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文檔簡介

1、專題1 傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用本專題圍繞傳統(tǒng)發(fā)酵食品的制作展開,主要操作技術歸納如下。1. 果酒與果醋的制作技術。2. 腐乳的制作技術。3. 泡菜的腌制與亞硝酸鹽含量的測定。課題1 果酒和果醋的制作一、基礎知識(一)果酒制作的原理知識要點:1. 酵母菌的兼性厭氧生活方式;2.發(fā)酵需要的適宜條件;3.傳統(tǒng)發(fā)酵技術所使用的酵母菌的來源。(二)果醋制作的原理知識要點:1.酒變醋的原理;2.控制發(fā)酵條件的作用;3.制醋所利用的醋酸菌的來源。二、課題成果評價(一)果酒的制作是否成功發(fā)酵后取樣,通過嗅味和品嘗進行初步鑒定。此外,還可用顯微鏡觀察酵母菌,并用重鉻酸鉀檢驗酒精的存在。如果實驗結果不理想,請學生分析

2、失敗原因,然后重新制作。(二)果醋的制作是否成功首先通過觀察菌膜的形成、嗅味和品嘗進行初步鑒定,再通過檢測和比較醋酸發(fā)酵前后的pH作進一步的鑒定。此外,還可以通過在顯微鏡下觀察發(fā)酵液中是否有醋酸菌,并統(tǒng)計其數(shù)量作進一步鑒定。三、答案和提示(一)旁欄思考題1.你認為應該先沖洗葡萄還是先除去枝梗?為什么?答:應該先沖洗,然后再除去枝梗,以避免除去枝梗時引起葡萄破損,增加被雜菌污染的機會。2.你認為應該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染?提示:需要從發(fā)酵制作的過程進行全面的考慮。例如,榨汁機、發(fā)酵裝置要清洗干凈;每次排氣時只需擰松瓶蓋、不要完全揭開瓶蓋等。3.制葡萄酒時,為什么要將溫度控制在1825 ?制葡

3、萄醋時,為什么要將溫度控制在3035 ?答:溫度是酵母菌生長和發(fā)酵的重要條件。20 左右最適合酵母菌繁殖。因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌,最適生長溫度為3035 ,因此要將溫度控制在3035 。4.制葡萄醋時,為什么要適時通過充氣口充氣?答:醋酸菌是好氧菌,在將酒精變?yōu)榇姿釙r需要氧的參與,因此要適時向發(fā)酵液中充氣。(二)資料發(fā)酵裝置的設計討論題請分析此裝置中的充氣口、排氣口和出料口分別有哪些作用。為什么排氣口要通過一個長而彎曲的膠管與瓶身連接?結合果酒、果醋的制作原理,你認為應該如何使用這個發(fā)酵裝置?答:充氣口是在醋酸發(fā)酵時連接充氣泵進行充氣用的;排氣口是在酒精發(fā)酵時用

4、來排出CO2的;出料口是用來取樣的。排氣口要通過一個長而彎曲的膠管與瓶身連接,其目的是防止空氣中微生物的污染,其作用類似巴斯德的鵝頸瓶。使用該裝置制酒時,應該關閉充氣口;制醋時,應將充氣口連接氣泵,輸入氧氣。(三)練習2.提示:大規(guī)模生產(chǎn)時需要進行更為全面周詳?shù)目紤],如原料的來源與選擇、菌種的培育與選擇、發(fā)酵的設備、發(fā)酵條件的自動化控制,以及如何嚴格控制雜菌污染;等等。此外,無論是葡萄酒或葡萄醋,實驗時所檢測的發(fā)酵液,并非商品意義上的產(chǎn)品。在實際生產(chǎn)中還需沉淀過濾、滅菌裝瓶等獲得成品酒或醋。葡萄酒還需在一定設施和條件下(如橡木桶和地窖)進行后續(xù)發(fā)酵,以獲得特定的風味和色澤。3.提示:需考慮廠房

