急性期腦梗死與血清NGF的關系研究臨床醫(yī)學專業(yè)

1、中文摘要急性期腦梗死與血清NGF的關系研究背景： 隨著國民生活質量的提高以及生活節(jié)奏地加快，腦血管病在我國已升至疾病死亡原因的首位。近年來國內腦梗死（cerebral infarction）的發(fā)病率高居不下，其病死率和致殘率也呈現(xiàn)連續(xù)攀升趨勢，嚴重危害人類健康。其中高致殘率不但給病人身體和心理造成雙重壓力，而且使家庭背負的經(jīng)濟負擔變得沉重。現(xiàn)代醫(yī)療技術的發(fā)展，已經(jīng)使腦梗死的防治有了明顯進步，但最大限度地降低致殘率和死亡率，仍是臨床一線醫(yī)師的關注點。神經(jīng)生長因子（nerve growth factor，NGF）可以調控神經(jīng)細胞生長發(fā)育的多個階段，其具有的促進損傷神經(jīng)修復的生物學特性，使其具有了重

2、要的臨床意義。目前，眾多國內外研究機構對NGF進行了深入地研究，其對于腦梗死的臨床價值也越來越受到關注，目前國內關于急性期腦梗死與血清NGF的關系研究甚少。目的：本研究通過檢測急性期腦梗死患者血清NGF含量，探討血清NGF與急性期腦梗死的關系。方法：研究組為發(fā)病24小時內的急性期腦梗死患者，共90例，其中男性47人，女性43人，年齡在4378歲，平均年齡為62.19±6.34歲；對照組20人均為門診健康體檢者，其中男性11人，女性9人，年齡在4475歲，平均年齡在63.57±6.22歲。根據(jù)郭玉璞腦梗死病灶大小分型原則，將急性期腦梗死研究組分為小梗死灶組（病灶最大直徑15m

3、m）、中梗死灶組（15mm病灶最大直徑50mm）及大梗死灶組（病灶最大直徑50mm）。腦梗死組研究對象均于發(fā)病后1d、7d和14d清晨空腹采取靜脈血5ml，標本置于-70冰箱中保存，后采用酶聯(lián)免疫吸附（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA）法測定血清NGF含量水平。用相同方法檢測對照組20例健康體檢者的血清NGF含量。計量資料用均數(shù)±標準差（±s）表示，統(tǒng)計處理采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件分析。結果：1.急性期腦梗死患者發(fā)病第1d、7d和14d血清NGF含量（ng/L）分別是16.04±1.33、12.26±

4、1.90、9.70±2.73，對照組為5.43±1.27，經(jīng)統(tǒng)計學處理結果顯示，急性期腦梗死發(fā)病第1d、7d和14d血清NGF含量均明顯高于對照組（P0.01）。同時，腦梗死組內各發(fā)病時間點血清NGF含量均有明顯差異（P0.01）。2.急性期腦梗死不同病灶大小及不同發(fā)病時間患者血清NGF含量的變化，大梗死灶組患者發(fā)病第1d、7d和14d血清NGF含量（ng/L）分別為18.31±0.46、14.94±0.62、13.71±0.63；中梗死灶組患者發(fā)病第1d、7d和14d血清NGF含量（ng/L）分別為16.20±0.42、13.08&

5、#177;0.73、10.76±1.11；小梗死灶組患者發(fā)病第1d、7d和14d血清NGF含量（ng/L）分別為14.96±0.39、10.54±0.81、7.32±1.06。通過統(tǒng)計學處理結果顯示，不同發(fā)病時間點內的大中小梗死灶三組患者血清NGF含量均有顯著差異（P0.01）。結論：1.急性期腦梗死患者血清NGF含量有先上升后下降的動態(tài)變化趨勢。2.急性期腦梗死患者血清NGF含量與腦梗死灶大小呈正相關。3.檢測腦梗死患者急性期血清NGF水平對于評估病情嚴重程度可能有重要的參考價值。關鍵詞： 神經(jīng)生長因子，急性期腦梗死，酶聯(lián)免疫吸附法。第1章 引言腦梗死

