酶的非水相催化

1、整理課件1第九章第九章 酶的非水相催化酶的非水相催化整理課件2v酶作為催化劑的優(yōu)點：高效的催化作用、酶作為催化劑的優(yōu)點：高效的催化作用、高度的選擇性高度的選擇性 、反應條件溫和等、反應條件溫和等v酶受到的限制：酶受到的限制： 酶易失活；底物或產(chǎn)物抑酶易失活；底物或產(chǎn)物抑制；通常僅在水溶液中表現(xiàn)出高活性；制；通常僅在水溶液中表現(xiàn)出高活性； 整理課件3水是酶促反應最常用的反應介質(zhì)。水是酶促反應最常用的反應介質(zhì)。但對于大多數(shù)有機化合物來說，水并不是一但對于大多數(shù)有機化合物來說，水并不是一種適宜的溶劑。因為許多有機化合物種適宜的溶劑。因為許多有機化合物( (底物底物) )在水介質(zhì)中難溶或不溶。在水介質(zhì)

2、中難溶或不溶。由于水的存在，往往有利于如水解、消旋化、由于水的存在，往往有利于如水解、消旋化、聚合和分解等副反應的發(fā)生。聚合和分解等副反應的發(fā)生。是否存在非水介質(zhì)能保證酶催化？是否存在非水介質(zhì)能保證酶催化？整理課件4長期的觀點認為長期的觀點認為: : 有機溶劑是酶的變性劑、失活劑這一傳有機溶劑是酶的變性劑、失活劑這一傳統(tǒng)酶學思想的影響下，酶在有機介質(zhì)中催化作統(tǒng)酶學思想的影響下，酶在有機介質(zhì)中催化作用的研究此前幾乎毫無進展。用的研究此前幾乎毫無進展。整理課件59.1 非水介質(zhì)中酶學基礎非水介質(zhì)中酶學基礎v1984年美國年美國Klibanov AM在在科學科學 上發(fā)表上發(fā)表了一篇關于酶在有機介質(zhì)中

3、催化條件和特點的綜述。了一篇關于酶在有機介質(zhì)中催化條件和特點的綜述。他們在僅含微量水的有機介質(zhì)中成功地酶促合成了他們在僅含微量水的有機介質(zhì)中成功地酶促合成了酯、肽、手性醇等許多有機化合物。并證實了酶在酯、肽、手性醇等許多有機化合物。并證實了酶在100高溫下，不僅能夠在有機溶劑中保持穩(wěn)定，高溫下，不僅能夠在有機溶劑中保持穩(wěn)定，還顯示出很高的催化轉(zhuǎn)酯活力。還顯示出很高的催化轉(zhuǎn)酯活力。v這一發(fā)現(xiàn)使原來認為生物催化必須在水溶液中進行這一發(fā)現(xiàn)使原來認為生物催化必須在水溶液中進行的酶學概念發(fā)生了革命性的變化。的酶學概念發(fā)生了革命性的變化。整理課件6v酶在酶在非水介質(zhì)非水介質(zhì)中，由于酶處于一種與水極不中，由

4、于酶處于一種與水極不相同的環(huán)境，不可避免地導致酶存在狀態(tài)與相同的環(huán)境，不可避免地導致酶存在狀態(tài)與酶結(jié)構的改變，在水相中建立起來的酶反應酶結(jié)構的改變，在水相中建立起來的酶反應動力學及反應機制都不能直接應用于非水介動力學及反應機制都不能直接應用于非水介質(zhì)中。質(zhì)中。v它們不同于標準的水溶液體系，在這些體系它們不同于標準的水溶液體系，在這些體系中水含量受到不同程度的嚴格控制，因此又中水含量受到不同程度的嚴格控制，因此又稱為稱為非常規(guī)介質(zhì)非常規(guī)介質(zhì)。整理課件7酶在非水介質(zhì)中的催化反應具有在許多常規(guī)水溶液中酶在非水介質(zhì)中的催化反應具有在許多常規(guī)水溶液中所沒有的新特征和優(yōu)勢：所沒有的新特征和優(yōu)勢：可進行水不

5、溶或水溶性差化合物的催化轉(zhuǎn)化，大可進行水不溶或水溶性差化合物的催化轉(zhuǎn)化，大大拓展了酶催化作用的底物和生成產(chǎn)物的范圍；大拓展了酶催化作用的底物和生成產(chǎn)物的范圍；改變了催化反應的平衡點，使在水溶液中不能或改變了催化反應的平衡點，使在水溶液中不能或很難發(fā)生的反應向期望的方向得以順利進行，如在很難發(fā)生的反應向期望的方向得以順利進行，如在水溶液中催化水解反應的酶在非水介質(zhì)中可有效催水溶液中催化水解反應的酶在非水介質(zhì)中可有效催化合成反應的進行；化合成反應的進行；使酶對包括區(qū)域?qū)Ｒ恍院蛯τ丑w專一性在內(nèi)的底使酶對包括區(qū)域?qū)Ｒ恍院蛯τ丑w專一性在內(nèi)的底物專一性大為提高，使對酶催化作用的選擇性的有物專一性大為提高，

6、使對酶催化作用的選擇性的有目的的調(diào)控的實現(xiàn)成為可能；目的的調(diào)控的實現(xiàn)成為可能；整理課件8 大大提高了一些酶的熱穩(wěn)定性；大大提高了一些酶的熱穩(wěn)定性；由于酶不溶于大多數(shù)的有機溶劑，使催化由于酶不溶于大多數(shù)的有機溶劑，使催化后酶易于回收和重復利用；后酶易于回收和重復利用；可有效減少或防止由水引起的副反應的產(chǎn)可有效減少或防止由水引起的副反應的產(chǎn)生；生；可避免在水溶液中進行長期反應時微生物可避免在水溶液中進行長期反應時微生物引起的污染；引起的污染；可方便地利用對水分敏感的底物進行相關可方便地利用對水分敏感的底物進行相關的反應；的反應；當使用揮發(fā)性溶劑作為介質(zhì)時，可使反應當使用揮發(fā)性溶劑作為介質(zhì)時，可使反

