生化檢驗(yàn)-第二章-蛋白質(zhì)

1、第一節(jié)第一節(jié) 概述概述一、血漿蛋白質(zhì)一、血漿蛋白質(zhì) 血漿蛋白質(zhì)功能血漿蛋白質(zhì)功能1.1.直接在血液中發(fā)揮作用直接在血液中發(fā)揮作用 在血漿中運(yùn)載弱水溶性物質(zhì)在血漿中運(yùn)載弱水溶性物質(zhì) 維持血漿膠體滲透壓維持血漿膠體滲透壓 組成血液組成血液pHpH緩沖系統(tǒng)緩沖系統(tǒng)參與凝血與纖維蛋白溶解參與凝血與纖維蛋白溶解血漿固有酶在血漿發(fā)揮作用血漿固有酶在血漿發(fā)揮作用2.需要時(shí)進(jìn)入組織發(fā)揮作用需要時(shí)進(jìn)入組織發(fā)揮作用對(duì)組織蛋白起修補(bǔ)作用對(duì)組織蛋白起修補(bǔ)作用組成體液免疫防御系統(tǒng)組成體液免疫防御系統(tǒng)抑制組織蛋白酶抑制組織蛋白酶參與代謝調(diào)控作用的激素參與代謝調(diào)控作用的激素血漿蛋白質(zhì)的功能及分類(lèi)血漿蛋白質(zhì)的功能及分類(lèi)運(yùn)輸載

2、體運(yùn)輸載體 血漿脂蛋白血漿脂蛋白(CM(CM、VLDLVLDL、LDLLDL、HDLHDL等等) ) 白蛋白白蛋白 轉(zhuǎn)鐵蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白 結(jié)合珠蛋白結(jié)合珠蛋白 血色素結(jié)合蛋白血色素結(jié)合蛋白 銅藍(lán)蛋白銅藍(lán)蛋白 視黃醇結(jié)合蛋白視黃醇結(jié)合蛋白 甲狀腺素結(jié)合球蛋白甲狀腺素結(jié)合球蛋白 皮質(zhì)素結(jié)合球蛋白皮質(zhì)素結(jié)合球蛋白 類(lèi)固醇激素結(jié)合球蛋白類(lèi)固醇激素結(jié)合球蛋白 蛋白酶抑制物：蛋白酶抑制物： 1 1- -抗胰蛋白酶、抗胰蛋白酶、1 1- -抗糜蛋白酶抗糜蛋白酶 2 2- -巨球蛋白等巨球蛋白等6 6種以上種以上血漿酶：血漿酶： 卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶、假性膽堿酯酶等卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶、假性膽堿酯酶等 蛋白類(lèi)

3、激素：蛋白類(lèi)激素： 胰島素、胰高血糖素、生長(zhǎng)激素等胰島素、胰高血糖素、生長(zhǎng)激素等凝血與纖溶蛋白：凝血與纖溶蛋白： 纖維蛋白原，凝血酶原，凝血因子纖維蛋白原，凝血酶原，凝血因子、 、，前激肽釋放酶、，前激肽釋放酶、HMWHMW激肽原，激肽原， 抗凝血酶抗凝血酶,纖維蛋白溶酶原等纖維蛋白溶酶原等 免疫球蛋白和補(bǔ)體蛋白：免疫球蛋白和補(bǔ)體蛋白：IgGIgG、A A 、M M、D D、E E C1q C1q、C1rC1r、C1sC1s、C2C2、C3C3、C4C4、C5C5、C6C6、 C7C7、C8C8、C9C9、B B因子、因子、D D因子、備解素等因子、備解素等血漿蛋白質(zhì)的功能及分類(lèi)血漿蛋白質(zhì)的功

4、能及分類(lèi)血漿蛋白質(zhì)的電泳分類(lèi)血漿蛋白質(zhì)的電泳分類(lèi)醋纖膜電泳或瓊脂糖電泳：醋纖膜電泳或瓊脂糖電泳： 白蛋白白蛋白 1 1球蛋白球蛋白 2 2球蛋白球蛋白 球蛋白球蛋白 球蛋白球蛋白 分辨率高時(shí)：可有分辨率高時(shí)：可有1 1和和2 2 2 2中也可有兩條中也可有兩條 采用聚丙烯酰胺凝膠電泳，采用聚丙烯酰胺凝膠電泳，在適當(dāng)條件下可以分出在適當(dāng)條件下可以分出3030多個(gè)區(qū)帶多個(gè)區(qū)帶各電泳區(qū)帶的主要血漿蛋白質(zhì)各電泳區(qū)帶的主要血漿蛋白質(zhì)前白蛋白前白蛋白 甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 0.20.4g/L白蛋白白蛋白 白蛋白白蛋白 35551-球蛋白球蛋白1-抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶 0.92.0 1-酸性糖蛋

5、白酸性糖蛋白 0.51.2 甲胎蛋白甲胎蛋白 310-5 高密度脂蛋白高密度脂蛋白 1.73.252-球蛋白球蛋白結(jié)合珠蛋白結(jié)合珠蛋白 0.32.0 2-巨球蛋白巨球蛋白 1.253.1 銅藍(lán)蛋白銅藍(lán)蛋白 0.20.6-球蛋白球蛋白 轉(zhuǎn)鐵蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白 2.03.6 低密度脂蛋白低密度脂蛋白 2.54.4 C4 0.10.4 2-微球蛋白微球蛋白 0.0010.002 纖維蛋白原纖維蛋白原 2.04.0 C3 0.71.5 -球蛋白球蛋白 IgA 0.74.0 IgG 7.016 IgM 0.42.3 C- C-反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白 0.008 （一）前白蛋白（一）前白蛋白（prealbumin,P

6、Aprealbumin,PA）即甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白即甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白( (transthyretintransthyretin，TTR)TTR)電泳顯示在白蛋白前方故名電泳顯示在白蛋白前方故名PAPA，肝臟合成，肝臟合成，55kD55kD，半壽期僅，半壽期僅2.52.5天。天。50507070與視黃醇結(jié)合蛋白組成復(fù)合體。與視黃醇結(jié)合蛋白組成復(fù)合體。能轉(zhuǎn)運(yùn)甲狀腺素和三碘甲腺原氨酸，能轉(zhuǎn)運(yùn)甲狀腺素和三碘甲腺原氨酸， 大約結(jié)合血漿中大約結(jié)合血漿中1010的甲狀腺激素。的甲狀腺激素。必需氨基酸含量很高，是組織修補(bǔ)材料。必需氨基酸含量很高，是組織修補(bǔ)材料。（二）視黃醇結(jié)合蛋白（二）視黃醇結(jié)合蛋白 （ret

7、inol-binding proteinretinol-binding protein，RBPRBP ）肝臟合成，僅肝臟合成，僅21kD21kD，半壽期，半壽期12h12h攜帶視黃醇從肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)到各種靶組織。攜帶視黃醇從肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)到各種靶組織。與與TTRTTR以以1:11:1比例結(jié)合，避免比例結(jié)合，避免RBPRBP從腎小球?yàn)V過(guò)，從腎小球?yàn)V過(guò)， 在靶細(xì)胞，在靶細(xì)胞，TTR-RBPTTR-RBP降解，視黃醇被攝入細(xì)胞，降解，視黃醇被攝入細(xì)胞，無(wú)視黃醇的無(wú)視黃醇的RBPRBP載體蛋白與載體蛋白與TTRTTR無(wú)親和性，無(wú)親和性， 被腎小球?yàn)V出，腎近端小管細(xì)胞吸收并降解。被腎小球?yàn)V出，腎近端小管細(xì)胞吸收并降

8、解。 （三）白蛋白（三）白蛋白（albumin albumin ，ALBALB） 生化特性生化特性占血漿總蛋白的占血漿總蛋白的57576868，不含糖，不含糖，66.3kD66.3kD由肝臟合成，由肝臟合成，111114.7g/d14.7g/d，半壽期約，半壽期約18182020天天 合成儲(chǔ)備大，由血漿膠體滲透壓和蛋白質(zhì)攝入量調(diào)節(jié)合成儲(chǔ)備大，由血漿膠體滲透壓和蛋白質(zhì)攝入量調(diào)節(jié) 腎病綜合征時(shí)合成量可增高到正常的腎病綜合征時(shí)合成量可增高到正常的300300以上以上遺傳性變異可發(fā)生電泳遷移率變化，出現(xiàn)雙白蛋白區(qū)帶遺傳性變異可發(fā)生電泳遷移率變化，出現(xiàn)雙白蛋白區(qū)帶（三）白蛋白（三）白蛋白生理作用生理作用

9、最重要血漿營(yíng)養(yǎng)蛋白，胞飲進(jìn)入細(xì)胞，氨基酸合成組織蛋白最重要血漿營(yíng)養(yǎng)蛋白，胞飲進(jìn)入細(xì)胞，氨基酸合成組織蛋白最重要血漿載體蛋白最重要血漿載體蛋白維持血漿膠體滲透壓的最重要成分維持血漿膠體滲透壓的最重要成分緩沖酸堿物質(zhì)的主要血漿蛋白質(zhì)緩沖酸堿物質(zhì)的主要血漿蛋白質(zhì)高度溶于水，能運(yùn)載許多疏水分子高度溶于水，能運(yùn)載許多疏水分子 生理生理pHpH中為負(fù)離子，每分子帶中為負(fù)離子，每分子帶200200個(gè)負(fù)電荷個(gè)負(fù)電荷 運(yùn)輸膽紅素運(yùn)輸膽紅素. .長(zhǎng)鏈脂肪酸長(zhǎng)鏈脂肪酸. .膽汁酸鹽膽汁酸鹽. .前列腺素前列腺素. .類(lèi)固醇激素類(lèi)固醇激素 無(wú)機(jī)離子無(wú)機(jī)離子( (如如CaCa2+2+、CuCu2+2+、NiNi2+2+

10、).).藥物藥物( (如阿司匹林、青霉素如阿司匹林、青霉素) )結(jié)合型激素和藥物無(wú)活性，結(jié)合型激素和藥物無(wú)活性，ALBALB含量或含量或pHpH變化時(shí)其活性變化變化時(shí)其活性變化（四（四) )1 1- -抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶( (1 1-antitrypsin-antitrypsin，1 1ATAT或或AAT AAT ）蛋白酶和抗蛋白酶蛋白酶和抗蛋白酶蛋白酶：清除病原微生物、壞死組織和衰老紅細(xì)胞蛋白酶：清除病原微生物、壞死組織和衰老紅細(xì)胞 蛋白酶過(guò)多或活性過(guò)強(qiáng)可破壞正常組織和細(xì)胞蛋白酶過(guò)多或活性過(guò)強(qiáng)可破壞正常組織和細(xì)胞抗蛋白酶：機(jī)體為對(duì)抗蛋白酶的異常作用而產(chǎn)生抗蛋白酶：機(jī)體為對(duì)抗蛋白酶的異常作用

11、而產(chǎn)生 抗蛋白酶減少可導(dǎo)致某些疾病發(fā)生抗蛋白酶減少可導(dǎo)致某些疾病發(fā)生（四）（四）1 1- -抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶 生理功能生理功能占血清中抑制蛋白酶活力的占血清中抑制蛋白酶活力的9090左右左右能抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、膠原蛋白酶能抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、膠原蛋白酶 及白細(xì)胞釋放的溶酶體蛋白水解酶及白細(xì)胞釋放的溶酶體蛋白水解酶 形成不可逆的酶形成不可逆的酶- -抑制物復(fù)合體抑制物復(fù)合體 （四）（四）1 1- -抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶 AATAAT的多種遺傳表型的多種遺傳表型至少有至少有7575種，表達(dá)的蛋白質(zhì)有種，表達(dá)的蛋白質(zhì)有M M型和型和Z Z型、型、S S型型 PiMMPiMM型最多，占人

12、群型最多，占人群95%95%以上以上類(lèi)型：類(lèi)型：PiMMPiMM: :PiMSPiMS、PiMZPiMZ、PiSSPiSS、PiSZPiSZ、PiZZPiZZ 活力：活力：100%100%: :8080、6060、6060、3535、1515 （五）（五）1 1- -酸性糖蛋白酸性糖蛋白 ( (1 1-acid glycoprotein-acid glycoprotein，1 1AGAG或或AAG)AAG)主要的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白主要的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白 急性炎癥時(shí)增高，與免疫防御功能有關(guān)急性炎癥時(shí)增高，與免疫防御功能有關(guān)AAGAAG可以結(jié)合利多卡因和心得安等可以結(jié)合利多卡因和心得安等 急性心肌梗

13、死時(shí)升高，藥物結(jié)合狀態(tài)增加急性心肌梗死時(shí)升高，藥物結(jié)合狀態(tài)增加 游離狀態(tài)減少，需要增加藥物劑量。游離狀態(tài)減少，需要增加藥物劑量。 肝臟合成，肝臟合成，40kD40kD，又稱(chēng)血清類(lèi)黏蛋白，又稱(chēng)血清類(lèi)黏蛋白，含糖約含糖約4545，包括，包括11112020唾液酸，唾液酸，血清黏蛋白的主要成分，黏蛋白是能被血清黏蛋白的主要成分，黏蛋白是能被 高氯酸和其它強(qiáng)酸沉淀的一組蛋白質(zhì)。高氯酸和其它強(qiáng)酸沉淀的一組蛋白質(zhì)。 （六）結(jié)合珠蛋白（六）結(jié)合珠蛋白（haptoglobinhaptoglobin，HpHp） 生化特性和表型生化特性和表型由肝臟合成，由肝臟合成，85kD85kD400kD400kD，分子量變化

14、很大，分子量變化很大2 22 2四聚體，四聚體， 亞基不同而形成的四聚體表型不同亞基不同而形成的四聚體表型不同 亞基有三種遺傳表型亞基有三種遺傳表型1F1F、1s 1s 、2 2，氨基酸數(shù)不同，氨基酸數(shù)不同 有些表型的四聚體又形成聚合體，在電泳中出現(xiàn)多條帶有些表型的四聚體又形成聚合體，在電泳中出現(xiàn)多條帶 結(jié)合珠蛋白的幾種遺傳表型結(jié)合珠蛋白的幾種遺傳表型 表表 型型 亞單位的結(jié)構(gòu)亞單位的結(jié)構(gòu) 組組 成成Hp1-1 (Hp1-1 (1F1F) )2 22 2 80kD80kD，鏈氨基酸鏈氨基酸8383個(gè)個(gè) 1F1F1S 1S 2 2 鏈氨基酸鏈氨基酸245245個(gè)個(gè) (1S1S) ) 2 2 2

15、2Hp2-1 (Hp2-1 (1S1S2 2 2 2 )n 120kD-200kD)n 120kD-200kD的聚合體的聚合體 (1F1F2 2 2 2)n )n Hp2-2 (Hp2-2 (2 2)n 160kD-400kD)n 160kD-400kD n =3-8 n不同不同 在電泳中呈多條帶在電泳中呈多條帶能與能與RBCRBC中釋放的游離中釋放的游離HbHb結(jié)合結(jié)合 每分子每分子HpHp結(jié)合兩分子結(jié)合兩分子HbHb 防止防止HbHb從腎丟失而保留鐵，避免從腎丟失而保留鐵，避免HbHb對(duì)腎臟損傷。對(duì)腎臟損傷。HpHp不能重新被利用，溶血后其含量急劇降低，不能重新被利用，溶血后其含量急劇降低

16、， 血漿血漿HpHp濃度多在一周內(nèi)由再生而恢復(fù)。濃度多在一周內(nèi)由再生而恢復(fù)。 （六）結(jié)合珠蛋白（六）結(jié)合珠蛋白 生理功能生理功能由肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成，分子量約由肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成，分子量約720kD720kD血漿最大的蛋白質(zhì)，不能從血管擴(kuò)散至細(xì)胞外液血漿最大的蛋白質(zhì)，不能從血管擴(kuò)散至細(xì)胞外液也是主要的蛋白酶抑制劑也是主要的蛋白酶抑制劑能結(jié)合并抑制各種類(lèi)型的蛋白酶，能結(jié)合并抑制各種類(lèi)型的蛋白酶， 如纖維蛋白溶酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶等如纖維蛋白溶酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶等酶與酶與2 2MGMG處于復(fù)合物狀態(tài)時(shí)處于復(fù)合物狀態(tài)時(shí) 酶底物為大分子，蛋白水解酶活性被抑制酶底物為大分子，蛋白水解酶

17、活性被抑制 酶底物為小分子，仍能被酶底物為小分子，仍能被2 2MG-MG-蛋白酶水解蛋白酶水解 （七）（七）2巨球蛋白巨球蛋白 (2-acroglobulin，2MG或或AMG)（八）銅藍(lán)蛋白（八）銅藍(lán)蛋白（ceruloplasmin,Cpceruloplasmin,Cp） 生化特性生化特性肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成，肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成，132kD132kD，2 2區(qū)帶區(qū)帶每分子含每分子含6 68 8個(gè)銅原子，含銅而呈藍(lán)色個(gè)銅原子，含銅而呈藍(lán)色95%95%的血清銅存在于的血清銅存在于CpCp中，另中，另5%5%呈可擴(kuò)散狀態(tài)呈可擴(kuò)散狀態(tài) 血循環(huán)中血循環(huán)中CpCp為銅沒(méi)有毒性的代謝庫(kù)。為銅沒(méi)有毒性的代謝庫(kù)。與氧化

18、還原反應(yīng)有關(guān)，與氧化還原反應(yīng)有關(guān)， 既能起氧化作用又能起抗氧化作用。既能起氧化作用又能起抗氧化作用。具有鐵氧化酶作用，能將具有鐵氧化酶作用，能將FeFe2+2+氧化為氧化為FeFe3+3+ Fe Fe3+3+再結(jié)合到轉(zhuǎn)鐵蛋白上，使鐵不具毒性再結(jié)合到轉(zhuǎn)鐵蛋白上，使鐵不具毒性還有抑制膜脂質(zhì)氧化的作用還有抑制膜脂質(zhì)氧化的作用 （八）銅藍(lán)蛋白（八）銅藍(lán)蛋白 生理功能生理功能（九）轉(zhuǎn)鐵蛋白（九）轉(zhuǎn)鐵蛋白（transferrintransferrin，TRFTRF） 生化特性生化特性肝細(xì)胞合成，肝細(xì)胞合成，79.6kD79.6kD，區(qū)帶，半壽期區(qū)帶，半壽期10.5d10.5d能可逆結(jié)合多價(jià)陽(yáng)離子能可逆結(jié)合

19、多價(jià)陽(yáng)離子: :鐵、銅、鋅、鈷等，鐵、銅、鋅、鈷等， 其對(duì)鐵的結(jié)合具有臨床重要性其對(duì)鐵的結(jié)合具有臨床重要性（九）轉(zhuǎn)鐵蛋白（九）轉(zhuǎn)鐵蛋白 生理功能生理功能從小腸進(jìn)入血液的從小腸進(jìn)入血液的FeFe2+2+被被CpCp氧化為氧化為FeFe3+3+， 再被再被TRFTRF的載體蛋白結(jié)合。的載體蛋白結(jié)合。每種細(xì)胞表面都有每種細(xì)胞表面都有TRFTRF受體，對(duì)受體，對(duì)TRF-FeTRF-Fe3+3+ 復(fù)合物比對(duì)復(fù)合物比對(duì)TRFTRF的載體蛋白親和力高得多的載體蛋白親和力高得多TRF-FeTRF-Fe3+3+將大部分將大部分FeFe3+3+運(yùn)輸?shù)焦撬韬铣蛇\(yùn)輸?shù)焦撬韬铣蒆bHb 小部分則運(yùn)輸?shù)礁鹘M織細(xì)胞，形成鐵

20、蛋白小部分則運(yùn)輸?shù)礁鹘M織細(xì)胞，形成鐵蛋白 及合成肌紅蛋白、細(xì)胞色素等及合成肌紅蛋白、細(xì)胞色素等（十）（十）2 2- -微球蛋白微球蛋白 （2 2-microglobulin-microglobulin，2 2M M，BMGBMG）存在于各種有核細(xì)胞表面，僅存在于各種有核細(xì)胞表面，僅11.8kD11.8kD是是HLAHLA的輕鏈或的輕鏈或鏈，可從細(xì)胞表面尤其是淋巴鏈，可從細(xì)胞表面尤其是淋巴 細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞表面脫落到血漿中細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞表面脫落到血漿中從腎小球?yàn)V過(guò)，再被腎近端小管重吸收和分解從腎小球?yàn)V過(guò)，再被腎近端小管重吸收和分解 （十一（十一)C-)C-反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白 （C-reactive

21、C-reactive protein,CRPprotein,CRP） 生化特性生化特性因在急性炎癥病人血清中出現(xiàn)的可以結(jié)合因在急性炎癥病人血清中出現(xiàn)的可以結(jié)合 肺炎球菌細(xì)胞壁肺炎球菌細(xì)胞壁C-C-多糖的蛋白質(zhì)而命名多糖的蛋白質(zhì)而命名由肝細(xì)胞所合成，由肝細(xì)胞所合成，115kD115kD電泳分布在慢電泳分布在慢區(qū)帶，有時(shí)可延伸到區(qū)帶，有時(shí)可延伸到區(qū)帶區(qū)帶 不僅結(jié)合多種細(xì)胞、真菌及原蟲(chóng)等多糖物質(zhì)不僅結(jié)合多種細(xì)胞、真菌及原蟲(chóng)等多糖物質(zhì) 在鈣離子存在下，還可以結(jié)合卵磷脂和核酸在鈣離子存在下，還可以結(jié)合卵磷脂和核酸 可引發(fā)對(duì)侵入細(xì)胞的免疫調(diào)理作用和吞噬作用可引發(fā)對(duì)侵入細(xì)胞的免疫調(diào)理作用和吞噬作用 結(jié)合后的

22、復(fù)合體具有對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)的激活作用結(jié)合后的復(fù)合體具有對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)的激活作用 表現(xiàn)炎癥反應(yīng)表現(xiàn)炎癥反應(yīng) ( (十一十一)C-)C-反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白 生理功能生理功能二、體液氨基酸二、體液氨基酸（amino acidamino acid，AAAA） 來(lái)源：消化道吸收、體內(nèi)合成、組織蛋白分解來(lái)源：消化道吸收、體內(nèi)合成、組織蛋白分解作用：合成蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌锘钚晕镔|(zhì)作用：合成蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌锘钚晕镔|(zhì)分解途徑：分解途徑：脫氨基成氨及脫氨基成氨及-酮酸酮酸( (轉(zhuǎn)變?yōu)樘?、脂肪或分解供能轉(zhuǎn)變?yōu)樘?、脂肪或分解供? )小部分脫羧基生成小部分脫羧基生成COCO2 2和胺類(lèi)和胺類(lèi)體液氨基酸含量可反映

23、體內(nèi)氨基酸代謝紊亂情況體液氨基酸含量可反映體內(nèi)氨基酸代謝紊亂情況氨基酸代謝紊亂有遺傳性原發(fā)性和繼發(fā)性氨基酸代謝紊亂有遺傳性原發(fā)性和繼發(fā)性 （一）遺傳性原發(fā)性氨基酸代謝紊亂（一）遺傳性原發(fā)性氨基酸代謝紊亂 為遺傳性代謝酶缺陷引起，種類(lèi)很多為遺傳性代謝酶缺陷引起，種類(lèi)很多 是相關(guān)基因突變所致，至今已發(fā)現(xiàn)是相關(guān)基因突變所致，至今已發(fā)現(xiàn)7070余種余種 絕大多數(shù)疾患罕見(jiàn)，而病情卻嚴(yán)重絕大多數(shù)疾患罕見(jiàn)，而病情卻嚴(yán)重 如果診斷足夠早，某些疾患可以治療如果診斷足夠早，某些疾患可以治療1.1.氨基酸血癥（氨基酸血癥（AminoacidemiaAminoacidemia） 酶缺陷酶缺陷 在氨基酸代謝起點(diǎn)，其催化

