課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

1、課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)自讀教材夯基礎(chǔ)1. 篩選菌株的思路(1) 自然界中目的菌株的篩選： 依據(jù)：根據(jù)它對(duì) 的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。 實(shí)例：PCR技術(shù)過程中用到的耐高溫的 Taq DNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出來的 Taq 細(xì)菌中提取出來的。(2) 實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選： 原理：人為提供有利于 生長(zhǎng)的條件(包括等)，同時(shí)的生長(zhǎng)。 方法：利用選擇培養(yǎng)基分離。a. 選擇培養(yǎng)基：允許 微生物生長(zhǎng)，同時(shí) 其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。b. 實(shí)例：選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基，以 作為唯一氮源，只有能合成 的微生物才能分解尿素。2 .統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目(1) 常用方法：法。 原理： 計(jì)數(shù)原

2、則：一般選擇菌落數(shù)在 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。 結(jié)果分析：統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目 是(2) 其他方法:1.閱讀教材P22第一段旁欄中的相關(guān)內(nèi)容，并思考回答下列問題。(1) 從物理性質(zhì)上劃分，此培養(yǎng)基屬于哪類培養(yǎng)基？從功能上劃分呢？(2) 在培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長(zhǎng)提供碳源和氮源的分別是什么物質(zhì)?(3) 該培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？如果具有，是如何進(jìn)行選擇的？2 閱讀教材P22中部楷體字部分，思考：哪位同學(xué)的結(jié)果更接近真實(shí)值？他們的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)嗎？如果需要，如何改進(jìn)?3閱讀教材P23上部的楷體字部分，請(qǐng)幫助 A同學(xué)設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，以排除其他同學(xué)所質(zhì) 疑的可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素。跟隨名

3、師解疑難1 選擇培養(yǎng)基的類型及作用(1) 在培養(yǎng)基中加入某種 。如加入青霉素可以分離出 加入可得到金黃色葡萄球菌。這里的加入指的是在培養(yǎng)基的培養(yǎng)成分的基礎(chǔ)上加入。(2) 改變培養(yǎng)基中的 。如培養(yǎng)基中 時(shí)，可以分離固氮微生物，因?yàn)榉枪痰⑸锊荒茉诖伺囵B(yǎng)基上生存。當(dāng)培養(yǎng)基的某種營(yíng)養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時(shí)，也具有分離效果。(3) 改變微生物的。如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)只能得到耐高溫的微生物。2 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目(1) 稀釋涂布平板法： 原理： 注意事項(xiàng)：a.設(shè)置重復(fù)組：同一稀釋度下， 作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。分析結(jié)果時(shí)，需考慮 ，結(jié)果不一致，意味著操作有誤，需要b .設(shè)置對(duì)照：目的

4、是 計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=。C :代表。V :代表。M : 。（2）顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：原理：此法利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血球計(jì)數(shù)板，在 下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。 缺點(diǎn)：。 方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個(gè)特定的面積為1 mm2和高為0.1 mm的計(jì)數(shù)室，在1 mm2的面積里又被劃分成 25個(gè)（或16個(gè)）中格，每個(gè)中格進(jìn)一 步劃分成16個(gè)（或25個(gè)）小格，但計(jì)數(shù)室都是由 400個(gè)小格組成的。如下圖所示：OU rwnL血坪計(jì)數(shù)扱正面血球計(jì)數(shù)板惻血計(jì)數(shù)敘0tinuiHr）蓋Ifc片 計(jì)算公式：每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)=實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及操作提示自讀教材夯基礎(chǔ)1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)流