7、應后的分離過程能耗降低后的分離過程能耗降低.整理課件9從上世紀八十年代中期開始，酶在非水從上世紀八十年代中期開始，酶在非水介質(zhì)中催化反應的研究十分活躍。介質(zhì)中催化反應的研究十分活躍。 現(xiàn)已報導，酯酶、脂肪酶、蛋白酶、纖維現(xiàn)已報導，酯酶、脂肪酶、蛋白酶、纖維素酶、淀粉酶等素酶、淀粉酶等水解酶類水解酶類；過氧化物酶、過氧；過氧化物酶、過氧化氫酶、醇脫氫酶、膽固醇氧化酶、多酚氧化化氫酶、醇脫氫酶、膽固醇氧化酶、多酚氧化酶、多細胞色素氧化酶等酶、多細胞色素氧化酶等氧化還原酶類氧化還原酶類和醛縮和醛縮酶等酶等轉(zhuǎn)移酶類轉(zhuǎn)移酶類中的十幾種酶在適宜的有機溶劑中的十幾種酶在適宜的有機溶劑中具有與水溶液中可比的催

8、化活性。中具有與水溶液中可比的催化活性。整理課件109.1.1非水介質(zhì)體系非水介質(zhì)體系v有機介質(zhì)反應體系有機介質(zhì)反應體系v超臨界流體反應體系超臨界流體反應體系v氣相介質(zhì)反應體系氣相介質(zhì)反應體系v離子液介質(zhì)反應體系離子液介質(zhì)反應體系 有機介質(zhì)中的酶催化是指酶在含有一定量有機介質(zhì)中的酶催化是指酶在含有一定量水的有機溶劑中進行的催化反應。水的有機溶劑中進行的催化反應。 適用于底物、產(chǎn)物兩者或其中之一為疏水適用于底物、產(chǎn)物兩者或其中之一為疏水性物質(zhì)的酶催化作用。性物質(zhì)的酶催化作用。 酶在有機介質(zhì)中由于能夠基本保持其完整酶在有機介質(zhì)中由于能夠基本保持其完整的結(jié)構和活性中心的空間構象，所以能夠發(fā)的結(jié)構和活

9、性中心的空間構象，所以能夠發(fā)揮其催化功能。揮其催化功能。 超臨界流體是指溫度和壓力超過某物質(zhì)臨界點的流體。可作為親脂性底物的溶劑。 具有擴散快、黏度低、傳質(zhì)好、產(chǎn)物易于分離、易調(diào)控反應的特性等優(yōu)點。 酶在氣相介質(zhì)中進行的催化反應。適用于底物是氣體或者能夠轉(zhuǎn)化為氣體的物質(zhì)的酶催化反應。 由于氣體介質(zhì)的密度低，擴散容易，因此酶在氣相中的催化作用與在水溶液中的催化作用有明顯的不同特點。 酶在離子液中進行的催化作用。酶在離子液中進行的催化作用。 離子液（離子液（ionic liquidsionic liquids）是由有機陽）是由有機陽離子與有機（無機）陰離子構成的在室溫條離子與有機（無機）陰離子構成

10、的在室溫條件下呈液態(tài)的低熔點鹽類件下呈液態(tài)的低熔點鹽類，揮發(fā)性低、穩(wěn)定，揮發(fā)性低、穩(wěn)定性好。性好。整理課件11酶促反應的有機介質(zhì)體系酶促反應的有機介質(zhì)體系1、含微量水的有機溶劑單相體系；、含微量水的有機溶劑單相體系；2、與水混溶的有機溶劑和水形成、與水混溶的有機溶劑和水形成的單相體系；的單相體系；3、水與有機溶劑形成的兩相或多、水與有機溶劑形成的兩相或多相體系：相體系：4、反相膠束體系；、反相膠束體系； 不管采用何種有機介質(zhì)反應體不管采用何種有機介質(zhì)反應體系，酶催化反應的介質(zhì)中都含系，酶催化反應的介質(zhì)中都含有機溶劑和一定量的水。它們有機溶劑和一定量的水。它們都對催化反應有顯著的影響。都對催化反

11、應有顯著的影響。 整理課件121、含微量水的有機溶劑單相體系含微量水的有機溶劑單相體系用非極性有機溶劑取代所有的大量水，使固相酶懸用非極性有機溶劑取代所有的大量水，使固相酶懸浮在有機相中。浮在有機相中。酶表面含有酶表面含有必需的結(jié)合水必需的結(jié)合水以保持催化活性以保持催化活性( (含水量含水量2%)2%)。酶的狀態(tài)可以是結(jié)晶態(tài)、凍干狀態(tài)、沉淀狀態(tài)，或酶的狀態(tài)可以是結(jié)晶態(tài)、凍干狀態(tài)、沉淀狀態(tài)，或者吸附在固體載體表面上。者吸附在固體載體表面上。底物底物產(chǎn)物產(chǎn)物界面界面有機溶劑有機溶劑水不互溶有機溶劑單相體水不互溶有機溶劑單相體系系 、微水介質(zhì)體系、微水介質(zhì)體系 整理課件132、與水互溶的有機溶劑單相

12、體系、與水互溶的有機溶劑單相體系v極性較大的有機溶劑與水形成均勻的單相極性較大的有機溶劑與水形成均勻的單相溶液體系。酶、底物和產(chǎn)物都能溶解在這溶液體系。酶、底物和產(chǎn)物都能溶解在這均一體系中。均一體系中。 v適用于在單一水溶液中溶解度很低、反應適用于在單一水溶液中溶解度很低、反應速度也很慢的親脂性底物的生物轉(zhuǎn)化。速度也很慢的親脂性底物的生物轉(zhuǎn)化。整理課件143、非極性有機溶劑、非極性有機溶劑-水兩相體系水兩相體系v由水和疏水性較強的有機溶劑組成的兩相反由水和疏水性較強的有機溶劑組成的兩相反應體系。應體系。v親水性物質(zhì)（酶）溶于水相，疏水性物質(zhì)親水性物質(zhì)（酶）溶于水相，疏水性物質(zhì)（底物或產(chǎn)物）溶于

13、有機相。（底物或產(chǎn)物）溶于有機相。v反應發(fā)生在兩相的界面上反應發(fā)生在兩相的界面上v振蕩與攪拌振蕩與攪拌整理課件154、反膠束體系、反膠束體系v反膠束是表面活性劑在非極性有反膠束是表面活性劑在非極性有機溶劑中形成的一種聚集體。機溶劑中形成的一種聚集體。v在大量與水不相混溶的有機溶劑在大量與水不相混溶的有機溶劑中，含有少量水溶液，加入表面中，含有少量水溶液，加入表面活性劑后形成的活性劑后形成的油包水油包水的微小液的微小液滴。滴。v反膠束體系能夠較好地模擬酶的反膠束體系能夠較好地模擬酶的天然狀態(tài)，在體系中，大多數(shù)酶天然狀態(tài)，在體系中，大多數(shù)酶能夠保持催化活性和穩(wěn)定性。能夠保持催化活性和穩(wěn)定性。 有機

