YY動物細(xì)胞工程12課件

1、動物細(xì)胞工程(gngchng)第一頁，共四十七頁。提問提問(twn)：v植物細(xì)胞工程常用植物細(xì)胞工程常用(chn yn)的技術(shù)手段有哪些？的技術(shù)手段有哪些？ 植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng), 植物體細(xì)胞植物體細(xì)胞(xbo)雜交雜交這些技術(shù)的理論基礎(chǔ)：這些技術(shù)的理論基礎(chǔ)：植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞的全能性動物細(xì)胞全能性如何？動物細(xì)胞全能性如何？動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)有哪些？常用的技術(shù)有哪些？第二頁，共四十七頁。動物動物(dngw)細(xì)胞培細(xì)胞培養(yǎng)養(yǎng)動物動物(dngw)細(xì)胞融合細(xì)胞融合單克隆抗體單克隆抗體(kngt)制備制備細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植動物動物細(xì)胞細(xì)胞工程工程技術(shù)技術(shù)動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)動

2、物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)第三頁，共四十七頁。第四頁，共四十七頁。教學(xué)教學(xué)(jio xu)目標(biāo)目標(biāo) 簡述動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程、條件及簡述動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程、條件及應(yīng)用。應(yīng)用。 簡述通過動物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆簡述通過動物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆(k ln)動物的過程和應(yīng)用前景。動物的過程和應(yīng)用前景。第五頁，共四十七頁。重點(diǎn)重點(diǎn) 動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程及條件動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程及條件(tiojin)。 用動物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動物的用動物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動物的過程。過程。難點(diǎn)難點(diǎn) 用動物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動物的用動物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動物的過程。過程。重點(diǎn)難點(diǎn)重點(diǎn)難點(diǎn)第六頁，共四十七頁。 燒傷病人燒傷病人(

3、bngrn)圖片圖片異體皮膚移植異體皮膚移植(yzh)圖圖片片第七頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12 皮膚燒傷，如果創(chuàng)面很?。ú淮笥谟矌牛┲灰３制つw燒傷，如果創(chuàng)面很?。ú淮笥谟矌牛┲灰３智鍧?，甚至深度燒傷，也可能自愈。如果下層真皮受清潔，甚至深度燒傷，也可能自愈。如果下層真皮受損面積較大損面積較大(jio d)(jio d)，常常需要植皮。植皮需要的健康皮，常常需要植皮。植皮需要的健康皮片。植皮需要的健康皮片，可以取自燒傷病人自身未片。植皮需要的健康皮片，可以取自燒傷病人自身未燒傷的部位（自體植皮），也可取自其他活人或尸體燒傷的部位（自體植皮），也可取自其他活人或尸體（異體植皮）等。自體

4、植皮是永久性的，取自其他人（異體植皮）等。自體植皮是永久性的，取自其他人或動物的植皮是暫時性的，是在創(chuàng)面愈合過程中為?；騽游锏闹财な菚簳r性的，是在創(chuàng)面愈合過程中為保護(hù)創(chuàng)面而采取的措施，護(hù)創(chuàng)面而采取的措施，10101414天后就要被身體排斥。天后就要被身體排斥。 如果一個大面積燒傷的病人來說，自體皮膚有如果一個大面積燒傷的病人來說，自體皮膚有限，其他渠道的皮膚來源不足。如何才能限，其他渠道的皮膚來源不足。如何才能(cinng)(cinng)獲得獲得大量的自體健康皮膚？大量的自體健康皮膚？第八頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12人耳鼠“人耳鼠人耳鼠”再出風(fēng)頭再出風(fēng)頭 20012001年，一只特別的

5、活老鼠在北年，一只特別的活老鼠在北京引起轟動京引起轟動這是有著一對紅眼睛這是有著一對紅眼睛的、尾巴長長的、渾身沒毛的小白鼠的、尾巴長長的、渾身沒毛的小白鼠。值得一提的是，這只小白鼠的背上。值得一提的是，這只小白鼠的背上，竟長著一只幾乎，竟長著一只幾乎(jh)(jh)與身子一般大與身子一般大小的小的“人耳人耳”。這只老鼠背上的。這只老鼠背上的“人人耳耳”是由上海市第九人民醫(yī)院副院長是由上海市第九人民醫(yī)院副院長、整復(fù)外科主任曹誼林教授利用組織、整復(fù)外科主任曹誼林教授利用組織工程技術(shù)復(fù)制出來的。工程技術(shù)復(fù)制出來的。 在京展出的數(shù)天，盡管在京展出的數(shù)天，盡管(jn gun)(jn gun)門票高達(dá)門票

