乳與乳制品微生物檢驗方法雙歧桿菌的檢驗

1、乳與乳制品微生物檢驗方法雙歧桿菌的檢驗YLNB 3.7 1 、引用依據(jù)： GB/T4789.34-20032、術(shù)語和定義雙歧桿菌：一群能分解葡萄糖，產(chǎn)生大量乙酸和乳酸， 厭氧，不耐酸，不形成芽孢，不運動，細胞呈現(xiàn)多樣形態(tài)的 革蘭氏陽性桿菌。3、 儀器及器材3.1 培養(yǎng)箱：36 1C；3.2 恒溫水浴：46 1C；3.3 顯微鏡；3.4 厭氧培養(yǎng)箱；3.5 離心機；3.6 天平；3.7 電爐；3.8 吸管；3.9 廣口瓶或三角瓶：容量為 500ml ；3.10 平皿：直徑約 90mm3.11 試管；3.12 酒精燈；3.13 滅菌刀或剪子；3.14 滅菌鑷子。4、培養(yǎng)基和試劑4.1 生理鹽水；4

2、.2 75%乙醇溶液；4.3 TPY 瓊脂培養(yǎng)基；4.4 BL 瓊脂培養(yǎng)基；4.5 BBL 瓊脂培養(yǎng)基；4.6 雙歧桿菌生化用基礎(chǔ)培養(yǎng)基；4.7 PYG 液體培養(yǎng)基；4.8 革蘭氏染色液；4.9 滅菌液體石蠟。5.檢驗程序6、方法6.1 以無菌操作將充分混勻的檢樣 25g (ml)放入含有 225ml 滅菌生理鹽水的滅菌錐形瓶內(nèi)做成1： 10 的均勻稀釋液。6.2 用 1 ml 滅菌吸管吸取 1: 10 稀釋液 1 ml，沿管壁徐徐 注入含有 9ml 滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖混勻，作成 1: 100 的稀釋液。6.3 另取 1 ml 滅菌吸管，按上述操作順序，作10 倍遞增稀釋液，如此每遞增

3、一次，即換用 1 支 1ml 滅菌吸管。6.4 選取 2 個3 個以上適宜稀釋度，分別在作 10 倍遞增稀 釋的同時，各取 0.1ml 分別加入計數(shù)培養(yǎng)基平皿， 均勻涂布， 每個稀釋度作兩個平皿。最好同時選用 2 種3 種培養(yǎng)基(BL、 BBL、TPY 培養(yǎng)基)，同時作滅菌生理鹽水空白對照。6.5 待瓊脂表面干后，翻轉(zhuǎn)平皿，放置厭氧罐內(nèi)，操作全過 程須在20min 內(nèi)完成。6.6 將厭氧罐置 36C1C溫箱內(nèi)培養(yǎng)培養(yǎng) 72h 3h,觀察雙 歧桿菌菌落特征見表 1。選擇菌落數(shù)在 30300 之間的平板 對可疑菌落進行計數(shù)，隨機挑取五個可疑菌落進行革蘭氏染 色，顯微鏡檢查和過氧化氫酶試驗。過氧化氫

4、酶陰性，革蘭 氏染色陽性，無芽孢，著色不均勻，出現(xiàn)“丫”或“ V型的分叉狀、或棒狀等多形態(tài)的桿菌可定為雙歧桿菌。表 1 雙歧桿菌在不同培養(yǎng)基上菌落生化形態(tài)特征培養(yǎng)基雙歧桿菌特征BL 培養(yǎng)基為黃色菌落中等大小，表面光亮，邊緣整齊呈瓷白 色、奶油色，質(zhì)地柔軟、細膩BBL 培養(yǎng)基為黃色菌落中等大小，表面光滑、凸起，邊緣整齊 呈奶油色，質(zhì)地柔軟、細膩TPY 培養(yǎng)基為黃色菌落表面光滑，凸起，邊緣整齊呈奶油色、瓷白色，質(zhì)地柔軟、細膩6.7 菌落計數(shù)：根據(jù)證實為雙歧桿菌的菌落數(shù)，計算出平皿 內(nèi)的雙歧桿菌數(shù)，然后乘以樣品的稀釋倍數(shù)，得每毫升樣品 中雙歧桿菌數(shù)。取三種培養(yǎng)基中計數(shù)最高的為最終結(jié)果。例 如，檢樣 1X104倍的稀釋液在 BBL 瓊脂平板上，生成的可 疑菌落為 35 個，取 5 個鑒定，證實為雙歧桿菌的是4 個，則 1