檢驗方法的性能驗

1、 根椐美國CLIA,88臨床實驗室質(zhì)量保證文件要求，從保證檢驗質(zhì)量考慮，實驗室在使用新檢測系統(tǒng)作患者標本檢測前，必須在實驗室的具體條件下，用試驗去驗證檢測系統(tǒng)的基本分析性能。只有真正認可了檢測系統(tǒng)的分析性能符合本實驗室及臨床要求，或和廠家的資料一致，才可以用于常規(guī)檢測。 是通過試驗途徑測定并評價方法的性能。如精密度和準確度，在試驗中測定的是不精密度和不準確度，不論不精密度還是不準確度，強調(diào)的都是誤差，評價試驗的過程就是對誤差的測定，因此方法評價的各項試驗是配合各種類型的分析誤差而設(shè)計的。分析誤差類型驗證試驗隨機誤差初步確定重復(fù)性（批內(nèi)） 再現(xiàn)性（批間）恒定誤差干擾方法比對比例誤差回收 1.精密

2、度精密度 2.準確度準確度 3. 不確定度不確定度 4.攜帶污染率攜帶污染率 5.可報告范圍可報告范圍 6.參考區(qū)間參考區(qū)間 7.比對試驗比對試驗 試驗人員必須掌握儀器操作和維護程序、標本準備方法和校準。 對較簡單的設(shè)備需要5天或更少的時間，對較復(fù)雜的多通道設(shè)備需要5天或更長的時間。 在完成儀器熟悉過程后開始實驗并收集數(shù)據(jù)。 評價實驗應(yīng)在操作者完全熟悉實驗過程和評價方案以后進行。 精密度精密度-在規(guī)定條件下獲得的獨立測量結(jié)果之間在規(guī)定條件下獲得的獨立測量結(jié)果之間的接近程度。精密度通常用不精密度表示，不精的接近程度。精密度通常用不精密度表示，不精密度用標準差或變異系數(shù)表示。標準差越大，精密度用標

3、準差或變異系數(shù)表示。標準差越大，精密度越低。密度越低。 精密度的內(nèi)容包括：批內(nèi)、批間精密度。精密度的內(nèi)容包括：批內(nèi)、批間精密度。 批內(nèi)精密度：指在相同條件下（時間、校準、方批內(nèi)精密度：指在相同條件下（時間、校準、方法、操作者、儀器、環(huán)境等）獲得的精密度，即法、操作者、儀器、環(huán)境等）獲得的精密度，即重復(fù)性。重復(fù)性。 批間精密度：是指在一種或幾種條件因素發(fā)生變批間精密度：是指在一種或幾種條件因素發(fā)生變化，但在同一實驗室內(nèi)獲得的精密度，即再現(xiàn)性?；?，但在同一實驗室內(nèi)獲得的精密度，即再現(xiàn)性。 為減少對結(jié)果的影響因素，全部實驗過程中應(yīng)使用同一批號的試劑和校準物。 實驗標本可采用穩(wěn)定的、以蛋白質(zhì)為基質(zhì)、可

4、模擬臨床標本特性的產(chǎn)品，如校準品，質(zhì)控品， 病人標本。必要時，可采用穩(wěn)定的混合冷凍血清,標本量足夠。 選擇標本濃度時應(yīng)接近醫(yī)學決定水平（臨床按照不同病情給予不同處理的指標閾值），一般推薦使用二個或二個以上濃度的標本。 項目 醫(yī)學決定水平 參考范圍123鉀鉀 3.05.87.53.55.3ALT2060300040UREA3.07.114.2 3.6-7.1 一個診斷試驗一般有3個醫(yī)學決定水平，提示需要進一步檢驗的閾值，相當于待診值。提示需要采取治療措施的界值，相當于確診值。提示預(yù)后或需要緊急處理的界值，另外有些指標需要設(shè)立危急值。 參照NCCLS(美國國家臨床實驗室標準委員會) EP5-A文件

