植物組織培養(yǎng)與器官培養(yǎng)課件

1、植物離體無性繁殖植物離體無性繁殖 簡稱離體繁殖簡稱離體繁殖（in vitroin vitro propagation propagation)、微微型繁殖型繁殖（micropropagationmicropropagation)，是指利用離體是指利用離體培養(yǎng)技術將來自優(yōu)良植株的莖尖、腋芽、葉培養(yǎng)技術將來自優(yōu)良植株的莖尖、腋芽、葉片、鱗片等器官、組織和細胞進行離體培養(yǎng)，片、鱗片等器官、組織和細胞進行離體培養(yǎng)，并在短期內獲得大量遺傳性一致的植株的方并在短期內獲得大量遺傳性一致的植株的方法（技術）。法（技術）。 用這種方法得到的植株群體稱單株無性系。用這種方法得到的植株群體稱單株無性系。(來自一個單

2、株（或一個單芽），它們遺傳組成相同來自一個單株（或一個單芽），它們遺傳組成相同) 近近400種植物離體繁殖已獲成功。蘭花、無子西瓜、馬鈴薯、種植物離體繁殖已獲成功。蘭花、無子西瓜、馬鈴薯、楊樹等已在種苗生產上廣泛應用。楊樹等已在種苗生產上廣泛應用。植物離體無性繁殖的意義（優(yōu)越性）植物離體無性繁殖的意義（優(yōu)越性）繁殖速度快，經濟效益高繁殖速度快，經濟效益高占用空間小，不受地區(qū)季節(jié)限占用空間小，不受地區(qū)季節(jié)限制，便于工廠化育苗制，便于工廠化育苗可以繁殖各種珍稀、涉危苗木可以繁殖各種珍稀、涉危苗木 離體繁殖周期：離體繁殖周期：13個月個月 繁殖系數(shù)：幾繁殖系數(shù)：幾十幾百倍十幾百倍 又稱快繁又稱快繁

3、離體繁殖是建立在離體繁殖是建立在體細胞系的基礎上，體細胞系的基礎上，是在人工控制的環(huán)是在人工控制的環(huán)境條件下，不會造境條件下，不會造成性狀分離，也不成性狀分離，也不會退化，同時還可會退化，同時還可避免病蟲害的侵染。避免病蟲害的侵染。利于篩選突變體，為育種服務利于篩選突變體，為育種服務手指玫瑰手指玫瑰 由根由根組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)的蒲的蒲公英幼苗公英幼苗植物離體無性繁殖的方式植物離體無性繁殖的方式 器官發(fā)生型器官發(fā)生型(organogenesis type)(organogenesis type) 胚狀體發(fā)生型胚狀體發(fā)生型(embryogenesis type)(embryogenesis type

4、) 不定芽型（不定芽型（adventitious bud type)adventitious bud type) 器官型器官型(organ type)(organ type) 原球莖型原球莖型(protocorm type)(protocorm type) 球莖芽型球莖芽型 塊莖型塊莖型 鱗莖型鱗莖型 孢子型孢子型 根莖型根莖型 微枝扦插型微枝扦插型 器官發(fā)生型器官發(fā)生型(organogenesis type)(organogenesis type)： 誘導器官外植體產生誘導器官外植體產生愈傷組織愈傷組織，經分化培，經分化培養(yǎng)形成芽、根再生成植株的方式。養(yǎng)形成芽、根再生成植株的方式。 技術關鍵

5、：外植體誘導產生的愈傷組織要早技術關鍵：外植體誘導產生的愈傷組織要早期挑選，使其來源盡量一致。期挑選，使其來源盡量一致。 特點：繁殖速度快；培養(yǎng)經愈傷組織階段再特點：繁殖速度快；培養(yǎng)經愈傷組織階段再生成植株，遺傳性不穩(wěn)定，易產生變異。生成植株，遺傳性不穩(wěn)定，易產生變異。蘆薈、煙草、油菜等蘆薈、煙草、油菜等 無菌母株制備無菌母株制備增殖、分化增殖、分化植株再生及鑒定植株再生及鑒定煉苗和移植煉苗和移植器官發(fā)生型器官發(fā)生型基本程序基本程序培養(yǎng)基中激素配比培養(yǎng)基中激素配比激素種類及濃度激素種類及濃度基本培養(yǎng)基組成基本培養(yǎng)基組成滲透壓滲透壓逐步過渡逐步過渡培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)基篩選材料滅菌材料滅菌胚狀體發(fā)生型