6、是指由于多種原因所致腦血液循環(huán)障礙，進而引起相應部位腦組織缺血、缺氧，最終發(fā)生組織壞死、軟化形成梗死的疾病，是臨床最常見的腦血管疾病，具有高病死率、高致殘率和高復發(fā)率的特點。近年來，由于醫(yī)學影像學的飛速發(fā)展，CT和MRI的普及讓罹患腦梗死的患者能夠及早及時地被檢出，這些在早期就被發(fā)現(xiàn)的腦梗死患者使得腦梗死的發(fā)病率大幅升高，患者不但要承受沉重的醫(yī)療經(jīng)濟負擔，還要經(jīng)受疾病帶來的心理打擊，所以做好腦梗死預防和治療的工作就變得尤為重要，對腦梗死的進一步探究和尋求更優(yōu)化的防治措施刻不容緩。神經(jīng)營養(yǎng)因子（neurotrophin, NT）是神經(jīng)細胞生長與存活所必需的一類蛋白質分子，NGF隸屬于神經(jīng)營養(yǎng)因子

7、家族，是人類發(fā)現(xiàn)的第一個神經(jīng)營養(yǎng)因子。NGF可以調節(jié)神經(jīng)細胞的生長發(fā)育，維持成熟神經(jīng)細胞生存以及對損傷神經(jīng)的修復，它的這些特性使得眾多國內外專家十分重視NGF在腦梗死領域的研究。隨著NGF的臨床價值不斷被挖掘，NGF有望成為診治腦梗死的新切入點，提高內源性NGF的表達以及利用外源性NGF可能成為診治腦梗死、降低致殘率和死亡率的一種全新路徑。目前，眾多研究機構對NGF進行了研究與開發(fā)，其重點多為外源性NGF，對于內源性NGF的研究雖然也引起了許多專家學者的關注，但是與腦梗死相關方面的臨床研究甚少。本研究通過檢測腦梗死急性期患者血清NGF含量的變化，探討其與急性期腦梗死的關系。第1章 關于急性期腦

8、梗死與血清NGF關系的綜述2.1 NGF的生物學基礎2.1.1 NGF的基本結構及分布NGF是由意大利科學家Rita Levi-Montalcini于1953年在小鼠肉瘤細胞內發(fā)現(xiàn)的首個神經(jīng)營養(yǎng)因子1，它屬于可溶性堿性蛋白質，沉降系數(shù)為7S，基因編碼位于1號染色體（1P21-P22.1），遺傳信息經(jīng)轉錄、翻譯后形成、三個亞單位，在彼此非共價鍵的作用力下，按照222的形式連接成為多聚復合體，擁有140×10³k Da高相對分子質量。其中，亞單位承擔了NGF絕大多數(shù)的活性功能，此亞單位擁有236個氨基酸，是由非共價鍵所維系的雙鏈多肽，生物學功能相關區(qū)域在進化中高度保守。NGF內

9、有6個特殊的半胱氨酸殘基，它們共組成3對二硫鍵，對NGF的生物活性起著至關重要的作用，二硫鍵一旦被水解，NGF也將失去生物活性2-3。NGF還具有高度同源性，特別是在分子生物學活性方面無明顯種屬特異性，從雄性小鼠頜下腺中分離純化出來的mNGF與人類NGF的同源性已達九成以上且作用于靶細胞的生物學效應無明顯差異，這一特點使得mNGF被廣泛地應用于科學研究和臨床治療中4。在神經(jīng)系統(tǒng)內，NGF主要在中樞膽堿能邁內特基底核的投射區(qū)產(chǎn)生，所以膽堿能神經(jīng)細胞支配區(qū)是其主要分布區(qū)，大腦皮質和海馬內膽堿能神經(jīng)元含量非常豐富，所以腦內的NGF在這兩個部位分布最高。NGF在腦內其他部位的分布由高到低依次為：嗅球、

