抗HIV室內(nèi)質控

1、自制抗-HIV臨界值質控血清的室內(nèi)質控及評價韓光宇徐州市醫(yī)學科學研究所醫(yī)院前言艾滋?。ǐ@得性免疫缺陷綜合征，AIDS）是嚴重危害人類健康和生命安全的重大傳染病，自1981年6月美國CDC首次報道了艾滋病以來便迅速在全球范圍蔓延，目前已有150個以上國家發(fā)生本病。19831984年，先后由法國巴斯德研究所的Montagnier、美國國立衛(wèi)生研究院國立癌癥研究所的Gallo和加州大學實驗室的Levy分別從不同的艾滋病病人分離出同一種病毒，由國際病毒分類委員會與1983年統(tǒng)一命名為人免疫缺陷病毒（HIV）,也稱為艾滋病病毒。現(xiàn)狀分析1985年我國發(fā)現(xiàn)了首例輸入性艾滋病病例，1989年發(fā)現(xiàn)了經(jīng)性途徑感

2、染HIV的國內(nèi)感染者，同年從注射毒品者中發(fā)現(xiàn)HIV感染者，1995年發(fā)現(xiàn)經(jīng)母嬰途徑傳播的HIV感染，至此三種傳播途徑均在我國出現(xiàn)。艾滋病在我國的傳播經(jīng)歷了三個階段，即傳入期（19851988年），共有7個省報告HIV和AIDS,主要為外國人或海外華人傳入病例及應用進口血制品而被感染者且主要分布于沿海大城市；擴散期（1989-1993）,HIV/AIDS擴散到21個省，大多數(shù)HIV/AIDS發(fā)現(xiàn)在沿海省和大城市，在云南發(fā)現(xiàn)注射毒品者中感染HIV;增長期（1994-現(xiàn)在），31個省級區(qū)劃均報告發(fā)現(xiàn)了HIV/AIDS。近年來，我國艾滋病疫情、發(fā)病和死亡人數(shù)明顯上升，感染范圍廣，呈現(xiàn)出全國低流行，局部

3、高流行的特點。傳播模式暨途徑發(fā)生變化，疫情由高危人群向一般人群擴散。截至2010年10月底，衛(wèi)生部通報累計報告艾滋病病毒感染者和病人37萬余例，其中病人13萬余例，死亡6.8萬余例1。而實際數(shù)字可能遠不止這些。因此艾滋病檢測實驗室遍布全國各醫(yī)療機構，抗體（抗-HIV）初篩檢查成為出入境檢驗檢疫、采供血、婦幼保健、手術前及征兵體檢等常規(guī)檢查的項目。問題確立檢測HIV抗體是艾滋病診斷的一項重要指標，也是控制HIV傳播和控制艾滋病流行的重要手段。目前艾滋病初篩實驗室多用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）作為常規(guī)的檢測方法，可快速檢測艾滋病毒抗體。由于ELISA方法易受多種因素影響，有系統(tǒng)誤差（包括試劑質

4、量、移液器與酶標儀讀數(shù)的準確性、冰箱水浴箱溫度的波動及環(huán)境溫度等）和隨機誤差（工作人員操作因素等）。因此在ELISA檢測時需設內(nèi)部對照質控血清及外部對照質控血清進行有效監(jiān)控。內(nèi)部對照血清即試劑盒提供的陽性和陰性對照血清，它是質量控制的基礎，每一次檢測都必須使用內(nèi)部對照質控血清且只能在同批號的試劑盒中使用。而為了監(jiān)控檢測的重復性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異必須設置外部對照質控血清以加強室內(nèi)質控，抗-HIV檢測亦不例外。為加強抗-HIV檢測工作的質量控制，確保檢測結果的準確性和可靠性，尤其是防止弱陽性標本漏檢，應設置弱陽性質控血清（又稱臨界值質控血清），以臨界值質控血清的吸光度值為該試劑盒臨界

5、值（Cut-off）的2-3倍（即S/CO=23）為宜。目的因衛(wèi)生部臨檢中心抗-HIV臨界值質控血清價格較貴，制備抗-HIV臨界值質控血清，以加強抗-HIV檢測的質量控制。文獻查證國內(nèi)多家抗-HIV初篩實驗室制備了臨界值質控血清，取得了很好的效果2-4。解決方法以正常人陰性血清稀釋抗-HIV試劑盒自身陽性對照質控血清制備抗-HIV臨界值質控血清，進行室內(nèi)質控。執(zhí)行過程1收集臨床多個無溶血、無脂濁、無黃疸、無細菌污染及其它傳染性指標的經(jīng)抗-HIV檢測陰性的正常人血清充分混勻，56C、30min滅活，3000r/min離心15min,去除沉淀物備用。2收集廈門英科新創(chuàng)抗-HIV試劑多批號陽性對照質

