大黃中蒽醌類成分的提取、分離和鑒定(實驗報告)

1、大黃中蔥酶類成分的提取、分離和鑒定一、 實驗?zāi)康?1)熟悉蔥醍類成分的提取分離方法(2)掌握pH梯度提取法的原理和操作技術(shù)(3)學(xué)習(xí)慈醍類化合物鑒定方法二、實驗器材材料及試劑： 大黃粗粉、濃硫酸、NaHCO NaCO、NaOH濃鹽酸、乙酸乙酯、石油醒、乙醒、普通濾紙、薄層層析硅膠板(2.5 cm X 10 cm)、廣泛PH試紙、剪刀、鉛筆、尺子、點樣毛細管、樣品管等。儀器：500mL圓底燒瓶、球形冷凝管(30cm)、橡皮管、燒杯、滴管、層析缸(廣口瓶)、250mL 分液漏斗、布氏漏斗、抽濾瓶、水浴鍋、集熱式磁力攪拌器、磁子、循環(huán)水式多用真空泵、 鐵架臺等。3、 實驗原理大黃為蓼科植物，味苦，性

2、寒，具有瀉熱通腸、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)等功效。其主要成分 為為意釀化合物，含量約為3%5%大部分與葡萄糖結(jié)合昔，游離昔元有大黃酸、大 黃素、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醛等。其中，大黃酸具有竣基，酸性最強； 大黃素具有B-酚羥基，酸性第二；蘆薈大黃素連有羥甲基，酸性第三；大黃素甲 醛和和大黃酚的酸性最弱。根據(jù)以上化合物的酸度差異，可用堿性強弱不同的溶液 進行梯度萃取分離。蘆薈大黃素Ri=CH2OHR2=H大黃素甲醛Ri=CH3R 2=OCH大黃酚 Ri=CH3R 2=H4、 實驗內(nèi)容大黃素的提取、分離流程圖大黃粗粉10g20%H2SQ 150 mlu加熱1h,抽濾、干燥濾餅150ml乙醛回流提取

3、1 h乙醛層5%NaHCO 3 萃取水層（紫紅色）乙醛層HCl 15%Na2CO大黃酸沉淀（粗品）水層（紅色）乙醛層HCl%NaOH大黃素沉淀（粗品）水層（紅色）蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醛沉淀（混合物）具體操作步驟1. 游離意釀的提?。?）酸水解：稱取大黃粗粉 10g,加20%HSQ水溶液150mL在水浴上加熱1小時，放冷，抽濾，濾餅用 NaOH洗至近中性（pH約為6）,于70c干燥后，研碎，置 250mL圓底燒瓶中，加入乙醛 150mL回流提取1小時（調(diào)45 C,回流即可），得到乙醛提取液。（ 2）蒽醌類成分的提?。阂颐烟崛∫航?jīng)薄層層析檢查有大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醛和大黃酚

4、。薄層板為硅膠一CMC粘合板，展開劑為石油醛（6090C）:乙酸乙酯（7： 3）近水平或直立展開，在可見光下，可看到四個斑點。其中最上面黃色斑點為大黃酚和大黃素甲醚的混合物, 在此條件下, 不能分開, 其余 3 個斑點依Rf 值 （由大到小）的順序是大黃素（橙色斑點）、蘆薈大黃素（黃色斑點）、大黃酸（黃色斑點）， 記錄圖譜并計算Rf 值 。2. PH 梯度萃取分離（1）將乙醛提取液加入 250mL分液漏斗中（使用前先檢漏），以35 mL 5 % NaHCO3水溶液萃取三次，乙醚層經(jīng)薄層層析檢查（展開劑同上）， 指示已提盡大黃酸后，合并三次NaHCO3萃取液，用濃鹽酸酸化至PH2-3 左右，析出

5、大黃酸沉淀。（注意：加酸時應(yīng)緩慢加入，以防酸液溢出，如出現(xiàn)分層現(xiàn)象，需將上層乙醚蒸去才能析出固體）。抽濾后，刮下顆粒并稱重。（2）經(jīng)5% NaHCOK溶液萃取后的乙醛層，繼以 35 mL 5 % NazCO水溶液萃取三次，乙醒層經(jīng)薄層檢查（展開劑同上），指示已提盡大黃素后，合并三次NS2CO萃取液，用濃鹽酸酸化至 PH2-3 左右，析出大黃素沉淀。（酸化時注意操作同前）。抽濾后，刮下顆粒并稱重。（3）經(jīng)5% NaCO水溶液萃取過后乙醛層以 35 mL % NaOHK溶液萃取四次，乙醛層經(jīng)薄層檢查（展開劑同上），指示已提盡后，合并三次NaOH?取液，用濃鹽酸酸化至 PH2-3左右， 析出蘆薈大黃

6、素、大黃酚和大黃素甲醚沉淀混合物。（酸化時注意操作同前）。 抽濾后，刮下顆粒并稱重。3. 樣品鑒定（1） 堿液試驗分別取各蒽醌結(jié)晶數(shù)毫克置于樣品管中，加 2%氫氧化鈉溶液1ml， 觀察顏色變化。凡有互為鄰位或?qū)ξ涣u基的蒽醌呈藍紫至藍色，其它羥基蒽醌呈紅色。5、 注意事項：(1)游離慈醍的提取要控制溫度，回流不宜太劇烈。(2) pH梯度萃取分離時，以保證提取充分，可以用薄層色譜作監(jiān)測。(3)注意堿液濃度及萃取時的靜置時間對實驗結(jié)果的影響。5cm6、 數(shù)據(jù)記錄、結(jié)果討論與分析：Rf大黃素=5=Rf蘆薈大黃素=5=Rf大黃酸=5=1、大黃酸沉淀2、大黃素沉淀3、蘆薈大黃素、大黃酚、 大黃素甲醴沉淀混

7、合物，觀察到分別取各上述沉淀(慈醍結(jié)晶)數(shù)毫克置于樣品管中，加2%氫氧化鈉溶液1ml各樣品管中溶液均呈紅色、但第1根管中顏色略淡。7、 思考題A大黃酸R1=H1、簡述大黃中5種游離羥基意醍化合物的酸性與結(jié)構(gòu)的關(guān)系。2=COOHB 大黃素R1=CH3R2=OHcfj«R1=CH2OHR2=HD 大黃素甲醚R1=CH3R2=OCH3E 大黃酚R1=CH3R2=H酸性：A>B>C>WD梯度萃取法的原理是什么如何利用該方法分離大黃中的5 種游離羥基蒽醌化合物答：pH梯度萃取法的原理是由于溶劑系統(tǒng)pH變化而改變了它們的存在狀態(tài)（游離型或解離型） ，從而改變了他們在溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)。由于各羥基蒽醌結(jié)構(gòu)上的不同所表現(xiàn)的酸性不同，用pH 梯度萃取法分離他們；大黃酚和大黃素甲醚酸性相近，利用其極性的差異，用柱色譜分離之。3. 結(jié)合本實驗，思考設(shè)計實驗方案所需因素答： 游離蒽醌的提取要控制溫度，回流不宜太劇烈。要注意堿液濃度及萃取時的靜置時間對實驗結(jié)果的影響。8、 參考文獻（ 1） 吳立軍主編，天然藥物化學(xué)實驗指導(dǎo)北京；人民衛(wèi)生出版社，2011（ 2）康廷國主編，中成藥薄層色譜鑒別. 北京：人民出版社，1995（ 3）