6、胚狀體發(fā)生型(embryogenesis type)(embryogenesis type)： 指植物器官、組織和細胞外植體經培養(yǎng)脫指植物器官、組織和細胞外植體經培養(yǎng)脫分化形成胚狀體再成苗的方式。分化形成胚狀體再成苗的方式。 技術關鍵：提高不同外植體胚狀體發(fā)生及技術關鍵：提高不同外植體胚狀體發(fā)生及萌發(fā)率和提高胚狀體同步化率。萌發(fā)率和提高胚狀體同步化率。 特點：胚狀體發(fā)生數(shù)量多、速度快、結構特點：胚狀體發(fā)生數(shù)量多、速度快、結構完整，繁殖系數(shù)高；遺傳性穩(wěn)定。完整，繁殖系數(shù)高；遺傳性穩(wěn)定。甘蔗、胡蘿卜、石刁柏等甘蔗、胡蘿卜、石刁柏等 不定芽型（不定芽型（adventitious bud type)a

7、dventitious bud type)： 選取具有頂芽和腋芽的短枝選取具有頂芽和腋芽的短枝無菌培養(yǎng)，誘導芽萌發(fā)成苗無菌培養(yǎng)，誘導芽萌發(fā)成苗或增殖產生許多不定芽發(fā)育或增殖產生許多不定芽發(fā)育成苗，將新萌生的枝條再轉成苗，將新萌生的枝條再轉接繼代，重復芽到苗的增殖接繼代，重復芽到苗的增殖過程，最后使其生根形成植過程，最后使其生根形成植株的方式。株的方式。 技術關鍵：打破頂端優(yōu)勢，技術關鍵：打破頂端優(yōu)勢，促使腋芽增殖并促其生根。促使腋芽增殖并促其生根。 特點：繁殖率高、保持物種特點：繁殖率高、保持物種的遺傳穩(wěn)定性，多用于林木的遺傳穩(wěn)定性，多用于林木的繁殖。的繁殖。FLash器官型器官型(organ

8、 type)(organ type) 指直接從莖、葉、鱗片等外植體上誘導不指直接從莖、葉、鱗片等外植體上誘導不定芽或帶芽的休眠器官（如小鱗莖、小球定芽或帶芽的休眠器官（如小鱗莖、小球莖、小塊莖）產生再生成植株的方式。莖、小塊莖）產生再生成植株的方式。 技術關鍵：對培養(yǎng)基要求高，控制好激素技術關鍵：對培養(yǎng)基要求高，控制好激素濃度，避免愈傷組織發(fā)生。濃度，避免愈傷組織發(fā)生。 優(yōu)點：繁殖率高，速度較快；遺傳性穩(wěn)定。優(yōu)點：繁殖率高，速度較快；遺傳性穩(wěn)定。三倍體無籽西瓜、甘蔗、香蕉、香石竹、三倍體無籽西瓜、甘蔗、香蕉、香石竹、絲石竹等絲石竹等 原球莖型原球莖型(protocorm type)(proto

9、corm type) 蘭屬特有的方式，蘭屬特有的方式，即外植體經培養(yǎng)即外植體經培養(yǎng)產生原球莖，再產生原球莖，再直接長成植株。直接長成植株。球莖芽型葉柄表面產生圓球形小突起球莖芽，一端出芽一端出根遺傳性較穩(wěn)定，球莖芽可直接放入土中種植觀葉海棠球莖芽型葉柄表面產生圓球形小突起球莖芽，一端出芽一端出根遺傳性較穩(wěn)定，球莖芽可直接放入土中種植觀葉海棠球莖芽型葉柄表面產生圓球形小突起球莖芽，一端出芽一端出根遺傳性較穩(wěn)定，球莖芽可直接放入土中種植觀葉海棠球莖芽型葉柄表面產生圓球形小突起球莖芽，一端出芽一端出根遺傳性較穩(wěn)定，球莖芽可直接放入土中種植觀葉海棠球莖芽型葉柄表面產生圓球形小突起球莖芽，一端出芽一端出

