小麥葉片中細(xì)胞器中重金屬含量測(cè)定

1、 小麥葉片中細(xì)胞器中重金屬含量測(cè)定一 試驗(yàn)?zāi)康? 了解生物毒性的一般方法。2 把握勻漿器、原子吸取儀的使用。3 把握生物樣品的處理方法。二 試驗(yàn)原理濕法消化：使用具有強(qiáng)氧化性酸混合液（如HNO3、HCl、HClO4等），式樣共同加熱消化，使細(xì)胞器中的金屬元素鋅、銅、鎘以離子態(tài)溶解在消解液中。差速離心法：細(xì)胞內(nèi)不同細(xì)胞器的比重和大小都不相同，在均勻密度介質(zhì)中不同離心力下沉降的細(xì)胞器組成不同或在梯度介質(zhì)中離心后分布于不同密度層，依據(jù)這一原理，差速離心法或密度梯度離心法就可將細(xì)胞內(nèi)各種組分分別出來(lái)。分別流程：裂開(kāi)組織（勻漿或研磨）差速離心或密度梯度離心分別細(xì)胞器結(jié)果檢驗(yàn)分析原子吸取分光光度計(jì)一般由四

2、大部分組成，即光源（單色銳線輻射源）、試樣原子化器、單色儀和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（包括光電轉(zhuǎn)換器及相應(yīng)的檢測(cè)裝置）。原子化器主要有兩大類，即火焰原子化器和電熱原子化器?；鹧嬗卸喾N火焰，目前普遍應(yīng)用的是空氣乙炔火焰。電熱原子化器普遍應(yīng)用的是石墨爐原子化器，因而原子吸取分光光度計(jì)，就有火焰原子吸取分光光度計(jì)和帶石墨爐的原子吸取分光光度計(jì)。前者原子化的溫度在21002400之間，后者在29003000之間。火焰原子吸取分光光度計(jì)，利用空氣乙炔測(cè)定的元素可達(dá)30多種，若使用氧化亞氮乙炔火焰，測(cè)定的元素可達(dá)70多種。但氧化亞氮乙炔火焰平安性較差，應(yīng)用不普遍。空氣乙炔火焰原子吸取分光光度法，一般可檢測(cè)到PPm級(jí)（

3、10-6），精密度1%左右。國(guó)產(chǎn)的火焰原子吸取分光光度計(jì)，都可配備各種型號(hào)的氫化物發(fā)生器（屬電加熱原子化器），利用氫化物發(fā)生器，可測(cè)定砷（As）、銻（Sb）、鍺（Ge）、碲（Te）等元素。一般靈敏度在ng/ml級(jí)（109），相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2%左右。汞(Hg)可用冷原子吸取法測(cè)定。石墨爐原子吸取分光光度計(jì)，可以測(cè)定近50種元素。石墨爐法，進(jìn)樣量少，靈敏度高，有的元素也可以分析到pg/mL級(jí)。三 試驗(yàn)內(nèi)容1 試驗(yàn)液的預(yù)處理。2 小麥葉片中細(xì)胞器中的重金屬含量。四 試驗(yàn)儀器設(shè)備和材料清單1 儀器設(shè)備：25ml勻漿器，電熱板，原子吸取儀，石墨爐原子吸取分光光度計(jì)，電子分析天平，離心機(jī)； 25ml、50m

4、l比色管，離心管，50ml燒杯，50ml、500ml容量瓶，玻璃珠若干，剪刀，鑷子。1ml、2ml、5ml、10ml、25ml移液管，洗瓶，紗布。2 溶液：勻漿液（組成為: 蔗糖250mmol/L，Trie-Hcl pH7.5 50mmol/L，二硫赤蘚糖醇1mmol/L），濃硝酸，高氯酸，濃鹽酸，蒸餾水，濃硫酸，硫酸銅，銅。五 試驗(yàn)步驟1 勻漿：用電子分析天平精確稱取小麥葉片，稱量完放入勻漿器，加入5ml上述勻漿液，將小麥勻漿，勻漿液放于50ml燒杯中待用。2 細(xì)胞器的分別：用高速冷凍離心機(jī)在不同轉(zhuǎn)速下分別細(xì)胞器。(差速離心法)3 消化：將每次分別的細(xì)胞器溶液倒入50ml小燒杯中，放于電加熱

5、板上，加入幾粒玻璃珠后，加入濃硝酸：高氯酸=3:1的溶液，漸漸升溫至160攝氏度，加熱至近干，如仍有顏色，再以1:3的比例加入高氯酸和濃硝酸直至顏色消逝得到澄清透亮的溶液。每次分別的細(xì)胞器都重復(fù)這個(gè)步驟。4 定容：將以上消化完全的溶液轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，用蒸餾水定容。5 銅含量的測(cè)定銅標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：（1） 銅標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取0.5000g金屬銅，加入10m硝酸（1:1），低溫加熱溶解并蒸干至近干，再加入5ml硫酸（1:1），當(dāng)心連續(xù)蒸發(fā)至冒白煙，冷卻后加水浸取，待鹽類全部溶解，冷卻后移入500ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。此溶液1ml含有1mg銅。（2） 銅混合標(biāo)準(zhǔn)使用液：取銅標(biāo)準(zhǔn)

6、貯備液2.5ml，用0.2%硝酸稀釋至50ml，得到50mg/L的銅溶液。（3） 銅標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制：吸取混合標(biāo)準(zhǔn)使用液0、0.5、1.5、2.5和5ml，分別放入五個(gè)50ml比色管中，用0.2%硝酸稀釋定容。（4） 用火焰原子吸取分光光度法在324.7nm條件下測(cè)定以上梯度銅溶液，并繪制銅標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得吸光度和銅濃度的比例關(guān)系。（5） 通過(guò)銅標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出小麥中各細(xì)胞器中的銅含量。（6） 計(jì)算：以BCF值做指標(biāo)：BCF是生物組織（干重）中化合物的濃度和溶解在水中的濃度之比，也可以認(rèn)為是生物對(duì)化合物的吸取速率與生物體內(nèi)化合物凈化速率之比，用來(lái)表示有機(jī)化合物在生物體內(nèi)的生物富集作用的大小。生物富

7、集系數(shù)是描述化學(xué)物質(zhì)在生物體內(nèi)累積趨勢(shì)之重要指標(biāo)。,6 鎘含量的測(cè)定 按上述方法，差速離心法下得到各種細(xì)胞器，細(xì)胞壁、細(xì)胞器組分用1:4 ( v/v) 的HNO3-HClO4 混合消煮, 消煮完全后, 定容、過(guò)濾, 用石墨爐原子吸取分光光度計(jì)測(cè)定各組分鎘含量。細(xì)胞質(zhì)組分和可溶部分的各流分無(wú)需消化, 直接用石墨爐原子吸取分光光度計(jì)測(cè)定鎘含量。7 鋅的測(cè)量（1） 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取6個(gè)25ml容量瓶，分別加入5滴1:1鹽酸，依次加入0.00,0.50,1.00,2.00，3.00，4.00ml的濃度為10mg/L的鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液，用去離子水稀釋至刻度，搖勻，配成含0.00,0.20,0.40,0.80,1.20,1.60mg/L的鋅標(biāo)準(zhǔn)系列，然后用帶有鋅空心陰極燈（213.9nm）的原子吸取分光光度計(jì)測(cè)定其吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（2） 消化：同上述消化步驟。（3） 測(cè)定：將消化液在與標(biāo)