5、、設備投資、原材料采購、工人人數(shù)及工資、產(chǎn)品種類、生產(chǎn)周期、銷售渠道、利潤等問題。課題2 腐乳的制作一、基礎知識知識要點:相關的微生物,如毛霉等在腐乳制作中的作用。二、課題成果評價(一)是否完成腐乳的制作學生是否完成腐乳的制作依據(jù)是:能夠合理地選擇實驗材料與用具;前期發(fā)酵后豆腐的表面長有菌絲,后期發(fā)酵制作基本沒有雜菌的污染。(二)腐乳質(zhì)量的評價制作成功的腐乳應該具有以下特點:色澤基本一致、味道鮮美、咸淡適口、無異味、塊形整齊、厚薄均勻、質(zhì)地細膩、無雜質(zhì)。(三) 能否總結不同條件對腐乳風味和質(zhì)量的影響。學生能從鹽、酒的用量、發(fā)酵的溫度、發(fā)酵時間的長短,以及香辛料等因素中的某一因素來說明其對腐乳風

6、味或質(zhì)量的影響。三、答案和提示(一)旁欄思考題1.你能利用所學的生物學知識,解釋豆腐長白毛是怎么一回事?答:豆腐上生長的白毛是毛霉的白色菌絲。嚴格地說是直立菌絲,在豆腐中還有匍匐菌絲。2.王致和為什么要撒許多鹽,將長毛的豆腐腌起來?答:鹽能防止雜菌污染,避免豆腐腐敗。3.我們平常吃的豆腐,哪種適合用來做腐乳?答:含水量為70%左右的豆腐適于作腐乳。用含水量過高的豆腐制腐乳,不易成形。4.吃腐乳時,你會發(fā)現(xiàn)腐乳外部有一層致密的“皮”。這層“皮”是怎樣形成的呢?它對人體有害嗎?它的作用是什么?答:“皮”是前期發(fā)酵時在豆腐表面上生長的菌絲(匍匐菌絲),它能形成腐乳的“體”,使腐乳成形?!捌ぁ睂θ梭w無

7、害。(二)練習1.答:越接近瓶口,雜菌污染的可能性越大,因此要隨著豆腐層的加高增加鹽的用量,在接近瓶口的表面,鹽要鋪厚一些,以有效防止雜菌污染。課題3 制作泡菜并檢測亞硝酸鹽含量一、基礎知識 (一)乳酸菌發(fā)酵知識要點:1. 乳酸菌在自然界的分布;2. 乳酸菌發(fā)酵的原理。(二)亞硝酸鹽知識要點:1.亞硝酸鹽的有關知識;2.我國食品衛(wèi)生標準規(guī)定的亞硝酸鹽含量標準;3.亞硝酸鹽的危害。三、課題成果評價(一)泡菜腌制的質(zhì)量如何可以根據(jù)泡菜的色澤和風味進行初步的評定,還可以在顯微鏡下觀察乳酸菌形態(tài),比較不同時期泡菜壇中乳酸菌的含量。(三)是否進行了及時細致的觀察與記錄在實驗進行過程中,應及時對泡菜中亞硝

8、酸鹽含量進行鑒定,比較不同時期亞硝酸鹽含量的變化及其對泡菜質(zhì)量的影響。三、答案和提示(一)旁欄思考題1.為什么含有抗生素的牛奶不能發(fā)酵成酸奶?答:酸奶的制作依靠的是乳酸菌的發(fā)酵作用??股啬軌驓⑺阑蛞种迫樗峋纳L,因此含有抗生素的牛奶不能發(fā)酵成酸奶。2.為什么日常生活中要多吃新鮮蔬菜,不吃存放時間過長、變質(zhì)的蔬菜?答:有些蔬菜,如小白菜和蘿卜等,含有豐富的硝酸鹽。當這些蔬菜放置過久發(fā)生變質(zhì)(發(fā)黃、腐爛)或者煮熟后存放太久時,蔬菜中的硝酸鹽會被微生物還原成亞硝酸鹽,危害人體健康。3.為什么泡菜壇內(nèi)有時會長一層白膜?你認為這層白膜是怎么形成的?答:形成白膜是由于產(chǎn)膜酵母的繁殖。酵母菌是兼性厭氧微

9、生物,泡菜發(fā)酵液營養(yǎng)豐富,其表面氧氣含量也很豐富,適合酵母菌繁殖。(二)練習2.答:果酒的制作主要利用的是酵母菌的酒精發(fā)酵,果醋的制作利用的是醋酸菌將酒精轉(zhuǎn)變?yōu)榇姿岬拇x,腐乳的制作利用的主要是毛霉分泌的蛋白酶等酶類,泡菜的制作利用的是乳酸菌的乳酸發(fā)酵。傳統(tǒng)發(fā)酵技術都巧妙地利用了天然菌種,都為特定的菌種提供了良好的生存條件,最終的發(fā)酵產(chǎn)物不是單一的組分,而是成分復雜的混合物。專題2 微生物的培養(yǎng)與應用本專題圍繞微生物技術展開,主要技術歸納如下。1.培養(yǎng)基的制備。2.高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌。3.倒平板操作。4.平板劃線操作和稀釋涂布平板法。5.應用選擇培養(yǎng)基分離某種特定的微生物(課題2和課題3)

10、。課題1 微生物的實驗室培養(yǎng)一.知識要點:(一)培養(yǎng)基1.培養(yǎng)基的用途和種類,指出培養(yǎng)基可分為液體和固體兩大類;2.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方;3.盡管培養(yǎng)基的配方各不相同,但是其基本成分都包括水、碳源、氮源和無機鹽。(二)無菌技術知識要點:1.無菌技術的概念;2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別;3.常用的消毒與滅菌的方法,接種環(huán)灼燒滅菌的方法二.課題成果評價(一)培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12 d后無菌落生長,說明培養(yǎng)基的制備是成功的,否則需要重新制備。(二)接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致,并符合大腸桿菌菌落的特

11、點,則說明接種操作是符合要求的;如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落,則說明接種過程中,無菌操作還未達到要求,需要分析原因,再次練習。(三)是否進行了及時細致的觀察與記錄培養(yǎng)12 h與24 h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同,及時觀察記錄的同學會發(fā)現(xiàn)這一點,并能觀察到其他一些細微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學生良好的科學態(tài)度與習慣。三、答案和提示(一)旁欄思考題1.無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外,還有什么目的?答:無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要,請選擇合適的方法。(1) 培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿(2) 玻

12、棒、試管、燒瓶和吸管(3) 實驗操作者的雙手答:(1)、(2)需要滅菌;(3)需要消毒。(二)倒平板操作的討論1.培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到50 左右時,才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度?提示:可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶,感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時,就可以進行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰?答:通過灼燒滅菌,防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后,為什么要將平板倒置?答:平板冷凝后,皿蓋上會凝結水珠,凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高,將平板倒置,既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā),又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,造成污染。4.在倒平板的過程中,如果

13、不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位,這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎?為什么?答:空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生,因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。(三)平板劃線操作的討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)?在劃線操作結束時,仍然需要灼燒接種環(huán)嗎?為什么?答:操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物;每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后,接種環(huán)上殘留的菌種,使下一次劃線時,接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端,從而通過劃線次數(shù)的增加,使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少,以便得到菌落。劃線結束后灼燒接種環(huán),能及時殺死接種環(huán)上殘

14、留的菌種,避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。2.在灼燒接種環(huán)之后,為什么要等其冷卻后再進行劃線?答:以免接種環(huán)溫度太高,殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時,為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線?答:劃線后,線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少,每次從上一次劃線的末端開始,能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少,最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。(四)涂布平板操作的討論涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求,想一想,第2步應如何進行無菌操作?提示:應從操作的各個細節(jié)保證“無菌”。例如,酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒

15、精燈火焰周圍;等等。(五)練習1.提示:可以從微生物生長需要哪些條件的角度來思考。例如,微生物的生長需要水、空氣、適宜的溫度,食品保存可以通過保持干燥、真空的條件,以及冷藏等方法來阻止微生物的生長。2.提示:可以從這三種培養(yǎng)技術的原理、操作步驟等方面分別進行總結歸納。例如,這三種培養(yǎng)技術都需要為培養(yǎng)物提供充足的營養(yǎng),但無土栽培技術的操作并不需要保證無菌的條件,而其他兩種技術都要求嚴格的無菌條件。  課題2  土壤中分解尿素的細菌的分離一.研究思路(一)篩選菌株微生物的選擇培養(yǎng),是指利用培養(yǎng)基的組成使適宜生長的特定微生物得到較快繁殖的技術,也稱為微生物的“選擇培養(yǎng)”

