中藥指紋圖譜操作指引

1、中藥指紋圖譜操作指南說明：本實驗研究規(guī)程指南為在原技術(shù)要求的基礎(chǔ)上規(guī) 范中藥注射劑色譜指紋圖譜試驗研究而制訂。本指南未能概 括的內(nèi)容，通過實踐可自行補充調(diào)整，但申報資料或復核資 料中須有相應(yīng)的說明和申述。指南中的“色譜指紋圖譜”指采 用柱色譜及薄層色譜等各種色譜技術(shù)實驗研究的指紋圖譜。 光譜指紋圖譜將另行規(guī)定。一、供試品收集 供試品收集是研究指紋圖譜最初也是最關(guān)鍵的步驟，由于不可能 對一個藥材的所有樣本進行試驗，而且生長環(huán)境條件對藥材 代謝產(chǎn)物有影響，所以要收集有代表性的供試品。收集不少 于10批供試品的含義是指樣本的數(shù)和量要有足夠的代表性。 （一）原料藥材：在藥材的化學成分與中醫(yī)臨床療效的之

2、間的 關(guān)聯(lián)尚未能闡明的現(xiàn)階段，基本上是在承認其傳統(tǒng)的功能主 治及臨床驗證的基礎(chǔ)上進行指紋圖譜的實驗研究。原料藥材 的指紋圖譜主要是反映其自然狀態(tài)的內(nèi)在質(zhì)量情況，研究其 指紋圖譜是以此作為選擇原藥材投料或混批提取的依據(jù)，同 時作為研究注射劑成品指紋圖譜相關(guān)性的基礎(chǔ)。由于自然條 件的變化，藥材個體之間指紋圖譜的差異是正常的，在品種 鑒定無誤的基礎(chǔ)上，力爭藥材有較為固定和穩(wěn)定的來源，個 體之間的指紋圖譜主要特征大致相似即可，使成品指紋圖譜 特征的穩(wěn)定有起碼的保證。藥材的"批"不是工業(yè)生產(chǎn)的"批"，是指相互獨立的供試 品，即不能將同一地點或同一渠道同一時間獲得的

3、供試品分 成若干份供試品，以保證試驗結(jié)果的代表性。由于收集藥材 供試品受主觀和客觀的條件限制，供試驗的供試品嚴格講均 沒有統(tǒng)計學的意義，所以供試品數(shù)越多越好，10批是最低的 要求。供試品應(yīng)保證其真實性，應(yīng)有完整采樣原始記錄，內(nèi) 容包括： 藥材名稱供試品來源（真實記錄供試品來自何處：傳統(tǒng)產(chǎn)地收集或是 資源豐富的產(chǎn)地收集，或者來自GAP基地供應(yīng)；還是產(chǎn)地 購買、市場購買或委托購買，等，以便于生產(chǎn)原料的采購選 擇和測試數(shù)據(jù)的可追溯）。收集時間（購買時間）及收集人貨源情況調(diào)查（貨源是否充足和穩(wěn)定）基原鑒定及鑒定人：產(chǎn)地或GAP基地收集的藥材結(jié)合植物 形態(tài)鑒定品種。如缺原植物，由熟練的專業(yè)人員憑性狀或顯

4、 微特征鑒別。如近緣品種、難以區(qū)分的野生品種（如白花蛇 舌草、蒲公英），應(yīng)在指紋圖譜研究中仔細比較，如獲得的 指紋圖譜相似度很高，也可應(yīng)用，但須明確記錄。并在今后 實施GAP時確定一個品種，如指紋圖譜相似度很低，則須 確定品種，改為栽培品使用。商品混亂的品種（如陳皮）產(chǎn) 區(qū)的選擇應(yīng)縮小范圍，并結(jié)合資源選用藥典收載品種中的一 種。復方制劑中的君藥及處方量大的藥材必需重點注意品種 的鑒定，以避免今后執(zhí)行指紋圖譜過程中出現(xiàn)難以預料的困 難。質(zhì)量評估：為了便于對色譜的正確分析，減少試驗結(jié)果的判 斷誤差，首先藥材需符合藥典或部頒標準規(guī)定，并詳細記錄。 所有藥材均須編號，必要時附藥材外形照片。供試品的留樣

