消毒劑消毒效力及有效期驗證方案00

1、Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the ProgrammeValidation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認驗證方案Tablet of Content目錄1. 目的和范圍 . 42. 驗證小組職責 . 43. 驗證小組簽名 . 54. 定義與縮寫 . 55. 參考文件 . 56. 概述 . 57. 確認前準備 . 78. 消毒劑消毒效力試驗 . 89. 消毒劑有效期確認試驗 . 1310. 驗證偏差和變更 . 1611. 附錄列表 . 171.1.1. 目的和范圍 目的確認各潔凈級別的操作間及設備外表面按照規(guī)定的消毒

2、程序消毒能夠達到消毒、防止污染的目的，并在消毒劑有效期內(nèi)能確保其消毒效力能符合要求。1.2. 范圍本驗證方案適用于本公司潔凈區(qū)的墻面、天花板、門窗、機器設備、儀器、操作臺、地漏、推車、桌椅等表面以及操作人員雙手（手套）的消毒等。2.2.1. 驗證小組職責 驗證小組組長職責保證方案和記錄的起草。保證在執(zhí)行前完成對方案及記錄的審核和批準。負責對驗證小組成員進行本方案的培訓。保證完全按照方案實施。確保能及時發(fā)現(xiàn)偏差，并按照已經(jīng)達成一致偏差處理方法對其進行記錄、糾正、調(diào)查和最終確認。驗證過程中，如有變更，參照變更控制執(zhí)行。確保報告的生成、審核和批準，以便對方案進行最終批準。2.2. QA職責執(zhí)行前完成

3、對方案及記錄的審核。負責驗證過程的監(jiān)控和檢查，保證驗證方案的實施，參與驗證結(jié)果評價。參與驗證偏差的調(diào)查、處理和評估。驗證過程中，如有變更，參照變更控制執(zhí)行。2.3. 其它成員職責執(zhí)行前確認方案已批準，并經(jīng)過培訓。按驗證方案實施驗證，收集、整理驗證數(shù)據(jù)，完成驗證記錄和報告。參與驗證偏差的調(diào)查和處理，確認并通過偏差修訂和解決方案。3. 驗證小組簽名4. 5. 5.1. 5.2. 5.3. 5.4. 5.5. 5.6. 5.7. 5.8. 6. 6.1.定義與縮寫 無 參考文件變更控制（SOP0501-01）； 驗證主計劃（SOP0702-01）； 驗證的組織和實施（SOP0701-01）； 微生物

4、棉簽擦拭取樣方法驗證報告VR8012-01 清潔劑和消毒劑管理（SOP2005-01）； 菌液配制及計數(shù)（TM7006-01） 藥品生產(chǎn)驗證指南2003版微生物檢測驗證技術(shù)（中國醫(yī)藥科技出版社） 概述本公司的潔凈區(qū)分為A級、C級和D級，擬定用于潔凈區(qū)表面消毒的有七種消毒劑：75%乙醇、0.1%新潔爾滅溶液、0.3%新潔爾滅溶液、0.1%醋酸洗必泰、0.5%醋酸洗必泰、40mg/L的二氧化氯、60mg/L的二氧化氯。本次驗證方案將選用以上7種消毒劑分別進行驗證試驗。作用對象一樣的消毒劑每月輪換使用，避免表面微生物產(chǎn)生耐藥菌株。在利用消毒劑進行表面擦拭消毒過程中消毒劑的作用時間應不少于10分鐘，利

5、用消毒劑進行浸泡消毒的不少于10分鐘。消毒劑的種類、消毒對象、消毒方法和有效期6.2. 為了確認消毒劑的消毒效力，通過實驗室考察部分和現(xiàn)場考察部分分別進行驗證。其中，用定量懸浮試驗法和表面實驗法進行實驗室考察試驗部分。潔凈區(qū)設施表面材質(zhì)有不銹鋼和玻璃兩種，故表面試驗法選用不銹鋼載片和玻璃裁片模擬潔凈區(qū)設施表面進行驗證試驗。 兩種試驗方法作用的消毒劑見表?，F(xiàn)場考察試驗部分選擇固體車間（D級）的制粒一、QC微生物檢測室（C級）、QC微生物檢測室超凈工作臺（A級）設備表面消毒前和消毒后分別進行取樣，測定其微生物數(shù)量。7. 7.1.確認前準備確認的相關(guān)SOP和在驗證過程中用到的相關(guān)文件，將檢查結(jié)果記錄