5、程 土壤要求：富含Q冇機(jī)質(zhì),pH 接近地且潮濕 取祥部僮土距地義約3 b era的土壤層 稀釋原因：樣品的曙耗程度直 接影響平板上牛一隹的4菌落數(shù)冃 稲釋標(biāo)準(zhǔn)：選用一定稀釋范團(tuán) 的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)畀呆證獲得菌落 數(shù)在囚恥3G0之間，便于計(jì)數(shù) 培養(yǎng)鬲福的微生物.往往 需要不同的培養(yǎng)同溫度和培養(yǎng) U時(shí)間 觀察匸毎隔24 h統(tǒng)卄一撫菌落 數(shù)目，;ft后選取E數(shù)旦稔崖時(shí)的 記錄柞為結(jié)果豈菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)*取同一畫壘 釋度下的3個(gè)平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，求出 囲平均值*井根據(jù)所對(duì)應(yīng)的E)稀 登理計(jì)算出樣陸中細(xì)菌的數(shù)目2. 菌種鑒定原理：分解尿素的細(xì)菌合成的 將分解為，使培養(yǎng)基的 增強(qiáng)。(2) 方法：在以 為唯一氮源的

6、培養(yǎng)基中加入 指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素。1.為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度?2 當(dāng)?shù)谝淮螠y(cè)定時(shí)為什么要將稀釋的范圍放寬一些?3 .為什么要選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果?跟隨名師解疑難1.操作中的注意事項(xiàng)(1) : 。稱取土壤、將稱好的土樣倒入錐形瓶、稀釋土壤溶液，每一步都要在 旁進(jìn)行。(2) :如在培養(yǎng)皿上注明 、以及等。2 結(jié)果分析與評(píng)價(jià)H 容現(xiàn)象結(jié)論有無雜菌污染的判斷選擇培養(yǎng)基的篩選作用樣品的稀釋操作重復(fù)組的結(jié)果例1下表是某微生物培養(yǎng)基的配方。請(qǐng)分析回答下列問題:編號(hào)成分(NH 4)2SO4KH2PO4FeSO4CaCl2H2O含量0.4 g4.0

7、 g0.5 g0.5 g100 mL從培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分看，此培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)的微生物同化作用類型是。利用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物時(shí)，微生物所需要的碳源來自 。(2) 此表中含有的微生物的營(yíng)養(yǎng)成分包括 。(3) 若除去該培養(yǎng)基中的后再加入不含氮元素的有機(jī)物，則此培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物種類是。(4) 培養(yǎng)基若加入氨基酸，則它可充當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)成分是 。(5) 若要觀察微生物的菌落的特點(diǎn)，培養(yǎng)基中還應(yīng)添加的成分是 。歸納拓展卩幾種常見微生物的分離方法根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點(diǎn)，加入某種物質(zhì)或不加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目 的。常見微生物的分離舉例如下： 酵母菌、霉菌等真菌：用含 的培養(yǎng)基分離; 金黃色葡萄球菌

8、：用含 的培養(yǎng)基分離； 固氮微生物：用 的培養(yǎng)基分離； 自養(yǎng)型微生物：用含 的培養(yǎng)基分離； 厭氧型和兼性厭氧型微生物：用普通培養(yǎng)基在 下分離。微生物的分離與計(jì)數(shù)例2自然界中的微生物往往是混雜生長(zhǎng)的。人們?cè)谘芯课⑸飼r(shí)一般要將它們分離提純，然后進(jìn)行數(shù)量的測(cè)定。下面是對(duì)大腸桿菌進(jìn)行數(shù)量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答有關(guān)問題。實(shí)驗(yàn)步驟：(1) 制備稀釋倍數(shù)為10(4) 某同學(xué)在測(cè)定大腸桿菌的密度時(shí)發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落，能否肯定該 大腸桿菌的品系被污染了？為什么？隨堂基礎(chǔ)鞏固1在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng) 的培養(yǎng)基稱作()A 鑒別培養(yǎng)基B.加富培養(yǎng)基C

9、.選擇培養(yǎng)基 AB（3）示意圖A和B中，表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中 的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高的利用率。課時(shí)跟蹤檢測(cè)一、選擇題（每小題3分，共24分）1 下列關(guān)于土壤取樣的敘述錯(cuò)誤的是（）A 土壤取樣，應(yīng)選取肥沃、濕潤(rùn)的土壤B. 先鏟去表層土 3 cm左右，再取樣C. 取樣用的小鐵鏟和信封在使用前不用滅菌D .應(yīng)在火焰旁稱取土壤2 可以鑒定出分解尿素的細(xì)菌的方法是（）A 以尿素為唯一氮源