5、。 批內(nèi)不精密度：取二個水平的新鮮血清或質(zhì)控血漿，連續(xù)重復(fù)測定20次，計算SD ,CV。 批間不精密度：選擇二個水平的新鮮血清或質(zhì)控血漿，連續(xù)重復(fù)測定20天，計算SD ,CV。 由臨床醫(yī)學家和臨床化學家共同研究制定，既應(yīng)反映臨床應(yīng)用與解釋結(jié)果的要求（稱醫(yī)學效用限度），又應(yīng)基本符合實驗室所能達到的技能狀態(tài)。 ISO15189認可準則不精密度要求：以能力驗證/室間質(zhì)評評價界限作為允許總誤差（TEa），重復(fù)性精密度1/4 TEa,中間精密度1/3TEa.項目1/3TEa 1/4 TEa1/3CLiA88北京市我科室內(nèi)質(zhì)控K3.432.583.0 -5.564.0 -4.176.0 -2.773.60

6、4.0 -1.02Na0.930.70120 1.11130 -1.02150 0.891.90130-0.97CL1.671.2590 -1.67110 -1.671.80110-1.21 準確度：是一次測量結(jié)果與被測量真值的接近程度。它涵蓋正確度和精密度，他往往以不準確度來衡量，不準確度的數(shù)字表達是不確定度。 正確度：大量測得均值與真值的一致程度。是系統(tǒng)誤差分量的度量，以偏倚來表示。偏倚越大，正確度越差。 精密度：在規(guī)定條件下，獨立測試結(jié)果間的一致程度。是隨機誤差分量的度量，以標準差來表示。標準差越大，精密度越低。 從字面上準確度、正確度往往使人困惑，但從實驗誤差理論來解釋就比較容易理解。

7、正確度是系統(tǒng)誤差分量的度量；精密度隨機誤差分量的度量。 要做到準確度高，第一要求正確度高，無偏倚或偏倚小，這就需要由大量測試結(jié)果的平均值與參照值進行比較才能求出，也就是系統(tǒng)誤差小；第二要精密度高，即隨機誤差要小，試驗重復(fù)性好。這樣只有正確度和精密度都高的結(jié)果其準確度才高。 1圖：正確度、精密度都高，因而準確度也高。 2圖：精密度高，正確度不好，存在偏倚，因而準確度不好。 3圖：正確度、精密度都不好，既有系統(tǒng)誤差存在，隨機誤差又很大。 4圖：精密度不好，但正確度好，但離散程度很大，無法保證準確度的可靠性。 通過正確度、精密度這兩個指標，才能完整體現(xiàn)檢測結(jié)果的準確程度。 根據(jù)NCCLS EP9-A

8、2文件，將檢測系統(tǒng)通過具有溯源性的校準品校準后，檢測兩個濃度定值質(zhì)控品，連續(xù)檢測3次取平均值計算其相對偏倚。若相對偏倚%在規(guī)定的允許限制內(nèi)，結(jié)果可接受，其準確度可被認可。 均值-靶值偏倚= - % 靶值 參加室間質(zhì)量評價項目，采用衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)量評價結(jié)果，若年度室間質(zhì)評成績均為合格，取每個項目一年平均偏倚值判斷準確度； 如果沒有參加室間質(zhì)量評價的項目，可選取五份臨床樣本，與其他實驗室進行比對，判斷該實驗的準確性。凝血酶原時間 PT（秒） 樣本編號 我室結(jié)果 靶值 偏倚（% ）201211 11.4 12.0 -5.00 201212 11.5 12.0 -4.17 20121324.2

9、24.10.41 201214 23.8 24.2-1.65 20121546.6 49.3-5.48 表征合理地賦予被測量之值的分散性，與測量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)，稱為測量不確定度。在實際使用中可根據(jù)表示方法分為標準不確定度和擴展不確定度。 標準不確定度：以標準差表示的測量不確定度。 擴展不確定度：確定測量結(jié)果區(qū)間的量，合理賦予被測量之值分布的大部分可望含于此區(qū)間。 通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的比較鏈，使測量結(jié)果或測量標準的值能夠與規(guī)定的參考標準，通常是國家標準或國際標準聯(lián)系起來的特性。 真值（sI單位）決定性方法 一級參考物質(zhì) 參考方法 二級參考物質(zhì) 溯源 廠家常規(guī)方法 校準品 實驗室常