6、在文件檢查內(nèi)，見附錄1。7.2.驗證小組的成員已進行該驗證方案及相關(guān)SOP的培訓，將檢查結(jié)果記錄在培訓內(nèi)，見附錄2。7.3. 7.3.1.驗證用試劑與材料 菌種7.3.2. 培養(yǎng)基7.3.3. 消毒液擬定選用的中和劑7.3.4. 稀釋液0.9%無菌氯化鈉溶液（NS）7.3.5. 器具及設備7.4. 8. 8.1. 8.1.1.驗證用試劑與材料記錄見附錄3。 消毒劑消毒效力試驗 中和劑鑒定試驗 試驗目的通過該試驗，確認所用的中和劑對對應的消毒劑有良好的中和作用，對試驗用菌劑及其恢復期培養(yǎng)示范有害或不良影響。8.1.2. 菌液的制備及計數(shù)8.1.2.1. 金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌

7、工作菌液的制備8.1.2.2.8.1.3.8.1.3.1.8.1.3.2.接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng)1824小時。取上述培養(yǎng)物用0.9無菌氯化鈉溶液做10倍系列稀釋成5×1055×106CFU/ml的工作菌液（如肉湯培養(yǎng)物的濃度已為1×1085×108CFU/ml，可不再用0.9無菌氯化鈉溶液稀釋）。 計數(shù)時，將5×1055×106CFU/ml的工作菌液10倍系列稀釋成含50100CFU/ml菌液，并同時采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基3035培養(yǎng)2天計數(shù)。計算該稀釋級的平均菌落數(shù)，將

8、計數(shù)結(jié)果換算成每毫升濃菌液的菌落數(shù)。 白色念珠菌工作菌液的制備 接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，2328培養(yǎng)2448小時。取上述培養(yǎng)物用0.9無菌氯化鈉溶液做10倍系列稀釋成5×1055×106CFU/ml的工作菌液（如肉湯培養(yǎng)物的濃度已為5×1055×106CFU/ml，可不再用0.9無菌氯化鈉溶液稀釋）。計數(shù)時，將5×1055×106CFU/ml的工作菌液10倍系列稀釋成含50100CFU/ml菌液，并同時采用改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基2328培養(yǎng)3天計數(shù)。計算該稀釋級的平均菌落數(shù)，將計數(shù)結(jié)果換算成每毫升濃菌液的菌落數(shù)。 鑒

9、定試驗操作 配制75%乙醇、0.1%新潔爾滅溶液、0.3%新潔爾滅溶液、0.1%醋酸洗必泰、0.5%醋酸洗必泰、40mg/L的二氧化氯、60mg/L的二氧化氯，具體操作執(zhí)行清潔劑和消毒劑管理。將配置好的消毒劑置20±1恒溫水浴鍋中備用。 分組操作試驗分組及稀釋操作方法簡表具體操作 第1組目的：觀察消毒液對試驗菌有無殺滅或抑制能力。 操作：取消毒劑4.5ml+工作菌液0.5ml，混勻作用10min后，取混合液B 0.5ml+稀釋液4.5ml，混勻作用10min，取混合液B和10-10.5ml注皿，平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置3035培養(yǎng)

10、3天計數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置2328培養(yǎng)5天計數(shù)計數(shù)。 第2組目的：觀察殘留消毒劑被中和后受到消毒劑作用后的試驗菌是否恢復生長。 操作：取消毒劑4.5ml+工作菌液0.5ml，混勻作用10min后，取混合液A 0.5ml +中和劑4.5ml，混勻作用10min，用稀釋液稀釋成10-1。分別取未稀釋溶液即混合液B（混合液0.5mll+中和劑4.5ml的混合液）及10-1 0.5ml注皿，各平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置于3035培養(yǎng)3天計數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置于2328培養(yǎng)5天計數(shù)。 第3組目的：觀察中和劑是否有

11、抑菌性、毒性操作：取中和劑4.5ml+工作菌液0.5ml，混勻作用10min，取混合液0.5ml l+稀釋液4.5ml，混勻作用10min后，用稀釋液進行10倍系列稀釋成10-2、10-3。取相應稀釋級0.5ml注皿，各稀釋級平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置3035培養(yǎng)3天計數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置2328培養(yǎng)5天計數(shù)計數(shù)。 第4組目的：觀察中和產(chǎn)物，或未被完全中和殘留消毒劑對試驗菌的生長繁殖是否有影響。 操作：取消毒劑和中和劑1:1的混合液4.5ml+工作菌液0.5ml，混勻作用10min，取混合液0.5ml l+稀釋液4.5ml