6、高達(dá)2020元，但還是有將近元，但還是有將近2020萬人，心甘情愿地掏錢一睹萬人，心甘情愿地掏錢一睹“人耳鼠人耳鼠”的風(fēng)采。的風(fēng)采。 人耳鼠的出現(xiàn)(chxin)，透露了怎樣的信息？第九頁，共四十七頁。1、概念、概念(ginin) 是指從動物是指從動物(dngw)(dngw)機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組組織織，將它分散成，將它分散成單個細(xì)胞單個細(xì)胞，然后放在，然后放在適宜的適宜的培養(yǎng)基培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞中，讓這些細(xì)胞生長生長和和增增殖殖。2、原理、原理(yunl)細(xì)胞分裂增殖細(xì)胞分裂增殖一、動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)如何進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)如何進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)? ?第十頁，共四十七頁。請同學(xué)閱讀教

7、材請同學(xué)閱讀教材(jioci)(jioci)和圖和圖2-12-16 6來描述細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程：來描述細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程：第十一頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12取動物取動物(dngw)動的動的組織塊組織塊胰蛋白酶胰蛋白酶(y dn bi mi)剪碎剪碎單個單個細(xì)胞細(xì)胞(xbo)加培加培養(yǎng)液養(yǎng)液細(xì)胞細(xì)胞懸浮懸浮液液接觸接觸抑制抑制部分細(xì)胞部分細(xì)胞“癌變癌變”，無限傳代，無限傳代動物細(xì)胞培養(yǎng)不能動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成動物體最終培養(yǎng)成動物體10代代細(xì)胞細(xì)胞原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁細(xì)胞貼壁胰蛋白酶胰蛋白酶處理、處理、細(xì)胞株細(xì)胞株細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞系細(xì)胞系2.動物細(xì)胞培養(yǎng)過程：動物細(xì)胞

8、培養(yǎng)過程：50代代細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)瓶適宜條適宜條件培養(yǎng)件培養(yǎng)分瓶分瓶培養(yǎng)培養(yǎng)第十二頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12強(qiáng)調(diào)一：細(xì)胞強(qiáng)調(diào)一：細(xì)胞(xbo)貼壁過程貼壁過程細(xì)胞貼壁：細(xì)胞貼壁：在培養(yǎng)在培養(yǎng)(piyng)瓶懸液中分散的細(xì)胞很快就瓶懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求(yoqi)：表面光滑、無毒、易表面光滑、無毒、易于于 貼貼 附。附。第十三頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸到表面相互接觸(jich)(jich)時時, ,細(xì)胞就會停止分裂增殖細(xì)胞就會停

9、止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。接觸抑制。強(qiáng)調(diào)強(qiáng)調(diào)(qing dio)二：接觸抑二：接觸抑制制第十四頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12有關(guān)有關(guān)(yugun)概概念念:1 1、原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)：將動物組織消化后的初次將動物組織消化后的初次 培養(yǎng)培養(yǎng)。（分瓶前）（分瓶前）2 2、傳代培養(yǎng)：傳代培養(yǎng)：將將貼滿瓶壁的需要重新用胰蛋貼滿瓶壁的需要重新用胰蛋白酶等處理，然后白酶等處理，然后(rnhu)(rnhu)分瓶繼續(xù)分瓶繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，讓細(xì)，讓細(xì)胞繼續(xù)增殖。這樣的胞繼續(xù)增殖。這樣的培養(yǎng)培養(yǎng)過程過程稱為傳代培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)。 （分瓶后）（分瓶后）第十五頁，共四十七頁。YY動

