2022年豬瘟間接血凝抗體檢測(cè)試驗(yàn)

1、豬瘟間接血凝抗體檢測(cè)試驗(yàn)一、原理：用血凝抗原檢測(cè)未知血清抗體的試驗(yàn)，稱為正向間接血凝試驗(yàn)IHA。抗原與其對(duì)應(yīng)的抗體相遇，在一條件下形成抗原抗體復(fù)合物。但這種復(fù)合物的分子團(tuán)很小，肉眼看不見。將抗原吸附致敏在紅細(xì)胞外表，制成豬瘟血凝抗原，用于檢測(cè)免疫動(dòng)物血清中的豬瘟抗體水平。這種經(jīng)過豬瘟抗原致敏的紅細(xì)胞與豬瘟抗體相遇，紅細(xì)胞便出現(xiàn)清晰的凝集現(xiàn)象。2、 主要組分：1豬瘟血凝抗原5ml/瓶，5瓶/盒；2豬瘟陽性對(duì)照血清0.5ml/管，1管/盒；3豬瘟陰性對(duì)照血清0.5ml/管，1管/盒；4稀釋液50ml/瓶，2瓶/盒；5封板膜10張/盒。三、試驗(yàn)器材： 196孔110°V型醫(yī)用血凝板； 28

2、道或12道移液器； 3微量振蕩器。4、 物理性狀：1抗原 搖勻呈棕紅色或咖啡色，靜置后，血球逐漸沉入瓶底；2陰性對(duì)照血清 淡黃色清亮稍帶粘性的液體；3陽性對(duì)照血清 微紅或淡黃色稍渾濁帶粘性的液體；4稀釋液 淡黃或無色透明液體，低溫下放置，瓶底易析出少量結(jié)晶，在水浴中加溫后即可全溶，不影響使用。5、 作用與用途：用于檢測(cè)豬瘟疫苗免疫動(dòng)物血清抗體效價(jià)。6、 用法與判定： 1、用法 1.1加稀釋液 在血凝板上17排的110孔、第8排的14孔和第57孔；加稀釋液50l/孔。 1.2稀釋待檢血清 待檢血清使用前，需經(jīng)過56水浴滅活30分鐘，取待檢滅活血清樣品50l，分別參加反響板16排的第1孔中，與稀釋

3、液混勻后，吸取50l，加于第2孔中，依次作2倍系列稀釋至第10孔，第10孔混勻后取出50l棄去。 1.3稀釋陽性對(duì)照血清 在血凝板的第7排第1孔加陽性血清50l，2倍系列稀釋至第10孔，混勻后從該孔取出50l丟棄。此時(shí)被檢血清和陽性血清的稀釋倍數(shù)依次為1:21:1024。 1.4稀釋陰性對(duì)照血清 在血凝板上的第8排第1孔加陰性血清50l，對(duì)倍稀釋至第3孔，混勻后從該孔取出50l丟棄。此時(shí)陰性血清的稀釋倍數(shù)依次為1:2、1:4、1:8。第57孔為稀釋液對(duì)照，每孔僅參加50l稀釋液。 1.5加血凝抗原血清稀釋孔和稀釋對(duì)照孔加血凝抗原充分搖勻，瓶底應(yīng)無血球沉淀25l/孔。將反響板置微型振蕩器上震蕩2

4、3分鐘或用手依次四邊輕拍，直至血球分布均勻。封板膜封板，室溫下靜置23小時(shí)判定結(jié)果，也可延至翌日判定。2、 判定以呈現(xiàn)“血凝反響的血清最高稀釋度作為該血清的間接血凝抗體效價(jià)。血凝反響強(qiáng)度表示如下：“ 紅細(xì)胞全部凝集，形成一層均勻膜，布滿整個(gè)孔底?！?紅細(xì)胞在孔底形成一層薄膜，面積比前者略小?！?紅細(xì)胞在孔底形成薄膜凝集，邊緣松散或呈鋸齒狀?！?紅細(xì)胞在孔底呈稀薄、散在、少量凝集，孔底有小圓點(diǎn)?！?#177; 紅細(xì)胞沉于孔底，但周圍不光滑或中心有空斑?！?紅細(xì)胞完全沉于孔底，呈光滑的圓點(diǎn)。當(dāng)陽性血清抗體效價(jià)1:256、陰性血清抗體效價(jià)1:8、稀釋液對(duì)照孔無自凝現(xiàn)象時(shí)，試驗(yàn)成立。接種豬瘟疫苗的豬群

5、免疫抗體效價(jià)1:16為免疫合格。7、 考前須知：1為使您的實(shí)驗(yàn)獲得正確結(jié)果，請(qǐng)您在實(shí)驗(yàn)前仔細(xì)閱讀本說明書；2收到本試劑盒時(shí)，應(yīng)立即翻開包裝，取出血凝抗原瓶，用力搖動(dòng)，使粘附在瓶蓋上的紅細(xì)胞搖下，否那么易出現(xiàn)沉渣，影響使用效果；3勿用90°和130°血凝板，嚴(yán)禁使用一次性血凝板，以免誤判結(jié)果；4嚴(yán)重溶血或嚴(yán)重污染的血清樣品不易檢測(cè)，以免發(fā)生非特異性反響；5每次檢測(cè)只做一份陰性、陽性和稀釋液對(duì)照；6用過的血凝板應(yīng)及時(shí)在水龍頭下沖凈血球。再用蒸餾水或去離子水沖洗2次，甩干水分放37恒溫箱內(nèi)枯燥備用。檢測(cè)用具應(yīng)煮沸消毒，37枯燥備用。血凝板應(yīng)定期浸泡在洗液中也可浸泡在5%鹽酸液內(nèi)，48小時(shí)取出后清水沖凈。內(nèi)容總結(jié)1豬瘟間接血凝抗體檢測(cè)試驗(yàn)一、原理：用血凝抗原檢測(cè)未知血清抗體的試驗(yàn)，稱為正向間接血凝試驗(yàn)IHA24稀釋液50ml/瓶，2瓶/盒3第57孔為稀釋液對(duì)照，每孔僅參加50l稀釋液4判定以呈現(xiàn)“血凝反