5、、貯藏和標簽：由于指紋圖譜研究周期較長， 供試品必須在干燥、低溫、避光處貯藏，標簽必須有編號， 收集供試品的編號應(yīng)與貯藏樣品、試驗樣品的編號一致。留 樣數(shù)量應(yīng)不少于試驗實際用量的3倍。以保證試驗結(jié)果有異 議時的可追溯。如以中藥飲片或炮制品為起始原料，應(yīng)采用符合中國藥典或 飲片炮制規(guī)范的供試品。申報資料可將關(guān)鍵內(nèi)容扼要填寫于表一中：表一（推薦）藥材名稱供試品編號供試品來源收集時間（購買時間）及收集人貨源情況調(diào)查基原鑒定及鑒定人學名：鑒定人：質(zhì)量評估供試品留樣數(shù)量： 容器：貯藏地點及條件：標簽原始記錄保存處附一：藥材外形照片。附二：藥材的色譜圖（試驗完畢后）。（二）半成品（提取物）：藥材所含成分的

6、個體差異是難以避免的，指紋圖譜研 究用的半成品應(yīng)來自生產(chǎn)車間通過藥材混批調(diào)整及規(guī)范的 生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的實際樣品。關(guān)鍵技術(shù)及相應(yīng)參數(shù)填寫于表 二，并附試驗完畢后指紋圖譜。表二（推薦）半成品（提取物）名稱 混批前批號 日期提取方法（關(guān)鍵技術(shù)） 混批后批號混批比例原始記錄保存處供試品留樣數(shù)量：？?容器：？?貯藏地點及條件：？ 附： 混批前后的指紋圖譜。（三）成品（注射劑）：產(chǎn)品批號、生產(chǎn)單位、成品批號與半成品（提取物）批號的相關(guān)性均須 有明確的記錄，以保證試驗數(shù)據(jù)的可追溯。成品的“對照用 指紋圖譜”是建立在標準化提取物或10批以上產(chǎn)品指紋圖 譜的基礎(chǔ)上。各批供試樣品須有留樣。主要內(nèi)容填寫于表三， 并附

7、試驗完畢后的指紋圖譜。表三（推薦）供試品批號生產(chǎn)單位 供試品數(shù)量供試品留樣 數(shù)量：？?容器：？?貯藏地點及條件：？ 指 紋圖譜研究用的原藥材、半成品及注射劑成品均應(yīng)有10批 以上的樣品供實驗，以保證指紋圖譜的可重復性。二、供 試品溶液的制備（一）藥材供試品溶液的制備取樣：供試品取樣應(yīng)注意代表性，以保持實驗室取樣與實 際生產(chǎn)應(yīng)用藥材一致，例如地上部分的藥材，取樣約0.5 1Kg,分別稱量莖、葉、花、果的大致比例并做記錄。例如 果實類藥材，生產(chǎn)時去除種子的，供試品也應(yīng)除去種子，并 做記錄。如果藥材表觀質(zhì)量不均勻（如大小不一、肥瘦不等、 粗細不勻等），應(yīng)注意供試品的取樣有代表性，其后的試驗 中，必要