10、根遺傳性較穩(wěn)定，球莖芽可直接放入土中種植觀葉海棠球莖芽型葉柄表面產生圓球形小突起球莖芽，一端出芽一端出根遺傳性較穩(wěn)定，球莖芽可直接放入土中種植觀葉海棠球莖芽型葉柄表面產生圓球形小突起球莖芽，一端出芽一端出根遺傳性較穩(wěn)定，球莖芽可直接放入土中種植觀葉海棠球莖芽型球莖芽型 葉柄表面產生圓球形小突起葉柄表面產生圓球形小突起球莖芽，球莖芽，一端出芽一端出根一端出芽一端出根 遺傳性較穩(wěn)定，球莖芽可直接放入遺傳性較穩(wěn)定，球莖芽可直接放入土中種植土中種植 唐唐菖菖蒲蒲觀觀葉葉海海棠棠塊莖型塊莖型 葉片或葉柄上形成粒狀芋塊，進一步分葉片或葉柄上形成粒狀芋塊，進一步分化出芽和根化出芽和根 塊莖芽可為繁殖系母體，

11、不斷切割繁殖塊莖芽可為繁殖系母體，不斷切割繁殖移栽，成活率高移栽，成活率高 。 花葉芋花葉芋 鱗莖型鱗莖型 鱗片近軸面或邊緣直接形成帶根的小鱗莖鱗片近軸面或邊緣直接形成帶根的小鱗莖 在試管內形成小鱗莖需較長時間在試管內形成小鱗莖需較長時間 百合百合 郁金香郁金香孢子型孢子型 用成熟或未成熟的孢子進行培養(yǎng)用成熟或未成熟的孢子進行培養(yǎng) 孢子繁殖最困難的是表面消毒，萌發(fā)時孢子繁殖最困難的是表面消毒，萌發(fā)時間較長間較長 地錢地錢狼尾蕨狼尾蕨根莖型根莖型 蕨類具有橫向的莖及直立的短根莖，為蕨類具有橫向的莖及直立的短根莖，為組織培養(yǎng)的最佳外植體組織培養(yǎng)的最佳外植體 根狀莖上產生蕨葉及根，繁殖速度較孢根狀莖

12、上產生蕨葉及根，繁殖速度較孢子型快子型快 腎蕨等腎蕨等 微枝扦插型微枝扦插型 帶芽的小插條在試管內進行無菌扦插帶芽的小插條在試管內進行無菌扦插 為木本植物進行快速繁殖的主要方式為木本植物進行快速繁殖的主要方式 葡萄、楊樹葡萄、楊樹 3.1.3 培養(yǎng)基3.1.3.1 無機鹽無機鹽無機鹽培養(yǎng)基的組成培養(yǎng)基的組成3.1.3.1 無機鹽3.1.3.2有機物有機物 氨基酸類氨基酸類 重要的有機氮源重要的有機氮源 維生素類維生素類 以輔酶形式參與植物細胞代以輔酶形式參與植物細胞代謝活動，對生長、分化具有很好的促進謝活動，對生長、分化具有很好的促進作用作用 vb1， vb6 糖類糖類 主要的碳源主要的碳源蔗

13、糖？蔗糖？ 天然有機添加物類天然有機添加物類 CM（椰乳）、馬（椰乳）、馬鈴薯汁、酵母提取液（鈴薯汁、酵母提取液（YE）、番茄汁等）、番茄汁等蔗糖濃度分別為蔗糖濃度分別為0 0、1%1%、5%5%3.1.3.3 調節(jié)物質（一）生長素類（一）生長素類 促進細胞伸長生長和分裂、促進細胞伸長生長和分裂、誘導愈傷組織形成、促進生根，與一定量的誘導愈傷組織形成、促進生根，與一定量的細胞分裂素配合可誘導不定芽的分化、側芽細胞分裂素配合可誘導不定芽的分化、側芽的萌發(fā)與生長、胚狀體的產生等。的萌發(fā)與生長、胚狀體的產生等。常用的有常用的有2,4-D2,4-D、NAANAA、IBAIBA、IAAIAAIAAIAA