10、基底前腦、小腦和紋狀體，在腦內的不均衡分布也體現(xiàn)了不同腦組織內膽堿能神經(jīng)細胞的含量差異5。此外，NGF在體內其他部位也有廣泛分布：如唾液腺、前列腺和胎盤組織等6。2.1.2 NGF的受體NGF的受體主要有兩種，分別為酪氨酸激酶A（tyrosine kinase receptor A，Trk A）和神經(jīng)營養(yǎng)素p75（neurotrophin receptor p75）7。前者親和力強，能夠與NGF特異性結合，引發(fā)相關蛋白酶活化，啟動信號傳導的一系列通路，最終使NGF的生物學效應得以表達，因此Trk A是NGF的功能性受體，遍布于NGF效應細胞的細胞膜上8。p75是富含半胱氨酸的一類跨膜糖蛋白，其

11、分布范圍非常廣，彌漫于中樞神經(jīng)系統(tǒng)內，在神經(jīng)系統(tǒng)內也有分布。它的親和力遠遠低于Trk A，與NGF結合后也無法直接產(chǎn)生生物學效應，但它擁有許多無可替代的功能9：（1）能夠準確辨識NGF家族，并與家族成員結合；（2）可對酪氨酸激酶的活性加以調控，增強Trk A與NGF的結合能力，使NGF的生物學效應充分表達；（3）逆向輸送NGF，特別在修復病損的周圍神經(jīng)中表現(xiàn)明顯；（4）加劇神經(jīng)鞘磷脂的水解速率，引導細胞凋亡；（5）激發(fā)鳥苷酸結合蛋白耦聯(lián)機制，保證生物信號穩(wěn)定傳遞。2.1.3 NGF的信號傳導通路 NGF擁有Trk A和p75兩種受體，因為兩者在各方面有著顯著差異，所以它們各自介導著不同的信號通

12、路7。（1）Trk A一般介導正性信號，如促進神經(jīng)細胞的存活、生長和分化等。Trk A與NGF結合后在膜上生成二聚體，引發(fā)Trk A 的多個酪氨酸殘基自動磷酸化，進而激活下游信號傳導蛋白，依照酪氨酸殘基被激活的順序，Trk A介導的信號傳導通路依賴于以下3種途徑的協(xié)同運作：絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）途徑：Trk A的殘基Y490首先被磷酸化，進一步激活MAPK激酶，使MAPK通路開放，MAPK開啟B淋巴細胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）的表達，發(fā)揮抑制細胞凋亡的生物學效應。磷酯酶C-（phosp

13、holipase C-，PLC-）途徑：Trk A殘基Y785磷酸化后激活PLC-，經(jīng)過一系列生化反應最終激活細胞外調節(jié)蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK），產(chǎn)生增強神經(jīng)細胞存活力和再生力的生物學效應。磷脂酰肌醇-3-羥激酶（phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，PKB）途徑：Trk A殘基Y751磷酸化后與PI3K相連，PI3K能激活PKB并且可以增強Bcl-2轉錄，PKB和Bcl-2共同增強神經(jīng)細胞的存活能力。 （

14、2）p75主要傳導誘發(fā)細胞凋亡的負性信號，但也能介導少量的促進神經(jīng)細胞生存的正性信號。p75與NGF結合后傳導信號的通路包括：核轉錄因子-B（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells，NF-B）途徑：邢雪松等人10在大鼠腦缺血再灌注模型的研究中發(fā)現(xiàn)NF-B調控的基因編碼產(chǎn)物具有抗氧化和增強細胞防御力的作用。激活NF-B能發(fā)揮其抵抗細胞凋亡的效應，同時可提高Trk A的活性。c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）-p53-BAX途徑：此通路主要能提高細胞凋亡的速度，JNK