8、時應(yīng)做比較試驗，以考察所含成分有無顯著差異， 供生產(chǎn)參考。稱樣：應(yīng)按照常規(guī)要求，將選取的供試品適當粉碎后混合均 勻，再從中稱取試驗所需的數(shù)量，一般稱取供試品與選取樣 品的比例為1： 10,即如稱取1g供試品，應(yīng)在混合均勻的 10g選取的樣品中稱取。因為指紋圖譜需要提供量化的信 息，稱取供試品的精度一般要求取3位有效數(shù)字。制備：藥材指紋圖譜的主要目的，一是考察藥材本身的質(zhì)量 情況，二是以藥材的指紋圖譜為參比，提取物及制劑的指紋 圖譜與之比較，以考察制劑與原藥材的相關(guān)性。藥材供試品 溶液的制備，可選用適宜的溶劑和提取方法，定量操作進行， 盡量使藥材中的成分較多地在色譜圖中反映出來，并達到較 好的分

9、離。最終制備的供試品溶液還應(yīng)能適應(yīng)色譜試驗的需 要，如液相色譜的供試品溶液宜用色譜流動相或色譜洗脫強 度較弱的溶劑；薄層色譜用的供試品溶液可采用液液萃取或 固液萃取，選用適宜的溶劑制備供試品溶液。氣相色譜的供 試品可采用水蒸氣蒸餾法、頂空進樣法或固相微萃取法，供 試品如需使用溶劑，應(yīng)用低極性低沸點的溶劑。定容：供試品溶液最終應(yīng)用適宜的溶劑溶于標定容量的容器 中，制成標示濃度的供試品溶液（g/mL或mg/mL）。放置：一般要求供試品溶液盡量新鮮配制，如連續(xù)試驗需要， 供試品溶液應(yīng)在避光、低溫、密閉容器條件下短期放置，一 般不超過兩周，溶液不穩(wěn)定的，一般不超過48小時。標簽：須注明編號或批號，應(yīng)與

10、取樣的藥材編號一致，或有 明確的關(guān)聯(lián)，以保證數(shù)據(jù)的可追溯。主要操作過程及數(shù)據(jù)應(yīng)詳細記錄。（二）半成品（提取物）供試品溶液的制備：稱取不同批次的半成品（提取物），參照”供試品溶液" 的制備方法中相應(yīng)的內(nèi)容制備成一定量的溶液，備用。標簽 須注明編號或批號，應(yīng)與取樣的藥材編號一致，或有明確的 關(guān)聯(lián)，以保證數(shù)據(jù)的可追溯。主要操作過程及數(shù)據(jù)應(yīng)詳細記 錄。（三）成品（注射劑）供試品溶液制備：液體注射劑一般可直接或稀釋后作為供試品溶液，必要時也可用適宜的溶 劑提取并制備成一定量的溶液。固體形式的注射劑（凍干粉針）須注意注射劑成品的附加劑有無對色譜試驗干擾。如有 干擾，須研究采取適宜的樣品預處理方法

11、以排除干擾（如含 有氯化鈉則液相色譜不可使用蒸發(fā)光散射檢測器；如糖分太 多，可能影響薄層色譜的清晰度和分離度；凍干粉針的骨架 劑用量較大時也可能影響色譜的質(zhì)量等）。此外，單方注射 劑藥材或復方注射劑中不同藥材成分類別如果相差較大，色 譜條件要求不同，需要進行樣品的預處理時，應(yīng)分別進行試 驗，便于制備2張以上的指紋圖譜。主要步驟及數(shù)據(jù)應(yīng)詳細 記錄。三、參照物（一）參照物的選擇：指紋圖譜的參照物質(zhì)一般選取容易獲取的一個以上注射劑中的主要活 性成分或指標成分，主要用于考察指紋圖譜的穩(wěn)定程度和重 現(xiàn)性，并有助于色譜的辨認。在與臨床藥效未能取得確切關(guān) 聯(lián)的情形下，參照物（復方注射劑應(yīng)首選君藥的活性成分或