14、為天然植物生長素，見光易分解，高溫高壓為天然植物生長素，見光易分解，高溫高壓易受破壞；易受破壞；2,4-D2,4-D有抑制芽形成的作用，一般用于細胞啟動有抑制芽形成的作用，一般用于細胞啟動脫分化階段；脫分化階段；誘導分化則用誘導分化則用NAANAA、NBANBA或或IAAIAA。IBAIBA誘導生根效誘導生根效果最好。果最好。（二）細胞分裂素類（二）細胞分裂素類 促進細胞分裂、誘導愈傷組織或器官分化促進細胞分裂、誘導愈傷組織或器官分化不定芽、解除頂端優(yōu)勢而促進側芽增殖、不定芽、解除頂端優(yōu)勢而促進側芽增殖、抑制離體組織或器官衰老。抑制離體組織或器官衰老。 常用的有常用的有6-BA、 KT 、 Z

15、T6-BA6-BABA分別為分別為0, 0.1, 5mg/LNAA分別為分別為0, 0.1, 5mg/L（三）赤霉素類（三）赤霉素類 主要應用主要應用GA3，促進體細胞胚發(fā)育成小植，促進體細胞胚發(fā)育成小植株，株，GA3不耐熱，水溶解后不穩(wěn)定，應采不耐熱，水溶解后不穩(wěn)定，應采用過濾除菌，并用酒精溶解。用過濾除菌，并用酒精溶解。 脫落酸脫落酸 抑制蛋白質合成，抵消和抑制上述三種激抑制蛋白質合成，抵消和抑制上述三種激素發(fā)揮作用；誘導休眠、促進衰老和脫落。素發(fā)揮作用；誘導休眠、促進衰老和脫落。 乙烯乙烯3.1.3.4 植物細胞工程培養(yǎng)基配制植物細胞工程培養(yǎng)基配制 培養(yǎng)基母液的配制培養(yǎng)基母液的配制 大量

16、元素一般配成大量元素一般配成10倍濃度的母液；倍濃度的母液； 微量元素和有機營養(yǎng)常配成微量元素和有機營養(yǎng)常配成100倍濃度的母液；倍濃度的母液； 混合定容時，注意藥劑的添加順序及稀釋度，以混合定容時，注意藥劑的添加順序及稀釋度，以免沉淀；免沉淀； 生長調節(jié)類物質不溶于水生長調節(jié)類物質不溶于水,需用不同溶劑進行溶解需用不同溶劑進行溶解 單獨配制的試劑：單獨配制的試劑： 鐵鹽與鐵鹽與EDTA CaCl2 前前P28以以KNO3為例為例1L培養(yǎng)基需要量為培養(yǎng)基需要量為19g。在配制母液時，增加在配制母液時，增加10倍量，為倍量，為190g。在母液中的濃度為在母液中的濃度為190g/L，即，即0.19

17、g/ml在配制培養(yǎng)基時，取在配制培養(yǎng)基時，取10ml，10ml0.19g/ml=19g回回P263.1.3.4 植物細胞工程培養(yǎng)基配制植物細胞工程培養(yǎng)基配制 培養(yǎng)基配制過程培養(yǎng)基配制過程 藥品藥品 按順序混合按順序混合 pHpH調整調整 加熱溶解加熱溶解 器皿器皿 水洗水洗 干燥干燥 分裝培養(yǎng)基分裝培養(yǎng)基 加塞加塞 冷卻冷卻 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 3.1.3.5 常用培養(yǎng)基 到目前研制開發(fā)了數(shù)十種適宜不同植物、到目前研制開發(fā)了數(shù)十種適宜不同植物、不同組織、不同細胞生長發(fā)育的培養(yǎng)基不同組織、不同細胞生長發(fā)育的培養(yǎng)基配方。但多數(shù)培養(yǎng)基配方是在幾種普遍配方。但多數(shù)培養(yǎng)基配方是在幾種普遍應用的培養(yǎng)

18、基上演變而來的。應用的培養(yǎng)基上演變而來的。 這幾種常見的培養(yǎng)基為是：這幾種常見的培養(yǎng)基為是：MS、ER、B5、N6、NT、White等，其配方如下：等，其配方如下：培養(yǎng)基分類培養(yǎng)基分類 根據(jù)培養(yǎng)基無機鹽含量的差異將其分為以根據(jù)培養(yǎng)基無機鹽含量的差異將其分為以下下4類：類：高無機鹽含量培養(yǎng)基（植物器官、花藥、高無機鹽含量培養(yǎng)基（植物器官、花藥、細胞及原生質體培養(yǎng)）；細胞及原生質體培養(yǎng)）；-MS較高硝酸鹽含量培養(yǎng)基（木本、十字花科較高硝酸鹽含量培養(yǎng)基（木本、十字花科和單子葉植物的組織和花藥培養(yǎng)）；和單子葉植物的組織和花藥培養(yǎng)）；-B5中等無機鹽含量培養(yǎng)基（花藥培養(yǎng)）；中等無機鹽含量培養(yǎng)基（花藥培養(yǎng)