15、、p53、BAX依次被啟動，其中p53的含量與細胞凋亡有直接聯(lián)系11。神經(jīng)酰胺途徑：此通路介導的生物學效應具有雙重效果12，這一特性與蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)跟神經(jīng)酰胺相作用的濃度有關。低濃度的神經(jīng)酰胺可以激活PKC，能夠促進神經(jīng)細胞的生長發(fā)育；而高濃度的神經(jīng)酰胺則降低PKC的活性，導致神經(jīng)細胞快速死亡。如前所述，Trk A介導正性信號，p75主要傳遞負性信號，但在絕大多數(shù)的細胞背景和環(huán)境下Trk A能有效地抑制p75誘導負性信號13，最終使NGF的生物學總效應為促進神經(jīng)細胞生長發(fā)育和增強病損神經(jīng)的修復。2.2 NGF的生物學效應（1）NGF在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的初期，

16、能通過促進神經(jīng)干細胞的生長和分化、刺激神經(jīng)纖維的定向生長、調控神經(jīng)遞質的合成、抑制神經(jīng)細胞凋亡等途徑，擁有調控神經(jīng)細胞的存活數(shù)量，促進神經(jīng)細胞分化和發(fā)育的生物學效應14、15。（2）NGF還能增強多種成熟神經(jīng)細胞的生存力，促進成熟細胞的軸索與其他細胞間的聯(lián)系，因此具備了維持神經(jīng)系統(tǒng)成熟階段的生物學效應16。（3）當神經(jīng)系統(tǒng)遭遇損傷時，NGF的表達迅速升高，通過調節(jié)細胞周圍的環(huán)境來保護受損神經(jīng)細胞。NGF促進軸突定向再生17，使之能與靶細胞形成功能連接，同時增強髓鞘修復力18，最終使損傷的神經(jīng)細胞完成修復，達到改善神經(jīng)功能缺損癥狀的目的。NGF保護和修復病損神經(jīng)系統(tǒng)的生物學效應，對于中樞神經(jīng)和周

17、圍神經(jīng)均奏效。（4）另外，通過近年來對NGF的深入研究，發(fā)現(xiàn)其對非神經(jīng)系統(tǒng)也有一定作用，如調控免疫系統(tǒng)功能、促進骨折愈合、影響炎性反應等19。2.3 NGF的藥物學進展 NGF因其獨特的生物學效應具有廣闊的臨床應用前景，可能成為許多疾病的潛在治療藥物，如視神經(jīng)損傷、腦梗死、阿爾茨海默病、顱腦創(chuàng)傷、脊髓損傷和周圍神經(jīng)病等。雄性小鼠頜下腺提取的mNGF具有安全、有效和毒副作用低的特點，是最常用的能夠滿足科學研究和臨床應用條件的NGF，注射用鼠神經(jīng)生長因子（恩經(jīng)復）已在國內上市，藥代動力學顯示大鼠肌注后達峰時間越為4小時，24小時內吸收率高于80%，主要從腎臟排泄，極少部分隨糞便排出。注射用鼠神經(jīng)生

18、長因子具有治療正己烷中毒性周圍神經(jīng)病和促進神經(jīng)損傷恢復等療效，給許多患者帶來了福音。現(xiàn)在臨床應用的NGF多數(shù)經(jīng)肌肉注射給藥，絕大多數(shù)用來治療周圍神經(jīng)的病變，NGF相對分子質量較大，自然狀態(tài)下難以透過血腦屏障（blood-brain barrier，BBB），對于大腦內部疾患的治療效果甚微。BBB是血液與腦組織間的一種特殊屏障，由血管內皮、基膜和星形膠質細胞終足構成，能夠選擇性地限制部分物質出入腦組織，對大腦具有一定的保護性。近年來，許多研究發(fā)現(xiàn)BBB在某些條件下能夠增加通透性：李兵等人發(fā)現(xiàn)顱腦損傷后BBB能夠一定程度上開放，開放的通透度與損傷程度呈正相關，NGF能隨著BBB的開放而進入腦組織發(fā)