14、溶劑酶酶整理課件16 反相膠束反相膠束是在與水不互溶的大量有機溶劑是在與水不互溶的大量有機溶劑中，加入表面活性劑后形成的油包水的微中，加入表面活性劑后形成的油包水的微小水滴，也稱為微乳液。它是熱力學穩(wěn)定、小水滴，也稱為微乳液。它是熱力學穩(wěn)定、光學透明的溶液體系。光學透明的溶液體系。極性極性非極性非極性底物底物產(chǎn)物產(chǎn)物有機溶劑有機溶劑整理課件17有機介質(zhì)有機介質(zhì)酶促反應的優(yōu)點酶促反應的優(yōu)點v1 有利于疏水性底物的反應。有利于疏水性底物的反應。v2 可提高酶的熱穩(wěn)定性可提高酶的熱穩(wěn)定性.v3 能催化在水中不能進行的反應能催化在水中不能進行的反應v4 可改變反應平衡移動方向可改變反應平衡移動方向v5

15、 可控制底物專一性可控制底物專一性整理課件18v6 可防止由水引起的副反應。可防止由水引起的副反應。v7 可擴大反應可擴大反應pH值的適應性。值的適應性。v8 酶易于實現(xiàn)固定化。酶易于實現(xiàn)固定化。v9 酶和產(chǎn)物易于回收。酶和產(chǎn)物易于回收。v10 可避免微生物污染可避免微生物污染。整理課件199.1.2非水介質(zhì)中酶的結(jié)構與性質(zhì)非水介質(zhì)中酶的結(jié)構與性質(zhì)v(一一) 非水介質(zhì)中酶的狀態(tài)非水介質(zhì)中酶的狀態(tài)v在有機溶劑中，酶分子不能直接溶于其中，它的存在有機溶劑中，酶分子不能直接溶于其中，它的存在狀態(tài)有多種形主要分為兩大類在狀態(tài)有多種形主要分為兩大類v第一類為固態(tài)酶，它包括冷凍干燥的酶粉或固定化第一類為固

16、態(tài)酶，它包括冷凍干燥的酶粉或固定化酶，它們以固體形式存在有機溶劑中。還有利用結(jié)酶，它們以固體形式存在有機溶劑中。還有利用結(jié)晶酶進行非水介質(zhì)中催化反應和酶結(jié)構的研究，結(jié)晶酶進行非水介質(zhì)中催化反應和酶結(jié)構的研究，結(jié)晶酶的結(jié)構更接近于水溶液中酶的結(jié)構，它的催化晶酶的結(jié)構更接近于水溶液中酶的結(jié)構，它的催化效率也遠高于其他類型的固態(tài)酶。效率也遠高于其他類型的固態(tài)酶。v第二類為可溶解酶，它主要包括水溶性大分子共價第二類為可溶解酶，它主要包括水溶性大分子共價修飾酶和非共價修飾的高分子修飾酶和非共價修飾的高分子酶復合物、表面活酶復合物、表面活性劑性劑酶復合物以及微乳液中的酶等。酶復合物以及微乳液中的酶等。整理

17、課件20整理課件21v酶作為蛋白質(zhì)，它在水溶液中以具有一定構酶作為蛋白質(zhì)，它在水溶液中以具有一定構象的三級結(jié)構狀態(tài)存在。這種結(jié)構和構象是象的三級結(jié)構狀態(tài)存在。這種結(jié)構和構象是酶發(fā)揮催化功能所必需的酶發(fā)揮催化功能所必需的“緊密緊密”，而又有，而又有“柔性柔性” 的狀態(tài)。的狀態(tài)。v“緊密緊密”狀態(tài)主要取決于蛋白質(zhì)狀態(tài)主要取決于蛋白質(zhì)分子內(nèi)分子內(nèi)的氫的氫鍵。溶液中水分子與蛋白質(zhì)分子之間所形成鍵。溶液中水分子與蛋白質(zhì)分子之間所形成的氫鍵使蛋白質(zhì)分子內(nèi)氫鍵受到一定程度的的氫鍵使蛋白質(zhì)分子內(nèi)氫鍵受到一定程度的破壞，蛋白質(zhì)結(jié)構變得松散，呈一種破壞，蛋白質(zhì)結(jié)構變得松散，呈一種“開啟開啟” 狀態(tài)。狀態(tài)。整理課件

18、22“鋼性鋼性”與與”柔性柔性”的動態(tài)平衡的動態(tài)平衡 整理課件23(二二)非水介質(zhì)中的酶學性質(zhì)非水介質(zhì)中的酶學性質(zhì)v由于有機溶劑的存在，改變了底物存在狀態(tài)由于有機溶劑的存在，改變了底物存在狀態(tài)和酶和底物相結(jié)合的自由能，而這些會影響和酶和底物相結(jié)合的自由能，而這些會影響到有機溶劑中酶的熱穩(wěn)定性、底物特異性、到有機溶劑中酶的熱穩(wěn)定性、底物特異性、立體選擇性、區(qū)域選擇性和化學鍵選擇性等立體選擇性、區(qū)域選擇性和化學鍵選擇性等酶學性質(zhì)。酶學性質(zhì)。整理課件241熱力學穩(wěn)定性熱力學穩(wěn)定性v有機溶劑中酶的熱穩(wěn)定性和儲存穩(wěn)定性都比有機溶劑中酶的熱穩(wěn)定性和儲存穩(wěn)定性都比水溶液中高。水溶液中高。v原因：（原因：（1

19、）酶結(jié)構剛性增強；（）酶結(jié)構剛性增強；（2）水含量）水含量有限。有限。整理課件25v（1）酶結(jié)構剛性增強：酶的親水區(qū)與水相接觸，）酶結(jié)構剛性增強：酶的親水區(qū)與水相接觸，環(huán)境中的水分子與酶蛋白功能團之間能形成氫鍵，環(huán)境中的水分子與酶蛋白功能團之間能形成氫鍵，使蛋白質(zhì)形成具有柔韌性的空間結(jié)構，稱為使蛋白質(zhì)形成具有柔韌性的空間結(jié)構，稱為“開啟開啟”型空間結(jié)構。有機溶劑中水的缺乏，使酶蛋白分子型空間結(jié)構。有機溶劑中水的缺乏，使酶蛋白分子內(nèi)的氫鍵增多，酶分子結(jié)構內(nèi)的氫鍵增多，酶分子結(jié)構剛性增強。剛性增強。v同時處于有機溶劑中時，酶分子的同時處于有機溶劑中時，酶分子的疏水區(qū)暴露疏水區(qū)暴露，分，分子折疊受到