19、）；-H低無機鹽含量培養(yǎng)基（生根）。低無機鹽含量培養(yǎng)基（生根）。-WHITE3.1.4 植物組織培養(yǎng)問題分植物組織培養(yǎng)問題分析析3.1.4.13.1.4.1試管苗玻璃化現(xiàn)象（試管苗玻璃化現(xiàn)象（vitrificationvitrification） 是指組織培養(yǎng)過程中的特有的一種生理失是指組織培養(yǎng)過程中的特有的一種生理失調或生理病變，試管苗呈半透明狀外觀形調或生理病變，試管苗呈半透明狀外觀形態(tài)異常的現(xiàn)象。態(tài)異常的現(xiàn)象。 玻璃化苗絕大多數(shù)為玻璃化苗絕大多數(shù)為 來自莖尖或莖段來自莖尖或莖段 培養(yǎng)物的不定芽。培養(yǎng)物的不定芽。 通常玻璃化苗通常玻璃化苗 恢復正常的比例很低，恢復正常的比例很低， 在繼代培

20、養(yǎng)中仍然在繼代培養(yǎng)中仍然 形成玻璃化苗。形成玻璃化苗。玻璃化的解決方法玻璃化的解決方法增加培養(yǎng)基中的溶質水平，以降低培養(yǎng)基的增加培養(yǎng)基中的溶質水平，以降低培養(yǎng)基的水勢；水勢；減少培養(yǎng)基中減少培養(yǎng)基中NH4+濃度；濃度；增加光照；增加光照；增加容器通風，最好進行增加容器通風，最好進行CO2施肥，這對減施肥，這對減輕試管苗玻璃化的現(xiàn)象有明顯的作用；輕試管苗玻璃化的現(xiàn)象有明顯的作用；降低培養(yǎng)溫度，進行變溫培養(yǎng)，有助于減輕降低培養(yǎng)溫度，進行變溫培養(yǎng)，有助于減輕試管苗玻璃化的現(xiàn)象發(fā)生；試管苗玻璃化的現(xiàn)象發(fā)生；降低培養(yǎng)基中細胞分裂素含量，可以考慮加降低培養(yǎng)基中細胞分裂素含量，可以考慮加入適量脫落酸。入適量

21、脫落酸。3.1.4.2 褐變問題褐變問題 成因 酶促-酚氧化成醌及聚合 非酶促-醌聚合 時段 初代培養(yǎng)初代培養(yǎng) 繼代培養(yǎng)繼代培養(yǎng) 選擇合適的外植體選擇合適的外植體 一般來說，最好選擇生長處于旺盛的外一般來說，最好選擇生長處于旺盛的外植體，這樣可以使褐變現(xiàn)象明顯減輕。植體，這樣可以使褐變現(xiàn)象明顯減輕。 合適的培養(yǎng)條件合適的培養(yǎng)條件 無機鹽成分、植物生長物質水平、適宜溫無機鹽成分、植物生長物質水平、適宜溫度、及時繼代培養(yǎng)均可以減輕材料的褐變現(xiàn)象。度、及時繼代培養(yǎng)均可以減輕材料的褐變現(xiàn)象。 使用抗氧化劑使用抗氧化劑 在培養(yǎng)基中，使用半胱氨酸、抗壞血酸等抗在培養(yǎng)基中，使用半胱氨酸、抗壞血酸等抗氧化劑能