19、揮作用20。周文莉、嚴超英研究組通過對大鼠的實驗發(fā)現(xiàn)腦組織缺氧能使BBB的通透性增加，利于外源NGF通過靜脈抵達腦組織發(fā)揮作用21。劉曾旭等人深入研究了血管內皮細胞之間的緊密連接，發(fā)現(xiàn)若緊密連接的結構和功能因外傷、缺血、缺氧、感染、免疫及理化因素發(fā)生改變，會不同程度地造成BBB通透性升高22?；谝陨隙囗椦芯浚梢酝茰yNGF在腦缺血時能夠透過BBB的機制可能為：（1）BBB的結構被破壞：血管內皮和星形膠質細胞終足是BBB的兩大組成結構。血管內皮細胞間的緊密連接是BBB具有選擇性的基礎，當腦缺血發(fā)生時，血管內皮細胞間的緊密連接變得寬大疏松，導致BBB通透性增加22。星形膠質細胞對維持BBB的功能

20、具有關鍵作用，腦缺血會使星形膠質細胞的足突變得腫大，引起血腦屏障通透性增高23。（2）特殊轉運途徑的開啟：腦缺血能夠啟動不飽和的跨膜擴散和需特異轉運蛋白的飽和運輸24，使得NGF等大分子物質能輕松通過BBB。腦缺血發(fā)生后，NGF從腦組織經(jīng)通透性增高的BBB進入血液，使得NGF能夠在外周血中被檢測，因此缺血性腦血管疾病與血清NGF含量有密切聯(lián)系。盡管在一些條件下BBB會因通透性提高而開放，NGF能自由進出BBB，但是難以在腦組織中維持理想的濃度，使其發(fā)揮穩(wěn)定的生物學效應。針對NGF在臨床應用中面臨的困境，目前許多國內外專家對NGF進行了深入研究，提出了重組細胞注入法、置管腦外注藥法、特制眼液滴入

21、法、神經(jīng)通路給藥法、聚合物植入法、化學連接法、生物素-抗生物素蛋白技術等新的給藥途徑25-27；Ding Y等28通過大腦中動脈短暫缺血模型研究發(fā)現(xiàn)，運動能提高顱內NGF表達；黃國棟團隊將NGF封存于納米柔性脂質體內，通過實驗證明載NGF納米柔性脂質體能夠有效地促進其突破BBB29，以上研究有望拓寬NGF的臨床應用領域。2.4 缺血腦組織NGF的含量變化在正常生理狀態(tài)下，腦組織中NGF的含量較低，但對神經(jīng)細胞的生長發(fā)育、成熟和損傷后修復的意義重大。劉鵬研究組30發(fā)現(xiàn)使斯?jié)娎鄹?#183;多雷（Sprague-Dawley，SD）大鼠局灶性腦缺血后，皮層缺血半暗帶NGF陽性神經(jīng)細胞數(shù)目高于假手術

22、組，提示腦組織缺血能上調缺血半暗帶NGF表達水平，并推測腦組織在缺血情況下其內源性保護機制的開啟與腦內NGF表達上調有關。Lindvall O等國外專家31發(fā)現(xiàn)腦缺血2小時后即出現(xiàn)NGF mRNA的表達增強，表達程度取決于腦組織缺血時間及病損程度。我國張輝等32采用線栓法制作SD大鼠大腦中動脈閉塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型，在局灶性腦缺血后24h發(fā)現(xiàn)NGF在缺血邊緣區(qū)的神經(jīng)細胞及膠質細胞胞漿內的表達均有明顯上調，其中單純腦缺血比合并其他疾病的腦缺血患者NGF表達更為明顯。魏孟琳、鄒玉安等33通過相關實驗也得出相似的NGF表達結果，他們發(fā)現(xiàn)

23、實驗大鼠的腦組織梗死區(qū)NGF的表達在發(fā)病初期有所增加，并在22小時左右達到高峰，后逐漸下降。段淑榮、王海濤等人34則解剖了多例腦梗死患者大腦，研究了側腦室室管膜下區(qū)和海馬齒狀回在不同時間點NGF的表達情況，發(fā)現(xiàn)腦組織在缺血后4.510小時NGF表達開始增多，缺血后24 70小時達高峰，34天開始下降，缺血56天仍有較多陽性細胞表達，提示NGF可能參與了缺血性腦損傷的內源性神經(jīng)保護作用，同時發(fā)現(xiàn)轉化生長因子-（transforming growth factor-,TGF-）、血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在表達時間上與NGF相