20、一定程度的破壞，帶電基團之間相互作子折疊受到一定程度的破壞，帶電基團之間相互作用形成非活性的用形成非活性的“封閉封閉”構象。酶分子結(jié)構構象。酶分子結(jié)構剛性增剛性增強強，對受熱而引起折疊松散的抗性增強，熱穩(wěn)定性，對受熱而引起折疊松散的抗性增強，熱穩(wěn)定性提高。提高。整理課件26v（2）水含量有限：由于有機溶劑中缺少使酶熱失）水含量有限：由于有機溶劑中缺少使酶熱失活的水分子，因此由水而引起的酶分子中天冬酰胺、活的水分子，因此由水而引起的酶分子中天冬酰胺、谷氨酰胺的脫氨基作用，天冬氨酸肽鍵的水解，二谷氨酰胺的脫氨基作用，天冬氨酸肽鍵的水解，二硫鍵的破壞，半骯氨酸的氧化及脯氨酸和甘氨酸的硫鍵的破壞，半骯

21、氨酸的氧化及脯氨酸和甘氨酸的異構化等蛋白質(zhì)熱失活的全過程難以進行。異構化等蛋白質(zhì)熱失活的全過程難以進行。 例如：胰脂肪酶在例如：胰脂肪酶在100100的水溶液中，很快完全失的水溶液中，很快完全失活，但在活，但在100100含含0.02%0.02%水的三丁酸甘油酯中，作用水的三丁酸甘油酯中，作用1212小時，仍保留小時，仍保留50%50%的酶活。的酶活。 胰凝乳蛋白酶在無水辛烷中，于胰凝乳蛋白酶在無水辛烷中，于2020保存保存5 5個月活個月活力不損失，而在水溶液中，其半衰期只有幾天。力不損失，而在水溶液中，其半衰期只有幾天。整理課件27某些酶在有機介質(zhì)與水溶液中的熱穩(wěn)定性某些酶在有機介質(zhì)與水溶

22、液中的熱穩(wěn)定性 酶酶 介質(zhì)條件介質(zhì)條件 熱穩(wěn)定性熱穩(wěn)定性豬胰脂肪酶豬胰脂肪酶三丁酸甘油酯三丁酸甘油酯水，水， pH7.0pH7.0T T1/21/2 26 h 26 hT T1/21/2 2 min 2 min酵母脂肪酶酵母脂肪酶三丁酸甘油酯三丁酸甘油酯/ /庚醇庚醇水，水，pH7.0pH7.0T T1/21/2 =1.5 h =1.5 hT T1/21/2 2 min 2 min脂蛋白脂肪酶脂蛋白脂肪酶甲苯，甲苯，9090，400 h400 h活力剩余活力剩余4040胰凝乳蛋白酶胰凝乳蛋白酶正辛烷，正辛烷，100100水，水，pH 8.0, 55pH 8.0, 55T T1/2 1/2 =

23、80 min= 80 minT T1/21/2 = 15 min = 15 min核糖核酸酶核糖核酸酶壬烷，壬烷，110110，6 h6 h水，水，pH 8.0, 90pH 8.0, 90活力剩余活力剩余9595T T1/21/2 10 min 24 h 24 hT T1/2 1/2 10 min 10 min限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶正庚烷，正庚烷，5555，30d30d活力不降低活力不降低-葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶2-2-丙醇，丙醇，5050，30 h30 h活力剩余活力剩余8080溶菌酶溶菌酶環(huán)己烷，環(huán)己烷，110110水水T T1/21/2 =140 min =140 minT T1

24、/21/2 = 10 min = 10 min整理課件28v在低水有機溶劑體系中，酶的穩(wěn)定性與含水在低水有機溶劑體系中，酶的穩(wěn)定性與含水量密切相關；一般在低于臨界含水量范圍內(nèi)，量密切相關；一般在低于臨界含水量范圍內(nèi)，酶很穩(wěn)定；含水量超出臨界含水量后酶穩(wěn)定酶很穩(wěn)定；含水量超出臨界含水量后酶穩(wěn)定性隨含水量的增加而急劇下降。性隨含水量的增加而急劇下降。 例如，核糖核酸酶在非水相介質(zhì)中的水含量例如，核糖核酸酶在非水相介質(zhì)中的水含量從從0.06g/g0.06g/g蛋白質(zhì)，增加到蛋白質(zhì)，增加到0.2g/g0.2g/g蛋白質(zhì)時，蛋白質(zhì)時，酶的半衰期從酶的半衰期從120min120min減少到減少到50min

25、50min。整理課件29整理課件302底物選擇性底物選擇性v在非水介質(zhì)中，由于酶分子結(jié)構發(fā)生變化，致使酶的底在非水介質(zhì)中，由于酶分子結(jié)構發(fā)生變化，致使酶的底物選擇性會發(fā)生一些改變物選擇性會發(fā)生一些改變。v原因：在水溶液中，原因：在水溶液中，底物與酶分子活性中心的結(jié)合主要依靠底物與酶分子活性中心的結(jié)合主要依靠疏水作用疏水作用，所以，所以疏水性較強疏水性較強的底物，容易與活性中心部位結(jié)的底物，容易與活性中心部位結(jié)合，催化反應的合，催化反應的速度較高速度較高；而在有機介質(zhì)中，有機溶劑與底；而在有機介質(zhì)中，有機溶劑與底物之間的疏水作用比底物與酶之間的疏水作用更強。所以物之間的疏水作用比底物與酶之間的疏

26、水作用更強。所以疏疏水性較強水性較強的底物容易受有機溶劑的作用，反而影響其與酶分的底物容易受有機溶劑的作用，反而影響其與酶分子活性中心的結(jié)合，催化反應的子活性中心的結(jié)合，催化反應的速度較低速度較低。整理課件31v不同的有機溶劑有不同的極性，所以在不同不同的有機溶劑有不同的極性，所以在不同的有機介質(zhì)中，酶的底物選擇性也不一樣。的有機介質(zhì)中，酶的底物選擇性也不一樣。v一般來說，在極性較強的有機溶劑中，疏水一般來說，在極性較強的有機溶劑中，疏水性較強的底物容易進行反應；在極性較弱的性較強的底物容易進行反應；在極性較弱的有機溶劑中，疏水性較弱的底物容易進行反有機溶劑中，疏水性較弱的底物容易進行反應。應

27、。整理課件32 3對映體選擇性對映體選擇性v 酶的對映體選擇性是指酶識別酶的對映體選擇性是指酶識別外消旋化合物外消旋化合物中某種構象對映體的能力，這種選擇性是由中某種構象對映體的能力，這種選擇性是由兩種對映體的非對映異構體的自由能差別造兩種對映體的非對映異構體的自由能差別造成的。成的。v有機溶劑中酶對底物的對映體選擇性由于介有機溶劑中酶對底物的對映體選擇性由于介質(zhì)的親質(zhì)的親( (疏疏) )水性的變化而發(fā)生改變。水性的變化而發(fā)生改變。整理課件334.位置選擇性位置選擇性（kcat/Km ）1/（kcat/Km ）2與溶劑的疏水性相關與溶劑的疏水性相關酶在有機介質(zhì)中進行催化時，具有區(qū)域選擇性（re

28、gioselectivity），即酶能夠選擇底物分子即酶能夠選擇底物分子中某一區(qū)域的基團優(yōu)先進行反應。中某一區(qū)域的基團優(yōu)先進行反應。整理課件345化學鍵選擇性化學鍵選擇性v化學鍵的選擇性是非水介質(zhì)中酶催化的一個顯著特化學鍵的選擇性是非水介質(zhì)中酶催化的一個顯著特點。點。v化學鍵選擇性是指當同一個底物分子中有化學鍵選擇性是指當同一個底物分子中有2個以上個以上的化學鍵都可以與進行反應時，酶對其中的一個化的化學鍵都可以與進行反應時，酶對其中的一個化學鍵可以優(yōu)先進行催化反應。學鍵可以優(yōu)先進行催化反應。v在有機介質(zhì)中進行酶催化反應時，化學鍵選擇性可在有機介質(zhì)中進行酶催化反應時，化學鍵選擇性可能變化。這種選

29、擇性與傳統(tǒng)的化學催化完全相反，能變化。這種選擇性與傳統(tǒng)的化學催化完全相反，這樣就可以在不需基團保護的情況下進行催化反應。這樣就可以在不需基團保護的情況下進行催化反應。整理課件356pH記憶和分子記憶記憶和分子記憶 vpHpH記憶記憶：有機溶劑中的酶能夠保持它冷凍干燥：有機溶劑中的酶能夠保持它冷凍干燥前或吸附到載體上之前所在緩沖液中的前或吸附到載體上之前所在緩沖液中的pH。v因為酶在凍干或吸附到載體之前，先置于一因為酶在凍干或吸附到載體之前，先置于一定定pH值的緩沖液中，緩沖液的值的緩沖液中，緩沖液的pH值決定了酶值決定了酶分子活性中心基團的解離狀態(tài)。分子活性中心基團的解離狀態(tài)。v利用酶的利用酶

30、的pH記憶特性可以控制有機相中酶催記憶特性可以控制有機相中酶催化的最適化的最適pH。整理課件36有機相生物印跡酶有機相生物印跡酶 枯草桿菌蛋白酶溶液枯草桿菌蛋白酶溶液含含N-Ac-Tyr-NHN-Ac-Tyr-NH2 2 凍干凍干除去抑制劑除去抑制劑枯草桿菌枯草桿菌蛋白酶蛋白酶枯草桿菌蛋白酶溶液枯草桿菌蛋白酶溶液不含不含N-Ac-Tyr-NHN-Ac-Tyr-NH2 2 凍干凍干枯草桿菌枯草桿菌蛋白酶蛋白酶在辛烷中催化酯化反應的速度比較：在辛烷中催化酯化反應的速度比較：反應（反應（1 1）中得到的酶比反應（）中得到的酶比反應（2 2）中得到的酶）中得到的酶高高100100倍倍在水溶液中其活性在

31、水溶液中其活性 ：相同相同（1）（2）整理課件37酶蛋白酶蛋白抑制劑抑制劑凍干凍干除去抑制劑除去抑制劑有機溶劑有機溶劑水溶液水溶液分子記憶分子記憶整理課件38v分子印跡技術原理：分子印跡技術原理： 競爭性抑制劑誘導酶活性中心構象發(fā)生變化，競爭性抑制劑誘導酶活性中心構象發(fā)生變化，形成一種高活性的構象形式，而此種構象形形成一種高活性的構象形式，而此種構象形式在除去抑制劑后，因酶在有機介質(zhì)中的高式在除去抑制劑后，因酶在有機介質(zhì)中的高度剛性而得到保持。度剛性而得到保持。v分子記憶分子記憶: :酶蛋白分子在有機相中具有對配體酶蛋白分子在有機相中具有對配體的的“記憶記憶”功能。功能。整理課件399.1.3

32、水對有機介質(zhì)中酶催化的影響水對有機介質(zhì)中酶催化的影響v酶溶于水，有機介質(zhì)中的水含量多少對酶的空間構酶溶于水，有機介質(zhì)中的水含量多少對酶的空間構象、酶的催化活性、酶的穩(wěn)定性、酶的催化反應速象、酶的催化活性、酶的穩(wěn)定性、酶的催化反應速度等都有密切關系，水還與酶催化作用的底物和產(chǎn)度等都有密切關系，水還與酶催化作用的底物和產(chǎn)物的溶解度有關。物的溶解度有關。 v維持酶分子完整的空間構象所必需的最低水量稱為維持酶分子完整的空間構象所必需的最低水量稱為必需水（必需水（essential wateressential water）。v有機介質(zhì)中水的含量對酶催化反應速度有顯著影響。有機介質(zhì)中水的含量對酶催化反應

