蒲薏顆粒藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究

1、蒲薏顆粒藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究                         作者：遲明艷 黃勇 王愛民 蘭燕宇 王永林【摘要】  目的對(duì)蒲薏顆粒進(jìn)行藥效學(xué)研究。方法觀察蒲薏顆粒對(duì)荷瘤(H22)小鼠增效減毒作用，對(duì)艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延長(zhǎng)率的影響，對(duì)體外培養(yǎng)人食管癌(ECA-109)細(xì)胞的影響，對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的影響。結(jié)果蒲薏顆粒能增強(qiáng)化療藥物

2、抑瘤作用、拮抗化療藥物對(duì)WBC及骨髓有核細(xì)胞的抑制;對(duì)艾氏腹水癌小鼠生存時(shí)間有明顯的延長(zhǎng)作用;并顯著抑制ECA-109細(xì)胞增殖的細(xì)胞毒作用;同時(shí)該藥具有提高小鼠細(xì)胞免疫功能的作用。結(jié)論蒲薏顆粒具有抗癌和增強(qiáng)免疫作用。 【關(guān)鍵詞】  蒲薏顆粒; 抗腫瘤; 免疫增強(qiáng)蒲薏顆粒由蒲公英、生薏苡仁等5味中藥組成，具有清熱解毒、活血化瘀、補(bǔ)益氣血的功效，臨床用于腫瘤放、化療所致的氣血兩虛有很好的療效，我們根據(jù)其功能主治進(jìn)行了有關(guān)的主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)。1 材料1.1 動(dòng)物 KM小鼠，雄性，體重1822 g;SD大鼠，雄性，體重180210 g，均由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(黔

3、)2002-0001。BALB/C小鼠(SPF級(jí))，雄性，體重1620 g，簡(jiǎn)陽(yáng)市簡(jiǎn)城比爾動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)提供，動(dòng)物合格證號(hào)：0011159。1.2 瘤株 小鼠肝癌H22：由華西醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所提供;艾氏腹水癌(EAC)細(xì)胞，由重慶醫(yī)科大學(xué)生物工程系超聲研究所提供。人食管癌細(xì)胞(ECA-109)：由中科院生命研究所提供。1.3 藥物 蒲薏顆粒(PY)由貴州渝生制藥有限公司提供，每克顆粒含4g生藥，批號(hào)：20030306;環(huán)磷酰胺(CTX)，上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：031001;5-氟尿嘧啶(5-Fu)，上海旭東海普藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：030405;噻唑藍(lán)(MTT)：Sigma公司出品，

4、批號(hào)：206-069-5。         2 方法與結(jié)果2.1 蒲薏顆粒對(duì)小鼠肝癌H22化療的增效減毒作用13在無(wú)菌條件下于小鼠右腋皮下接種2×107/ml的H22細(xì)胞懸液，0.2 ml/只，24 h后按體重隨機(jī)分為模型對(duì)照組，5-Fu組，PY高、低劑量組，5-Fu加PY高劑量組，5-Fu加PY低劑量組。各組小鼠按表1的劑量灌胃(ig)給藥，1次/d，連續(xù)10 d，模型對(duì)照組給予等量生理鹽水(NS)。停藥次日稱重后，摘眼球取血作外周血象檢查，脫頸椎處死動(dòng)物，剖取并稱重瘤塊，抑瘤率。剝離小鼠右股骨，用16

5、40培養(yǎng)液通過針頭反復(fù)沖洗骨髓并測(cè)定洗液中骨髓有核細(xì)胞數(shù)。見表1。腫瘤抑制率(%)=(1-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重對(duì)照組平均瘤重)×100%由表1結(jié)果可見，蒲薏顆粒與5-Fu合用，可使5-Fu的腫瘤抑制率明顯提高;白細(xì)胞、骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)也有顯著性差異(P<0.05或P<0.01);提示蒲薏顆粒具有增效減毒的作用。表1 對(duì)小鼠肝癌H22化療的增效減毒作用與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，*P<0.01;與5-Fu組比較，#P<0.05，#P<0.01;n=102.2 蒲薏顆粒對(duì)艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延長(zhǎng)率的影響 45于無(wú)菌條件下小鼠腹腔常規(guī)接種艾氏腹水

6、癌小鼠(1×108/ml)的細(xì)胞懸液，瘤液0.2 ml/只，接種后24 h，按體重隨機(jī)分為5組：模型對(duì)照組，CTX組(20 mg/kg)，PY高、中、低劑量組，各組小鼠按表2的劑量ig給藥，1次/d，連續(xù)10 d，模型對(duì)照組給予等量NS。記錄存活天數(shù)，計(jì)算生命延長(zhǎng)率，比較各組間差異。結(jié)果見表2。生命延長(zhǎng)率(%)=給藥組平均生存時(shí)間-對(duì)照組平均生存時(shí)間對(duì)照組平均生存時(shí)間×100%表2 蒲薏顆粒對(duì)艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延長(zhǎng)率的影響由表2結(jié)果可見，蒲薏顆粒高、中、低劑量組EAC荷瘤小鼠生存時(shí)間與模型對(duì)照組比較均有顯著差異,生命延長(zhǎng)率最高達(dá)50%以上,表明該藥對(duì)艾氏腹水癌小鼠