22、夠較為有效地避免或減輕很多外植體的褐變現(xiàn)象。氧化劑能夠較為有效地避免或減輕很多外植體的褐變現(xiàn)象。 材料預處理和細胞篩選材料預處理和細胞篩選 使用吸附劑使用吸附劑 0.1%-0.5%0.1%-0.5%的活性炭的活性炭、PVP對防止褐變也有較為對防止褐變也有較為明顯的效果。明顯的效果。 連續(xù)轉移連續(xù)轉移 對容易褐變的材料可間隔對容易褐變的材料可間隔1224h1224h的培養(yǎng)后，再轉的培養(yǎng)后，再轉移到新的培養(yǎng)基上，這樣經過連續(xù)處理移到新的培養(yǎng)基上，這樣經過連續(xù)處理7-l0d7-l0d后，褐變現(xiàn)象便后，褐變現(xiàn)象便會得到控制或大為減輕。會得到控制或大為減輕。減輕褐變現(xiàn)象發(fā)生的方法減輕褐變現(xiàn)象發(fā)生的方法3

23、.1.4.3 微生物污染問題微生物污染問題 原因原因 消毒不徹底消毒不徹底 外植體消毒問題外植體消毒問題 培養(yǎng)基及器皿消毒問題培養(yǎng)基及器皿消毒問題 環(huán)境消毒問題環(huán)境消毒問題 無菌操作不過關無菌操作不過關外植體消毒問題外植體消毒問題 外植體取材外植體取材 外植體外植體(expant)是指用于離體培養(yǎng)的活的是指用于離體培養(yǎng)的活的植物組織。植物組織。來源：來源：外植體消毒問題外植體消毒問題外植體滅菌的過程：外植體滅菌的過程：流水沖洗流水沖洗1020min表面消毒表面消毒無菌水沖洗無菌水沖洗45次次 瀝水待用瀝水待用 Flash常用消毒劑消毒滅菌效果比較常用消毒劑消毒滅菌效果比較消毒劑消毒劑使用濃度使

24、用濃度%去除的難易去除的難易 消毒時間消毒時間min 效果效果次氯酸鈣次氯酸鈣次氯酸鈉次氯酸鈉漂白粉漂白粉溴水溴水過氧化氫過氧化氫升汞升汞酒精酒精抗生素抗生素硝酸銀硝酸銀9102飽和溶液飽和溶液1210120.11707545(mg/L)1易易易易易易易易最易最易較難較難易易中中較難較難5305305302105152100.223060530很好很好很好很好很好很好很好很好好好最好最好好好較好較好好好容器容積容器容積（mL）121下所需的最下所需的最少滅菌時間少滅菌時間( (min）205075250500100015002000152025303540培養(yǎng)基滅菌培養(yǎng)基滅菌 手術刀手術刀 鑷

25、子鑷子 平皿平皿 干熱滅菌干熱滅菌 150-160，2h 環(huán)境消毒問題環(huán)境消毒問題無菌操作問題無菌操作問題評價下列操作正確與否評價下列操作正確與否評價下列操作正確與否評價下列操作正確與否評價下列操作正確與否評價下列操作正確與否評價下列操作正確與否評價下列操作正確與否無菌操作無菌操作 無菌操作前的準備工作無菌操作前的準備工作 無菌操作臺的使用無菌操作臺的使用 操作所用器械應浸泡在操作所用器械應浸泡在95%酒精中，用前需放在酒精中，用前需放在耐熱器皿中加入少量酒精后進行灼燒，每次使用耐熱器皿中加入少量酒精后進行灼燒，每次使用后都要滅菌。后都要滅菌。 無菌操作步驟無菌操作步驟 外植體的適當切割的注意

26、事項外植體的適當切割的注意事項 繼代培養(yǎng)的材料繼代培養(yǎng)的材料( (液體材料、固體材料）液體材料、固體材料）3.1.4.4 其他問題 培養(yǎng)條件控制培養(yǎng)條件控制 激素水平激素水平 光照：時間，強度和光質。光照：時間，強度和光質。 溫度：適溫有利于細胞分裂與分化，而在溫度：適溫有利于細胞分裂與分化，而在一定范圍內降低培養(yǎng)溫度可以使細胞的質一定范圍內降低培養(yǎng)溫度可以使細胞的質量增加；培養(yǎng)基晝夜變溫可能有利于器官量增加；培養(yǎng)基晝夜變溫可能有利于器官的發(fā)生。的發(fā)生。 pH pH 通常使用的通常使用的pHpH值的范圍是值的范圍是5.55.56.56.5。pH4pH77，培養(yǎng)物不能正常生長。，培養(yǎng)物不能正常生

