肺炎支原體及耐藥位點核酸檢測

1、精選ppt肺炎支原體及耐藥位點核酸檢測肺炎支原體及耐藥位點核酸檢測精選ppt1流行病學(xué)分析2肺炎支原體耐藥現(xiàn)狀3 大環(huán)內(nèi)酯抗生素耐藥機(jī)制目錄CONTENT5肺炎支原體耐藥與臨床3 體內(nèi)誘導(dǎo)耐藥株精選ppt精選pptPart 141肺炎支原體及耐藥突變檢測肺炎支原體及耐藥突變檢測項目簡介項目簡介精選ppt p1302精選ppt兒童肺炎支原體肺炎 社區(qū)獲得性肺炎社區(qū)獲得性肺炎(Community acquired pneumonia,CAP)肺炎支原體肺炎肺炎支原體肺炎 (Mycoplasma pneumoniae,MP)MP 占CAP的1040%。支原體支原體：是介于細(xì)菌與病毒之間的微生物。已發(fā)

2、現(xiàn)約60種，14種可致病.致呼吸道感染：肺炎支原體最常見，沙眼衣原體次之。精選ppt實驗室診斷實驗室診斷：病原學(xué)檢查病原學(xué)檢查包括包括：培養(yǎng) 血清學(xué)（特異性：Ag、Ab；非特異性）、 核酸診斷技術(shù)（PCR ）分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)： （1）咽喉、鼻咽、胸水或體液中分離培養(yǎng)出MP是診斷MP感染的可靠標(biāo)準(zhǔn)。 （2）需1014天或更長，早期診斷意義不大，用于回顧性診斷和研究。 （3）快速培養(yǎng)敏感性和特異性均不高，價值有限。n兒童肺炎支原體肺炎診治專家共識. 中華實用兒科臨床雜志.2015，30（17）：1304精選ppt病原學(xué)檢查：血清學(xué)病原學(xué)檢查：血清學(xué)特異性診斷特異性診斷：檢測抗原和抗體 1. 1.明

3、膠顆粒凝集試驗明膠顆粒凝集試驗（PA）：檢測IgM和 IgG混合抗體。 單次抗體滴度1:160，診斷近期感染參考價值。 恢復(fù)期和急性期雙份抗體滴度：4倍/4倍以上增高/減低時，確診價值 2.2.酶聯(lián)免疫吸附試驗酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：可分別檢測IgM和IgG， 單次MP-IgM陽性：對診斷MP的近期感染有價值。 恢復(fù)期和急性期IgM或IgG抗體滴度呈4倍或者4倍以上增高或減低時，可以確診為MP感染。 非特異性診斷非特異性診斷：冷凝集試驗冷凝集試驗（CA），參考價值。 MP感染時陽性率僅為50%左右； 腺病毒、巨細(xì)胞病毒、EB病毒等感染也可誘導(dǎo)血清冷凝集素的產(chǎn)生。n兒童社區(qū)獲得性肺炎管理

4、指南. 中華兒科雜志.2013，51（10）：745n成人肺炎支原體肺炎診治專家共識，中華結(jié)核和呼吸雜志，2010,33（9）：643精選ppt病原學(xué)檢查：血清學(xué)病原學(xué)檢查：血清學(xué)MP-IgM：(1) 病程病程：感染后早期抗體，一般感染后45天出現(xiàn)，檢測太早可假陰性。持續(xù) 13個月甚至更長；(2)年齡年齡： 嬰幼兒免疫功能不完善，產(chǎn)生抗體能力低，可出現(xiàn)假陰性或者低滴度的抗體，評價結(jié)果時需考慮患兒的病程及年齡。(3) 廠家及方法廠家及方法：試劑盒生產(chǎn)廠家和檢測方法不同，判斷的陽性結(jié)果值有所差異。精選ppt病原學(xué)診斷：核酸診斷技術(shù)方法：RT-PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增（LAMP）技術(shù)、RNA恒溫擴(kuò)增實

5、時熒光檢測（SAT）技術(shù)等。優(yōu)點：（1）特異性強、敏感、快速，可用于早期診斷。（2）核酸擴(kuò)增技術(shù)不受年齡、抗體產(chǎn)生能力、病程早晚及用藥因素干擾，感染早期檢測率最高。注意：與感染后攜帶狀態(tài)鑒別。 有研究顯示，MP感染后1個月，其DNA的檢出率仍然高達(dá)50%， MP-DNA持續(xù)攜帶的中位數(shù)時間為7周，個別達(dá)7個月之久。聯(lián)合檢測：血清學(xué)和核酸檢測聯(lián)合，提高檢出率。精選ppt小結(jié)無論是分離培養(yǎng)， 血清學(xué)檢測， 還是分子生物學(xué)檢測， 都存在各自的局限性， 目前學(xué)者多推薦采用 2 種或 2 種以上診斷方法相結(jié)合，以提高診斷的準(zhǔn)確性。針對不同的診斷方法，具體分析實驗中出現(xiàn)的結(jié)果不一致現(xiàn)象，適當(dāng)調(diào)整試驗方法，

6、 綜合考慮臨床、 經(jīng)濟(jì)性以及可操作性等問題，探索并制定出更適合于臨床的快速、 準(zhǔn)確、 經(jīng)濟(jì)的診斷方法， 必將推動 MP 感 染 臨 床 診 斷 和 治 療 的 進(jìn) 一 步 發(fā) 展 。 精選ppt治療肺炎支原體肺炎常用抗菌藥物： 大環(huán)內(nèi)酯類 氟喹諾酮類 四環(huán)素類抗感染治療的療程通常需要10-14天，部分難治性病例的療程可延長至3周左右用藥治療精選ppt大環(huán)內(nèi)酯類大環(huán)內(nèi)酯類：首選機(jī)理機(jī)理：與MP核糖體的特殊靶位的蛋白質(zhì)結(jié)合，阻斷轉(zhuǎn)肽酶作用，感染mRNA移位，選擇性抑制MP蛋白質(zhì)合成。種類種類： 第一代：紅霉素 第二代：阿奇霉素、克拉霉素、羅紅霉素； 第三代酮內(nèi)酯類：泰利霉素（telithromyc

7、in）,塞紅霉素（cethromycin)用于MP治療的主要是1、2代，三代尚未用于兒童。兒童社區(qū)獲得性肺炎管理指南（2013修訂），中華兒科雜志，2013,51（10）：745精選ppt大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥形勢嚴(yán)峻！大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥形