免疫學(xué)復(fù)習(xí)題和實驗題

1、名詞解釋：1 免疫：古典免疫是指人體和動物體對某種病原微生物的抵抗力以及對同一種病原微生物再感 染的特異防御能力?，F(xiàn)代免疫指人和動物機體識別和排斥抗原的功能活動。2 免疫原：在具有免疫應(yīng)答能力的機體中，能使機體中產(chǎn)生免疫應(yīng)答的物質(zhì)。3 半抗原：只有反應(yīng)原性而缺乏免疫原性的物質(zhì)。4 復(fù)合半抗原：不能單獨刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，但可與相應(yīng)的抗體結(jié)合，在一定條件下出現(xiàn) 肉眼可見的反應(yīng)，這種抗原稱為復(fù)合半抗原。5 抗原：凡是能刺激機體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細胞并能與之結(jié)合引起特異性免疫反應(yīng)的物質(zhì)， 即具有免疫原性和反應(yīng)原性的物質(zhì)。6 抗原表位：存在于抗原分子表面具有特殊立體構(gòu)型和免疫活性的基團稱為抗原決定簇

2、（基）或表位。7 B細胞表位：抗原中被BCR和抗體分子所識別（直接識別或結(jié)合）的部位。8 反應(yīng)原性：是指抗原能與相應(yīng)的抗體或致敏淋巴細胞發(fā)生特異性反應(yīng)的特性。9 免疫原性：是指抗原能刺激機體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細胞的特性。10 T細胞表位：蛋白質(zhì)分子中被MHC分子遞呈并被TCR識別的肽段。11 互補決定區(qū)：即V區(qū)中的高變區(qū)，直接與抗原接觸結(jié)合的區(qū)域。12 同種抗原：物質(zhì)的抗原在遺傳上變異時稱此種抗原為同種抗原。13 佐劑：一種物質(zhì)先于抗原注入動物體內(nèi)或與抗原混合后同時注入動物體內(nèi)，能非特異性地改變或增強機體對該抗原的特異性免疫應(yīng)答，發(fā)揮輔助作用，這類物質(zhì)統(tǒng)稱為佐劑。14 抗原提呈：一些

3、細胞能夠攝取、加工、處理蛋白質(zhì)使其降解成小肽并由細胞的MHC分子將肽運送到細胞表面供T細胞識別的過程。15 T細胞抗原受體：T細胞表面具有識別和結(jié)合特異性抗原的分子結(jié)構(gòu)。16 B細胞抗原受體：B細胞表面具有識別和結(jié)合特異性抗原的分子結(jié)構(gòu)。17 輔佐細胞：能捕獲和處理抗原以及遞呈給免疫活性細胞，叫做抗原遞呈細胞（輔佐細胞）。18 再次免疫應(yīng)答：相同抗原再次免疫機體，產(chǎn)生的抗體潛伏期短、維持時間長、含量高、以IgG為主，為高親和性抗體。19 初次免疫應(yīng)答：抗原首次刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，產(chǎn)生的抗體潛伏期長、維持時間短、含量低、以IgM為主，為低親和性抗體。20 基因工程重組亞單位苗：基因工程重組亞單

4、位疫苗是用DNA重組技術(shù)，將編碼病原微生物保護性抗原的基因?qū)嗽思毎蛘婧思毎?，使其在受體細胞中高效表達，分泌保護性抗原肽鏈。提取保護性抗原肽鏈，加入佐劑即制成基因工程重組亞單位疫苗，又稱為生物合成亞單位疫苗。21 基因工程重活載體疫苗：是用基因工程技術(shù)將保護性抗原基因(目的基因)轉(zhuǎn)移到載體中使之表達的活疫苗。22 多價苗：是指將同一種細菌(或病毒)的不同血清型混合制成的疫苗。23 聯(lián)苗：是指由兩種以上的細菌(或病毒)聯(lián)合制成的疫苗，以達到一次免疫可達到預(yù)防幾種疾病的目的。24 基因缺失苗：基因缺失疫苗是用基因工程技術(shù)將強毒株毒力相關(guān)基因切除構(gòu)建的活疫苗。25 細胞因子：指一類有免疫細胞和相

5、關(guān)細胞產(chǎn)生的調(diào)節(jié)細胞功能、參與炎癥反應(yīng)、創(chuàng)傷愈合等多功能、高活性多功能多肽或蛋白質(zhì)分子。26 凝集試驗：細菌、紅細胞等顆粒性抗原的懸液與相應(yīng)抗體結(jié)合后，在電解質(zhì)的參與下，抗原顆粒相互凝聚形成團塊，這種現(xiàn)象叫做凝集試驗或稱凝集反應(yīng)。27 瓊脂（免疫）擴散：沉淀反應(yīng)在瓊脂凝膠中進行，抗原和抗體在凝膠中自由擴散，二者在凝膠中相遇，在最適比例出形成抗原抗體復(fù)合物，此復(fù)合物較大，又能繼續(xù)擴散，則形成沉淀帶，叫瓊脂（免疫）擴散。28 內(nèi)源性抗原：自身細胞內(nèi)合成的抗原。如胞內(nèi)菌（結(jié)核桿菌）和病毒感染細胞所合成的細菌抗原和病毒抗原，腫瘤細胞合成的腫瘤抗原。29 外源性抗原：被單核巨噬細胞等從細胞外吞噬、捕獲或

6、者與B細胞特異性結(jié)合而后進入細胞的抗原，包括所有從體外進入的微生物、疫苗、異種蛋白質(zhì)等以及自身合成而釋放于細胞外的非自身物質(zhì)。30 單克隆抗體：單克隆抗體是應(yīng)用細胞融合技術(shù)使骨髓瘤細胞和免疫動物淋巴細胞融合而成的雜交瘤細胞單克隆所產(chǎn)生的一種特異性高度專一和化學(xué)性狀高度純一的抗體。31 抗體：是指機體在抗原物質(zhì)刺激下所產(chǎn)生的、能與該抗原發(fā)生特異性反應(yīng)的一類免疫球蛋白，存在于血液、淋巴液、組織液和粘膜分泌物中是構(gòu)成機體體液免疫的主要物質(zhì)。32 分泌成分：是由局部黏膜上皮細胞所合成，在IgA通過黏膜上皮細胞過程中與之結(jié)合 形成分泌型的二聚體，具有保護IgA抵抗蛋白水解酶的水解作用。33 免疫活性細胞

7、：指抗原特異性淋巴細胞，此類淋巴細胞只有接受抗原刺激后才能分化增殖，產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答。34 黏膜相關(guān)淋巴組織：指消化道、呼吸道等黏膜下的淋巴組織形成淋巴小結(jié)。35 異嗜性抗原：是一類與種族特異性無關(guān)的存在于人、動物、植物及微生物之間的性質(zhì)相同的抗原。36 中和作用：病毒或毒素與相應(yīng)的抗體結(jié)合以后失去了對易感動物的致病力，稱中和作用。37 細胞免疫：T細胞接受抗原刺激后，增殖、分化成為效應(yīng)性淋巴細胞并產(chǎn)生細胞因子，所導(dǎo)致的特異性免疫應(yīng)答。38 體液免疫：B細胞受抗原刺激后活化、增殖、分化為漿細胞，合成分泌抗體，存在于體液中，抗體能與相應(yīng)的抗原結(jié)合，發(fā)揮其免疫效應(yīng)。存在于體液中的抗體時構(gòu)成體液免

8、疫的基礎(chǔ)。39 獨特型：同一個體內(nèi)，不同B細胞克隆產(chǎn)生的免疫球蛋白，其VH 區(qū)和VL區(qū)內(nèi)氨基酸組成不同，因而表現(xiàn)出其自身特異型抗原的差異（指不同抗原特異性免疫球蛋白在可變區(qū)呈現(xiàn)的抗原性）?？贵w分子可變區(qū)的構(gòu)型可產(chǎn)生獨特型決定簇。40 調(diào)理作用：調(diào)理素(如抗體和補體成分)與病原體或其他顆?？乖Y(jié)合，通過與巨噬細胞表面Fc受體或補體受體結(jié)合，從而促進吞噬細胞對病原體的吞噬作用。41 免疫球蛋白的功能區(qū)：L鏈功能區(qū) ：分為L鏈可變區(qū)（VL）和L鏈恒定區(qū)（CL）兩功能 區(qū)。 H鏈功能區(qū) ：IgG、IgA和IgD的H鏈各有一個可變區(qū)（VH）和三個恒定區(qū)（CH1、CH2和CH3）共四個功能區(qū)。42 穿孔素

9、：具有細胞毒作用的效應(yīng)分子。貯存在細胞毒性T細胞和NK細胞胞質(zhì)顆粒中，兩類效應(yīng)細胞與靶細胞接觸而激發(fā)顆粒胞吐，所釋放的穿孔素通過聚合作用而在靶細胞表面形成小孔，從而介導(dǎo)殺傷作用。43 抗體依賴性細胞介導(dǎo)的細胞毒作用：抗體依賴的細胞介導(dǎo)的細胞毒性作用是指表達IgGFc受體的NK細胞、巨噬細胞和中性粒細胞等，通過與已結(jié)合在病毒感染細胞和腫瘤細胞等靶細胞表面的IgG抗體的Fc段結(jié)合，而殺傷這些靶細胞的作用。44 攻膜復(fù)合物：膜攻復(fù)合體補體溶細胞生物學(xué)效應(yīng)的效應(yīng)復(fù)合體，為三條補體激活途徑的共同末端通路，即膜攻擊復(fù)合物。45 主要組織相容性復(fù)合體：MHC是由一群緊密連鎖的基因群組成，定位于動物或人某對染

10、色體的特定區(qū)域，呈高度多態(tài)性。46 淋巴細胞再循環(huán)：淋巴細胞周而復(fù)始地從血液進入外周淋巴組織，再通過淋巴管道回到血液中的過程。免疫學(xué)實驗總結(jié) 實驗一：病毒血凝試驗1、 原理： 某些病毒（如新城疫病毒、流感病毒）表面分子（血凝素）可以與一些動物紅細胞表面分子發(fā)生特異結(jié)合反應(yīng)，在兩者比例適當(dāng)及適宜的液體環(huán)境中，這種結(jié)合反應(yīng)會引起該紅細胞發(fā)生凝集，以此建立的實驗方法稱為血凝試驗。該試驗可以鑒定某些病毒的血凝性。2、 操作方法：1. 在干凈的微量反應(yīng)板上選好一排孔，第1孔至第12孔，每個孔中加25ul生理鹽水。2. 在第1孔中加25ul新城疫病毒抗原液，混勻，吸取25ul，移到第2孔，按倍比稀釋法，稀

11、釋到第11孔。第1孔至第12孔，每個孔中再補加25ul生理鹽水。3. 在第1孔至第12孔中，加1.2%雞紅細胞懸液25ul。4. 在桌面上輕輕滑動震蕩，使紅細胞充分混勻，置于25-37，45分鐘-60分鐘，觀察結(jié)果。 實驗二：病毒血凝抑制試驗1、 原理： 某些病毒（如新城疫病毒、流感病毒）表面分子可以與一些動物紅細胞表面分子發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，在兩者比例適當(dāng)及適宜的液體環(huán)境中，這種結(jié)合反應(yīng)會引起該紅細胞發(fā)生凝集。但這些病毒可引起某些動物紅細胞發(fā)生凝集的表面分子可以誘導(dǎo)機體發(fā)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，產(chǎn)生對應(yīng)的抗體。 如果這些病毒表面引起血凝的分子先與這種抗體發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，再與某些動物紅細胞懸液作用，血凝作用就

12、會被部分抑制或完全抑制。依此建立的血清學(xué)實驗稱為病毒血凝試驗。病毒血凝試驗可用于檢測病毒血凝抑制抗體的相對水平，也可以用已知抗體來鑒定病毒。2、 操作方法：（1）在干凈的微量反應(yīng)板上選好一排孔，第1孔至第12孔，每個孔中加25ul生理鹽水。（2）在第1孔中加25ul待測血清，混勻，吸25ul到第2孔，按倍比稀釋法，稀釋到第10孔。（3）第1孔至第11孔，每個孔中加25ul4單位新城疫病毒液。第12孔加25ul生理鹽水。在15 -37 作用5min。（4）在第1孔至第12孔中，加1.2%雞紅細胞懸液25ul。（5）在桌面上輕輕滑動震蕩，使紅細胞充分混勻，置于25-37，45分鐘-60分鐘，觀察結(jié)

13、果。 實驗三：雙向雙擴散試驗1、 原理： 10g/L瓊脂糖凝膠呈多孔結(jié)構(gòu)，孔徑大約80nm，各種抗原、抗體分子可以在里面自由擴散。在瓊脂糖凝膠板上，相距適當(dāng)距離打小孔，小孔內(nèi)分別加適量的抗原和抗體。將抗原液和抗體液分別加入同一瓊脂糖凝膠板內(nèi)的相鄰小孔中，抗原和抗體分子在凝膠中順濃度梯度自由擴散。當(dāng)擴散到它們的濃度比例相適宜的部位時，抗原和相對應(yīng)的抗體形成大的抗原-抗體復(fù)合物，出現(xiàn)一條乳白色沉淀線。如果抗原和抗體不相對應(yīng)，或者抗原與對應(yīng)抗體之間濃度比例相差太大，無沉淀線出現(xiàn)。該試驗可用已知抗原檢測未知抗體，或已知抗體檢測未知抗原，可用于分析復(fù)雜的抗原成分，測定抗原和抗體的純度，測定抗體效價和抗原

14、滴度，可以用于分析兩種抗原成分的差異性。2、 操作方法： （1）1.2%瓊脂糖凝膠板的制備取1.2g優(yōu)質(zhì)瓊脂糖，8g氯化鈉，加120ml蒸餾水，在微波爐中加熱，使之完全溶化，待水蒸發(fā)到100ml刻度處時停止加熱。加1ml 1%硫柳汞，混勻，分裝，直徑6cm的平皿加9ml，冷卻。（2）用打孔器按適當(dāng)間距打孔，如下圖，每組中心1孔加周圍6孔，在酒精燈上烘烤封底。在微量反應(yīng)板上加生理鹽水或0.1mol/L、pH7.2PBS，對待檢血清進行倍比稀釋。加樣，周圍5孔加倍比稀釋的待檢血清，第6孔加雞傳染性法氏囊病參考陽性血清，中心孔加雞傳染性法氏囊病瓊擴診斷抗原，均加滿。（3）置于濕盒，放在恒溫培養(yǎng)箱中，

15、37、24h-48h。判定依據(jù)，周圍1-5孔與中心孔之間出現(xiàn)沉淀線，且與第6孔與中心孔形成的沉淀線發(fā)生融合，結(jié)果為陽性，以最高稀釋度的孔為反應(yīng)滴度。 實驗四：病毒雞胚中和試驗1、 原理： 將新城疫系病毒毒液作10倍遞進稀釋，分成兩列，在第一列每管中加等量正常血清（無新城疫病毒抗體），在第二列每管中加等量待測血清，混勻后置培養(yǎng)箱371h，再分別接種9日齡健康、無新城疫病毒抗體的雞胚，每個稀釋度接種5-10枚；繼續(xù)孵化5天。記錄每個稀釋度組的死亡數(shù)、累計死亡數(shù)和累計存活數(shù)，分別計算正常血清和待測血清的LD50及待測血清的中和指數(shù)（為中和病毒的能力大于正常血清的數(shù)值）。2、 操作方法：1、將不含新城

16、疫抗體的雞蛋孵化至9-11日齡。2、以無菌0.1mol/L、pH7.2PBS將新城疫系病毒毒液作10倍遞進稀釋，以滅菌小瓶或試管均分成2列，在第一列每管中加等量正常血清（無新城疫病毒抗體），在第二列每管中加等量待測血清，混勻后置培養(yǎng)箱371h。3、每個稀釋度組接種有活力的雞胚5-10枚，尿囊腔接種（見圖片），0.1mL/枚，繼續(xù)孵化5天。4、每天觀察2次，記錄每個稀釋度組的死亡數(shù)、累計死亡數(shù)和累計存活數(shù)，分別計算正常血清的LD50和待測血清的LD50及中和指數(shù)。 實驗五: 免疫層析金標記技術(shù)1、原理: 免疫膠體金技術(shù)是以膠體金作示蹤標志物而建立的一類免疫標記技術(shù)。 氯金酸（HAuCl4）在還原

17、劑（如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等）作用下，聚合成特定大小（5nm-50nm)的顆粒，由于靜電作用，成為一種穩(wěn)定的膠體溶液，稱為膠體金。不同的還原劑可以制備不同大小的膠體金顆粒。 膠體金顆粒在弱堿或弱酸環(huán)境中帶負電荷，可與抗體分子中帶正電荷的基團以靜電作用力發(fā)生結(jié)合，而其生物學(xué)特性（如抗體與抗原的結(jié)合）不受影響。膠體金標記抗體可應(yīng)用于光鏡或電鏡的免疫組化法、液相免疫測定、固相免疫分析（如免疫層析金標記技術(shù) ）以及流式細胞術(shù)等。2.操作方法：1. 使用前，將試劑盒和樣品恢復(fù)至室溫。2. 取出檢測卡，開封后平放于桌面上，用移液器或滴管吸取樣品液，垂直滴加3滴（約70-80ul）于加樣孔中，加樣

18、后開始計時。3. 加樣品液后，約30秒內(nèi)，紅色的液體從靠樣品孔的觀察窗邊緣涌出。朝另一方向流動。4. 5分鐘時判斷結(jié)果，超過10分鐘的結(jié)果無效。 實驗六:酶聯(lián)免疫吸附試驗1.原理:在聚苯乙烯微量滴定板孔中預(yù)先吸附某種抗原，將待測抗體加到孔中，充分反應(yīng)后充分洗滌；再加酶標抗抗體，充分反應(yīng)后充分洗滌；之后加酶的底物，進行顯色反應(yīng)。顯色后，以肉眼觀察和分析結(jié)果,或在酶標測定儀上測定吸光值,依據(jù)對照孔的吸光值和待測孔的吸光值的比值，判定結(jié)果。2.操作方法：（1）包被：在聚苯乙烯微量滴定板上，選擇一排孔，在每排的1-4孔加75ul包被液，在第1-4孔中加75ul雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗原液，置37恒溫箱、30min，或4、過夜。棄去孔中液體，甩干凈，加200ul洗滌液，放置1min，棄去，如此，洗滌3次。（2）封閉：在第1-4孔中加200ul