10、物細(xì)胞工程12在傳代培養(yǎng)過程在傳代培養(yǎng)過程(guchng)中中 10代以前的代以前的細(xì)胞核型不變細(xì)胞核型不變 1050代，增殖逐漸減慢，以至于完全停代，增殖逐漸減慢，以至于完全停止，部分細(xì)胞的細(xì)止，部分細(xì)胞的細(xì)胞細(xì)胞核型可能發(fā)生改變胞細(xì)胞核型可能發(fā)生改變 50代以后的細(xì)胞發(fā)生突變，獲得不死性，代以后的細(xì)胞發(fā)生突變，獲得不死性，朝著等同于癌細(xì)胞的方向發(fā)展。朝著等同于癌細(xì)胞的方向發(fā)展。應(yīng)用應(yīng)用(yngyng)(yngyng)：目前：目前使用的使用的或或冷凍保存的冷凍保存的正常細(xì)胞通正常細(xì)胞通常為常為1010代以內(nèi)代以內(nèi)，以保持細(xì)胞，以保持細(xì)胞正常的二倍體核型正常的二倍體核型。第十六頁，共四十七頁。

11、YY動物細(xì)胞工程12有關(guān)有關(guān)(yugun)概念概念3 3、細(xì)胞株：細(xì)胞株：10到到40、50代的細(xì)胞，遺傳代的細(xì)胞，遺傳物質(zhì)沒發(fā)生物質(zhì)沒發(fā)生(fshng)改變。改變。 4 4、細(xì)胞系：、細(xì)胞系：超過超過50代的細(xì)胞，遺傳物代的細(xì)胞，遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，可無限增殖。質(zhì)發(fā)生改變，可無限增殖。 細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別： 細(xì)胞系的遺傳細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。，容易傳代培養(yǎng)。第十七頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12細(xì)胞細(xì)胞懸浮懸浮液液1010代代細(xì)胞細(xì)胞5050代代細(xì)胞細(xì)胞無限傳無限傳代代原代培養(yǎng)原代培

12、養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞株細(xì)胞系細(xì)胞系如何界定如何界定(ji dn)(ji dn)原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細(xì)胞株和細(xì)胞系原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細(xì)胞株和細(xì)胞系？多數(shù)組織細(xì)胞固定在表面生長多數(shù)組織細(xì)胞固定在表面生長和分裂和分裂。隨細(xì)胞增多，細(xì)胞就會停止分裂增殖隨細(xì)胞增多，細(xì)胞就會停止分裂增殖遺傳物質(zhì)改變遺傳物質(zhì)改變(gibin)第十八頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12思考題：思考題：1 1、選用、選用(xunyng)(xunyng)健康動物體內(nèi)什么樣的組織塊做細(xì)胞培養(yǎng)材健康動物體內(nèi)什么樣的組織塊做細(xì)胞培養(yǎng)材料？為什么？料？為什么？因?yàn)檫@些組織因?yàn)檫@些組織(zzh)(zzh)或器官，分裂能或器官，分

13、裂能力旺盛，易于培養(yǎng)。力旺盛，易于培養(yǎng)。動物胚胎或幼齡個體動物胚胎或幼齡個體(gt)(gt)的器官或組織的器官或組織拓展拓展-動物組織或細(xì)胞培養(yǎng)的難易程度動物組織或細(xì)胞培養(yǎng)的難易程度幼體組織或細(xì)胞幼體組織或細(xì)胞 老齡組織或細(xì)胞老齡組織或細(xì)胞分化程度低的組織或細(xì)胞分化程度低的組織或細(xì)胞 分化程度高的組織分化程度高的組織 或細(xì)胞或細(xì)胞腫瘤組織或細(xì)胞腫瘤組織或細(xì)胞 正常組織或細(xì)胞正常組織或細(xì)胞第十九頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程123、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明(shumng)細(xì)胞細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成份？間的物質(zhì)是什么成份？催化蛋白質(zhì)水解。細(xì)胞間的物質(zhì)催

14、化蛋白質(zhì)水解。細(xì)胞間的物質(zhì)(wzh)(wzh)主要是蛋主要是蛋白質(zhì)白質(zhì)( (膠原蛋白等膠原蛋白等) )。4、細(xì)胞膜的主要、細(xì)胞膜的主要(zhyo)成份是什么？成份是什么？蛋白質(zhì)和磷脂蛋白質(zhì)和磷脂成塊組織使細(xì)胞靠在一起限制了細(xì)胞的生長和增殖成塊組織使細(xì)胞靠在一起限制了細(xì)胞的生長和增殖，且細(xì)胞不能與培養(yǎng)液充分接觸，不利于培養(yǎng)。，且細(xì)胞不能與培養(yǎng)液充分接觸，不利于培養(yǎng)。2 2、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個細(xì)胞？、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個細(xì)胞？第二十頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程126 6、既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化、既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化(xiohu)(xiohu)掉，那將動物組掉