16、。在本課題提供的選擇培養(yǎng)基的配方中,尿素是培養(yǎng)基中的惟一氮源,因此,原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長。但實際上,微生物的培養(yǎng)是一個非常復雜的問題,有些微生物可以利用其他微生物的代謝產(chǎn)物生長繁殖,因此能夠在選擇培養(yǎng)基上生長的微生物不一定是所需要的微生物,還需要進一步的驗證。(二)統(tǒng)計菌落數(shù)目統(tǒng)計菌落數(shù)目的理論依據(jù)是:當樣品的稀釋度足夠高時,培養(yǎng)基表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中的一個活菌。因此,恰當?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計菌落數(shù)目的關鍵。為了保證結果準確,通常將幾個稀釋度下的菌液都涂布在平板上,培養(yǎng)后再選擇菌落數(shù)在30300的平板進行計數(shù)。(三)設置對照A同學的結果與其他同學不同,可能

17、的解釋有兩種。一是由于土樣不同,二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。究竟是哪個原因,可以通過實驗來證明。實驗方案有兩種。一種方案是可以由其他同學用與A同學一樣的土樣進行實驗,如果結果與A同學一致,則證明A無誤;如果結果不同,則證明A同學存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。另一種方案是將A同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng),作為空白對照,以證明培養(yǎng)基是否受到污染。通過這個事例可以看出,實驗結果要有說服力,對照的設置是必不可少的。二.課題成果評價(一)培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落對照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長,說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇

18、培養(yǎng)基的數(shù)目,說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。(二)樣品的稀釋操作是否成功如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30300的平板,則說明稀釋操作比較成功,并能夠進行菌落的計數(shù)。三.練習2.提示:反芻動物的瘤胃中含有大量的微生物,其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌,接觸空氣后會死亡,因此分離其中能分解尿素的微生物除了需要準備選擇培養(yǎng)基外,還應參照厭氧菌的培養(yǎng)方法進行實驗設計. 課題3  分解纖維素的微生物的分離一.基礎知識(一) 纖維素與纖維素酶知識要點: 1.纖維素在生物圈的分布;2.纖維素酶的作用。(二)纖維素分解菌的篩選知識要點: 1.剛果紅染色法;2

19、.剛果紅染色法的原理。二、課題成果評價(一)培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落:對照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長則說明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落,則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。(二)分離的結果是否一致:由于在土壤中細菌的數(shù)量遠遠高于真菌和放線菌的數(shù)量,因此最容易分離得到的是細菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同,學生也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結果。三、答案和提示(一)旁欄思考題1.本實驗的流程與課題2中的實驗流程有哪些異同?答:本實驗流程與課題2的流程的區(qū)別如下。課題2是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為惟一氮源的選擇性培養(yǎng)基上,直接分離得到菌落。本課

20、題通過選擇培養(yǎng),使纖維素分解菌得到增殖后,再將菌液涂布在選擇培養(yǎng)基上。其他步驟基本一致。2.為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌?答:由于生物與環(huán)境的相互依存關系,在富含纖維素的環(huán)境中,纖維素分解菌的含量相對提高,因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。3.將濾紙埋在土壤中有什么作用?你認為濾紙應該埋進土壤多深?答:將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚集,實際上是人工設置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應將紙埋于深約10 cm左右腐殖土壤中。4.想一想,這兩種方法各有哪些優(yōu)點與不足?你打算選用哪一種方法?兩種剛果紅染色法的比較方法一是傳統(tǒng)的方法,缺點是操作繁瑣,加入剛果紅

21、溶液會使菌落之間發(fā)生混雜;其優(yōu)點是這樣顯示出的顏色反應基本上是纖維素分解菌的作用。方法二的優(yōu)點是操作簡便,不存在菌落混雜問題,缺點是由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì),可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊,因為培養(yǎng)基中纖維素占主要地位,因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。方法二的另一缺點是:有些微生物具有降解色素的能力,它們在長時間培養(yǎng)過程中會降解剛果紅形成明顯的透明圈,與纖維素分解菌不易區(qū)分。5.為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物?答:在選擇培養(yǎng)的條件下,可以使那些能夠適應這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖,而那些不適應這種營