27、長。 氣體氣體激素水平的控制激素水平的控制 生長素應用的濃度范圍為生長素應用的濃度范圍為0.115mg/L。 在細胞脫分化過程中，啟動細胞分裂形在細胞脫分化過程中，啟動細胞分裂形成愈傷組織，以成愈傷組織，以2,4-D最為有效。最為有效。 細胞脫分化需要高濃度的細胞脫分化需要高濃度的2,4-D，當胚性，當胚性細胞形成轉入再分化時，則需較低的細胞形成轉入再分化時，則需較低的2,4-D濃度。濃度。 使用濃度范圍為使用濃度范圍為0.110mg/L。 細胞分裂素既可誘導細胞分裂，又可調節(jié)細細胞分裂素既可誘導細胞分裂，又可調節(jié)細胞分化。胞分化。16h/d24h/d0h/d液體振蕩培養(yǎng)的愈傷組織生長與振蕩頻

28、率的關系液體振蕩培養(yǎng)的愈傷組織生長與振蕩頻率的關系3.2 植物胚胎培養(yǎng)Flash 概念概念花藥培養(yǎng)屬于花藥培養(yǎng)屬于器官培養(yǎng)范疇器官培養(yǎng)范疇花粉培養(yǎng)屬于花粉培養(yǎng)屬于細胞培養(yǎng)范疇細胞培養(yǎng)范疇也稱小孢子培養(yǎng)也稱小孢子培養(yǎng)花藥及花粉培養(yǎng)花藥及花粉培養(yǎng)把發(fā)育到一定階段的花藥接種在人把發(fā)育到一定階段的花藥接種在人工培養(yǎng)基上，使其發(fā)育和分化成植工培養(yǎng)基上，使其發(fā)育和分化成植株的過程株的過程從花藥中分離出花粉粒使之成為分散或游離的狀態(tài)，通過從花藥中分離出花粉粒使之成為分散或游離的狀態(tài)，通過培養(yǎng)使其脫分化并發(fā)育成植株的過程培養(yǎng)使其脫分化并發(fā)育成植株的過程 獲得單倍體植株獲得單倍體植株 花藥培養(yǎng)的基本程序：花藥培

29、養(yǎng)的基本程序： Flash 選處于生殖生長高峰期的花藥，需低選處于生殖生長高峰期的花藥，需低溫預處理（溫預處理（310，210天），天），光照先弱后強。光照先弱后強?；ㄋ幣囵B(yǎng)花藥培養(yǎng)目的及程序目的及程序花粉或小孢子的分離花粉或小孢子的分離花粉或小孢子培養(yǎng)目的及方法花粉或小孢子培養(yǎng)目的及方法目的：獲得單倍體植株目的：獲得單倍體植株 花藥看護培養(yǎng)花藥看護培養(yǎng) 花粉懸浮培養(yǎng)花粉懸浮培養(yǎng) 固液雙層培養(yǎng)固液雙層培養(yǎng)花粉培養(yǎng)方法花粉培養(yǎng)方法3.3 毛狀根培養(yǎng)毛狀根培養(yǎng) 定義：毛狀根定義：毛狀根(hairy roots)是（雙子葉）植株是（雙子葉）植株或組織、器官經發(fā)根農桿或組織、器官經發(fā)根農桿菌（菌（Ag

30、robacterium rhizogenes）感染后，）感染后，形成的類似頭發(fā)一樣的根形成的類似頭發(fā)一樣的根組織。又稱發(fā)狀根。組織。又稱發(fā)狀根。 1934年，年，Hildebrand 報道了發(fā)根農桿菌感報道了發(fā)根農桿菌感染蘋果樹產生發(fā)根染蘋果樹產生發(fā)根 。 毛狀根的特性毛狀根的特性 特性：特性： 毛狀根可以不依賴激素快速生長，根多叢生，毛狀根可以不依賴激素快速生長，根多叢生，多分枝，多根毛，無向地性。多分枝，多根毛，無向地性。 生理生化和遺傳穩(wěn)定。生理生化和遺傳穩(wěn)定。 為什么可以不依賴激素？為什么可以不依賴激素？ 發(fā)根農桿菌的發(fā)根農桿菌的Ri質粒上的質粒上的T-DNA片斷整合進片斷整合進植物細胞核基因組中。植物細胞核基因組中。 T-DNA上有生長素合成基因上有生長素合成基因tms 1 和和tms 2能夠指導能夠指導IAA的合成。的合成。 3.3.1 毛狀根的