PCR及其衍生技術(shù)

1、3（1）反向）反向PCR技術(shù)技術(shù)(Inverse PCR, IPCR)：（2）錨定）錨定PCR技術(shù)技術(shù)(Anchored PCR, APCR)：（ 3）不對(duì)稱）不對(duì)稱PCR技術(shù)技術(shù)(asymmetric PCR)：（ 4）反轉(zhuǎn)錄）反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)技術(shù)(reverse transcription PCR, RT-PCR)：（5）巢式）巢式PCR技術(shù)技術(shù)(NEST-PCR)：（6）多重）多重PCR技術(shù)技術(shù)(multiplex PCR)：（7）重組）重組PCR技術(shù)：技術(shù)：（8）原位）原位PCR技術(shù)：技術(shù)： （9）熒光定量實(shí)時(shí)）熒光定量實(shí)時(shí)PCR技術(shù)技術(shù) 技術(shù)技術(shù) （1）反向）反向PCR技術(shù)技術(shù)(In

2、verse PCR, IPCR)：反向反向PCR是克隆已知序列旁側(cè)序列的一是克隆已知序列旁側(cè)序列的一種方法。種方法。一種在已知序列中無 切點(diǎn)的限制性內(nèi)切酶消化基因組DNA。酶切片段自身環(huán)化。以環(huán)化的DNA作為模板，用一對(duì)與已知序列兩端特異性結(jié)合的引物，擴(kuò)增夾在中間的未知序列。 擴(kuò)增產(chǎn)物是線性的DNA片段，大小取決于上述限制性內(nèi)切酶在已知基閑側(cè)翼DNA序列內(nèi)部的酶切位點(diǎn)分布情況。用不同的限制性內(nèi)切酶消化，可以得到大小不同的模板DNA，再通過反向PCR獲得未知片段 。cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)（rapid amplification of cDNA ends，RACE） 通過通過RT-PCR技術(shù)由已

3、知部分技術(shù)由已知部分cDNA序列來得到序列來得到完整的完整的cDNA5和和3端，包括單邊端，包括單邊PCR和錨定和錨定PCR。1.基于蛋白質(zhì)保守性的兼并引物的設(shè)計(jì)及基于蛋白質(zhì)保守性的兼并引物的設(shè)計(jì)及ORF保守區(qū)保守區(qū)RT-PCR克?。豢寺?；2. 3-RACE3. 5-RACE1.基于蛋白質(zhì)保守性的兼并引物的設(shè)計(jì)及基于蛋白質(zhì)保守性的兼并引物的設(shè)計(jì)及ORF保守區(qū)保守區(qū)RT-PCR克隆；克?。?利用ncbi搜索不同物種中同一目的基因的蛋白或cDNA編碼的氨基酸序列因?yàn)槊艽a子的關(guān)系，不同的核酸序列可能表達(dá)的氨基酸序列是相同的，所以氨基酸序列才是真正保守的。 對(duì)所找到的序列進(jìn)行多序列對(duì)。 確定合適的保守區(qū)域 設(shè)計(jì)簡并引物至少需要上下游各有一個(gè)保守區(qū)域，且兩個(gè)保守區(qū)域相距50 400個(gè)aa為宜，使得pcr產(chǎn)物在1501200bp之間，最重要的是每一個(gè)保守區(qū)域至少有6個(gè)aa殘基，因?yàn)槊織l引物至少18bp左右。利用軟件設(shè)計(jì)引物 RAG，YCT，MAC，KGT，SCG，W AT，H ACT，B CGT，ACG， DA/G