22、養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制,因此可以起到“濃縮”的作用。(二)練習2.答:流程圖表示如下。土壤取樣選擇培養(yǎng)(此步是否需要,應根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定)梯度稀釋將菌懸液涂布到有特定選擇作用的培養(yǎng)基上挑選單菌落發(fā)酵培養(yǎng)專題3 植物的組織培養(yǎng)技術本專題圍繞植物組織培養(yǎng)的基本技術展開,主要技術歸納如下。1.培養(yǎng)基的制備2.外植體消毒3.接種4.培養(yǎng)5.移栽6.栽培課題1  菊花的組織培養(yǎng)一、基礎知識(一)植物組織培養(yǎng)的基本過程知識要點:1.細胞分化的概念;2.離體植物細胞的脫分化和再分化。(二)影響植物組織培養(yǎng)的因素知識要點:影響植物組織培養(yǎng)的因素有培養(yǎng)基配制、外植體的選取、消毒、

23、接種、培養(yǎng)、移栽和栽培等。二、注意事項(一)無菌技術是植物組織培養(yǎng)能否獲得成功的關鍵植物組織培養(yǎng)不同于扦插、分根、葉插等常規(guī)無性繁殖。由于植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,所以對培養(yǎng)條件的要求較高,對無菌操作的要求非常嚴格。如果不小心引起污染,將可能造成培養(yǎng)工作的前功盡棄。無菌技術包括培養(yǎng)基消毒滅菌和植物材料(外植體)的消毒滅菌。對培養(yǎng)材料進行表面滅菌時,一方面要考慮藥劑的消毒效果;另一方面還要考慮植物材料的耐受能力。不同藥劑、不同植物材料,甚至不同器官要區(qū)別對待。(二)妥善處理被污染的培養(yǎng)物 即使對于有經(jīng)驗的操作人員,操作后出現(xiàn)培養(yǎng)物被污染的情況也常有。一般情況下,細菌污

24、染可能是由接種人員造成的,如未戴口罩,接種時說話,或手及器械消毒不嚴等。真菌污染可能是植物材料滅菌不當。需要特別注意的是,一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)材料被污染,特別是真菌性污染,一定不要打開培養(yǎng)瓶。應先將所有被污染的培養(yǎng)瓶統(tǒng)一放在高壓蒸汽鍋內(nèi)進行高壓蒸汽滅菌,然后再打開培養(yǎng)瓶,進行清洗。(三)有毒藥品的用后處理外植體滅菌用過的有毒藥品要妥善處理(如氯化汞等),以免引起環(huán)境污染。一般應收集后統(tǒng)一交給有關專業(yè)部門處理。三、課題成果評價(一)對接種操作中污染情況的分析接種34 d后,在接種操作中被雜菌污染的培養(yǎng)物會表現(xiàn)出被污染的現(xiàn)象。請學生適時統(tǒng)計污染率,分析接種操作是否符合無菌要求。(二)是否完成了對植物組織的

25、脫分化和再分化觀察實驗結果,看看是否培養(yǎng)出了愈傷組織,記錄多長時間長出愈傷組織。統(tǒng)計更換培養(yǎng)基后愈傷組織進一步分化成根和芽的比例和時間。(三)是否進行了統(tǒng)計、對照與記錄做好統(tǒng)計和對照,填好結果記錄表,培養(yǎng)嚴謹?shù)目茖W態(tài)度。從實驗的第一步開始就要做好實驗記錄,可以分組配制不同培養(yǎng)基,如誘導愈傷或直接分化叢芽的培養(yǎng)基,然后做不同配方的比較。(四)生根苗的移栽是否合格生根苗移栽技術的關鍵是既要充分清洗根系表面的培養(yǎng)基,又不能傷及根系。一般使用無土栽培的辦法。培養(yǎng)基質(zhì)要提前消毒,可以向培養(yǎng)基質(zhì)噴灑質(zhì)量分數(shù)為5%的高錳酸鉀,并用塑料薄膜覆蓋12 h。掀開塑料薄膜后24 h才能移栽。新移栽的組培苗要在溫室過

26、渡幾天,等壯苗后再定植大田或進行盆栽。統(tǒng)計自己移栽的成活率,看看移栽是否合格。四、答案和提示(一)旁欄思考題1.你能說出各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎?同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比,MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同?答:微量元素和大量元素提供植物細胞生活所必需的無機鹽;蔗糖提供碳源,同時能夠維持細胞的滲透壓;甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同,MS培養(yǎng)基則需提供大量無機營養(yǎng),無機鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。2.你打算做幾組重復?你打算設置對照實驗嗎?答:可以生分組,做不