24、的氨基酸在血中增加在氨基酸代謝起點(diǎn)，其催化的氨基酸在血中增加 在代謝途徑中間，酶催化前的中間代謝物堆積在代謝途徑中間，酶催化前的中間代謝物堆積 有時(shí)因正常途徑受阻，通過(guò)旁路代謝的產(chǎn)物可增多有時(shí)因正常途徑受阻，通過(guò)旁路代謝的產(chǎn)物可增多 氨基酸血癥（氨基酸血癥（aminoaciduria)aminoaciduria)： 氨基酸、或其中間代謝物、或其旁路代謝物在血氨基酸、或其中間代謝物、或其旁路代謝物在血液中增高。液中增高。 如酪氨酸血癥、組氨酸血癥、精氨酸血癥等如酪氨酸血癥、組氨酸血癥、精氨酸血癥等2. 2. 氨基酸尿癥（氨基酸尿癥（AminoaciduriaAminoaciduria） 血漿增多

25、的氨基酸及其代謝物均從腎小球?yàn)V過(guò)血漿增多的氨基酸及其代謝物均從腎小球?yàn)V過(guò) 超出腎小管重吸收能力從尿排出即為氨基酸尿癥超出腎小管重吸收能力從尿排出即為氨基酸尿癥 尿液中濃度經(jīng)常比血漿更高尿液中濃度經(jīng)常比血漿更高 血漿和尿液氨基酸增多可同時(shí)存在血漿和尿液氨基酸增多可同時(shí)存在 稱(chēng)某種氨基酸血癥或氨基酸尿癥有時(shí)是傳統(tǒng)習(xí)慣稱(chēng)某種氨基酸血癥或氨基酸尿癥有時(shí)是傳統(tǒng)習(xí)慣 腎小管細(xì)胞膜存在氨基酸載體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白腎小管細(xì)胞膜存在氨基酸載體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 當(dāng)某種載體缺乏時(shí)，相應(yīng)氨基酸從尿中排出增加當(dāng)某種載體缺乏時(shí)，相應(yīng)氨基酸從尿中排出增加 血漿中這些氨基酸濃度可在正常范圍或偏低血漿中這些氨基酸濃度可在正常范圍或偏低 遺傳性氨

26、基酸代謝紊亂的缺陷酶遺傳性氨基酸代謝紊亂的缺陷酶 及其血和尿中增高的成分及其血和尿中增高的成分( (帶帶* *為尿中氨基酸為尿中氨基酸) ) 疾病名稱(chēng)疾病名稱(chēng) 缺乏的酶缺乏的酶 血漿（尿）中增高的成分血漿（尿）中增高的成分苯丙酮酸尿癥苯丙酮酸尿癥 苯丙氨酸羥化酶苯丙氨酸羥化酶 苯丙氨酸、苯丙氨酸、 *苯丙酮酸苯丙酮酸I I型酪氨酸血癥型酪氨酸血癥 延胡索酸乙酰乙酸酶延胡索酸乙酰乙酸酶 酪氨酸、甲硫氨酸酪氨酸、甲硫氨酸尿黑酸尿癥尿黑酸尿癥 尿黑酸氧化酶尿黑酸氧化酶 尿黑酸（輕度）尿黑酸（輕度）同型胱氨酸尿癥同型胱氨酸尿癥 胱硫醚合成酶胱硫醚合成酶 甲硫氨酸、同型胱氨酸甲硫氨酸、同型胱氨酸組氨酸血

27、癥組氨酸血癥 組氨酸酶組氨酸酶 組氨酸、丙氨酸組氨酸、丙氨酸甘氨酸血癥甘氨酸血癥 甘氨酸氧化酶甘氨酸氧化酶 甘氨酸甘氨酸支鏈酮酸尿癥支鏈酮酸尿癥 支鏈酮酸氧化酶支鏈酮酸氧化酶 纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸等纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸等胱硫醚尿癥胱硫醚尿癥 胱硫醚酶胱硫醚酶 胱硫醚胱硫醚型高脯氨酸血癥型高脯氨酸血癥 脯氨酸氧化酶脯氨酸氧化酶 脯氨酸、脯氨酸、 *羥脯氨酸羥脯氨酸精氨酸琥珀酸尿癥精氨酸琥珀酸尿癥 精氨酸琥珀酸酶精氨酸琥珀酸酶 谷氨酰胺、脯氨酸、甘氨酸等谷氨酰胺、脯氨酸、甘氨酸等精氨酸血癥精氨酸血癥 精氨酸酶精氨酸酶 精氨酸、精氨酸、 *胱氨酸胱氨酸胱氨酸尿癥胱氨酸尿癥 腎小管堿性氨基酸載

28、體腎小管堿性氨基酸載體 *胱氨酸胱氨酸.精氨酸精氨酸.賴(lài)氨酸賴(lài)氨酸.鳥(niǎo)氨酸鳥(niǎo)氨酸色氨酸代謝綜合癥色氨酸代謝綜合癥 腎小管中性氨基酸載體腎小管中性氨基酸載體 *所有中性氨基酸所有中性氨基酸二羧基氨基酸尿癥二羧基氨基酸尿癥 腎小管酸性氨基酸載體腎小管酸性氨基酸載體 *谷氨酸、天冬氨酸谷氨酸、天冬氨酸亞氨基甘氨酸尿癥亞氨基甘氨酸尿癥 腎小管亞氨基酸載體腎小管亞氨基酸載體 *脯氨酸、羥脯氨酸、甘氨酸脯氨酸、羥脯氨酸、甘氨酸（二）繼發(fā)性氨基酸代謝紊亂（二）繼發(fā)性氨基酸代謝紊亂 與氨基酸代謝有關(guān)的器官出現(xiàn)嚴(yán)重病變與氨基酸代謝有關(guān)的器官出現(xiàn)嚴(yán)重病變 如肝臟和腎臟疾患、蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良、燒傷等如肝臟和腎臟疾患、

29、蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良、燒傷等 肝功能衰竭：支鏈氨基酸肝功能衰竭：支鏈氨基酸/ /芳香族氨基酸比值芳香族氨基酸比值 （BCAA/AAABCAA/AAA比值）下降比值）下降 繼發(fā)性腎性氨基酸尿：由腎小管損害、腎近曲小繼發(fā)性腎性氨基酸尿：由腎小管損害、腎近曲小管功能障礙，使氨基酸重吸收減少而引起管功能障礙，使氨基酸重吸收減少而引起 三、嘌呤核苷酸三、嘌呤核苷酸（一）嘌呤核苷酸代謝一）嘌呤核苷酸代謝 嘌呤核苷酸的合成：從頭合成途徑、補(bǔ)救途徑嘌呤核苷酸的合成：從頭合成途徑、補(bǔ)救途徑嘌呤核苷酸的分解：終產(chǎn)物是尿酸，人類(lèi)不能再分解嘌呤核苷酸的分解：終產(chǎn)物是尿酸，人類(lèi)不能再分解嘌呤核苷酸合成代謝嘌呤核苷酸合成代謝主

30、要原料：主要原料：5-5-磷酸核糖磷酸核糖氨基酸氨基酸一碳單位一碳單位 二、高尿酸血癥（二、高尿酸血癥（hyperuricemiahyperuricemia） 分為原發(fā)性和繼發(fā)性?xún)深?lèi)，以前者為多分為原發(fā)性和繼發(fā)性?xún)深?lèi)，以前者為多原發(fā)性高尿酸血癥：原發(fā)性高尿酸血癥： 遺傳性嘌呤代謝紊亂和遺傳性嘌呤代謝紊亂和/ /或尿酸排泄障礙引起或尿酸排泄障礙引起, 多數(shù)由多基因遺傳缺陷所致。病因不明，與代多數(shù)由多基因遺傳缺陷所致。病因不明，與代謝綜合征關(guān)系密切謝綜合征關(guān)系密切繼發(fā)性高尿酸血癥：繼發(fā)性高尿酸血癥： 高嘌呤飲食、腎臟疾病、血液病、藥物等引起高嘌呤飲食、腎臟疾病、血液病、藥物等引起嘌呤代謝紊亂嘌呤代

31、謝紊亂在原發(fā)性高尿酸血癥的病因中約占在原發(fā)性高尿酸血癥的病因中約占1010主要原因：嘌呤代謝酶缺陷主要原因：嘌呤代謝酶缺陷 大多數(shù)屬多基因遺傳缺陷，機(jī)制不明大多數(shù)屬多基因遺傳缺陷，機(jī)制不明 由單酶缺陷引起者僅占由單酶缺陷引起者僅占1 12 2 單酶缺陷原因：?jiǎn)蚊溉毕菰颍捍吸S嘌呤次黃嘌呤- -鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)(HGPRT)缺乏缺乏 PRPPPRPP合成酶亢進(jìn)合成酶亢進(jìn)G-6-PG-6-P酶缺乏，引起酶缺乏，引起G-6-G-6-磷酸增多磷酸增多 沿磷酸戊糖途徑生成較多沿磷酸戊糖途徑生成較多PRPPPRPP，嘌呤合成增多，嘌呤合成增多腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶腺嘌呤

32、磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(APRT)(APRT)缺乏缺乏 腺嘌呤不能經(jīng)補(bǔ)救途徑合成腺苷酸而出現(xiàn)堆積腺嘌呤不能經(jīng)補(bǔ)救途徑合成腺苷酸而出現(xiàn)堆積 腺嘌呤代謝產(chǎn)物腺嘌呤代謝產(chǎn)物2 2，8-8-二羥腺嘌呤由尿排出增加二羥腺嘌呤由尿排出增加 可產(chǎn)生腎結(jié)石，可產(chǎn)生腎結(jié)石，不是高尿酸血癥不是高尿酸血癥 2.2.尿酸排泄障礙尿酸排泄障礙原發(fā)性高尿酸血癥中原發(fā)性高尿酸血癥中80809090具有尿酸排泄障礙具有尿酸排泄障礙腎臟功能大多正常，僅存在尿酸排泄障礙腎臟功能大多正常，僅存在尿酸排泄障礙屬多基因遺傳性疾病，易感基因和發(fā)病機(jī)制不明確屬多基因遺傳性疾病，易感基因和發(fā)病機(jī)制不明確 2.2.尿酸排泄障礙尿酸排泄障礙 腎臟對(duì)尿酸

33、鹽的排泄有四個(gè)階段：腎臟對(duì)尿酸鹽的排泄有四個(gè)階段： 腎小球腎小球 濾過(guò)血漿中的全部尿酸鹽濾過(guò)血漿中的全部尿酸鹽 減少減少 近曲小管近曲小管 重吸收濾液中大部分重吸收濾液中大部分 增多增多 近端小管近端小管 再分泌再分泌 減少減少 髓絆降支髓絆降支 被動(dòng)重吸收被動(dòng)重吸收 增多增多 終尿排出尿酸鹽只占濾過(guò)量的終尿排出尿酸鹽只占濾過(guò)量的6 61010 總量約為總量約為2.4mmol2.4mmol3.0mmol/d3.0mmol/d 腎臟尿酸排泄障礙涉及以上各個(gè)過(guò)程腎臟尿酸排泄障礙涉及以上各個(gè)過(guò)程 3.3.代謝綜合征與高尿酸血癥代謝綜合征與高尿酸血癥原發(fā)性高尿酸血癥與肥胖、原發(fā)性高血壓、原發(fā)性高尿酸血

34、癥與肥胖、原發(fā)性高血壓、 血脂異常、糖尿病、胰島素抵抗關(guān)系密切。血脂異常、糖尿病、胰島素抵抗關(guān)系密切。高尿酸血癥是代謝綜合征的一個(gè)組成部分高尿酸血癥是代謝綜合征的一個(gè)組成部分肥胖和高甘油三酯血癥是高尿酸血癥的相關(guān)因素肥胖和高甘油三酯血癥是高尿酸血癥的相關(guān)因素 但血液尿酸和但血液尿酸和TG等之間相互作用的機(jī)制仍不清楚等之間相互作用的機(jī)制仍不清楚4.4.高嘌呤飲食高嘌呤飲食短時(shí)間內(nèi)從飲食攝入大量含嘌呤食物會(huì)生成大量尿酸短時(shí)間內(nèi)從飲食攝入大量含嘌呤食物會(huì)生成大量尿酸 超過(guò)腎臟排泄能力導(dǎo)致血液尿酸升高超過(guò)腎臟排泄能力導(dǎo)致血液尿酸升高各類(lèi)葷菜都含嘌呤，尤其是各種動(dòng)物內(nèi)臟和海鮮各類(lèi)葷菜都含嘌呤，尤其是各種

35、動(dòng)物內(nèi)臟和海鮮嘌呤極高：腦嘌呤極高：腦. .肝肝. .腎腎. .心心. .蛤蜊蛤蜊. .鳳尾魚(yú)鳳尾魚(yú). .沙丁魚(yú)沙丁魚(yú). .肉汁等肉汁等嘌呤較高蔬菜：菠菜嘌呤較高蔬菜：菠菜. .韭菜韭菜. .扁豆扁豆. .豌豆豌豆. .大豆大豆. .豆制品等豆制品等飲料：咖啡、濃茶含一定量嘌呤飲料：咖啡、濃茶含一定量嘌呤酒類(lèi)：啤酒可能性最大，烈性酒次之，葡萄酒不存在酒類(lèi)：啤酒可能性最大，烈性酒次之，葡萄酒不存在雞蛋和牛奶含豐富蛋白質(zhì)而嘌呤較低，水果中嘌呤很少雞蛋和牛奶含豐富蛋白質(zhì)而嘌呤較低，水果中嘌呤很少5.5.各種腎臟疾病各種腎臟疾病各種腎小球疾病各種腎小球疾病 濾過(guò)功能等減退濾過(guò)功能等減退慢性鉛中毒慢性鉛

36、中毒 腎小管損害腎小管損害藥物競(jìng)爭(zhēng)性抑制腎小管排泌尿酸：藥物競(jìng)爭(zhēng)性抑制腎小管排泌尿酸： 雙氫克尿塞雙氫克尿塞/ /利尿酸利尿酸/ /速尿速尿/ /吡嗪酰胺吡嗪酰胺/ /小劑量阿司匹林小劑量阿司匹林血液乳酸或酮酸等有機(jī)陰離子濃度增高：血液乳酸或酮酸等有機(jī)陰離子濃度增高： 腎小管對(duì)尿酸的分泌受到競(jìng)爭(zhēng)性抑制而排出減少腎小管對(duì)尿酸的分泌受到競(jìng)爭(zhēng)性抑制而排出減少6.6.細(xì)胞破壞增多細(xì)胞破壞增多使核酸分解及尿酸生成增多：使核酸分解及尿酸生成增多：骨髓增生性疾病核酸合成增加和周轉(zhuǎn)加速骨髓增生性疾病核酸合成增加和周轉(zhuǎn)加速白血病、淋巴瘤、紅細(xì)胞增多癥等白血病、淋巴瘤、紅細(xì)胞增多癥等惡性腫瘤的化療和放療后細(xì)胞破壞

37、過(guò)多惡性腫瘤的化療和放療后細(xì)胞破壞過(guò)多溶貧、溶貧、SLESLE、牛皮癬、心梗、肺結(jié)核等、牛皮癬、心梗、肺結(jié)核等 組織細(xì)胞破壞增多組織細(xì)胞破壞增多 高尿酸血癥和痛風(fēng)的病因分類(lèi)高尿酸血癥和痛風(fēng)的病因分類(lèi) 類(lèi)類(lèi) 型型 病因或遺傳特征病因或遺傳特征原發(fā)性高尿酸血癥原發(fā)性高尿酸血癥 尿酸排泄減少，占尿酸排泄減少，占80-90 多基因性常染色體顯性遺傳多基因性常染色體顯性遺傳 尿酸產(chǎn)生過(guò)多尿酸產(chǎn)生過(guò)多 從頭合成嘌呤過(guò)多從頭合成嘌呤過(guò)多(占原發(fā)性占原發(fā)性10-20) 多基因性常染色體顯性遺傳多基因性常染色體顯性遺傳 特異性酶缺陷特異性酶缺陷(占原發(fā)性占原發(fā)性1) 青春性原發(fā)性痛風(fēng)青春性原發(fā)性痛風(fēng) HGPRT

38、部分缺乏，部分缺乏，X-連鎖連鎖 青春期尿酸結(jié)石癥青春期尿酸結(jié)石癥 （突變型）（突變型）PRS活性增強(qiáng)活性增強(qiáng) Lesch-NyhanLesch-Nyhan綜合征綜合征 HGPRT完全缺乏，完全缺乏，X-連鎖連鎖 Con Con gierkegierke病病 葡萄糖葡萄糖-6-磷酸酶缺乏或不足磷酸酶缺乏或不足 繼發(fā)性高尿酸血癥繼發(fā)性高尿酸血癥 尿酸排泄減少尿酸排泄減少 腎功能減退腎功能減退 慢性腎疾患慢性腎疾患 腎小球?yàn)V過(guò)減少腎小球?yàn)V過(guò)減少 糖尿病腎病糖尿病腎病 腎小管排泌尿酸減少腎小管排泌尿酸減少 高血壓、內(nèi)分泌疾病、高血壓、內(nèi)分泌疾病、 有機(jī)酸增加有機(jī)酸增加 、鉛中毒腎病、鉛中毒腎病尿酸產(chǎn)

39、生過(guò)多尿酸產(chǎn)生過(guò)多 骨髓增殖性疾?。喊籽　⒍喟l(fā)性骨髓瘤、紅細(xì)胞增多癥骨髓增殖性疾?。喊籽　⒍喟l(fā)性骨髓瘤、紅細(xì)胞增多癥 慢性溶血性貧血慢性溶血性貧血 全身擴(kuò)散的癌癥，惡性腫瘤化療或放療全身擴(kuò)散的癌癥，惡性腫瘤化療或放療 嚴(yán)重的剝脫性牛皮癬嚴(yán)重的剝脫性牛皮癬一、體液總蛋白定量一、體液總蛋白定量二、體液白蛋白定量二、體液白蛋白定量三、血清蛋白質(zhì)電泳三、血清蛋白質(zhì)電泳四、免疫固定電泳四、免疫固定電泳五、體液個(gè)別蛋白質(zhì)五、體液個(gè)別蛋白質(zhì)六、體液氨基酸六、體液氨基酸七、體液尿酸七、體液尿酸 第二節(jié)第二節(jié) 常用體液蛋白質(zhì)與非蛋白含氮化合物檢測(cè)項(xiàng)目常用體液蛋白質(zhì)與非蛋白含氮化合物檢測(cè)項(xiàng)目 一、一、 體液總

40、蛋白體液總蛋白體液總蛋白體液總蛋白 數(shù)量種類(lèi)眾多數(shù)量種類(lèi)眾多定量測(cè)定時(shí)作了如下假定：定量測(cè)定時(shí)作了如下假定：1.1.所有血漿蛋白是單純的多肽鏈，糖脂類(lèi)和金所有血漿蛋白是單純的多肽鏈，糖脂類(lèi)和金 屬有機(jī)物等均不計(jì)在內(nèi)，其含氮量平均為屬有機(jī)物等均不計(jì)在內(nèi)，其含氮量平均為16162.2.各種蛋白質(zhì)理化性質(zhì)雖不同，各種蛋白質(zhì)理化性質(zhì)雖不同，但與化學(xué)試劑的但與化學(xué)試劑的 反應(yīng)性（如呈色、沉淀）一致。反應(yīng)性（如呈色、沉淀）一致。測(cè)定蛋白質(zhì)時(shí)利用蛋白質(zhì)特有的結(jié)構(gòu)或性質(zhì)：測(cè)定蛋白質(zhì)時(shí)利用蛋白質(zhì)特有的結(jié)構(gòu)或性質(zhì)：重復(fù)的肽鏈結(jié)構(gòu)；重復(fù)的肽鏈結(jié)構(gòu)；分子中均含有氮原子；分子中均含有氮原子；與色素結(jié)合的能力；與色素結(jié)合

41、的能力；沉淀后借濁度或光折射測(cè)定；沉淀后借濁度或光折射測(cè)定；酪氨酸和色氨酸殘基對(duì)酚試劑反應(yīng)或紫外光吸收酪氨酸和色氨酸殘基對(duì)酚試劑反應(yīng)或紫外光吸收臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)定體液蛋白質(zhì)的方法有多種臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)定體液蛋白質(zhì)的方法有多種 各種方法性能和應(yīng)用情況不同各種方法性能和應(yīng)用情況不同 最多用的是雙縮脲法最多用的是雙縮脲法 一、一、 體液總蛋白體液總蛋白（一）雙縮脲法（一）雙縮脲法（biurea method） 【測(cè)定原理測(cè)定原理】蛋白質(zhì)中兩個(gè)相鄰肽鍵蛋白質(zhì)中兩個(gè)相鄰肽鍵(-CO-NH-)(-CO-NH-)在堿性溶液中能在堿性溶液中能與二價(jià)銅離子作用產(chǎn)生穩(wěn)定的紫紅色絡(luò)和物。與二價(jià)銅離子作用產(chǎn)生穩(wěn)定的紫紅色絡(luò)和

42、物。此反應(yīng)與雙縮脲此反應(yīng)與雙縮脲( (兩個(gè)尿素縮合物兩個(gè)尿素縮合物H H2 2N-OC-NH-CO-N-OC-NH-CO-NHNH2 2) )在堿性溶液與在堿性溶液與CuCu2+2+作用形成紫紅色反應(yīng)相似。作用形成紫紅色反應(yīng)相似。因此將蛋白質(zhì)與堿性銅反應(yīng)的方法稱(chēng)為雙縮脲法因此將蛋白質(zhì)與堿性銅反應(yīng)的方法稱(chēng)為雙縮脲法（一）雙縮脲法（一）雙縮脲法【參考區(qū)間參考區(qū)間】隨年齡增大有所增高，隨年齡增大有所增高，6060歲后則稍有下降。歲后則稍有下降。新生兒新生兒:46:4670 g/L70 g/L，數(shù)月到，數(shù)月到2 2歲歲:51:5175g/L75g/L， 3 3歲及以上歲及以上:60:6080 g/L8

43、0 g/L。成人成人:64:6483g/L(83g/L(直立行走直立行走) )和和606078g/L(78g/L(臥床臥床) )【臨床意義臨床意義】濃度下降常由白蛋白濃度下降而引起濃度下降常由白蛋白濃度下降而引起濃度增高見(jiàn)于慢性炎癥等多克隆免疫球蛋白增多，濃度增高見(jiàn)于慢性炎癥等多克隆免疫球蛋白增多，以及漿細(xì)胞病的單克隆免疫球蛋白增多癥。以及漿細(xì)胞病的單克隆免疫球蛋白增多癥。（一）雙縮脲法（一）雙縮脲法【方法評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)】（1 1）特異性：）特異性：至少含兩個(gè)至少含兩個(gè)-CONH-CONH-才能與才能與CuCu2+2+絡(luò)合，絡(luò)合， 氨基酸及二肽無(wú)反應(yīng)，三肽以上才能反應(yīng)。氨基酸及二肽無(wú)反應(yīng)，三肽以

44、上才能反應(yīng)。 體液小分子肽含量極低，可忽略不計(jì)。體液小分子肽含量極低，可忽略不計(jì)。（2 2）呈色一致性：）呈色一致性：因呈色強(qiáng)度與肽鍵數(shù)量即蛋白質(zhì)因呈色強(qiáng)度與肽鍵數(shù)量即蛋白質(zhì) 含量成正比，故各種蛋白質(zhì)呈色強(qiáng)度基本相同，含量成正比，故各種蛋白質(zhì)呈色強(qiáng)度基本相同， 為目前所有總蛋白測(cè)定方法中最好。為目前所有總蛋白測(cè)定方法中最好。（一）雙縮脲法（一）雙縮脲法【方法評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)】（3 3）臨床應(yīng)用：）臨床應(yīng)用：檢測(cè)范圍檢測(cè)范圍1010120g/L120g/L靈敏度不高，但很適合血清總蛋白濃度靈敏度不高，但很適合血清總蛋白濃度對(duì)胸腹水總蛋白的檢測(cè)低限為對(duì)胸腹水總蛋白的檢測(cè)低限為0.47g/L0.47g/

45、L 生物檢測(cè)限為生物檢測(cè)限為1.33g/L1.33g/L 胸腹腔積液胸腹腔積液TPTP在在4.54.550 g/L50 g/L，可采用該法，可采用該法蛋白質(zhì)濃度很低的腦脊液和尿液無(wú)法定量蛋白質(zhì)濃度很低的腦脊液和尿液無(wú)法定量（二）測(cè)定體液總蛋白的其他方法（二）測(cè)定體液總蛋白的其他方法 1.1.染料結(jié)合法染料結(jié)合法 酸性環(huán)境蛋白質(zhì)帶正電荷，可與染料陰離子反應(yīng)酸性環(huán)境蛋白質(zhì)帶正電荷，可與染料陰離子反應(yīng)而產(chǎn)生顏色改變。而產(chǎn)生顏色改變。染料有氨基黑、麗春紅、考馬斯亮藍(lán)、鄰苯三酚紅染料有氨基黑、麗春紅、考馬斯亮藍(lán)、鄰苯三酚紅鉬等，前兩種常作血清蛋白電泳的染料。鉬等，前兩種常作血清蛋白電泳的染料?？捡R斯亮藍(lán)

46、可用于尿液、腦脊液等定量測(cè)定，雖簡(jiǎn)考馬斯亮藍(lán)可用于尿液、腦脊液等定量測(cè)定，雖簡(jiǎn)便和靈敏，但比色杯對(duì)染料有吸附作用。便和靈敏，但比色杯對(duì)染料有吸附作用。鄰苯三酚紅鉬法沒(méi)有考馬斯亮藍(lán)法的缺點(diǎn)。鄰苯三酚紅鉬法沒(méi)有考馬斯亮藍(lán)法的缺點(diǎn)。各法均存在與不同蛋白質(zhì)結(jié)合力不一致的問(wèn)題各法均存在與不同蛋白質(zhì)結(jié)合力不一致的問(wèn)題 （二）測(cè)定體液總蛋白的其他方法（二）測(cè)定體液總蛋白的其他方法 1.1.染料結(jié)合法染料結(jié)合法 鄰苯三酚紅鉬法鄰苯三酚紅鉬法（pyrogallol red molybdate，PRM） 原理：原理：在酸性介質(zhì)中，鄰苯三酚紅在酸性介質(zhì)中，鄰苯三酚紅- -鉬酸鹽與蛋白鉬酸鹽與蛋白質(zhì)形成復(fù)合物，最大吸

47、收峰從質(zhì)形成復(fù)合物，最大吸收峰從467nm467nm轉(zhuǎn)移至轉(zhuǎn)移至594nm594nm。靈敏度高，檢測(cè)下限約靈敏度高，檢測(cè)下限約101020mg/L20mg/L，上限約，上限約2g/L2g/L 試劑不吸附比色杯，可用于自動(dòng)生化分析儀中試劑不吸附比色杯，可用于自動(dòng)生化分析儀中各種蛋白質(zhì)呈色程度不同，球蛋白約為白蛋白各種蛋白質(zhì)呈色程度不同，球蛋白約為白蛋白7070 加入適量十二烷基磺酸鈉，球蛋白反應(yīng)性有所升高加入適量十二烷基磺酸鈉，球蛋白反應(yīng)性有所升高該法適用于蛋白質(zhì)濃度低的尿液、腦脊液等該法適用于蛋白質(zhì)濃度低的尿液、腦脊液等 （二）測(cè)定體液總蛋白的其他方法（二）測(cè)定體液總蛋白的其他方法 2.2.凱

48、氏定氮法（凱氏定氮法（KjeldahlKjeldahl method method） 1883 1883年建立，是經(jīng)典的蛋白質(zhì)測(cè)定方法。年建立，是經(jīng)典的蛋白質(zhì)測(cè)定方法。原理：測(cè)定樣品中的含氮量，推算出蛋白質(zhì)含量。蛋原理：測(cè)定樣品中的含氮量，推算出蛋白質(zhì)含量。蛋白質(zhì)中含氮量較為恒定，平均白質(zhì)中含氮量較為恒定，平均1616, ,即即1 1克氮相當(dāng)于克氮相當(dāng)于6.256.25克蛋白質(zhì)?？说鞍踪|(zhì)。 準(zhǔn)確性好，精密度高，靈敏度高，適用于任何形態(tài)的準(zhǔn)確性好，精密度高，靈敏度高，適用于任何形態(tài)的樣品測(cè)定，至今仍被認(rèn)為是測(cè)定許多生物樣品中蛋白樣品測(cè)定，至今仍被認(rèn)為是測(cè)定許多生物樣品中蛋白質(zhì)含量的參考方法。質(zhì)含

49、量的參考方法。但操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)，不適合臨床常規(guī)測(cè)定。但操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)，不適合臨床常規(guī)測(cè)定。 （二）測(cè)定體液總蛋白的其他方法（二）測(cè)定體液總蛋白的其他方法 3 3比濁法（比濁法（turbidimetry）某些酸如三氯乙酸、磺基水楊酸等能與蛋白某些酸如三氯乙酸、磺基水楊酸等能與蛋白質(zhì)結(jié)合而產(chǎn)生微細(xì)沉淀，由此產(chǎn)生的懸浮液質(zhì)結(jié)合而產(chǎn)生微細(xì)沉淀，由此產(chǎn)生的懸浮液濁度大小與蛋白質(zhì)的濃度成正比。濁度大小與蛋白質(zhì)的濃度成正比。優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、靈敏度高，優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、靈敏度高， 可測(cè)定尿液、腦脊液等蛋白質(zhì)較低的樣品?？蓽y(cè)定尿液、腦脊液等蛋白質(zhì)較低的樣品。缺點(diǎn)是影響濁度大小的因素較多，包括加入缺點(diǎn)是影響濁度大小

50、的因素較多，包括加入試劑的手法、混勻技術(shù)、反應(yīng)溫度等，且各試劑的手法、混勻技術(shù)、反應(yīng)溫度等，且各種蛋白質(zhì)形成的濁度亦有較大的差別。種蛋白質(zhì)形成的濁度亦有較大的差別。 （二）測(cè)定體液總蛋白的其他方法（二）測(cè)定體液總蛋白的其他方法 3 3比濁法比濁法 芐乙氯銨法芐乙氯銨法是目前臨床上較多應(yīng)用的比濁法是目前臨床上較多應(yīng)用的比濁法原理：原理：芐乙氯銨在堿性條件下與蛋白質(zhì)形成沉芐乙氯銨在堿性條件下與蛋白質(zhì)形成沉淀，其懸浮液穩(wěn)定，淀，其懸浮液穩(wěn)定，660nm 660nm 處進(jìn)行濁度測(cè)定。處進(jìn)行濁度測(cè)定。靈敏度、準(zhǔn)確度、對(duì)白蛋白和球蛋白的反應(yīng)一靈敏度、準(zhǔn)確度、對(duì)白蛋白和球蛋白的反應(yīng)一致性都優(yōu)于其他比濁法，檢

51、測(cè)范圍較廣。致性都優(yōu)于其他比濁法，檢測(cè)范圍較廣。精密度仍不夠理想。精密度仍不夠理想。 （二）測(cè)定體液總蛋白的其他方法（二）測(cè)定體液總蛋白的其他方法 4 4. 酚試劑法酚試劑法（phenol reagent method）FolinFolin在在19211921年首創(chuàng)，用于酪氨酸和色氨酸測(cè)定年首創(chuàng)，用于酪氨酸和色氨酸測(cè)定 后由吳憲用于蛋白質(zhì)定量后由吳憲用于蛋白質(zhì)定量原理：原理：蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸使磷鎢酸和磷鉬蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸使磷鎢酸和磷鉬酸還原為鎢藍(lán)和鉬藍(lán)。酸還原為鎢藍(lán)和鉬藍(lán)。靈敏度較高靈敏度較高各種蛋白質(zhì)酪氨酸和色氨酸含量不同，各種蛋白質(zhì)酪氨酸和色氨酸含量不同， 如如ALBALB含色

52、氨酸含色氨酸0.20.2，球蛋白色氨酸，球蛋白色氨酸2 23 3 因此只適合測(cè)定單一蛋白質(zhì)。因此只適合測(cè)定單一蛋白質(zhì)。受還原性物質(zhì)干擾受還原性物質(zhì)干擾( (帶帶-SH-SH化合物、糖類(lèi)、酚類(lèi)等化合物、糖類(lèi)、酚類(lèi)等) ) （二）測(cè)定體液總蛋白的其他方法（二）測(cè)定體液總蛋白的其他方法 5直接紫外吸收法直接紫外吸收法根據(jù)蛋白質(zhì)在根據(jù)蛋白質(zhì)在280nm280nm或或215/225nm215/225nm紫外吸收值，紫外吸收值，計(jì)算蛋白質(zhì)含量。計(jì)算蛋白質(zhì)含量。 蛋白質(zhì)濃度（蛋白質(zhì)濃度（g/L）1.45A280nm-0.74A260nm 準(zhǔn)確性受蛋白中芳香族氨基酸含量影響甚大準(zhǔn)確性受蛋白中芳香族氨基酸含量影

53、響甚大 而且尿酸和膽紅素在而且尿酸和膽紅素在280nm280nm附近有干擾。附近有干擾。不適合血清、尿液等組成復(fù)雜的體液蛋白質(zhì)，不適合血清、尿液等組成復(fù)雜的體液蛋白質(zhì)， 常用于較純的酶、免疫球蛋白等測(cè)定。常用于較純的酶、免疫球蛋白等測(cè)定。 二、體液白蛋白二、體液白蛋白 【檢測(cè)方法檢測(cè)方法】包括電泳法、免疫化學(xué)法和染料結(jié)合法。包括電泳法、免疫化學(xué)法和染料結(jié)合法。電泳法只能測(cè)其百分含量，乘電泳法只能測(cè)其百分含量，乘TPTP濃度得其濃度濃度得其濃度 用于用于ALBALB定量不方便且精密度不如直接定量定量不方便且精密度不如直接定量免疫化學(xué)法包括免疫比濁法和放射免疫法等免疫化學(xué)法包括免疫比濁法和放射免疫

54、法等 特異性好、靈敏度高，特異性好、靈敏度高，ALBALB易純化、抗血清易制備，易純化、抗血清易制備，適合尿液和腦脊液等低濃度適合尿液和腦脊液等低濃度ALBALB的測(cè)定的測(cè)定血清血清ALBALB測(cè)定可采用染料結(jié)合法測(cè)定可采用染料結(jié)合法 二、體液白蛋白二、體液白蛋白【檢測(cè)方法檢測(cè)方法】 染料結(jié)合法染料結(jié)合法 原理：原理：陰離子染料溴甲酚綠陰離子染料溴甲酚綠( (bromcresolbromcresol green green ，BCG)BCG) 溴甲酚紫溴甲酚紫( (bromcresolbromcresol purple purple ，BCP)BCP)能與能與ALBALB結(jié)合，結(jié)合， 其最大吸

55、收峰發(fā)生轉(zhuǎn)移。其最大吸收峰發(fā)生轉(zhuǎn)移。 BCGBCG與與ALBALB形成的藍(lán)綠色復(fù)合物在形成的藍(lán)綠色復(fù)合物在630nm630nm處有吸收峰，處有吸收峰， BCPBCP與與ALBALB形成的綠色復(fù)合物在形成的綠色復(fù)合物在603nm603nm處有吸收峰。處有吸收峰。 而球蛋白基本不結(jié)合這些染料。而球蛋白基本不結(jié)合這些染料。 二、體液白蛋白二、體液白蛋白【參考區(qū)間參考區(qū)間】隨年齡有所變化，隨年齡有所變化，0 04 4天：天：282844 g/L44 g/L 4 4天天1414歲：歲：383854 g/L54 g/L，此后下降，此后下降成人：成人：353552 g/L52 g/L，6060歲為歲為323

56、246 g/L46 g/L 走動(dòng)者比臥床者平均高走動(dòng)者比臥床者平均高3 g/L3 g/L【醫(yī)學(xué)決定水平醫(yī)學(xué)決定水平】：35g35gL L時(shí)正常時(shí)正常 282834g34gL L為輕度缺乏為輕度缺乏 212127g27gL L為中度缺乏為中度缺乏 21g21gL L則嚴(yán)重缺乏則嚴(yán)重缺乏 低于低于28g28gL L時(shí)，會(huì)出現(xiàn)組織水腫時(shí)，會(huì)出現(xiàn)組織水腫【臨床意義臨床意義】ALBALB增高僅見(jiàn)于嚴(yán)重失水時(shí)，無(wú)重要臨床意義增高僅見(jiàn)于嚴(yán)重失水時(shí)，無(wú)重要臨床意義低低ALBALB血癥見(jiàn)于下述許多疾病情況：血癥見(jiàn)于下述許多疾病情況：（1 1）白蛋白合成不足）白蛋白合成不足： 嚴(yán)重肝臟合成功能下降如肝硬化、重癥肝

57、炎嚴(yán)重肝臟合成功能下降如肝硬化、重癥肝炎 蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良或吸收不良蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良或吸收不良ALBALB受飲食蛋白質(zhì)攝入量影響，可作為營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)受飲食蛋白質(zhì)攝入量影響，可作為營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的評(píng)價(jià)指標(biāo)，早期缺乏時(shí)不易檢出。的評(píng)價(jià)指標(biāo)，早期缺乏時(shí)不易檢出。二、體液白蛋白二、體液白蛋白【臨床意義臨床意義】 （2 2）白蛋白丟失：）白蛋白丟失： 尿中丟失如腎病綜合征、慢性腎小球腎炎、尿中丟失如腎病綜合征、慢性腎小球腎炎、 糖尿病腎病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎病等糖尿病腎病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎病等 胃腸道蛋白質(zhì)丟失，因黏膜炎癥壞死胃腸道蛋白質(zhì)丟失，因黏膜炎癥壞死 皮膚丟失如燒傷及滲出性皮炎等皮膚丟失如燒傷及滲出性皮炎等

58、（3 3）白蛋白分解代謝增加：）白蛋白分解代謝增加： 組織損傷如外科手術(shù)和創(chuàng)傷組織損傷如外科手術(shù)和創(chuàng)傷 組織分解增加如感染性炎癥疾病等組織分解增加如感染性炎癥疾病等 二、體液白蛋白二、體液白蛋白【臨床意義臨床意義】（4 4）白蛋白的分布異常：）白蛋白的分布異常： 門(mén)靜脈高壓時(shí)大量門(mén)靜脈高壓時(shí)大量ALBALB從血管內(nèi)漏入腹腔從血管內(nèi)漏入腹腔（5 5）無(wú)白蛋白血癥）無(wú)白蛋白血癥： 極少見(jiàn)的遺傳性缺陷，血漿極少見(jiàn)的遺傳性缺陷，血漿ALBALB含量常低于含量常低于1g/L1g/L二、體液白蛋白二、體液白蛋白【方法評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)】 （1 1）兩種染料結(jié)合法均操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好）兩種染料結(jié)合法均操作簡(jiǎn)便、重

59、復(fù)性好（2 2）特異性）特異性BCGBCG與與ALBALB為快反應(yīng)，為快反應(yīng)，3030秒基本完全秒基本完全 血清血清和和球蛋白能起慢反應(yīng)，程度較球蛋白能起慢反應(yīng)，程度較ALBALB低低 縮短反應(yīng)時(shí)間能避免非特異性反應(yīng)縮短反應(yīng)時(shí)間能避免非特異性反應(yīng)BCPBCP與與ALBALB即時(shí)完全反應(yīng)即時(shí)完全反應(yīng) 無(wú)球蛋白非特異性干擾無(wú)球蛋白非特異性干擾 但但BCPBCP與牛、豬等與牛、豬等ALBALB的反應(yīng)性比人的反應(yīng)性比人ALBALB程度低程度低二、體液白蛋白二、體液白蛋白【方法評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)】 （3 3）臨床應(yīng)用：）臨床應(yīng)用：兩法均適合于血清白蛋白測(cè)定兩法均適合于血清白蛋白測(cè)定BCPBCP法檢測(cè)范圍為法檢

60、測(cè)范圍為5 550g/L50g/L，上限較低，上限較低BCGBCG法檢測(cè)范圍為法檢測(cè)范圍為5 560g/L60g/L，應(yīng)用更方便，應(yīng)用更方便BCGBCG法測(cè)定胸腹腔積液法測(cè)定胸腹腔積液ALBALB檢測(cè)低限為檢測(cè)低限為0.44g/L0.44g/L 生物檢測(cè)限生物檢測(cè)限0.98g/L0.98g/L，胸腹腔積液，胸腹腔積液1.51.535 g/L35 g/L 能采用能采用BCGBCG法測(cè)定法測(cè)定尿液和腦脊液尿液和腦脊液ALBALB定量則不適宜采用該法定量則不適宜采用該法二、體液白蛋白二、體液白蛋白三、血清蛋白電泳三、血清蛋白電泳（serum protein electrophoresis,SPE）