12、 指標成分）起著辨認和評價色譜指紋圖譜特征的指引作用， 它并不等同于含量測定的對照品。指紋圖譜一般色譜比較復 雜，內(nèi)標物不易選擇，也不易插入，指紋圖譜不是含量測定， 故內(nèi)標物的作用也不等同于含量測定的內(nèi)標物，因此應(yīng)慎重 考慮選用內(nèi)標物質(zhì)的必要性和可能性。參照物應(yīng)說明名稱、 來源和純度。如無參照物也可選指紋圖譜中的穩(wěn)定的色譜峰 做為參照峰，說明其色譜行為和有關(guān)數(shù)據(jù)，并應(yīng)盡可能闡明 其化學結(jié)構(gòu)及化學名稱。如情況需要，又有可能也可考慮選 擇適當?shù)膬?nèi)標物插入色譜中。（二）參照物溶液的制備：精密稱取，用適宜的溶劑制成標示濃度的溶液，備用。四、實驗常用的色譜技術(shù)有薄層色譜、液相色譜、氣相色譜及其他色譜技術(shù)

13、。須注意各種色譜技術(shù)的特點和不足， 結(jié)合實際選用。不論何種色譜技術(shù)，選用的原則是必需具有 良好的專屬性、重現(xiàn)性和可行性。專屬性：建立的指紋圖譜必須能夠表達該品種的特征， 即唯一性。重現(xiàn)性：同一品種同一樣品指紋圖譜中構(gòu)成指紋的各特 征峰（斑點）作為整體（峰位、峰數(shù)、峰的豐度、各峰的大 致比例）在不同實驗室和不同操作者之間得到的色譜整體特 征應(yīng)有較高的相似度，以表明方法的可行性。同一品種不同 樣品之間的相似度不屬于此范圍?？尚行裕荷V方法和試驗條件應(yīng)易于推廣和便于執(zhí)行， 即一旦由藥品監(jiān)督管理部門批準成為質(zhì)量標準的內(nèi)容后，生 產(chǎn)企業(yè)、中等水平的分析實驗室和省級以上的法定檢驗機構(gòu) 均可執(zhí)行該標準。（一

14、）實驗室：承擔色譜指紋圖譜的實驗室應(yīng)符合以下6個條件：1、實驗室具備承擔指紋圖譜的總體能力；2、實驗室設(shè)備通過檢驗證明符合指紋圖譜試驗研究的 需要；3、技術(shù)人員具備從事指紋圖譜試驗研究的能力；4、對實驗室的技術(shù)能力評價應(yīng)有定期的內(nèi)部的獨立檢查;5、試驗數(shù)據(jù)有可追溯，與其他實驗室有可比性；6、實驗室應(yīng)有質(zhì)量保證體系，以確保各種措施實施的 透明和一致。（二）儀器：所用的儀器性能應(yīng)能滿足指紋圖譜 試驗的需要，并須經(jīng)校驗；如果同一臺儀器有兩個以上的項 目共用，須有特別措施保證儀器的清洗和維護，儀器使用要 有明確記錄。液相色譜柱記錄商品名稱、生產(chǎn)廠家及相關(guān)參 數(shù)（固定相、柱長度、內(nèi)徑、填料粒度等）；一般

15、需用三根 以上不同生產(chǎn)廠家的柱子進行比較，經(jīng)比較試驗后應(yīng)固定色 譜柱來源與規(guī)格。色譜系統(tǒng)的適應(yīng)性試驗可用該品種指紋圖 譜所用的參照物，參照常法進行，如柱效明顯降低，在排除 其它因素后，說明該色譜柱不能繼續(xù)使用。另一方法是用制 作”對照用指紋圖譜”的提取物留樣樣品定期重復試驗，將前 后得到的指紋圖譜垂直疊加，直觀比較，各指紋特征峰是否 能重合及整個色譜的形狀是否有變異，如有變異致使指紋特 征已難以辨認，或選擇難分離的一對或一組峰，其分離度如 明顯降低，在排除其他可能的影響因素后，可認作該色譜柱 不能使用。儀器使用人、使用時間及周期應(yīng)有記錄。薄層色譜系離線操作，薄層板為一次性器材，不存在重 復使用