24、重疊，三者對腦梗死后受損神經(jīng)的保護作用可能具有協(xié)同性。通過以上國內外專家學者的研究可以發(fā)現(xiàn)，腦組織缺血后可以提高NGF的釋放，使缺血腦組織NGF的含量升高。且NGF的表達具有一定的規(guī)律性。2.5展望NGF是一種具有促進神經(jīng)細胞生長、發(fā)育和修復作用的大分子蛋白，其獨特的生物學效應使其在治療神經(jīng)病變尤其對周圍神經(jīng)病變的治療中效果顯著。近年來，在探索治療中樞神經(jīng)病變的道路上，已有多項動物實驗和臨床治療病例35-37表明NGF在治療腦梗死等疾病中擁有巨大的應用潛力。隨著NGF的研究重點由周圍神經(jīng)逐漸轉向中樞神經(jīng)，NGF與腦梗死的關系也愈加受到密切關注：應用外源性NGF能使腦梗死病人在認知、語言和運動等

25、方面有明顯改善，降低致殘率；通過檢測腦梗死病人血清NGF的含量可能對評估病情嚴重程度有重要的參考價值。第3章 實驗研究3.1 資料與方法3.1.1 臨床資料腦梗死組患者的納入條件：2015年10月1日至2016年12月30日于我院神經(jīng)內科住院的腦梗死急性期患者，且符合1995年中華醫(yī)學會第四屆全國腦血管學術會議制訂的各類腦血管病診斷要點診斷標準38。納入標準：（1）入院時尚在發(fā)病24小時內；（2）行頭部核磁檢查，明確顯示腦部急性梗死灶；（3）具有明顯神經(jīng)功能缺損的定位體征。排除標準：（1）伴有其他系統(tǒng)的危重疾病者，如嚴重的心肺疾病、嚴重肝腎功能異常；（2）伴發(fā)兇險的感染性疾病者；（3）體內代謝

26、障礙或旺盛，患有代謝性疾病者；（4）免疫調節(jié)失衡，免疫功能異常者；（5）具有腫瘤病史、器官移植史的患者；（6）近4周內有手術、外傷史者；（7）嚴重營養(yǎng)不良的患者。按照以上標準共納入患者90人，其中男性47人，女性43人。年齡在4378歲，平均年齡為62.19±6.34歲。根據(jù)郭玉璞39病灶大小分型法，將以上患者分為三組：小梗死灶組（病灶最大直徑15mm）、中梗死灶組（15mm病灶最大直徑50mm）和大梗死灶組（病灶最大直徑50mm）。經(jīng)既往病史詢問、詳細體格檢查和多項輔助檢查排除器質性疾病，共招納對照組20名同期健康體檢者，其中男性11人，女性9人，年齡在4475歲，平均年齡為63.

27、57±6.22歲。腦梗死組與對照組在年齡、性別上的差異均無統(tǒng)計學意義。3.1.2 標本收集腦梗死組患者分別于發(fā)病第1d、7d和14d采集清晨空腹靜脈血5ml，血樣經(jīng)檢查無溶血后離心處理15分鐘，取上層血清置于Eppendorf管中放入-70冰箱保存。采集對照組健康體檢者的清晨空腹靜脈血1次，采集處理的過程與腦梗死組無差異。3.1.3 實驗方法檢查各樣本無氣泡、渾濁沉淀和反復凍融后，按照ELISA試劑盒說明書的操作步驟進行血清NGF含量的測定。根據(jù)標準品的濃度、對比度的吸光度（A）值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的A值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。3.1.4 統(tǒng)計學方法