10、規(guī)方法 觀測值 為了結(jié)果更加準確，分析系統(tǒng)應(yīng)具有完整性、有效性和適用性。即試劑、校準品、質(zhì)控品、消耗品應(yīng)配套使用。 使用非配套分析系統(tǒng)的實驗室應(yīng)按照NCCLS-EP9的要求與配套分析系統(tǒng)的結(jié)果進行比對，以驗證分析系統(tǒng)的有效性。 測量不確定度估計值可通過單個分量方差相加合成測量過程多個分量估計值，然后取合成方差的平方根。 U=（批內(nèi)變異的平方+所有定標品不確定度的平方）的平方根。其中選擇醫(yī)學決定水平附近的常規(guī)非溶血標本，（檢測次數(shù)=20）；廠家提供定標品的不確定度與溯源性。 擴展不確定度計算：將不確定度估計為正態(tài)分布，取K=2代表具有95%置信區(qū)間， U=Uc2項目 儀器 定標品 試劑 樣本Uc

11、 校準品Uc 測量UcGLU Olympus AU640生化分析儀 Olympus Olympus 10.111.01TP Olympus AU640生化分析儀 Olympus Olympus 0.56 0.80.98 攜帶污染：由測量系統(tǒng)將一個檢測樣品反應(yīng)攜帶到另一個檢測樣品反應(yīng)的分析物不連續(xù)量，由此錯誤地影響了另一個檢測樣品的反應(yīng)量。 原因:數(shù)十個項目共用試劑針，樣品針，攪拌棒，管道等；使用維護不當，管道污垢積聚；儀器使用時間過長，部件老化沖洗能力降低；試劑組成成分影響前后檢測項目的結(jié)果，檢測項目排列不合理。 攜帶污染率操作： 共檢測29次。 高值血清；生理鹽水；樣本1:1000稀釋后 2

12、計算：鹽水平均值為A，稀釋后樣本均值為B， A 交叉污染率=-100% B*1000 3判斷：0.3%為正常。 操作方法： 1取檢測結(jié)果異常高值血清標本，連續(xù)作3次。 2取檢測結(jié)果低值（在參考區(qū)間下限附近）血清標本，連續(xù)作3次。 3按照下面公式計算攜帶污染率： A1-A3 攜帶污染率=- B3-A3 其中B3代表第3次高值，A1代表第次1低值，A3代表第3次低值。 3評價標準：攜帶污染率10%(廠家標準)。 可報告范圍（線性范圍）：指系統(tǒng)最終的輸出值與被測分析物的濃度成正比的范圍，即測定濃度曲線接近直線的程度，它反映整個系統(tǒng)的輸出特性?？蓤蟾娣秶阜椒ㄖ苯訙y量標本，而不需要任何的稀釋、濃縮或其

13、他預(yù)處理等非通常檢測過程部分。 常規(guī)方法應(yīng)具有較寬的分析范圍，一般覆蓋健康人參考范圍和臨床可能出現(xiàn)的高值。項目標本K血清 115尿 2300Na血清 100200尿 10300cl血清 50200尿 15400MTP腦脊液60300尿6150ALT5400 參考（參考（NCCLS ）EP6-P2文件及相關(guān)文件。文件及相關(guān)文件。 1材料：選取新鮮患者血清標本高值、低值材料：選取新鮮患者血清標本高值、低值各一份，（臨床無法找到高值樣本，也可各一份，（臨床無法找到高值樣本，也可使用高值質(zhì)控血清代替）高值樣本于廠家使用高值質(zhì)控血清代替）高值樣本于廠家說明的線性或線性上限的說明的線性或線性上限的30%，