16、問題，但不同廠家的商品預制薄層板質(zhì)量可能不一 致，手工自制的薄層板只能供篩選試驗條件使用，用確定的 條件制作指紋圖譜（圖像）時必須用有質(zhì)量保證的商品預制 薄層板（如Silicagel 60, Merck等）。圖譜攝像時如用數(shù)碼攝 像機，解像度應(yīng)在20,00,000象素以上，熒光色譜須在薄層 色譜專用的紫外光燈箱下加濾光片拍攝。如有相應(yīng)的積分軟 件，可立即生成輪廓掃描圖以及積分數(shù)據(jù)；也可用常規(guī)的薄 層色譜掃描儀進行積分和繪制輪廓圖譜。薄層掃描儀的機械 部分、電子部分及光源需定期校驗。氣相色譜如色譜柱類型、長度、內(nèi)徑、老化條件、載氣、 流速、柱溫、柱頭壓力、進樣方式、進樣口溫度、檢測器等 均需考察

17、；儀器除定期檢查校驗外，填充柱或毛細管柱的柱 效也應(yīng)參照液相色譜柱定期校驗柱效。其他種類的色譜儀參 照上述原則校驗和記錄。各種儀器均須按照儀器操作手冊以及SOP進行。（三）試驗方法和試驗條件：色譜指紋圖譜試驗方法和試驗條 件的優(yōu)選：試驗條件應(yīng)能滿足指紋圖譜的需要，不宜簡單套 用含量測定用的試驗條件，并需根據(jù)指紋圖譜的特點進行試 驗條件的優(yōu)選。試驗方法和試驗條件選擇的目的是通過比較實驗，從 中選取相對簡單易行的方法和條件，獲取足以代表品種特征 的指紋圖譜，以滿足指紋圖譜的專屬性、重現(xiàn)性和普遍適用 性的要求。方法和條件須經(jīng)過嚴格的方法學驗證。由于色譜 指紋圖譜具有量化的概念，所以從樣品的稱取、供試

18、液的制 備和進行色譜分析時均須定量操作。在指紋圖譜研究中，" 量化”的含義是指在定量操作的條件下所得到的指紋圖譜在 整體特征上可以作半定量的比較，以表達供試品個體之間指 紋圖譜在"量”方面的總體差異程度，以及半成品（提取物） 和成品之間及成品批間指紋圖譜在“量”方面的相似程度。選擇試驗方法及試驗條件須根據(jù)供試品的特點和需要 設(shè)計合適的試驗方案，在保證專屬性、重現(xiàn)性的前提下，宜 選擇簡單、實用、便于實施的方法和試驗條件，并需要進行 方法學驗證。（四）試驗中應(yīng)注意的事項：（1）液相色譜的色譜柱需做比較試驗加以選擇，流動相至 少用三種不同組成進行比較，并從中選取最合適的色譜條 件

19、。目前，高效液相色譜一般為反相色譜，采用十八烷基硅 烷鍵合相柱，特殊情況下可選擇其他類型的化學鍵合相柱。 不同生產(chǎn)廠家不同牌號的色譜柱因選用的硅膠原料、鍵合條 件、封尾情況等的差異，致使在性能上互有差異，故通過試 驗比較，選擇合適的色譜柱很重要，選用的色譜柱最好是多 數(shù)實驗室常用的。如需梯度洗脫時，應(yīng)盡量采用線性梯度。 并應(yīng)報告儀器梯度滯后時間。測定梯度滯后時間，可用一零 死體積連接器代替色譜柱，以甲醇為溶劑A，含0.1%丙酮的 甲醇為溶劑B，檢測波長為260nm，運行0-100% B的線性 梯度，梯度時間20分鐘，流速1.0ml/min,記錄梯度圖形， 測定梯度曲線中間點的時間，減去10分鐘

