究的方法。該技術(shù)與熒光顯微鏡觀察相結(jié)合，可對(duì)特定的蛋白質(zhì)進(jìn)

6、行細(xì)胞或組織內(nèi)的精確定相結(jié)合，可對(duì)特定的蛋白質(zhì)進(jìn)行細(xì)胞或組織內(nèi)的精確定位。位。常用于抗原、抗體標(biāo)記的熒光染料有以下幾種常用于抗原、抗體標(biāo)記的熒光染料有以下幾種顯示綠色熒光：Fluorescein isothocyancie(FITC),Alexa-488顯示紅色熒光：Rhodamine B, Texas Red, Alexa-546,568,594顯示藍(lán)色熒光：Alexa350 用Alexa488標(biāo)記的抗人-tubulin抗體染色顯示微管( 綠 色 ) ; 細(xì) 胞 核 : 紅 色 , D A P I 染 色人皮膚角化細(xì)胞免疫熒光染色人皮膚角化細(xì)胞免疫熒光染色用抗-tubulin抗體染色顯示微管

7、(綠色); 細(xì)胞核: 紅色, DAPI染色(激光共聚焦顯微鏡照片)PtK1細(xì)胞免疫熒光染色細(xì)胞免疫熒光染色現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十八頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十九頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十一頁，共53頁底物顯色底物顯色定性或定量的分析定性或定量的分析原理原理包被包被反應(yīng)反應(yīng)加入待測(cè)抗加入待測(cè)抗體或體或抗原和酶標(biāo)抗原和酶標(biāo)抗原抗原或抗體或抗體洗滌洗滌使結(jié)合在固相上使結(jié)合在固相上的抗原抗體復(fù)的抗原抗體復(fù)合物合物與未結(jié)合的分與未結(jié)合的分離離1234基本步驟基本步驟現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十二頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十三頁，共53頁適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，但不適

8、用于測(cè)定半抗原及低適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，但不適用于測(cè)定半抗原及低于二價(jià)的小分子單價(jià)抗原，因其不能形成兩位點(diǎn)夾心于二價(jià)的小分子單價(jià)抗原，因其不能形成兩位點(diǎn)夾心 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十四頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十五頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十六頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十七頁，共53頁020,00040,00060,00080,000100,000試劑盒試劑盒儀器儀器特殊防護(hù)特殊防護(hù)治理污染治理污染人民幣人民幣人民幣人民幣三種免疫測(cè)定技術(shù)的成本及費(fèi)用三種免疫測(cè)定技術(shù)的成本及費(fèi)用現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十八頁，共53頁A.將將Ab吸附在固相載體表面吸附在固相載體表面; B. 加入酶標(biāo)加入酶標(biāo)Ag和待測(cè)和待測(cè)Ag，競爭結(jié)合，競爭結(jié)合Ab； 對(duì)照只加入酶標(biāo)對(duì)照只加入酶標(biāo)Ag； C. 加底物。對(duì)照孔與樣品孔底物降解量的差未知加底物。對(duì)照孔與樣品孔底物降解量的差未知Ag量。量。3 競爭法測(cè)定抗原競爭法測(cè)定抗原現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十九頁，共53頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十頁，共53頁原理：原理：抗人抗人IgMIgM鏈抗體包被鏈抗體包