28、實驗所得的原始數(shù)據(jù)錄入SPSS22.0軟件中進行統(tǒng)計分析，兩樣本之間的對比采用t檢驗，用方差處理分析多組間的比較，用均值±標準差（±s）來表示得到的計量數(shù)據(jù)，P0.05表示有統(tǒng)計學意義。3.2 結果3.2.1 腦梗死組患者發(fā)病第1d、7d和14d血清NGF含量的動態(tài)變化急性期腦梗死患者發(fā)病第1d、7d和14d血清NGF的含量（ng/ L）分別為16.04±1.33、12.26±1.90、9.70±2.73，對照組為5.43±1.27。經(jīng)統(tǒng)計學處理后發(fā)現(xiàn)：腦梗死發(fā)病第1d、7d和14d血清NGF的含量均明顯高于對照組（P0.01），并且

29、腦梗死發(fā)病第1d、7d和14d血清NGF含量之間也有顯著性差異(P0.01)，詳見表3.1、圖3.1。表 3.1 急性期腦梗死患者不同發(fā)病時間血清NGF含量的動態(tài)變化(±s，ng/ L)組 別 n NGF對 照 組 20 5.43±1.27梗死組1d 90 16.04±1.33*梗死組7d 90 12.26±1.90*梗死組14d 90 9.70±2.73*#注：*表示實驗組各組與對照組比較P0.01，表示發(fā)病7d與發(fā)病1d比較P0.01，表示發(fā)病14d與發(fā)病7d比較P0.01。注：*表示實驗組各組與對照組比較P0.01，表示發(fā)病7d與發(fā)病1d

30、比較P0.01，表示發(fā)病14d與發(fā)病7d比較P0.01。圖 3.1 急性期腦梗死患者不同發(fā)病時間血清NGF含量的動態(tài)變化比較圖3.2.2 急性期腦梗死不同病灶大小及不同發(fā)病時間患者血清NGF含量的動態(tài)變化大梗死灶組患者發(fā)病第1d、7d和14d血清NGF含量（ng/L）分別為18.31±0.46、14.94±0.62、13.71±0.63；中梗死灶組患者發(fā)病第1d、7d和14d血清NGF含量（ng/L）分別為16.20±0.42、13.08±0.73、10.76±1.11；小梗死灶組患者發(fā)病第1d、7d和14d血清NGF含量（ng/L）

31、分別為14.96±0.39、10.54±0.81、7.32±1.06。經(jīng)統(tǒng)計學處理，不同發(fā)病時間點內的大中小梗死灶三組患者血清NGF含量均有顯著差異（P0.01）。詳見表 3.2、圖 3.2。表 3.2 急性期腦梗死不同病灶大小及不同發(fā)病時間患者血清NGF含量的動態(tài)變化(±s，ng/ L)組 別 n 發(fā)病1d 發(fā)病7d 發(fā)病14d大梗死灶組 18 18.31±0.46 14.94±0.62 13.71±0.63中梗死灶組 30 16.20±0.42 13.08±0.73 10.76±1.11小梗

32、死灶組 42 14.96±0.39 10.54±0.81 7.32±1.06注：表示小梗死灶組與中梗死灶組比較P0.01；表示中梗死灶與大梗死灶組相比較P0.01。注：*表示各組間后一組與前一組比較P0.01。圖 3.2 急性期腦梗死患者發(fā)病不同時間不同梗死灶大小血清NGF含量動態(tài)變化比較圖第3章 討 論NGF是神經(jīng)生長因子家族中最重要的神經(jīng)細胞生長調節(jié)因子之一，主要分布于神經(jīng)系統(tǒng)，尤其在大腦內廣泛存在。NGF與相應受體結合后，經(jīng)不同的信號轉導通路發(fā)揮作用。在正常生理狀態(tài)下，NGF能夠促進神經(jīng)細胞的生長和分化，維持神經(jīng)細胞的成熟40；當機體處于病態(tài)時，NGF可以促