20、，即得。不同的 儀器，由于梯度滯后時間的不同，可能影響方法的重現(xiàn)性， 通?？赏ㄟ^調(diào)整進樣和梯度起始時間減少這種影響。檢測器 最常見的是紫外-可見光檢測器，文獻報道的檢測波長常常是 為含量測定某一特定成分，不一定完全適合指紋圖譜的需 要，為了獲取多層次的信息，常常需要選擇數(shù)個不同的檢測 波長，條件許可的可使用二極管陣列檢測器，獲取不同波長 得到的色譜圖，從中汲取更多的信息。對在紫外區(qū)無吸收的 化合物，也可選擇其它類型的檢測器，如差示折光檢測器或 蒸發(fā)光散射檢測器等。(2)薄層色譜一般采用常規(guī)硅膠預制板或高效硅膠預制 板，必要時也可選用聚酰胺薄膜板或纖維素薄層板等，選用 時主要是保證色譜圖像的質(zhì)量

21、，劣質(zhì)的預制板不能使用。展 開用溶劑系統(tǒng)的選擇至少需做三種不同展開系統(tǒng)的比較，另 外，需注意觀察溫度和相對濕度對色譜行為的影響。雜質(zhì)的 干擾對柱色譜，常常是“隱性”的；薄層色譜則由于樣品供試 液中所有成分均可在薄層板上觀察，所以雜質(zhì)成分對色譜的 干擾是“顯性”的，可直觀地反映在薄層色譜上，甚至直接影 響指紋圖譜的觀察，因此樣品供試液的預處理常常是需要考 慮的步驟之一。薄層色譜指紋圖譜宜在同板將"對照用提取物 ”與供試品平行比較，即每一薄層板必須有"隨行對照用提取 物”或相應(yīng)的參照物。顯色劑分通用顯色劑和專屬顯色劑，結(jié) 合使用可在一個色譜條件下得到的指紋圖譜獲取成分類別或化學

22、成分功能團的信息，如生物堿、黃酮類、三萜類、甾 體類、香豆素類等，專用的顯色劑可以直觀地顯示各自的特 征。(3)氣相色譜通常使用毛細管柱，如填充柱得到的色譜 雖然簡單，但如確能表達該品種的指紋特征，也可采用。一 般極性與非極性固定相均須比較，以確定選用合適的固定 相。色譜運行時間能保證供試品中的成分均能流出色譜柱。 如需要將相對保留時間作為固定的常數(shù)("保留指數(shù)”)，也可 根據(jù)實際需要和可能選取1,2個內(nèi)標物質(zhì)計算。如需程序升 溫宜采用線性升溫，盡量避免復雜的多階程序。其它色譜技術(shù)可參照上述基本要求設(shè)計試驗。色譜中的參照峰由于作用不同于含量測定，提高其分離 度應(yīng)以不犧牲色譜的整體特征

23、為前提，所以不應(yīng)孤立地苛求 其分離度必需達到含量測定的要求。試驗研究中一般需要實驗室模擬生產(chǎn)工藝制備供試品 溶液，作為實驗室模擬樣品，以考察試驗條件，并與實際生 產(chǎn)的供試品的指紋圖譜作參考比較。由于實驗室制備條件不 可能與大生產(chǎn)工藝制備的產(chǎn)品完全一致，在其后的相關(guān)性比 較時，有關(guān)數(shù)據(jù)僅供參考用，如大生產(chǎn)樣品與實驗室模擬樣 品指紋圖譜相差十分明顯，則提示有必要從生產(chǎn)工藝和實驗 室模擬樣品兩方面檢查原因。五、色譜指紋圖譜的建立和辨認試驗條件確立后，將獲得的所有樣品的指紋圖 譜逐一研究比較，首先試驗人員應(yīng)將原藥材、半成品（提取 物）、成品的指紋圖譜分別直觀比較。一張指紋圖譜，特別 是分辨率較高的圖譜