15、，那將動物組織分散成單個細(xì)胞要注意什么問題呢？織分散成單個細(xì)胞要注意什么問題呢？7 7、能夠用胃蛋白酶、能夠用胃蛋白酶(wi dn bi mi)(wi dn bi mi)代替胰蛋白酶嗎？為代替胰蛋白酶嗎？為什么什么？注意注意(zh y)時間的控制時間的控制 不能，因?yàn)閮烧叩淖钸m不能，因?yàn)閮烧叩淖钸mPHPH不同，而正常組織細(xì)不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PHPH較接近較接近5、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？能能第二十一頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程123.3.總結(jié)總結(jié)(zngji)(zngji)：動物細(xì)：動物細(xì)胞培養(yǎng)過程胞培養(yǎng)

16、過程動物胚胎動物胚胎(piti)或幼齡動或幼齡動物的組織、器官物的組織、器官細(xì)胞細(xì)胞(xbo)懸浮液懸浮液剪碎用胰蛋白酶處理剪碎用胰蛋白酶處理1010代細(xì)胞代細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶40-5040-50代細(xì)胞代細(xì)胞傳傳代代培培養(yǎng)養(yǎng)無限傳代無限傳代單個細(xì)胞單個細(xì)胞加培養(yǎng)液稀釋加培養(yǎng)液稀釋傳代傳代1010代以內(nèi)，代以內(nèi)，遺傳物質(zhì)不改變，遺傳物質(zhì)不改變，保持正常二倍體核型保持正常二倍體核型。傳代傳代10-5010-50代左右，增長緩慢以至于代左右，增長緩慢以至于完全停止，完全停止，部分細(xì)胞核型可能發(fā)生變部分細(xì)胞核型可能發(fā)生變化化（遺傳物質(zhì)可能改變（遺傳物質(zhì)可能改變）為什么用胰蛋白酶處理？為什么用胰蛋

17、白酶處理？原代培養(yǎng)特點(diǎn)：原代培養(yǎng)特點(diǎn)：細(xì)胞貼壁、接觸抑細(xì)胞貼壁、接觸抑制制繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細(xì)胞獲得不死性獲得不死性，細(xì)胞突變細(xì)胞突變，遺傳物質(zhì)已經(jīng)改變遺傳物質(zhì)已經(jīng)改變，等等同于癌細(xì)胞同于癌細(xì)胞。原原代代培培養(yǎng)養(yǎng)第二十二頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12歸納歸納(gun)過程過程取取 的組織的組織(zzh)(zzh)、器官、器官細(xì)胞細(xì)胞(xbo)懸浮懸浮液液 酶酶 細(xì)胞貼壁、接細(xì)胞貼壁、接觸抑制觸抑制 培養(yǎng)培養(yǎng) 10 10代細(xì)胞代細(xì)胞 培養(yǎng)培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞株無限傳代無限傳代細(xì)胞系細(xì)胞系單個細(xì)胞單個細(xì)胞加加 液液遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì) 改變改變遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì) 改變改變動物胚胎或

18、幼齡動物動物胚胎或幼齡動物胰蛋白胰蛋白培養(yǎng)培養(yǎng)原代原代傳代傳代未未已已50代細(xì)胞代細(xì)胞第二十三頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12 多細(xì)胞多細(xì)胞(xbo)動物和人體的細(xì)胞動物和人體的細(xì)胞(xbo)都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的知識，思考并討論下列問題學(xué)的知識，思考并討論下列問題？1、體外培養(yǎng)細(xì)胞時需要哪些提供、體外培養(yǎng)細(xì)胞時需要哪些提供那些物質(zhì)？那些物質(zhì)？2、體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的、體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？環(huán)境條件？第二十四頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程121 1、無菌、無毒的環(huán)境（先、無菌、無毒的環(huán)境（先培養(yǎng)液培養(yǎng)液、培養(yǎng)器具培養(yǎng)器具無無菌處理；添

