霉菌和毒素的檢測(cè)方法

1、編輯ppt食品中霉菌及毒素的檢測(cè)方法專 業(yè)：食品科學(xué)編輯pptNumber 1研究背景及意義研究背景及意義 Number 2霉菌的檢測(cè)方法霉菌的檢測(cè)方法 Number 3毒素的檢測(cè)方法毒素的檢測(cè)方法 Number 4參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)目目 錄錄contents編輯ppt霉菌霉菌 霉菌廣泛分布于自然界中，由于其可形成各種微小的孢子， 因而很容易污染食品。霉菌毒素霉菌毒素 霉菌毒素是霉菌產(chǎn)生的一種有毒的次生代謝產(chǎn)物，毒素污染會(huì)導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)價(jià)值降低，引起動(dòng)物疾病，并直接或間接危害人類健康。1 研究背景及意義編輯ppt 自從20 世紀(jì) 60 年代發(fā)現(xiàn)強(qiáng)致癌的黃曲霉毒素以來(lái),霉菌與霉菌毒素對(duì)食品的污染日益引起

2、重視。我國(guó)在2011 年頒布了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB2761-2011食品中真菌毒素限量,各級(jí)食品監(jiān)督檢測(cè)機(jī)構(gòu)全面開展霉菌的檢測(cè)工作。編輯ppt方法方法01GB4789.15-2010 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)。方法方法02食品中霉菌和酵母計(jì)數(shù) PetrifilmTM測(cè)試片法。2.1霉菌檢測(cè)方法霉菌檢測(cè)方法編輯ppt03菌落計(jì)數(shù)結(jié)果和報(bào)告結(jié)果和報(bào)告0405鏡檢鏡檢培養(yǎng)培養(yǎng)0201樣品的稀釋樣品的稀釋2.1食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)編輯ppt編輯ppt 2.1.1 樣品的稀釋 2.1.2 培養(yǎng)編輯ppt 肉眼觀察，必要時(shí)可用放大鏡，記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母

3、數(shù)。以菌落形成單位（colony forming units，CFU）表示。 選取菌落數(shù)在 10 CFU150 CFU的平板，根據(jù)菌落形態(tài)分別計(jì)數(shù)霉菌和酵母數(shù)霉菌蔓延生長(zhǎng)覆蓋整個(gè)平板的可記錄為多不可計(jì)。菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。 2.1.3 菌落計(jì)數(shù)編輯ppt 2.1.4.1 結(jié)果 計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)計(jì)算。 若所有平板上菌落數(shù)均大于 150 CFU，則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。 若所有平板上菌落數(shù)均小于 10 CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。 若所有稀釋度平板均無(wú)菌落

4、生長(zhǎng)，則以小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算；如為原液，則以小于 1計(jì)數(shù)。 編輯ppt 2.1.4.2 報(bào)告 1)菌落數(shù)在 100 以內(nèi)時(shí)，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告。 2)菌落數(shù)大于或等于 100 時(shí)，前 3 位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前 2 位數(shù)字，后面用0 代替位數(shù)來(lái)表示結(jié)果；也可用 10 的指數(shù)形式來(lái)表示，此時(shí)也按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字。 3)稱重取樣以 CFU/g 為單位報(bào)告，體積取樣以 CFU/mL 為單位報(bào)告，報(bào)告或分別報(bào)告霉菌和/或酵母數(shù)。 編輯ppt 2.1.5 鏡檢B.1 檢樣的制備：取定量檢樣,加蒸餾水稀釋至折光指數(shù)為 1.3447

5、1.3460（即濃度為7.9%8.8%），備用。 B.2 顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)視野的校正：將顯微鏡按放大率 90125 倍調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)視野，使其直徑為 1.382 mm。 B.3 涂片：洗凈郝氏計(jì)測(cè)玻片，將制好的標(biāo)準(zhǔn)液，用玻璃棒均勻的攤布于計(jì)測(cè)室，以備觀察。 B.4 觀測(cè)：將制好之載玻片放于顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)視野下進(jìn)行霉菌觀測(cè)，一般每一檢樣觀察 50 個(gè)視野，同一檢樣應(yīng)由兩人進(jìn)行觀察。 B.5 結(jié)果與計(jì)算：在標(biāo)準(zhǔn)視野下，發(fā)現(xiàn)有霉菌菌絲其長(zhǎng)度超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)視野（1.382mm)的1/6或三根菌絲總長(zhǎng)度超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)視野的1/6（即測(cè)微器的一格）時(shí)即為陽(yáng)性（+），否則為陰性（-），按100個(gè)視野計(jì)，其中發(fā)現(xiàn)有霉菌菌絲體存在的視野數(shù)

6、，即為霉菌的視野百分?jǐn)?shù)。 編輯ppt編輯ppt2.1 食品中霉菌和酵母計(jì)數(shù) PetrifilmTM測(cè)試片法PetrifilmTM霉菌和酵母測(cè)試片： 1）測(cè)試片中添加抗生素，可抑制細(xì)菌生長(zhǎng)； 2）含有酵母菌指示劑，使酵母菌更易計(jì)數(shù)； 3）適用與菌落總數(shù)、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、單增李斯特氏菌。編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt酶酶 聯(lián)聯(lián) 免免 疫疫 吸吸 附附 法法熒光檢測(cè)熒光檢測(cè)法法近紅外光近紅外光譜法譜法微柱法微柱法薄層色譜薄層色譜法法. . 氣相色譜氣相色譜和氣質(zhì)譜和氣質(zhì)譜聯(lián)用法聯(lián)用法高效液相高效液相色譜法和色譜法和液質(zhì)聯(lián)用液質(zhì)聯(lián)用2.2 霉霉菌菌毒毒素素檢檢測(cè)