24、，必須制備有足夠代表性的樣品的圖 譜，仔細觀察，首先找出藥材色譜具有指紋意義的各個峰， 給以編號，藥材、半成品和成品之間的圖譜比較，如有缺峰， 則缺號，以保持峰的編號不變，便于清楚地考察相互之間的 相關(guān)性。半成品（提取物）的指紋圖譜與原藥材的指紋圖譜 應(yīng)有一定的相關(guān)性，即半成品（提取物）指紋圖譜的特征應(yīng) 在原藥材的指紋圖譜中可以追溯，而原藥材中的某些特征在 提取物指紋圖譜中允許因生產(chǎn)工藝關(guān)系而有規(guī)律的丟失。半 成品（提取物）指紋圖譜與成品（注射劑）的指紋圖譜應(yīng)有 較高的相關(guān)性。中藥復方注射劑如處方藥味較多，藥量各異， 成分復雜，難以要求在指紋圖譜中全部體現(xiàn)，但作為原料的 各味藥材，必須研究各自

25、的指紋圖譜。有的品種某一種成分 含量很高（如黃苓中的黃苓苷），在色譜圖中占絕對優(yōu)勢， 其它特征很弱，雖然這本身就是特征，但有時為了區(qū)別用藥 材作起始原料和單一成分直接投料（如用黃苓苷代替黃苓藥 材），可試用不同的檢測波長或不同色譜方法，突出其它特 征，相互參照辨認。有的復方注射劑數(shù)種藥材均含同一類別 的成分，而且成分又較多時（如人參、三七、黃芪并存）， 建立指紋圖譜的難度很大，除盡量改進試驗條件，提高色譜 的分辨率外，可用陰性對照，考察相關(guān)峰的疊加關(guān)系，止匕時，各指紋峰之間比例的穩(wěn)定成為重要特征。因此更說明用藥材 的標準提取物投料將是必然的發(fā)展趨勢。指紋圖譜的辨認應(yīng)注意指紋特征的整體性。一個品

26、種的指紋圖譜是由各 個具有指紋意義的峰組成的完整圖譜構(gòu)成，各個有指紋意義 的峰（或薄層色譜的斑點）其位置（保留時間或比移值）、 大小或高低（積分面積或峰高）、各峰之間相對的比例是指 紋圖譜的綜合參數(shù)，辨認和比較時從整體的角度綜合考慮， 注意各有指紋意義的峰相互的依存關(guān)系。液相色譜不同儀器 可能因滯留體積不同等原因?qū)е卤Ａ魰r間的漂移。薄層色譜 的比移值不同實驗室漂移現(xiàn)象更較常見，所以比較色譜的整 體特征很重要，不宜糾纏細枝末節(jié)。指紋圖譜的評價指標是 供試品指紋圖譜與該品種對照用指紋圖譜（共有模式）及供 試品之間指紋圖譜的相似性。指紋圖譜的相似性從兩個方面 考慮，一是色譜的整體“面貌”，即有指紋意

27、義的峰的數(shù)目、 峰的位置和順序、各峰之間的大致比例（薄層色譜還有斑點 的顏色）等是否相似，以判斷樣品的真實性。二是供試品與 對照樣品或“對照用指紋圖譜”之間及不同批次樣品指紋圖譜 之間總積分值作量化比較。如總積分面積相差較大（如土 20%），則說明同樣量的樣品含有的內(nèi)在物質(zhì)有較明顯的"量" 的差異，這種差異是否允許，應(yīng)視具體品種，具體工藝的實 際情況，并結(jié)合含量測定項目綜合判斷。這種比較應(yīng)在同一 臺儀器平行進行測定。為了減輕日常檢驗的煩瑣計算，積分數(shù)據(jù)可以簡化為3位有效數(shù)字，或者直接讀取圖譜縱坐標的 刻度值。因為積分值本身由于不同成分響應(yīng)不同，而且量的 多少與真值不一定呈線