7、生存時(shí)間有明顯的延長(zhǎng)作用。2.3 對(duì)體外培養(yǎng)人食管癌(ECA-109)細(xì)胞的影響1取大鼠30只，隨機(jī)分為對(duì)照組(NS 10 ml/kg)、環(huán)磷酰胺組 (20 mg/kg)、蒲薏顆粒組(12 g/kg)。各組動(dòng)物分別ig給藥，1次/d，連續(xù)7 d。末次ig后2 h乙醚麻醉，無(wú)菌條件下股動(dòng)脈取血，4 2 500 r/min離心25 min，吸取血清，同組血清混勻，以0.22 m微孔濾膜正壓過濾除菌，各組保留部分全血清，其余血清用1 640分別配成含鼠血清60%，30%，15%的培養(yǎng)基，-40保存?zhèn)溆谩?         

8、;取在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人食管癌細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)株(ECA-109)，用胰酶消化后，稀釋成 1×105個(gè)/ml，臺(tái)盼藍(lán)染色，檢測(cè)活細(xì)胞達(dá)95%以上。分別將腫瘤細(xì)胞接種于96孔板，每孔100 l，培養(yǎng)24 h后，觀察細(xì)胞貼壁后，分別換成含不同濃度大鼠血清培養(yǎng)基，每組10個(gè)平行孔。培養(yǎng)24 h，每孔內(nèi)加入5 mg/ml MTT10 l，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄去培養(yǎng)孔內(nèi)培養(yǎng)基，每孔加入二甲基亞砜100 l，待藍(lán)色結(jié)晶完全溶解后，用酶標(biāo)儀(波長(zhǎng)490 nm)測(cè)定各孔吸光度(A)。見表3。細(xì)胞毒活性(%)=(1-實(shí)驗(yàn)組OD值對(duì)照組OD值)×100%表3 含藥血清對(duì)ECA-109細(xì)胞的細(xì)胞毒活性與相應(yīng)濃

9、度對(duì)照組鼠血清比較,*P<0.05，*P<0.01;n=10與相應(yīng)血清濃度的對(duì)照組比較，蒲薏顆粒各劑量組的OD值明顯減小，差異顯著(P0.05，P0.01)，高劑量組細(xì)胞毒活性大于20%。顯示蒲薏顆粒有顯著的抑制ECA-109細(xì)胞增殖的細(xì)胞毒作用。2.4 對(duì)荷瘤(S180)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響B(tài)ALB/C小鼠，在無(wú)菌條件下，接種S180細(xì)胞懸液，0.2 ml/只，接種后24 h，分組，給藥方法見表4。分別于給藥的第3天和第6天動(dòng)物皮下注7%的2.4-二硝基氯苯丙酮液0.02 ml/只致敏。于第1次致敏的第10天，動(dòng)物一側(cè)耳用1%的2.4-二硝基氯苯甘油溶液0.02 ml進(jìn)行涂布攻

10、擊，另側(cè)耳作對(duì)照，24 h后處死動(dòng)物，剪下兩耳，打孔器取耳片，稱重，以左右兩耳片的重量差作為腫脹度，比較各組間差異。同時(shí)取胸腺、脾臟稱重，胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。見表4。由表4結(jié)果可見，蒲薏顆?？墒购闪鲂∈蠼档偷倪t發(fā)型超敏反應(yīng)水平、胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)明顯改善，具有提高荷瘤小鼠的細(xì)胞免疫水平作用。表4 對(duì)荷瘤(S180)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，*P<0.013 討論“蒲薏顆粒”處方為貴州省民間中醫(yī)祖?zhèn)鹘?jīng)驗(yàn)方，臨床應(yīng)用五十余年，由蒲公英、薏苡仁等5味藥組成。方中蒲公英清熱解毒、消腫散結(jié)，利尿通淋。藥研究其主要成分蒲公英多糖是一種免疫促進(jìn)劑，其抗癌活性與免疫激

11、活效果有關(guān)6;薏苡仁清熱排膿、健脾滲濕，伸筋除痹痛，其中的薏苡仁內(nèi)酯能抑制艾氏腹水癌，而且能參與機(jī)體免疫功能，提高機(jī)體的免疫監(jiān)視7。方中其他3味藥：何首烏、靈芝、三棱則扶正以助君臣藥的祛邪之功。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，蒲薏顆粒確有抗癌和免疫增強(qiáng)作用，從而在實(shí)驗(yàn)研究上為蒲薏顆粒惡性腫瘤提供了理論依據(jù),同時(shí)印證了蒲薏顆粒的臨床療效?！尽?#160; 1 王北嬰,李儀奎.中藥新藥研制開發(fā)技術(shù)與方法M.上海：上海技術(shù)出版社，2001：735.2 劉明霞，李貴海.癌敵膠囊對(duì)環(huán)磷酰胺的增效減毒作用J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2000, 17(3)：202.3 朱建偉, 孔 捷, 侯文靜，等.參蟲顆粒體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007, 18(5)：1124,1125.4 胡 蓉，代國(guó)友，王 瑜.扶正抗癌膠囊的抗癌作用及其毒性J.華西藥學(xué)雜志，2002,17(4