10、的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑B .以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入二苯胺試劑C.以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入蘇丹川試劑D 以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮脲試劑3 用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置的對(duì)照是（）、10 .某研究小組欲研究被石油污染過的土壤中細(xì)菌的數(shù)量，并從中篩選出能分解石油的細(xì)、10菌。下列操作錯(cuò)誤的是()、105、106的系列稀釋液。(2) 選用法接種樣品。(3) 適宜溫度下培養(yǎng)。 結(jié)果分析：(1) 測(cè)定的大腸桿菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確可信的是()A .一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是23B 兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是22和26,取

11、平均值24C.三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、5和52，取平均值26D .四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、30、24和25,取平均值25(2) 一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為 105的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為23.4，那么每毫升樣品中的菌株數(shù)是(涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.2 mL)。D.基(3) 用這種方法測(cè)定密度，實(shí)際活菌數(shù)量要比測(cè)得的數(shù)量 ,因?yàn)镃.TTTD.TTTA 稱取和稀釋被污染的土壤時(shí)應(yīng)在火焰旁B 用以石油為唯一碳源的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選C.分離菌種時(shí)可采用稀釋涂布平板法接種D 對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)宜采用平板劃線法接種4 （2014新課標(biāo)H ）為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定

12、了該河流水樣中的細(xì)菌 含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作?；卮鹣铝袉栴}：（1）該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌 后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為（2）該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí)，接種環(huán)通過滅菌，在第二次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是A 未接種的選擇培養(yǎng)基B 未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基C.接種了的選擇培養(yǎng)基D .接種了的牛肉膏蛋白胨

13、培養(yǎng)基4. 在土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)操作中，對(duì)使用的平板和試管要進(jìn)行標(biāo)記,以下說法正確的是（）A .對(duì)培養(yǎng)皿僅需注明培養(yǎng)基的種類即可B .一般在使用之后進(jìn)行標(biāo)記C.由于試管用得較多，只需對(duì)試管進(jìn)行標(biāo)記即可D .標(biāo)記的目的主要是為了防止實(shí)驗(yàn)中平板、試管等的混淆5. 下列關(guān)于 檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，錯(cuò)誤的是 （）A .用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B .取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1 mL ,分別涂布于各組平板上C.將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37 C恒溫培養(yǎng)2448 hD .利用稀釋涂布平板法只能分離微生物不能對(duì)微生物進(jìn)

14、行計(jì)數(shù)6 .通過選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生物群體中分離出所需的微生物。在缺乏氮源的培養(yǎng) 基上大部分微生物無法生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌的生長(zhǎng)；在培養(yǎng) 基中加入10%的酚可以抑制細(xì)菌和霉菌的生長(zhǎng)。禾U用上述方法能從混雜的微生物群體中分別 分離出（）大腸桿菌 霉菌放線菌固氮細(xì)菌A .C.B .D .只有7 .分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，對(duì)培養(yǎng)基的要求是（）加尿素不加尿素 加瓊脂不加瓊脂 加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸鹽不加硝酸鹽A .B .C.D .8.實(shí)驗(yàn)測(cè)定鏈霉素對(duì)3種細(xì)菌的抗生素效應(yīng)，用 3種細(xì)菌在事先準(zhǔn)備好的瓊脂平板上畫3條等長(zhǎng)的平行線（3條線均與圖中的鏈霉素帶接觸），將平板置

15、于37 C條件下恒溫培養(yǎng) 3天,結(jié)果如圖所示。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，以下敘述錯(cuò)誤的是（）A 鏈霉素能阻止結(jié)核菌的生長(zhǎng)B 鏈霉素對(duì)結(jié)核菌比對(duì)霍亂菌更有效C.鏈霉素對(duì)結(jié)核菌比對(duì)傷寒菌更有效D 鏈霉素可以用于治療傷寒病人二、非選擇題（共26分）圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的 mRNA部分序9. （12分）圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過程, 列。屮鑒別 培猱晶 歯種GITGAGAAAlJinTGGir10 0 細(xì)菌選肆I：壊桿-応培訴菇 培昴帚即1 （表示從握始密碼開貽毎起的堿施序號(hào)）乙（1）圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以 為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加 作指示劑，產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間后，其菌落周圍的指示劑將變成