33、進病損細胞修復，抑制細胞凋亡41。因此NGF擁有廣闊的臨床應用前景。NGF的生物學特性主要表現(xiàn)在以下幾個方面：在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的初期，NGF就已經(jīng)開始發(fā)揮作用，能夠促進神經(jīng)細胞的生長發(fā)育和分化；NGF能提高成熟神經(jīng)細胞的生存力，可以維持神經(jīng)系統(tǒng)的成熟狀態(tài)；當神經(jīng)系統(tǒng)損傷時，高表達的NGF可以穩(wěn)定細胞內外的環(huán)境，促進病損神經(jīng)細胞的修復；此外，NGF對于非神經(jīng)系統(tǒng)也有一定積極作用。腦組織缺血后，受堵塞的血管周圍有少量血液滲出，局部缺血腦組織出現(xiàn)水腫，大腦耐受缺血缺氧的程度較弱，短時間內就能引發(fā)腦梗死42。腦梗死急性期病灶是由大量神經(jīng)細胞死亡的中央壞死區(qū)和周邊仍殘存部分側支代償性循環(huán)的缺血半暗帶組成，

34、盡可能地減少神經(jīng)細胞壞死、挽救缺血半暗帶是缺血腦組織上調NGF表達的原因，NGF能通過以下機制來保護和修復缺血腦組織43-45：維持胞內Ca2+濃度穩(wěn)定：腦組織缺血會導致細胞外Ca2+超速內流，使之在胞內不斷積滯造成Ca2+超載。NGF通過對鈣調素、鈣通道和排鈣系統(tǒng)等方面的作用，維持胞內Ca2+濃度穩(wěn)定，保護受損神經(jīng)細胞；提高自由基清除率：自由基是體內多種生化反應的產(chǎn)物，具有強氧化性，絕大多數(shù)自由基能通過多種途徑攻擊人體。在健康人體內，自由基處于平衡之中，腦組織缺血會打破原有的秩序引起自由基劇增，導致缺血腦組織的損傷。NGF能增強多種清除自由基的蛋白酶活性，提高自由基清除率，減輕受損細胞的危害

35、；降低谷氨酸濃度：谷氨酸作為一種興奮性神經(jīng)遞質在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內廣泛存在，且作用極強，能夠參與許多化學反應。腦組織缺血時，細胞內谷氨酸濃度往往超標，造成神經(jīng)細胞壞死。NGF能通過多種途徑穩(wěn)定谷氨酸濃度，并進一步減緩多種具有攻擊性的離子的濃度激增；抑制一氧化碳（NO）的負性作用：NO在腦缺血早期能發(fā)揮增強缺血半暗帶區(qū)域血液循環(huán)的正性作用，但晚期具有加重中央壞死區(qū)損害的負性作用。NGF可以降低生成NO的酶活性，減輕部分負性作用；減緩細胞凋亡速度：腦組織缺血缺氧的環(huán)境促使大量細胞凋亡的因子被激活，NGF控制Bcl-2等多種蛋白的轉錄翻譯，使神經(jīng)細胞凋亡速度明顯下降；其他機制：NGF能提高受損神經(jīng)細胞代

36、謝率，提高大分子物質合成速度46。NGF能誘導血管再生47，促進髓鞘形成48，抑制海馬神經(jīng)元瞬時受體電位通道7（transient receptor potential melastatin 7，TRPM7）的表達，延緩細胞死亡49。NGF還能刺激神經(jīng)干細胞增殖、分化為神經(jīng)細胞50，使其能部分替代已受損的神經(jīng)細胞，來改善神經(jīng)系統(tǒng)的功能缺損。通過本研究結果表3.1、圖3.1可以發(fā)現(xiàn)，急性期腦梗死組發(fā)病1d、7d和14 d血清NGF含量均高于健康對照組。出現(xiàn)這種結果的原因可能如下：（1）當腦梗死發(fā)生時，BBB的結構被破壞，通透性大大增加，使腦內的NGF能夠透過BBB進入血液，導致血清中NGF含量增高。（2）缺血腦組織周邊區(qū)域中，特定的神經(jīng)細胞、部分星形膠質細胞、活化的小膠質細胞和巨噬細胞能夠強力上調NGF的表達51。（3）腦梗死發(fā)生后，激活SHH（sonic hedgehog）信號通路使NGF的表達增加52。（4）腦梗死發(fā)生后，會誘導一系列特殊基因的表達與蛋白的合成，如即早基因（immediate early genes，IEGs）、白細胞介素-1（Interleukin-1，IL-