28、性關(guān)系；指紋圖譜的功能不同于含量 測定，它只需要數(shù)量的大概信息。相似性比較可以用”相似度 ”表達，相似度可以借助藥典會推薦的“中藥指紋圖譜計算機 輔助相似度評價軟件”計算，除個別品種視具體情況而定外， 一般成品指紋圖譜相似度計算結(jié)果在0.91.0（或以90100 表示）之間作為符合要求。自行開發(fā)的軟件必需公開算法。 申報資料中除相似度計算結(jié)果外，需附指紋圖譜。相似度小 于0.9，但直觀比較難以否定的供試品，可進一步采用模式 識別方法（如主成分分析）檢查原因。六、色譜指紋圖譜的校驗和復核生產(chǎn)企業(yè)申報的色譜指紋圖譜須經(jīng)獨立于生產(chǎn)企業(yè)以外的實驗室進行校驗，以確認其專屬性和重 現(xiàn)性。國家藥品監(jiān)督管理局

29、指定的省級藥品檢驗所負責研制 單位申報資料的技術(shù)審核與實驗復核，除另有規(guī)定外，已上 市品種的指紋圖譜復核，如同品種經(jīng)統(tǒng)一研究確定方法的指 紋圖譜標準復核由省級藥品檢驗所進行；廠家自己研制的指 紋圖譜標準復核由省級藥品檢驗所進行，并由國家藥典會組 織另一藥品檢驗所對其進行二次復核。半成品（提取物）不 做復核試驗，只做文字資料的技術(shù)審核，以判斷成品與原料 及半成品（提取物）的相關(guān)性以及申報資料內(nèi)容是否合理。 進行資料審核時注意申報的資料是否進行系統(tǒng)的方法學考 察和驗證，書面審核內(nèi)容包括提取方法、提取溶劑、色譜柱 或薄層板、色譜系統(tǒng)、檢測波長等的選擇；精密度、方法穩(wěn) 定性、重現(xiàn)性及成品儲放后指紋圖譜

30、的穩(wěn)定性等考察，結(jié)果 可通過相似度軟件檢查，結(jié)果相似度均應(yīng)在0.9以上。所申 報的上述資料應(yīng)書寫規(guī)范，數(shù)據(jù)齊全。除情況確實需要外， 一般復核單位不再進行方法學復核試驗，但復核單位本身對 注射劑成品的復核試驗仍須進行自身的方法學驗證。復核申報的指紋圖譜試驗，應(yīng)與原申報資料提供的試驗條件 相同。如復核結(jié)果難以與申報資料的指紋圖譜吻合，應(yīng)結(jié)合 申報資料的有關(guān)內(nèi)容和數(shù)據(jù)以及復核單位的全部圖譜及數(shù) 據(jù)，客觀地公正地分析原因。必要時，由第三方再復核。也 可以隨行對照用提取物為參照，與供試品由申報單位和復核 單位分別在各自實驗室進行核對試驗，雙方供試品與對照用 提取物的指紋圖譜平行比較。如各自均能重復自身的結(jié)果， 而色譜的指紋特征又可以相互印證，雖與標準所附對照用指 紋圖譜有所差異，但相似度檢查均能通過，也可考慮予以認 可。但同一實驗室在完全相同的條件下獲得的指紋圖譜不應(yīng) 發(fā)生上述情況。故每次檢驗時均應(yīng)用隨行對照提取物同時試 驗，并進行相似度檢查。（一）送樣程序已上市品種的指紋圖譜，如同品種經(jīng)統(tǒng)一研究確定方 法的指紋圖譜，其研究資料與制劑由生產(chǎn)廠家送所在地的省 級藥品檢驗所復核，再轉(zhuǎn)報國家藥典會。如生產(chǎn)廠家自己研究的指紋圖譜，其研究資料及藥材與制劑