27、同的材料或配方,最后分別匯報成果。但每種材料或配方至少要做一組以上的重復。設置對照實驗可以取用一個經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶,與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng),用以說明培養(yǎng)基制作合格,沒有被雜菌污染。(二)練習1.答:植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,對培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長,如一些細菌、真菌等的生長。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染,就會導致實驗前功盡棄,因此要進行嚴格的無菌操作。2.答:外植體的生理狀態(tài)是成功進行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長旺盛的嫩枝生理狀況好,容易誘導脫分化和再分化。課題2 月季的花藥培養(yǎng)一、基礎知識(一)被子植物的花粉

28、發(fā)育知識要點:1.花粉是單倍體生殖細胞;2.花粉的發(fā)育要經(jīng)歷不同的時期。(二)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑知識要點:花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑。(三)影響花藥培養(yǎng)的因素知識要點:選取適宜的材料和培養(yǎng)基組成是花粉植株誘導成功的關鍵。二、課題成果評價(一)選材是否恰當選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關鍵。學生應學會通過顯微鏡觀察處于適宜發(fā)育期的花粉。(二)無菌技術是否過關如果出現(xiàn)了污染現(xiàn)象,說明某些操作步驟,如培養(yǎng)基滅菌、花蕾消毒或接種等有問題。(三)接種是否成功如果接種的花藥長出愈傷組織或釋放出胚狀體,花藥培養(yǎng)的第一步就成功了。要適時轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基,以便愈傷組織或胚狀體進一步分化成再生植株。三、答案和提示

29、(一)旁欄思考題 為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難?答:花瓣松動后,微生物就可能侵入到花藥,給材料的消毒帶來困難。(二)練習1.答:F2代紫色甜玉米的基因型組成可能為Aasusu或AAsusu。如果運用常規(guī)育種方法,將F2代中的紫色甜玉米與白色甜玉米(aasusu)進行測交,可以選擇出基因型為AAsusu純種紫色甜玉米。但這種方法比較繁瑣,耗時也較長,需要至少三年的選種和育種時間。如果利用花藥培養(yǎng)的技術,在F1代產(chǎn)生的花粉中就可能有Asu的組合,再將花粉植株進行染色體加倍,就可以直接得到紫色甜玉米的純合體(AAsusu)。這種方法可以大大縮短育種周期。2.答:植物組織培養(yǎng)技術與花

30、藥培養(yǎng)技術的相同之處是:培養(yǎng)基配制方法、無菌技術及接種操作等基本相同。兩者的不同之處在于:花藥培養(yǎng)的選材非常重要,需事先摸索時期適宜的花蕾;花藥裂開后釋放出的愈傷組織或胚狀體也要及時更換培養(yǎng)基;花藥培養(yǎng)對培養(yǎng)基配方的要求更為嚴格。這些都使花藥培養(yǎng)的難度大為增加。專題5 DNA和蛋白質(zhì)技術課題1  DNA的粗撮與鑒定技術一、基礎知識知識要點:1.DNA的物理化學性質(zhì),尤其是DNA的溶解性;2.二苯胺法鑒定DNA的方法和原理。分析插圖5-1“DNA在NaCl溶液中的溶解度曲線”,理解:在NaCl溶液濃度低于0.14 mol/L時,DNA的溶解度隨NaCl溶液濃度的增加而逐漸降低;在0.1

31、4 mol/L時,DNA溶解度最小;當NaCl溶液濃度繼續(xù)增加時,DNA的溶解度又逐漸增大。利用上述原理,可以將DNA溶于高濃度的NaCl溶液中,使其與其他物質(zhì)分開。2認識DNA和蛋白質(zhì)對酶、高溫和洗滌劑的耐受性的不同。教材在實驗設計中關于去除濾液中雜質(zhì)的第二、第三個方案,正是利用了上述不同的特性,從而達到分離DNA和蛋白質(zhì)的目的。3用二苯胺法鑒定DNA的方法二、課題成果評價(一)是否提取出了DNA觀察你提取的DNA顏色,如果不是白色絲狀物,說明DNA中的雜質(zhì)較多;二苯胺鑒定出現(xiàn)藍色說明實驗基本成功,如果不呈現(xiàn)藍色,可能所提取的DNA含量低,或是實驗操作中出現(xiàn)錯誤,需要重新制備。(二)分析DN