19、加一定量的菌處理；添加一定量的抗生素抗生素，防止污染，防止污染(wrn)(wrn)；定期；定期更換培養(yǎng)液更換培養(yǎng)液，清除代謝產(chǎn)物清除代謝產(chǎn)物) )2 2、營養(yǎng)、營養(yǎng) 糖糖（葡萄糖）、（葡萄糖）、氨基酸氨基酸、促生長因子促生長因子、無機(jī)無機(jī)鹽鹽和和微微 量元素量元素等（合成培養(yǎng)基）；通常等（合成培養(yǎng)基）；通常+ +血血清或血漿清或血漿等天然成分。等天然成分。 （二）（二） 動物動物(dngw)細(xì)胞培養(yǎng)的條細(xì)胞培養(yǎng)的條件件第二十五頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12第二十六頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程123 3、溫度溫度(36.5(36.50.5)0.5)和和P PH H(7.2(7.27.4

20、)7.4)4 4、氣體環(huán)境：、氣體環(huán)境： 主要主要(zhyo)(zhyo)有有O O2 2和和COCO2 2（操作中用的是（操作中用的是95%95%空氣和空氣和5% CO5% CO2 2 ）提醒提醒 CO2 2作用作用調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)(tioji)培養(yǎng)基培養(yǎng)基pH; O2 2作用作用細(xì)胞有氧呼吸，細(xì)胞代謝必需細(xì)胞有氧呼吸，細(xì)胞代謝必需 所用裝置所用裝置 培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶+培養(yǎng)箱。培養(yǎng)箱。第二十七頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12獲得獲得(hud)(hud)細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞(xbo)(xbo)的全能的全能性性細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體植物體培養(yǎng)培養(yǎng)(piyng)(piyng

21、)結(jié)果結(jié)果或細(xì)胞產(chǎn)物或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育快速繁殖、培育無病毒植株等無病毒植株等培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的葡萄糖、動物葡萄糖、動物血清血清蔗糖、植物激蔗糖、植物激素素培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖原理原理動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物組織和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較植物組織和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較第二十八頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12（三）（三） 動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)(jsh)的應(yīng)用的應(yīng)用v1大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）擾素

22、、單克隆抗體）v2作為基因工程中的受體細(xì)胞作為基因工程中的受體細(xì)胞v3培養(yǎng)的動物細(xì)胞可以用于檢測有毒物質(zhì)，培養(yǎng)的動物細(xì)胞可以用于檢測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性判斷某種物質(zhì)的毒性v4培養(yǎng)正?；蚋鞣N病變培養(yǎng)正常或各種病變(bngbin)的細(xì)胞，用于生的細(xì)胞，用于生理、病理、藥理等研究，為治療和預(yù)防癌癥理、病理、藥理等研究，為治療和預(yù)防癌癥及其他疾病提供理論依據(jù)及其他疾病提供理論依據(jù)第二十九頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12二二. .動物細(xì)胞核移植技術(shù)動物細(xì)胞核移植技術(shù)(jsh)(jsh)和克隆動物和克隆動物 將動物的一個將動物的一個細(xì)胞核細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)，移入一個已經(jīng)去掉去掉細(xì)胞核細(xì)胞核的

23、的卵母細(xì)胞卵母細(xì)胞中，使其中，使其重組重組并發(fā)育成一個并發(fā)育成一個新的胚胎新的胚胎(piti)，這個新的胚胎最終發(fā)育為，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個動物個體體（克隆動物）（克隆動物）分分類類胚胎細(xì)胞核移植：胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)(huf)全全能性容易能性容易 細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)全能性不細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)全能性不容易容易1 、動物細(xì)胞核移植概念：動物細(xì)胞核移植概念：第三十頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程122、體細(xì)胞核移植的過程體細(xì)胞核移植的過程(guchng)：第三十一頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12( (2 2）核移植的受