14、低值于廠，低值于廠家說明的線性低限。全部實驗和數(shù)據(jù)采集家說明的線性低限。全部實驗和數(shù)據(jù)采集應(yīng)在同一工作日內(nèi)完成。應(yīng)在同一工作日內(nèi)完成。 2.制備稀釋物程序：按照下列步驟制備制備稀釋物程序：按照下列步驟制備5份份樣本。樣本。 低濃度低濃度X1 高濃度高濃度X5 中間濃度中間濃度X2：3份份X1+1份份X5 中間濃度中間濃度X3：2份份X1+2份份X5 中間濃度中間濃度X4：1份份X1+3份份X5 3 標本被測物濃度計算：標本被測物濃度計算： X1*V1+X5*V5 被測物濃度被測物濃度= - V1+V5 X樣本濃度，樣本濃度，V為樣本體積為樣本體積 4 方法：每個檢測項目的方法：每個檢測項目的5

15、個不同濃度的樣本分個不同濃度的樣本分別作重復(fù)別作重復(fù)3次計算均值，檢測步驟同臨床標本，次計算均值，檢測步驟同臨床標本，結(jié)果填入記錄表。結(jié)果填入記錄表。理論濃度理論濃度 測定濃度測定濃度 均值均值66666139138138138138278278277279278417410411411411556545546543545 5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計判斷：數(shù)據(jù)統(tǒng)計判斷： 5.1 以理論計算值為以理論計算值為X軸，測定值均值為軸，測定值均值為Y軸作散軸作散點圖。點圖。 5.2 實實 測值與理論值的比較，偏差應(yīng)測值與理論值的比較，偏差應(yīng)10%。 5.2 利用利用NCCLS EP6-A推薦的多項式回歸分析推薦的多

16、項式回歸分析方法判斷統(tǒng)計學標準線性，計算方程方法判斷統(tǒng)計學標準線性，計算方程Y=aX+b,要要求求a=10.05，r0.975，則可直接判斷該測定方，則可直接判斷該測定方法檢測范圍在試驗已涉及范圍。法檢測范圍在試驗已涉及范圍。 參考區(qū)間：是在上、下參考限之間的參考值的分布范圍。依據(jù)參考值的分布和臨床使用要求，選擇合適的統(tǒng)計方法進行歸納分析，確定參考分布中的一部分為參考區(qū)間。通常確定的百分范圍為2.5%97.5%之間。臨床結(jié)果如果在確定的參考區(qū)間內(nèi)，臨床上視為“正?！?；超出參考區(qū)間則視為“異常”。 參考個體參考個體 組成 參考人群參考人群 選定 參考標本參考標本 通過測定獲得 參考值，參考值，

17、計算 參考限參考限 確定 參考區(qū)間參考區(qū)間 確定參考區(qū)間費時費力，希望每一個實驗室都能制定出自身的參考區(qū)間并不現(xiàn)實。所以臨床實驗室越來越依賴于其他實驗室或診斷試劑制造商提供可進行轉(zhuǎn)換的、符合要求的參考值。 常規(guī)化學項目參考區(qū)間來源： 朱麗華主編，王淑娟主審新編簡明醫(yī)學檢驗參考值手冊。 胡亞美，江載芳主編實用兒科學。 第三版臨床檢驗操作規(guī)程 廠家試劑說明書。 選20例參考個體 （能代表本實驗室健康人群，符合相應(yīng)排除、分組標準），對測試結(jié)果進行檢驗，確保其能夠代表具有相同統(tǒng)計學意義的結(jié)果組，即沒有一個結(jié)果為離群值。發(fā)現(xiàn)明顯離群值，要使用新標本進行替換，直至20例測試結(jié)果沒有離群值。 對于特定濃度Y

18、i值的離群點進行檢測時，需將其4個重復(fù)值從大到小排列（Yi-1到Y(jié)i-4）。 計算級差D=Yi-1Yi-4。 若Yi-1可能是離群點，計算D1=（Yi-1Yi-2）/D。 若Yi-4可能是離群點，計算D4= （Yi-3Yi-4）/D。 計算結(jié)果（D1或D4）如果大于0.765（0.05）或0.889（0.01），則該點判為離群點。 20例測試結(jié)果中不超過2個數(shù)值落在（10%的結(jié)果）的檢測值在參考區(qū)間外，則已知的生物參考區(qū)間可以接受；若3例及以上超過界限，再選擇20個參考個體進行驗證，少于或等于2個檢測值超過已知參考限，則已知參考區(qū)間可以接受，若又有3個以上超出參考限，則應(yīng)考慮建立自己的參考區(qū)間