33、速度有顯著影響。存在存在最適水含量最適水含量。整理課件401、水對酶分子空間構象的影響、水對酶分子空間構象的影響v酶的活性構象的形成是依賴于各種氫鍵、酶的活性構象的形成是依賴于各種氫鍵、疏水鍵等非共價相互作用。疏水鍵等非共價相互作用。v水參與了氫鍵的形成，而疏水相互作用水參與了氫鍵的形成，而疏水相互作用也只有在有水參與時才能形成。因此水也只有在有水參與時才能形成。因此水分子與酶分子的活性構象形成有關。分子與酶分子的活性構象形成有關。整理課件41v把有機介質(zhì)中酶促反應理解為把有機介質(zhì)中酶促反應理解為宏觀上是在有機宏觀上是在有機介質(zhì)中，而在微觀上仍是水介質(zhì)中，而在微觀上仍是水中的酶促反應。正中的酶

34、促反應。正因如此，才能使用有機介質(zhì)代替水溶液，進因如此，才能使用有機介質(zhì)代替水溶液，進行酶促反應。行酶促反應。v與酶分子起作用的只是與酶分子緊密接觸的與酶分子起作用的只是與酶分子緊密接觸的一層束縛水，只要保證這些基本必需的水分一層束縛水，只要保證這些基本必需的水分子固定在酶分子表面，而水溶液中其他大部子固定在酶分子表面，而水溶液中其他大部分的自由水盡可以被有機溶劑所代替。分的自由水盡可以被有機溶劑所代替。整理課件42v必需水：緊緊吸附必需水：緊緊吸附在酶分子表面，維在酶分子表面，維持酶催化活性所必持酶催化活性所必需的最少量的水稱需的最少量的水稱為必需水（或結(jié)合為必需水（或結(jié)合水、束縛水）。水、

35、束縛水）。整理課件43v有研究表明：在不同極性有機溶劑的低水反有研究表明：在不同極性有機溶劑的低水反應介質(zhì)中，隨著溶劑的親水性增大，保持在應介質(zhì)中，隨著溶劑的親水性增大，保持在糜蛋白酶表面的束縛水下降糜蛋白酶表面的束縛水下降2.51.0，而酶活性隨之下降了而酶活性隨之下降了10000倍。酶在完全干倍。酶在完全干燥的溶劑中通常沒有活性。所以體系中有足燥的溶劑中通常沒有活性。所以體系中有足夠的水分對酶的催化起著重要的作用。夠的水分對酶的催化起著重要的作用。 整理課件44酶活性酶活性含水量含水量最適含水量0動力學剛性熱力學不穩(wěn)定v在特定的有機介在特定的有機介質(zhì)反應體系中，質(zhì)反應體系中，催化速度達到最

36、催化速度達到最大時的含水量稱大時的含水量稱為為最適含水量最適含水量。2、水對有機介質(zhì)酶催化反應速度的影響、水對有機介質(zhì)酶催化反應速度的影響整理課件45過多水分子過多水分子整理課件46剛性：生物大分子結(jié)構的精確性剛性：生物大分子結(jié)構的精確性柔性：生物大分子局部區(qū)域具有一定的可運柔性：生物大分子局部區(qū)域具有一定的可運動性。動性。整理課件47v在非水介質(zhì)中，只有在最適水含量時，蛋白質(zhì)結(jié)構在非水介質(zhì)中，只有在最適水含量時，蛋白質(zhì)結(jié)構的動力學剛性與熱力學穩(wěn)定性之間才能達到最佳平的動力學剛性與熱力學穩(wěn)定性之間才能達到最佳平衡點，酶才表現(xiàn)出最大活性。衡點，酶才表現(xiàn)出最大活性。v實驗表明，水合作用能促進酶反應

37、，而過量的水會實驗表明，水合作用能促進酶反應，而過量的水會導致酶活性下降。導致酶活性下降。a不同酶需水量不同不同酶需水量不同b. 同一種酶在不同有機溶劑中需水量不同。同一種酶在不同有機溶劑中需水量不同。 溶劑疏水性越強，需水量越少溶劑疏水性越強，需水量越少“剛?cè)岵鷦側(cè)岵闭碚n件48表征必需水作用的參數(shù)表征必需水作用的參數(shù)-熱力學水活度熱力學水活度v水活度（水活度（water activity，Aw）：在一）：在一定的溫度和壓力下，反應體系中水的蒸定的溫度和壓力下，反應體系中水的蒸氣壓與同樣狀態(tài)下純水蒸氣壓之比。氣壓與同樣狀態(tài)下純水蒸氣壓之比。 AwP /P0 v水的存在狀態(tài)分游離態(tài)和結(jié)合

38、態(tài)，水活水的存在狀態(tài)分游離態(tài)和結(jié)合態(tài)，水活度即表示了這兩種狀態(tài)的存在比例。度即表示了這兩種狀態(tài)的存在比例。v該參數(shù)直接反應酶分子上水分的多少，與該參數(shù)直接反應酶分子上水分的多少，與體系中水含量及所用溶劑無關。體系中水含量及所用溶劑無關。整理課件49整理課件509.1.4有機溶劑對酶催化反應的影響有機溶劑對酶催化反應的影響1、有機溶劑對酶結(jié)構與活性的影響：、有機溶劑對酶結(jié)構與活性的影響： 酶分子與溶劑直接接觸，有機溶劑能酶分子與溶劑直接接觸，有機溶劑能 “剝?nèi)內(nèi)ァ本S持酶催化所必需的水，破壞氫鍵，降低分子表維持酶催化所必需的水，破壞氫鍵，降低分子表面張力，促使蛋白質(zhì)方式去折疊而變性。面張力，促使

39、蛋白質(zhì)方式去折疊而變性。 應選擇好所使用的溶劑，控制好介質(zhì)中的應選擇好所使用的溶劑，控制好介質(zhì)中的含水量，或者經(jīng)過修飾提高酶分子的親水性，含水量，或者經(jīng)過修飾提高酶分子的親水性，避免酶在有機介質(zhì)中因脫水作用而影響其催化避免酶在有機介質(zhì)中因脫水作用而影響其催化活性?；钚浴Ｕ碚n件51溶劑極性越弱，這一效應可能越強溶劑極性越弱，這一效應可能越強酶在有機介質(zhì)中催化時其底物的酶在有機介質(zhì)中催化時其底物的km值會比在水里時顯著增大值會比在水里時顯著增大整理課件52 溶劑極性參數(shù)溶劑極性參數(shù)logPlogP（P P為溶劑在正辛醇和水雙為溶劑在正辛醇和水雙相體系中的分配系數(shù)）來描述溶劑極性與酶相體系中的分配