24、體細(xì)胞核移植的受體細(xì)胞M中期中期(zhngq)卵母細(xì)胞卵母細(xì)胞用物理或化學(xué)方法激活受體細(xì)胞，完成細(xì)胞分裂用物理或化學(xué)方法激活受體細(xì)胞，完成細(xì)胞分裂和發(fā)育和發(fā)育(fy)進(jìn)程。進(jìn)程。（4 4）. .再激活受體細(xì)胞，構(gòu)建重組再激活受體細(xì)胞，構(gòu)建重組(zhn z)(zhn z)胚胎方法胚胎方法 歸納：歸納：( (1 1) ). .原理：動物原理：動物 細(xì)胞核細(xì)胞核 的全能性的全能性( (不能說動物細(xì)胞不能說動物細(xì)胞 全能性全能性) )（3 3）核移植時，先用核移植時，先用 電刺激電刺激 使供、受體細(xì)胞融使供、受體細(xì)胞融合合 第三十二頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12（5 5）選卵母細(xì)胞做受體細(xì)胞原因

25、選卵母細(xì)胞做受體細(xì)胞原因(yunyn)體積大，易操作體積大，易操作 ；含有促使細(xì)胞核全能性表含有促使細(xì)胞核全能性表達(dá)的達(dá)的物質(zhì)物質(zhì)(wzh)(wzh)和營養(yǎng)條件。和營養(yǎng)條件。（6 6）去掉去掉(q dio)(q dio)受體卵母細(xì)胞的核的原因受體卵母細(xì)胞的核的原因保證核移植的胚胎或動物的遺傳物質(zhì)全部來自（保證核移植的胚胎或動物的遺傳物質(zhì)全部來自（有重要利用價值的動物提供的）供體細(xì)胞。有重要利用價值的動物提供的）供體細(xì)胞。（8.8.）屬無性生殖，基因型不變（與供屬無性生殖，基因型不變（與供核核動物動物基因基因型一型一致）致）（7 7）. .核移植的供體細(xì)胞選用傳代核移植的供體細(xì)胞選用傳代1010

26、代以內(nèi)細(xì)胞的代以內(nèi)細(xì)胞的原因原因因?yàn)橐驗(yàn)?010代以內(nèi)的細(xì)胞一般能代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型保持正常的二倍體核型, ,保證了供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)。保證了供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)。第三十三頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12（9.9.）移植產(chǎn)生的克隆動物與提供細(xì)胞核的親本移植產(chǎn)生的克隆動物與提供細(xì)胞核的親本(qn bn)(qn bn)不不100%100%相同的原因相同的原因1)1)絕大部分絕大部分DNADNA來自來自(li z)(li z)于供體細(xì)胞核，但其核外還有少量的于供體細(xì)胞核，但其核外還有少量的DNADNA，即線粒體中的，即線粒體中的DNADNA（細(xì)胞質(zhì)遺傳）是來自（細(xì)胞質(zhì)遺

27、傳）是來自(li z)(li z)于受體卵于受體卵母細(xì)胞。母細(xì)胞。2)2)外界外界環(huán)境條件環(huán)境條件(tiojin)的影響引起的影響引起不可遺傳的變異不可遺傳的變異。3)3)在發(fā)育過程中可能發(fā)生在發(fā)育過程中可能發(fā)生 基因突變基因突變, ,染色體變異染色體變異 導(dǎo)導(dǎo) 致性狀改變。致性狀改變。（10.10.）該過程用到的技術(shù)手段：該過程用到的技術(shù)手段： 動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)、 動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合、 早期胚胎培養(yǎng)早期胚胎培養(yǎng) 和和 胚胎移植胚胎移植。第三十四頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程123、體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用(yngyng)前景：前景：（1）、在畜牧業(yè)中可、在

28、畜牧業(yè)中可以以加速家畜遺傳加速家畜遺傳(ychun)改良的進(jìn)程改良的進(jìn)程（2）、保護(hù)保護(hù)瀕危瀕危(bnwi)物種物種（3）、醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)、醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域域生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)及及組組織器官的移植織器官的移植（4）、了解胚胎發(fā)育和衰老過了解胚胎發(fā)育和衰老過程程；追蹤研究疾病的發(fā)展過程和治追蹤研究疾病的發(fā)展過程和治療疾病療疾病第三十五頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程124、體細(xì)胞核移植技術(shù)體細(xì)胞核移植技術(shù)(jsh)存在的問題：存在的問題：成活率低成活率低; ;克隆克隆(k ln)(k ln)動物的健康問題動物的健康問題; ;克隆動物食品的安全性問題?？寺游锸称返陌踩詥栴}。克隆人的倫理問題克