12、，混勻作用10min后，用稀釋液進行10倍系列稀釋成10-2、10-3。取相應稀釋級0.5ml注皿，各稀釋級平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置3035培養(yǎng)3天計數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置2328培養(yǎng)5天計。 第5組目的：作陽性對照用操作：取稀釋液4.5ml+工作菌液0.5ml，混勻作用10min，取混合液0.5ml l+稀釋液4.5ml，混勻作用10min后，用稀釋液進行10倍系列稀釋成10-2、10-3。取相應稀釋級0.5ml注皿，各稀釋級平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置3035培養(yǎng)3天計

13、數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置2328培養(yǎng)5天計數(shù)。 第6組目的：作為陰性對照用操作：分別取稀釋液和中和劑各1.0ml注入無菌平皿中，各制備2皿。8.1.3.3. 結(jié)果判斷8.1.4.8.2.8.2.1.8.2.2.8.2.2.1.8.2.2.2.試驗結(jié)果應符合下列全部條件，判斷所選中和劑合格。 第1組無菌生長，或僅有少數(shù)試驗菌菌落生長。 第2組菌落數(shù)比第1組菌落數(shù)多，但比第3、4、5組菌落數(shù)少，且符合下表要求 第3、4、5組有相似菌落數(shù)生長，其每組間菌落數(shù)誤差率不超過15%。計算公式如下： （3組間菌落平均數(shù)-各組菌落平均數(shù)）的絕對值之和 誤差率×100 3×3

14、組間菌落平均數(shù) 第6組無菌生長。否則，說明試劑有污染，應重新進行試驗。中和劑鑒定試驗記錄見附錄4。 定量懸浮試驗 試驗目的 由于0.3%的新潔爾滅溶液、0.1%新潔爾滅溶液、60mg/L二氧化氯溶液、0.1%醋酸洗必泰溶液、0.5%醋酸洗必泰溶液是通過浸泡或液封消毒，通過定量懸浮試驗，確定其消毒效力是否符合要求。 試驗操作 配制0.3%的新潔爾滅溶液、0.1%新潔爾滅溶液、60mg/L二氧化氯溶液、0.1%醋酸洗必泰溶液、0.5%醋酸洗必泰溶液，操作執(zhí)行清潔劑和消毒劑管理。將配置好的消毒劑置20±1恒溫水浴鍋中備用。 由于0.3%的新潔爾滅溶液、0.1%新潔爾滅溶液中低效消毒劑，且不

15、能殺滅芽孢，故定量懸浮試驗用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌。 0.1%醋酸洗必泰、0.5%醋酸洗必泰溶液、60mg/L二氧化氯溶液為高效消毒劑，能殺滅芽孢，故定量懸浮試驗用菌枯金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌。8.2.2.3. 將菌液制備成1×1071×107CFU/ml的工作菌液，菌液的制備及計數(shù)同。8.2.2.4. 將試管按需要分組排列在試管架上，試驗組分3組（8min、10min、12min各一組），并由左向右逐管標明消毒劑、中和劑、10-1、10-2。對照組分1組，并由左向右逐管標明稀釋液、中和劑、10-1、10-2、10-3、10-

16、4。8.2.2.5. 向個試管加入4.5ml相應的試劑，標明10-1、10-2、10-3、10-4。加入4.5ml的稀釋液。8.2.2.6. 吸取工作菌液0.5ml加入標明消毒劑的試管中，對照組加入標明稀釋液的試管中，迅速混勻，并開始計時。8.2.2.7. 待菌液與消毒劑相互作用至8min、10min、12min，吸取菌液和消毒劑混合液0.5ml，加入標明中和劑的試管中，迅速混勻。8.2.2.8. 中和作用10min后，吸取0.5ml加入標明10-1的試管中，混勻后吸取0.5ml加入標明10-2試管中（對照組以此類推，對照組直至10-4）。8.2.2.9. 試驗組分別取中和劑管、10-1、10

17、-2管溶液1ml按平皿法測定存活菌數(shù)；對照組取10-3、10-41ml按平皿法測定存活菌數(shù)。每管平行制備2皿。8.2.2.10. 金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置于3035培養(yǎng)2天計數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置于2328培養(yǎng)3天計數(shù)計數(shù)。8.2.3. 結(jié)果計算計算試驗組和對照組的活菌濃度 （CFU/ml），并換算為對數(shù)值（N），并按下式計算殺滅對數(shù)值:殺滅對數(shù)值 (KL)對照組平均活菌濃度的對數(shù)值（NO）試驗組活菌濃度對數(shù)值（NX）8.2.4. 可接受標準殺滅對數(shù)值 (KL)應不低于35個對數(shù)單位。8.2.5.8.3.8.3.1. 定量懸浮試驗記錄見