6、控血清，充分混勻，用上述正常人血清按1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64倍比稀釋，按照試劑盒說明書操作，每個稀釋度測定3孔，取其平均值，查找其線性范圍，并以S/CO約為2.5（23之間）的稀釋梯度配制臨界值質控血清，按1年使用量配制，加入0.01%硫柳汞防腐，無菌分裝至多個0.5ml的Eppdorf管，-20C冷凍保存?zhèn)溆谩?質控血清的使用方法檢測前取出冰凍質控血清1支，自然融化，平衡至室溫充分混勻，與臨床標本及陰、陽性對照一同嚴格按試劑盒說明書進行操作。用后及時4c冷藏，不可反復凍融。由于質控血清含量較低，效價不易保持，因此融化后只使用一周即棄去。結果評價1質控血清均勻性測定

7、隨機抽取10支質控血清融化，在同一塊板上測定，每支重復測定2孔，取平均值，計算各支質控血清S/CO的管間差異，得出其均值7=2.47,標準差s=0.23,變異系數(shù)CV=9.27%。具體結果見表1（其S/CO值按大小順序排列），表明分裝的各支質控血清是均勻的，管間差異符合要求。表1.質控血清均勻性測定結果12345678910S/CO2.112.232.282.392.472.512.562.612.722.862批內(nèi)精密度測定在同一塊板上，用質控血清重復測定20孔，計算其均值X=2.51,標準差s=0.31,變異系數(shù)CV=12.36%,結果見表2（其S/CO值按大小順序排列），表明制備臨界值質

8、控血清精密度符合要求。表2質控血清批內(nèi)精密度測定結果12345678910S/CO1.982.092.132.172.222.342.392.412.432.4811121314151617181920S/CO2.512.572.642.662.712.722.872.882.963.123室內(nèi)質控方法3.1 繪制質控圖由于抗-HIV檢測的特殊性，并不是每天都做檢測，因此連續(xù)測定20天每天一個數(shù)據(jù)用于繪制質控圖存在困難，參照全國艾滋病檢測技術規(guī)范5,用一周時間（5個工作日）每天做一次檢測，每次重復4孔，共20個數(shù)據(jù)計算平均值、標準差及變異系數(shù)，以S/CO值為縱坐標，以日期和次數(shù)為橫坐標，建立以

9、X為中心線，以X±2s為警告線，X±3s為控制線，作為實驗室該批號試劑質控框架圖。3.2 以后每次檢測時，取質控血清與標本一同檢測，計算S/CO值，點在質3.3 ，如果該點落在2s范圍之內(nèi)，本次實驗有效，可發(fā)出報告。如果該點落在X±2s以外，則認為本次實驗存在顯著誤差，及時分析誤差原因，尤其應警惕臨界值標本，分析原因后重復本次實驗。在一批試劑盒用完之后，將各個質控點用線連接起來即成為一個質控圖。4質控血清穩(wěn)定性觀察由于抗-HIV試劑盒的有效期一般為一年，以質控框架圖為基準，觀察連續(xù)12個月，計算每月質控血清S/CO的均值（X）,標準差（s）及變異系數(shù)（CV）,結果

10、見表3,表明質控血清在冰凍狀態(tài)下可保存一年。表3.質控血清每月S/CO的X、s、CV的變化123456789101112X2.522.592.432.492.722.532.392.582.612.512.462.39s0.320.320.290.340.340.310.320.300.360.350.310.33CV12.6912.3611.913.6512.5012.2513.3911.6313.7913.9412.6013.80結論近年來，隨著艾滋病感染者不斷增加、感染人群的變化和臨床病人的日益增多，抗-HIV的初篩檢查日益重要。ELISA檢測抗-HIV是國際上應用最早、發(fā)展最快，至今仍是HIV初篩實驗室使用最廣泛的檢測技術，因此提高抗-HIV檢測的準確性十分必要。除做好內(nèi)部對照外，應建立外部質控，2009年9月我們實驗室通過用正常人陰性血清稀釋試劑盒陽性對照血清制備的臨界值質控血清，使用一年，穩(wěn)定性和精密度符合要求，可有效監(jiān)測實驗的準確性和可靠性，取得了滿意的效果。參考資料1我國艾滋病防治工作取得顯著成效S.北京：中華人民共和國衛(wèi)生部新聞辦，2010-11-29.2王莉.艾滋病抗體檢測室內(nèi)質控血清的制備和應用J.河南醫(yī)藥信息，2003,24（2