19、。 2011年10月生免組進行生物參考區(qū)間驗證時發(fā)現(xiàn)，檢測項目直接膽紅素有70%不符合，檢測結(jié)果均低于目前提供的參考區(qū)間下限（1.713.2），查閱相關(guān)資料（廠家：3.4；臨床檢驗操作規(guī)程：03.4），發(fā)現(xiàn)原來參考區(qū)間已不適合臨床，故本室根據(jù)相應(yīng)患者群體自行確定參考區(qū)間。 比對試驗是用來檢查系統(tǒng)誤差（偏倚）的有效方法，用于確認同一患者在不同儀器上測定結(jié)果的可比性。 比對試驗啟動：比對試驗用于試劑、校準物批號改變；儀器部件的更換或進行重要維護程序；質(zhì)量控制結(jié)果失?。荒芰︱炞C或室間質(zhì)量評價失敗。 維持可比性涉及儀器標準化和校準，通過數(shù)學轉(zhuǎn)換使得不同測量系統(tǒng)結(jié)果強制一致，或在患者報告中采用清楚地表示

20、不同的參考區(qū)間。 用標準物質(zhì)按與分析樣品的同樣方法進行檢測，結(jié)果采用回歸分析比對。 用標準方法與試驗方法對同一試樣進行比對試驗。 將樣本安排給不同的分析人員同時進行試驗，把他們的試驗結(jié)果進行比對。 將樣本送交其他實驗室進行分析，與自己結(jié)果進行比對。 樣本選擇：新鮮患者樣本是理想材料；具有互通性性的參考物和控制物；用于室間質(zhì)量評價、能力驗證的材料。 濃度要求：分析物濃度具有測量不精密度可靠的估計。多數(shù)實驗室沒有足夠資源監(jiān)測整個分析測量范圍的不精密度，所以可選擇在接近質(zhì)量控制物濃度水平執(zhí)行可比性檢驗。 ISO15189認可準則實驗室內(nèi)分析系統(tǒng)定期比對要求：樣本數(shù)20例，濃度應(yīng)覆蓋測量范圍，應(yīng)包括醫(yī)

21、學決定水平，計算回歸方程，計算在醫(yī)學決定水平下的系統(tǒng)誤差（偏倚）應(yīng)小于1/2TEa. 參考（參考（NCCLS ）EP9文件及相關(guān)文件。文件及相關(guān)文件。 樣本選擇：樣本選擇：40例新鮮血清，覆蓋檢測范例新鮮血清，覆蓋檢測范圍，包括醫(yī)學決定水平，均勻分布。圍，包括醫(yī)學決定水平，均勻分布。 測定步驟：每天選擇測定步驟：每天選擇8份樣本在不同檢測系份樣本在不同檢測系統(tǒng)做雙份測定，即從統(tǒng)做雙份測定，即從18再由再由81分別用分別用兩種順序作兩遍兩種順序作兩遍,最少重復(fù)最少重復(fù)5天天 。 160份數(shù)據(jù)填入記錄表。觀察結(jié)果有無明顯份數(shù)據(jù)填入記錄表。觀察結(jié)果有無明顯的數(shù)據(jù)錯誤，若有明顯異常時，應(yīng)判斷是的數(shù)據(jù)錯誤，若有明顯異常時，應(yīng)判斷是否為離群點。否為離群點。 離群點判斷：需將其離群點判斷：需將其4個重復(fù)值從大到小排列個重復(fù)值從大到小排列（Yi-1到到Y(jié)i-4）。）。 計算級差計算級差D=Yi-1Yi-4。 若若Yi-1可能是離群點，計算：可能是離群點，計算：D1=（Yi-1Yi-2）/D。 若若Yi