18、附錄5 表面試驗法 試驗目的8.3.2.8.3.3.8.3.4.8.3.4.1.8.3.4.2.由于75%乙醇、40mg/L二氧化氯溶液、0.1%新潔爾滅溶液是通過擦拭消毒，故選用不銹鋼載片和玻璃裁片進行表面試驗法，確定其消毒效力是否符合要求。 菌種選擇 由于75%乙醇、0.1%新潔爾滅溶液中低效消毒劑，且不能殺滅芽孢，故表面試驗用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌。 40mg/L二氧化氯溶液為高效消毒劑，能殺滅芽孢，故表面試驗用菌枯金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌。 工作菌液制備 工作菌液的制備方法、濃度及驗證同步計數(shù)操作同。 試驗操作 （1） 染菌不銹鋼載片制備

19、 將經(jīng)滅菌的載片平鋪于無菌平皿內(nèi)，滴加金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌含菌量為1×1085×108CFU的菌液0.1ml，并均勻涂布于整個載體表面。滴染菌液后，載片置超凈工作臺晾干后備用。每種菌平行制備兩個染菌不銹鋼載片。 （2）染菌玻璃載片制備 因培養(yǎng)皿的材質(zhì)為玻璃，故用培養(yǎng)皿代替玻璃載片進行染菌試驗。進行菌液滴染前，用記號筆在培養(yǎng)皿菌液滴染面的背面畫出染菌面積（50mm×50mm），標注清晰。菌液滴染操作同染菌不銹鋼載片制備。 試驗組： 將消毒劑擦拭在制備好的染菌載片上，消毒劑作用時間分別為8min、10min、12min，不銹鋼載片和玻璃載片每個作用

20、時間分別制備2個。作用結(jié)束后，用接觸碟取樣（接觸碟規(guī)格： 55mm，取樣面積為25m2）。取金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號：BZW12085）；取樣白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號：BZW15129）。 接觸碟取樣方法：打開接觸碟蓋，使無菌培養(yǎng)基表面與取樣面直接接觸，均勻按壓接觸碟底板，確保全部瓊脂表面與取樣面表面均勻接觸10秒左右，在蓋上跌蓋。8.3.4.3.8.3.4.4.8.3.4.5.8.3.5.8.4.8.4.1.8.4.2.8.4.3.8.4.4.8.4.5. 對照組 對照組的活菌濃度計數(shù)見。. 陰性對照： 用接觸碟在已滅菌的

21、載片上（未染菌片的載）按壓取樣，操作同上。每種載片及每種接觸碟平行制備兩份。 培養(yǎng) 將取樣金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌的接觸碟倒置于3035培養(yǎng)2天計數(shù)；取樣白色念珠菌的接觸碟倒置于2328培養(yǎng)3天計數(shù)計數(shù)。 結(jié)果計算 計算試驗組和對照組的活菌濃度 （CFU/ml），并換算為對數(shù)值（N），并按下式計算殺滅對數(shù)值: 殺滅對數(shù)值 (KL)對照組平均活菌濃度的對數(shù)值（NO）試驗組活菌濃度對數(shù)值（NX） 可接受標準 殺滅對數(shù)值 (KL)應不低于35個對數(shù)單位。 表面試驗法記錄見附錄6 現(xiàn)場考察試驗 消毒前對潔凈區(qū)進行表面微生物取樣。 取樣地點：固體車間（D級）的制粒間一墻壁和設備表面、 QC微生物檢測室(C級)墻壁和設備表面、QC微生物檢測室超凈工作臺（A級）下設備表面。取樣操作及檢驗執(zhí)行表面微生物檢驗。 生產(chǎn)操作結(jié)束后操作人員按照生產(chǎn)區(qū)清潔對潔凈區(qū)進行清潔消毒。 清潔消毒完畢15分鐘后，現(xiàn)場QA對清潔消毒后的潔凈區(qū)進行表面微生物取樣。 固體車間（D級）的制粒間一墻壁和設備表面、 QC微生物檢測室(C級)墻壁和設備表面、QC微生物檢測室超凈工作臺（A級）下設備表面。取樣操作及檢驗執(zhí)行表面微生物檢驗。 至少進行3次試驗。 可接受標準消毒后：A級：<1CFU/25cm2C級：<25CFU/25cm2D級：&