16、色。（2）在5個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品溶液 0.1 mL , 培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過程采取的接種方法是 ,每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為 M08個(gè)；與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)較 。10. （14分）尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，不能直接被農(nóng)作物吸收，只有當(dāng)土壤中的微生物將尿素分解后才能被植物吸收利用。因此，對(duì)土壤中分解尿素的微生物進(jìn)行分離和鑒定具有重要意義?；卮鹣铝袉栴}：（1）對(duì)土壤中分解尿素的微生物的分離過程如下：第一步：土壤取樣。取土樣用的工具和盛土樣的信封等在使用前都需要 （填 消毒

17、”或滅菌”。第二步：樣品稀釋。通常分離不同種類的微生物要采用不同的稀釋度，原因是第三步：微生物的培養(yǎng)與觀察。將一定稀釋度的樣品接種在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上，并在適宜的條件下培養(yǎng)。分解尿素的微生物能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖，而則不能生長(zhǎng)繁殖。（2）若對(duì)土壤懸液進(jìn)行梯度稀釋時(shí)，未經(jīng)振蕩而直接取上層懸液進(jìn)行梯度稀釋，用稀釋倍數(shù)為104的樣液涂布到平板上進(jìn)行培養(yǎng)和計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)出的菌落數(shù)往往比正確操作統(tǒng)計(jì)出的菌落數(shù)。（3）若要對(duì)上述初步篩選出的分解尿素的微生物作進(jìn)一步的鑒定，需在如表所示培養(yǎng)基配方中添加的物質(zhì)是 、。若分離得到的是尿素分解菌，則培養(yǎng)基中 pH升高使酚紅指 示 劑 變?yōu)?紅 色， pH 升

18、高 的原 因 是成分KH 2PO4Na2HPO4MgSO 47H2O酚紅指示劑尿素蒸餾水培養(yǎng)基（含量）1.4 g2.1 g0.2 g0.01 g1.0 g1 000 mL11. 下圖是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過程，請(qǐng)據(jù)圖回答:逐級(jí)10g 細(xì)菌選擇簽別菌種土填樣品培養(yǎng)基 培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（1）無菌技術(shù)是微生物培養(yǎng)和鑒別的關(guān)鍵，在對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí)，應(yīng)采用的方法是。為檢測(cè)培養(yǎng)基滅菌是否徹底，應(yīng)進(jìn)行的操作是 。（2） 上圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以 作為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加 作指示劑，產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間后， 其菌落周圍的指示劑將變成 色。（3） 若要估算試管中菌種的數(shù)量，除了采用顯微鏡直

19、接計(jì)數(shù)的方法外，還可采用法進(jìn)行計(jì)數(shù)，該方法測(cè)得的值與實(shí)際值相比一般會(huì) （填 偏大” 偏小”或 相等”），其原因是。12. 為了探究土壤中的微生物對(duì)尿素是否有分解作用，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，并成功篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌（目的菌）。培養(yǎng)基成分及用量（g）如下表所示，實(shí)驗(yàn)步驟如下圖所示。請(qǐng)分 析回答問題。KH 2PO4Na2HPO4MgSO4 7H2O葡萄糖尿素瓊脂1.42.10.211015將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mLI 芒0 OD-輜桿倡數(shù)為(i)在脲酶作用下尿素分解的反應(yīng)式是(2)培養(yǎng)基中加入尿素的目的是篩選 ，這種培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基。，實(shí)驗(yàn) 目的菌”生長(zhǎng)所需的氮源和碳源分別來自