29、隆人的倫理問題第三十六頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12思考思考(sko)與探究與探究2.動物細(xì)胞培養(yǎng)要經(jīng)過脫分化動物細(xì)胞培養(yǎng)要經(jīng)過脫分化(fnhu)的過程嗎？的過程嗎？ 為什么？為什么？動物細(xì)胞培養(yǎng)不需經(jīng)過脫分化過程。因高度分化動物細(xì)胞培養(yǎng)不需經(jīng)過脫分化過程。因高度分化的動物細(xì)胞發(fā)育的動物細(xì)胞發(fā)育(fy)潛能變窄，失去了發(fā)育潛能變窄，失去了發(fā)育(fy)成完整個體的能力，所以，動物細(xì)胞也就沒有類成完整個體的能力，所以，動物細(xì)胞也就沒有類似植物組織或細(xì)胞培養(yǎng)時的脫分化過程了。要想似植物組織或細(xì)胞培養(yǎng)時的脫分化過程了。要想使培養(yǎng)的動物細(xì)胞定向分化，通常采用定向誘導(dǎo)使培養(yǎng)的動物細(xì)胞定向分化，通常采

30、用定向誘導(dǎo)動物干細(xì)胞，使其分化成所需要的組織或器官。動物干細(xì)胞，使其分化成所需要的組織或器官。第三十七頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程123.1997年，美國威斯康星州的一個奶牛場有一頭名叫盧辛達(dá)（年，美國威斯康星州的一個奶牛場有一頭名叫盧辛達(dá)（Lucinda）的奶牛，年產(chǎn)奶量為）的奶牛，年產(chǎn)奶量為30.8 t，創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)奶量，創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)奶量最高新紀(jì)錄。目前世界各國高產(chǎn)奶牛場奶牛，年平均產(chǎn)奶量一般最高新紀(jì)錄。目前世界各國高產(chǎn)奶牛場奶牛，年平均產(chǎn)奶量一般(ybn)為十幾噸，而我國奶牛產(chǎn)奶量年平均水平僅為為十幾噸，而我國奶牛產(chǎn)奶量年平均水平僅為34 t。（1）能利用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆

31、高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)嗎？請說明理）能利用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)嗎？請說明理由。由。可以。盧辛達(dá)的產(chǎn)奶量很高，有高產(chǎn)奶的遺傳基礎(chǔ)，可以。盧辛達(dá)的產(chǎn)奶量很高，有高產(chǎn)奶的遺傳基礎(chǔ)，利用盧辛達(dá)的體細(xì)胞克隆的奶牛其遺傳物質(zhì)基本上全利用盧辛達(dá)的體細(xì)胞克隆的奶牛其遺傳物質(zhì)基本上全部部(qunb)來自該奶牛，其克隆牛具有高產(chǎn)的遺傳基礎(chǔ)來自該奶牛，其克隆牛具有高產(chǎn)的遺傳基礎(chǔ)，如果精心培育和飼養(yǎng)，有可能在世界范圍內(nèi)推廣，如果精心培育和飼養(yǎng)，有可能在世界范圍內(nèi)推廣，克隆牛再與高產(chǎn)的公牛自然繁殖，可得到很多高產(chǎn)的克隆牛再與高產(chǎn)的公牛自然繁殖，可得到很多高產(chǎn)的后代，從而加快奶牛改良進(jìn)程。后代，從而加快奶牛改良進(jìn)程

32、。該克隆牛不能無限制地推廣，其數(shù)量不宜過多，尤其是在該克隆牛不能無限制地推廣，其數(shù)量不宜過多，尤其是在小范圍內(nèi)不能無限的繁殖，以避免奶牛群出現(xiàn)近親繁殖小范圍內(nèi)不能無限的繁殖，以避免奶牛群出現(xiàn)近親繁殖(jn qn fn zh)而引起種質(zhì)衰退。而引起種質(zhì)衰退。第三十八頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12（2）如果）如果(rgu)將克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)的任務(wù)交給你，你將將克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)的任務(wù)交給你，你將如何對它進(jìn)行克隆？如何對它進(jìn)行克??？從盧辛達(dá)耳朵（也可用別的組織、器官，耳朵在活體上容從盧辛達(dá)耳朵（也可用別的組織、器官，耳朵在活體上容易?。┥霞羧∫恍K組織，在體外培養(yǎng)獲得該組織（如軟易取）上剪取