40、系數(shù)）來描述溶劑極性與酶活的關系。活的關系。 logPlogP可描述溶劑的極性可描述溶劑的極性 在加入等量水時：溶劑的在加入等量水時：溶劑的logP logP 越高，酶活性越高，酶活性越大，所需最佳水量越少。越大，所需最佳水量越少。整理課件532、有機溶劑對底物和產(chǎn)物的影響、有機溶劑對底物和產(chǎn)物的影響v有機溶劑與水之間的極性不同，在反應過程中會影有機溶劑與水之間的極性不同，在反應過程中會影響響底物和產(chǎn)物的分配底物和產(chǎn)物的分配，從而影響酶的催化反應。，從而影響酶的催化反應。v有機溶劑能改變酶分子必需水層中底物或產(chǎn)物的濃有機溶劑能改變酶分子必需水層中底物或產(chǎn)物的濃度，而底物必須滲入必需水層，產(chǎn)物必

41、須移出此水度，而底物必須滲入必需水層，產(chǎn)物必須移出此水層，才能使反應進行下去。層，才能使反應進行下去。v極性產(chǎn)物傾向于保留在酶附近，可能引起產(chǎn)物抑極性產(chǎn)物傾向于保留在酶附近，可能引起產(chǎn)物抑制或不必要的副反應發(fā)生。制或不必要的副反應發(fā)生。整理課件549.2 酶在非水介質(zhì)中的催化反應及應用酶在非水介質(zhì)中的催化反應及應用v 一、酶催化反應的類型v1 C-O鍵的形成v(1)酯類 酯酶和脂肪酶可催化酯合成反應、轉(zhuǎn)酯反應和酸酐水解反應。整理課件55整理課件56整理課件57整理課件58整理課件59整理課件60整理課件61其它vC-N、C-C、氧化還原等整理課件62二、二、 非水相催化的應用非水相催化的應用v

42、有機相中酶催化研究最多的酶為水解酶有機相中酶催化研究最多的酶為水解酶(包括包括脂肪酶、蛋白酶、酯酶等脂肪酶、蛋白酶、酯酶等)。v因為，一方面水解酶不需要輔酶、使用方便、因為，一方面水解酶不需要輔酶、使用方便、易于獲得、價格便宜；易于獲得、價格便宜；v另一方面水解酶不僅能在水相或含水有機相另一方面水解酶不僅能在水相或含水有機相中催化水解反應，而且還能在微水介質(zhì)中催中催化水解反應，而且還能在微水介質(zhì)中催化?；磻王；D(zhuǎn)移化反應，這些在有機化酰化反應和?；D(zhuǎn)移化反應，這些在有機合成中特別有用。合成中特別有用。 整理課件63 光學活性物質(zhì)：能使平面偏振光旋轉(zhuǎn)的化合物為光光學活性物質(zhì)：能使平面偏振光旋

43、轉(zhuǎn)的化合物為光學活性物質(zhì)。學活性物質(zhì)。 手性：一個具有光學活性的有機物不能與它的鏡像手性：一個具有光學活性的有機物不能與它的鏡像重合。重合。 對映異構體：兩個互為鏡像但不能重合的對映體稱對映異構體：兩個互為鏡像但不能重合的對映體稱為對映異構體，它們旋光能力相同，但方向相反。為對映異構體，它們旋光能力相同，但方向相反。 外消旋體：等量對映異構體的混合物沒有光學活性，外消旋體：等量對映異構體的混合物沒有光學活性，成為外消旋體。成為外消旋體。 外消旋體拆分：即利用拆分技術將外消旋體的兩個外消旋體拆分：即利用拆分技術將外消旋體的兩個對映體分開。通過外消旋體的拆分可得純的光緒活對映體分開。通過外消旋體的

44、拆分可得純的光緒活性物質(zhì)。性物質(zhì)。整理課件64v藥物立體異構藥效的顯著差異的根本原因是生物藥物立體異構藥效的顯著差異的根本原因是生物體的對稱性破缺。體的對稱性破缺。v人體內(nèi)的幾乎所有生物大分子，也就是藥物作用人體內(nèi)的幾乎所有生物大分子，也就是藥物作用的一般靶點，基本都是具有手性的。因此，一對的一般靶點，基本都是具有手性的。因此，一對幾何上對稱的景象異構進入人體以后，因被機體幾何上對稱的景象異構進入人體以后，因被機體作為完全不同的物質(zhì)處理，而具有顯著的藥效差作為完全不同的物質(zhì)處理，而具有顯著的藥效差異。異。v某些藥物的一種對映體有顯著治療作用，而另一某些藥物的一種對映體有顯著治療作用，而另一種對

45、映體幾乎無作用。種對映體幾乎無作用。整理課件65手性藥物的拆分v概念：概念：v 手性化合物：是指化學組成相同，而其立手性化合物：是指化學組成相同，而其立體結(jié)構互為對映體的兩種異構體化合物體結(jié)構互為對映體的兩種異構體化合物整理課件66手性藥物兩種對映體的藥效差異手性藥物兩種對映體的藥效差異v一種有顯著療效，另一種有療效弱或無效一種有顯著療效，另一種有療效弱或無效v一種有顯著療效，另一種有毒副作用一種有顯著療效，另一種有毒副作用v兩種對映體的藥效相反兩種對映體的藥效相反v兩種對映體具有各自不同的藥效兩種對映體具有各自不同的藥效v兩種消旋體的作用具有互補性兩種消旋體的作用具有互補性整理課件67 OC

46、H2CHCH2NHCH*OHCH3CH3PropranololS-異構體為治療心臟病藥物心得安R-異構體為避孕藥NNHOOOO*R-(+)-苧烯L-(-)-苧烯* 桔子味 檸檬味OOHHOH2NNH2S-天冬酰胺 甜的 苦的R-天冬酰胺NH2H2NOHOHOThalidomideR-異構體為鎮(zhèn)靜藥（反應停）S-異構體有致畸胎作用圖圖2對映體的不同生理活性對映體的不同生理活性 -天使還是魔鬼？NHNHOO俗名俗名“反應停反應?！保缙谧鳛?，早期作為懷孕婦女的止嘔藥使用懷孕婦女的止嘔藥使用R-(+)-R-(+)-沙利度胺為鎮(zhèn)靜止嘔藥沙利度胺為鎮(zhèn)靜止嘔藥 S-(-)-S-(-)-沙利度胺有致畸作用沙