7、測(cè)方方法法編輯ppt ELISA 是利用抗原抗體反應(yīng)原理 ，已知抗原吸附在酶標(biāo)板上 加入酶標(biāo)記抗體和樣品提取液并混合均勻，充分反應(yīng)后用去離子水洗去多余抗體，再加入酶的底物，產(chǎn)生有色物質(zhì)，最后加入終止液使反應(yīng)終止。柳其芳 2006 ELISA法操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)速度快、成本低，適用于大批量樣品的快速篩選。蔣建云 2006 等也用此法檢測(cè)飼料中黃曲霉毒素 B1 的含量，不但特異性強(qiáng) 提取純化步驟簡(jiǎn)單，結(jié)果也易判讀 回收率在 90%左右。 2.2.1 酶 聯(lián) 免 疫 吸 附 法 編輯ppt 2.2.2 熒光檢測(cè)法 熒光檢測(cè)法 FLD 常結(jié)合免疫親和柱使用，是美國(guó) AOAC 的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，我國(guó)國(guó)標(biāo)(GB

8、/T 18979-2003)也采用此法檢測(cè)黃曲霉毒素的含量，檢測(cè)樣品經(jīng)甲醇/水提取后、過(guò)濾、稀釋。用含有黃曲霉毒素特異抗體的免疫親和柱層析凈化，超純水洗去雜質(zhì)，甲醇洗脫，加入溴溶液衍生后用熒光光度計(jì)測(cè)定。趙東豪等 2009 此法也常用來(lái)檢測(cè)玉米赤霉烯酮等。熒光檢測(cè)法方便、快捷、花費(fèi)少、不需使用霉菌毒素的標(biāo)準(zhǔn)品，減少對(duì)人的傷害 也常作為快速篩選方法使用。編輯ppt 2.2.3近紅外光譜法 近紅外光譜法（NIR）是近年來(lái)發(fā)展得比較快的光譜分析技術(shù)。 NIR 可以用來(lái)檢測(cè)小麥中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇等霉菌毒素。使用 NIR 分析，樣品不需預(yù)處理，多種組分可以同時(shí)測(cè)定，分析速度快，重現(xiàn)性好，但是此方法必

9、須先建立準(zhǔn)確的校正模型， 適用于經(jīng)常性質(zhì)量控制分析。編輯ppt 2.2.4 微柱法 微柱法：將樣品提取液通過(guò)氧化鋁-硅鎂型吸附劑填充的微柱，樣品中的雜質(zhì)被氧化鋁吸附，霉菌毒素則被硅鎂型吸附劑吸附，在紫外分析燈下觀察熒光環(huán)與標(biāo)準(zhǔn)比較定量 本法簡(jiǎn)便快速、靈敏度高。主要用于飼料中黃曲霉毒素的篩選。微柱凝膠免疫監(jiān)測(cè)儀編輯ppt 2.2.5 薄層色譜法 薄層色譜法：將樣品提取液在薄層板上點(diǎn)樣， 展開后，用吸收法或熒光法對(duì)被測(cè)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品掃描測(cè)定。對(duì)于黃曲霉毒素B1的檢測(cè)，我國(guó)國(guó)標(biāo)采用(TLC)法，該方法更適于確認(rèn)黃曲霉毒素 存在與否。編輯ppt氣相色譜和氣質(zhì)聯(lián)用法2.2.5 氣相色譜和氣氣相色譜和氣質(zhì)聯(lián)

10、用法質(zhì)聯(lián)用法 氣相色譜和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法20世紀(jì)70年代，氣相色譜和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法開始用于霉菌毒素的檢測(cè)毒素等單端孢霉烯族毒素。常采用氣相色譜法檢測(cè)，食品中毒素的檢測(cè)，由于未知成分較多，一般采用與質(zhì)譜聯(lián)用，靈敏度也有較大的提高，檢測(cè)限更低。編輯ppt 高效液相色譜法較早用于霉菌毒素的檢測(cè) 常用的檢測(cè)器有熒光、紫外、二極管陣列、蒸發(fā)光散射等檢測(cè)器，目前使用最廣泛的檢測(cè)霉菌毒素的方法 涉及到畜牧化工和食品等各行業(yè)。2.5.6. 高效液相色譜高效液相色譜和液質(zhì)聯(lián)用和液質(zhì)聯(lián)用液相色譜編輯pptHPLC-MS具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、精確度和選擇性好等特點(diǎn)，能夠?qū)γ咕舅剡M(jìn)行準(zhǔn)確的定性分析，不但檢測(cè)霉菌毒素還可以檢測(cè)結(jié)構(gòu)類似的其他物質(zhì) ,但是儀器設(shè)備比較昂貴 檢測(cè)成本高 操作步驟復(fù)雜 因此目前國(guó)內(nèi)的普及率不高。2.5.6 高效液相色譜高效液相色譜和液質(zhì)聯(lián)用和液質(zhì)聯(lián)用編輯ppt4 參考文獻(xiàn)1 龔阿瓊，胡駿鵬.常見霉菌毒素的危害及檢測(cè)方法J,2014;2 施震地.食品中霉菌檢測(cè)方法探究J，2012；3 GB4789.15-2010 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