33、一小塊組織，在體外培養(yǎng)獲得該組織（如軟骨組織）的細(xì)胞。從屠宰場取廢棄的牛卵巢，抽取卵母細(xì)骨組織）的細(xì)胞。從屠宰場取廢棄的牛卵巢，抽取卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)成熟。用顯微針去除卵母細(xì)胞的核，再將耳細(xì)胞體外培養(yǎng)成熟。用顯微針去除卵母細(xì)胞的核，再將耳細(xì)胞注入卵母細(xì)胞，用電刺激方法使卵母細(xì)胞與體細(xì)胞融合胞注入卵母細(xì)胞，用電刺激方法使卵母細(xì)胞與體細(xì)胞融合，這時供體核就進(jìn)入了受體卵母細(xì)胞，再用電刺激或化學(xué)，這時供體核就進(jìn)入了受體卵母細(xì)胞，再用電刺激或化學(xué)物質(zhì)激活注入了體細(xì)胞核的卵母細(xì)胞，使其完成減數(shù)分裂物質(zhì)激活注入了體細(xì)胞核的卵母細(xì)胞，使其完成減數(shù)分裂和發(fā)育過程和發(fā)育過程(guchng)。核移植胚胎在體外短時間培

34、養(yǎng)后，。核移植胚胎在體外短時間培養(yǎng)后，挑選正常卵裂的胚胎植入經(jīng)同期發(fā)情處理的受體母牛體內(nèi)挑選正常卵裂的胚胎植入經(jīng)同期發(fā)情處理的受體母牛體內(nèi)。第三十九頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程124.體細(xì)胞核移植技術(shù)在研究和應(yīng)用上還存在什么問體細(xì)胞核移植技術(shù)在研究和應(yīng)用上還存在什么問題？請你查閱題？請你查閱(chyu)資料，了解這方面的前沿動態(tài)資料，了解這方面的前沿動態(tài)。研究方面：克隆動物基因組重新編程的機(jī)制尚不清楚研究方面：克隆動物基因組重新編程的機(jī)制尚不清楚，克隆技術(shù)效率低，克隆動物畸形率高、死亡率高、，克隆技術(shù)效率低，克隆動物畸形率高、死亡率高、易出現(xiàn)早衰易出現(xiàn)早衰(zoshui)等問題。這些問題尚

35、在研究中。等問題。這些問題尚在研究中。應(yīng)用上：生產(chǎn)克隆動物費(fèi)用昂貴，距大規(guī)模應(yīng)用還有一定距應(yīng)用上：生產(chǎn)克隆動物費(fèi)用昂貴，距大規(guī)模應(yīng)用還有一定距離。離。第四十頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程12 2 2、在動物細(xì)胞、在動物細(xì)胞(xbo)(xbo)培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞細(xì)胞(xbo)(xbo)是是 （ ） A A獲得不死性的細(xì)胞獲得不死性的細(xì)胞 B B1010代以內(nèi)細(xì)胞代以內(nèi)細(xì)胞 C C原代細(xì)胞原代細(xì)胞 D D傳代細(xì)胞傳代細(xì)胞1 1、動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是、動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是 （ ） A.A.動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合 B.B.單克隆抗體單克隆抗體(kn

36、gt)(kngt) C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)A AD D課堂課堂(ktng)反饋練習(xí)反饋練習(xí)第四十一頁，共四十七頁。YY動物細(xì)胞工程123 3、在動物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述中正確的是：（、在動物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述中正確的是：（ ）A A、動物細(xì)胞培養(yǎng)的目的只是為了、動物細(xì)胞培養(yǎng)的目的只是為了(wi le)(wi le)獲得大量的細(xì)胞獲得大量的細(xì)胞 分泌蛋白分泌蛋白B B、動物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細(xì)胞分散、動物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細(xì)胞分散C C、細(xì)胞的癌變發(fā)生在原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過渡、細(xì)胞的癌變發(fā)生在原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過渡 過過程中程中D D、培養(yǎng)至、培養(yǎng)至5050代后傳代細(xì)胞遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變代后傳