20、培養(yǎng)基中的 和中需要振蕩培養(yǎng)的目的是 (4) 轉(zhuǎn)入固體培養(yǎng)基時(shí)，常采用 接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。(5) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行 處理后，才能倒掉。13.某生物興趣小組想對(duì)土壤中能分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離，并統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中的活菌數(shù)目，確定了培養(yǎng)基配方(如下表)。將配方中各種物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到I 000 mL ,再經(jīng)高溫滅菌，制成固體培養(yǎng)基以備用。KH 2PO4Na2HPO4MgSO4 7H2O蛋白胨葡萄糖尿素瓊脂11.4g2.1g0.2g1.0g10.0g1.0g15.0g(1 )為保持干燥，培養(yǎng)皿用 法滅菌；待培養(yǎng)基冷卻到 C (填“ 20”“ 30”或“400左右時(shí)

21、，在酒精燈附近倒平板；待平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置，可以防止，防止造成污染。(2)根據(jù)培養(yǎng)基的成分判斷，該同學(xué)不能分離出土壤中分解尿素的細(xì)菌，原因是(3) 該同學(xué)采用稀釋涂布平板法檢測(cè)樣液中細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是 ;然后，將I mL樣液稀釋I00倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0. 1 mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為 39、38和37,據(jù)此可得出每升樣液中的活菌數(shù)為 。(4) 若該同學(xué)采用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法測(cè)量細(xì)菌數(shù)量，左下圖是一塊血細(xì)胞計(jì)數(shù)板正面示意圖，其上有個(gè)計(jì)數(shù)室。右下圖是計(jì)數(shù)室中一個(gè)中格的細(xì)菌分布示意

22、圖，該中格內(nèi)細(xì)菌數(shù)量應(yīng)計(jì)為。0*1 mm* V*JXR-K-25課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)答案生存環(huán)境目的菌株?duì)I養(yǎng)、溫度、pH抑制或阻止其他微生物特定阻止或抑制尿素脲酶 稀釋涂布平板原理略 30300低 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)提示：固體培養(yǎng)基，因?yàn)榧尤肓四虅┉傊?。從功能上看屬于選擇培養(yǎng)基。提示：碳源主要是葡萄糖，氮源是尿素。提示：該培養(yǎng)基對(duì)微生物有選擇作用。該培養(yǎng)基以尿素為唯一氮源，只允許能以尿素作為氮源的微生物生長(zhǎng)。提示：第一位同學(xué)只涂布了1個(gè)平板，沒有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說服力。第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問題，涂布了3

23、個(gè)平板，但是，其中 1個(gè)平板的計(jì)數(shù)值結(jié)果與另 2個(gè)相差太遠(yuǎn)，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來求平均值，這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)都需要改進(jìn)。在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少3個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的 結(jié)果是否一致。結(jié)果不一致，意味著操作有誤，需要重新實(shí)驗(yàn)?？赡茉?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證結(jié)論所取土樣不同其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土樣進(jìn) 行實(shí)驗(yàn)若結(jié)果與A冋學(xué)的一致，則說明A無誤； 若結(jié)果與A同學(xué)的不一致，則說明A同 學(xué)操作失誤或培養(yǎng)基配制有問題培養(yǎng)基污染或操作失誤將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣 的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作空白對(duì)照

24、若有菌落出現(xiàn)，則說明培養(yǎng)基污染；若 無菌落出現(xiàn)，則說明未被污染化學(xué)物質(zhì)酵母菌和霉菌高濃度的食鹽營(yíng)養(yǎng)成分 缺乏氮源培養(yǎng)條件當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。至少涂布3個(gè)平板重復(fù)組的結(jié)果是否一致重新實(shí)驗(yàn)排除實(shí)驗(yàn)中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)的可信度（C說/） WI某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積代表稀釋倍數(shù)顯微鏡不能區(qū)分細(xì)菌的死活每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)=每小格平均細(xì)菌數(shù)400 X10 000稀釋倍數(shù)脲酶尿素氨堿性尿素酚紅變紅 提示：土壤中各類微 生物的數(shù)量不同，因此，為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離，同時(shí) 還應(yīng)當(dāng)有針對(duì)性地提供選擇培養(yǎng)的條件。提示：為確保能從中選擇出菌落數(shù)在30300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。提示：防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。無菌操作鐵鏟和信封都要滅菌酒精燈的火焰做好標(biāo)