47、利度胺有致畸作用 50年代末，在歐洲出現(xiàn)數(shù)千例短肢年代末，在歐洲出現(xiàn)數(shù)千例短肢畸胎新生兒，一度震驚全世界畸胎新生兒，一度震驚全世界整理課件69手性藥物兩種對映體的藥理作用手性藥物兩種對映體的藥理作用 藥物名稱藥物名稱 有效對映體的作用有效對映體的作用另一種對映體的作用另一種對映體的作用普萘洛爾普萘洛爾 萘普生萘普生 青霉素胺青霉素胺羥基苯哌嗪羥基苯哌嗪反應停反應停酮基布洛芬酮基布洛芬喘速寧喘速寧 乙胺丁醇乙胺丁醇萘必洛爾萘必洛爾S S構型，治療心臟病構型，治療心臟病,-,-受受體阻斷劑體阻斷劑S S構型，消炎、解熱、鎮(zhèn)痛構型，消炎、解熱、鎮(zhèn)痛S S構型，抗關節(jié)炎構型，抗關節(jié)炎S S構型，鎮(zhèn)咳構

48、型，鎮(zhèn)咳S S構型，鎮(zhèn)靜劑構型，鎮(zhèn)靜劑S S構型，消炎構型，消炎S S構型，擴張支氣管構型，擴張支氣管S S構型，抗結(jié)核病構型，抗結(jié)核病右旋體，治療高血壓右旋體，治療高血壓,-,-受體阻斷劑受體阻斷劑R R構型，鈉通道阻滯構型，鈉通道阻滯劑劑R R構型，療效很弱構型，療效很弱R R構型，突變劑構型，突變劑R R構型，有神經(jīng)毒性構型，有神經(jīng)毒性R R構型，致畸胎構型，致畸胎R R構型，防治牙周病構型，防治牙周病R R構型，抑制血小板構型，抑制血小板凝集凝集R,RR,R構型，致失明構型，致失明左旋體，舒張血管左旋體，舒張血管整理課件70 20世紀世紀90年代后，許多年代后，許多國家規(guī)定國家規(guī)定，凡

49、結(jié)構中，凡結(jié)構中具有不對稱因素的藥物，即具有不對稱因素的藥物，即“手性藥物手性藥物”，必須必須拆分拆分其相應的立體異構體，并其相應的立體異構體，并分別研究分別研究其藥理、其藥理、毒理和藥物代謝性質(zhì)。對已上市的消旋體藥物，毒理和藥物代謝性質(zhì)。對已上市的消旋體藥物，要要重新評價重新評價其光學異構體的性質(zhì)。對新申報的藥其光學異構體的性質(zhì)。對新申報的藥品，品，一開始一開始就要合成其光學異構體。就要合成其光學異構體。 - 殺菌還是助長？C(CH2)3ClOHNNNC(CH2)3ClOHNNN(2R,3R)-(+)-殺真菌劑殺真菌劑(2S,3S)-(-)-植物增長劑植物增長劑問題問題：如果只需要殺死真菌，

50、為什么也要：如果只需要殺死真菌，為什么也要 噴灑植物生長劑呢？噴灑植物生長劑呢？-手性選擇指紋圖 分析氨基酸可以鑒別摻假果汁分析氨基酸可以鑒別摻假果汁 比氨基酸更特殊的標記物：蘋果酸，乳酸酯、比氨基酸更特殊的標記物：蘋果酸，乳酸酯、酒石酸和丁二醇酒石酸和丁二醇 原料中手性選擇指紋圖即可以鑒別原料中手性選擇指紋圖即可以鑒別“原產(chǎn)原產(chǎn)地地”，也使摻假產(chǎn)品難于蒙混過關，也使摻假產(chǎn)品難于蒙混過關整理課件73手性藥物的拆分方法手性藥物的拆分方法v分為：非生物法、生物法分為：非生物法、生物法v非生物法（機械分離法、非生物法（機械分離法、 形成和分離對映體形成和分離對映體異構法、異構法、 色譜分離法、色譜分

51、離法、 動力學拆分）動力學拆分）整理課件74生物拆分法原理生物拆分法原理v實質(zhì)即兩個對映體競爭酶的同一個活性中心實質(zhì)即兩個對映體競爭酶的同一個活性中心位置，兩者的反應速率不同，產(chǎn)生選擇性，位置，兩者的反應速率不同，產(chǎn)生選擇性，從而使反應產(chǎn)物具有光學活性。從而使反應產(chǎn)物具有光學活性。 整理課件75青霉素酰化酶及其催化作用青霉素?；讣捌浯呋饔?利用其底物專一性及對映體的選擇性進行光學異構體利用其底物專一性及對映體的選擇性進行光學異構體的合成與拆分。的合成與拆分。 TW Wang, DZ Wei* et al., Structure-Based Stabilization of an Enzym

52、e: The Case of PenicillinAcylase from Alcaligenes faecalis, Protein & Peptide Letters, 2006. 整理課件76NH2COOHHNCOOHPhacNH2COOHHNCOOHPhacDL-TlePhacCl10% NaOH+PGAN-Phac-(DL)-TleN-Phac-(D)-TleL-TleShu-Lai Liu，Dongzhi Wei*, et al., Bioprocess and Biosystems Engineering, 2006Shu-Lai Liu，Dongzhi Wei*, et

53、 al., Preparative Biochemistry & Biotechnology, 2006青霉素酰化酶催化叔亮氨酸拆分青霉素?；复呋辶涟彼岵鸱终碚n件77COOHHNCOCOO-HNCOCOOHHNCOPGACOO-HNCOCOOHCOO-COO-NH3+N-Phac-DL-TleN-Phac-D-TlePAAL-TleN-Phac-DL-TleN-Phac-D-TlePAAOrganic PhaseAqueous Phase水水- -乙酸丁酯雙相體系中叔亮氨酸的拆分乙酸丁酯雙相體系中叔亮氨酸的拆分消除副產(chǎn)物苯乙酸的抑制消除副產(chǎn)物苯乙酸的抑制青霉素?；冈诎被岵鸱种械膽们嗝顾仵；冈诎被岵鸱种械膽谜碚n件78 氧化葡萄糖桿菌高效催化合成米格列醇關鍵中間產(chǎn)物（1）（2）（3）關鍵：生物催化效率及反應專一性關鍵：生物催化效率及反應專一性氧化葡萄糖桿菌用于氧化葡萄糖桿菌用于II型糖尿病首選藥物型糖尿病首選藥物米格列醇的生物合成米格列醇的生物合成整理課件79W Su, DZ Wei*, et al., Tetrahedron: Asymmetr