32、A中的雜質(zhì)本實驗提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。(三)不同實驗方法的比較對于不同的實驗方法,本課題可以采用分組的方法進行研究。首先選取不同的實驗材料,其次同種材料還可以采用不同方法,從多方面比較實驗結果,如DNA的純度、DNA的顏色、二苯胺顯色的深淺等,看看哪種實驗材料、哪種提取方法的效果更好。三、答案和提示(一)旁欄思考題1為什么加入蒸餾水能使雞血細胞破裂?答:蒸餾水對于雞血細胞來說是一種低滲液體,水分可以大量進入血細胞內(nèi),使血細胞脹裂,再加上攪拌的機械作用,就加速了雞血細胞的破裂(細胞膜和核膜的破裂),從而釋放出DNA。2加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么?答:洗滌劑是一

33、些離子去污劑,能溶解細胞膜,有利于DNA的釋放;食鹽的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解。3如果研磨不充分,會對實驗結果產(chǎn)生怎樣的影響?答:研磨不充分會使細胞核內(nèi)的DNA釋放不完全,提取的DNA量變少,影響實驗結果,導致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍色等。4此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細胞成分?答:可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)。5為什么反復地溶解與析出DNA,能夠去除雜質(zhì)?答:用高鹽濃度的溶液溶解DNA,能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì);用低鹽濃度使DNA析出,能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此,通過反復溶解與析出DNA,就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。6方案二與方案三

34、的原理有什么不同?答:方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白,從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開;方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同,從而使蛋白質(zhì)變性,與DNA分離。(二)練習1答:提取DNA的第一步是材料的選取,其目的是一定要選取DNA含量較高的生物材料,否則會由于實驗過程中或多或少的損失而造成檢測的困難;第二步是DNA的釋放和溶解,這一步是實驗成功與否的關鍵,要盡可能使細胞內(nèi)的DNA全部溶解;第三步是DNA的純化,即根據(jù)DNA的溶解特性、對酶及高溫的耐受性的不同等特性,最大限度地將DNA與雜質(zhì)分開;最后一步是對DNA進行鑒定,這是對整個實驗的結果的檢測。2答:提取蛋白質(zhì)比提取DNA的難度大

35、。這是因為,與DNA相比,蛋白質(zhì)對溫度、鹽濃度、pH等條件要敏感得多,很容易失活;并且蛋白質(zhì)的空間結構多種多樣,理化性質(zhì)各不相同,使得蛋白質(zhì)的提取沒有一種統(tǒng)一的方法,只能根據(jù)特定蛋白質(zhì)的特性摸索提取的條件,設計特定的方法。專題6 植物有效萬分的提取本專題圍繞植物有效成分的提取展開,主要操作技術歸納如下。1.蒸餾法。2.壓榨法。3.萃取法。課題1 植物芳香油的提取一、基礎知識(一)植物芳香油的來源知識要點:1.植物芳香油的來源和發(fā)展歷史;2.植物芳香油的主要化學成分。(二)植物芳香油的提取方法知識要點:提取植物芳香油的三種基本方法:蒸餾、壓榨和萃取。二、課題成果評價(一)是否提取出了植物精油觀察

36、提取出的玫瑰精油或橘皮精油,從顏色、氣味等方面來評價所提取的精油的純度和質(zhì)量。從玫瑰花提取的芳香油是淺黃色至黃色的液體,并帶有甜韻的玫瑰香;從橘皮提取的橘皮精油無色透明,具有誘人的橘香味。本課題只是對兩種精油進行了初步的提取,其中仍然含有大量的雜質(zhì)。(二)出油率的計算根據(jù)教科書提供的公式計算出油率。如果出油率高,說明實驗方案設計合理;如果出油率低,教師可以幫助學生從實驗方法的選擇、實驗過程的操作等各方面分析原因,改進后再作嘗試。三、答案和提示練習1.答:植物芳香油一般都是由23種芳香油混合調(diào)配而成的,其中的基底油常取自植物的種子或果實,比如胡桃油、甜杏油。基底油與其他芳香油調(diào)配在一起,能夠加強功效。從玫瑰花中提取出的玫瑰油稱為“液體黃金”,是世界香料工業(yè)不可取代的原料,多用于制造高級香水等化妝品。提取出的玫瑰油不含有任何添加劑或化學原料,是純天然的護膚品,具有極好的抗衰老和止癢作用,能夠促進細胞再生、防止肌膚老化、平撫肌

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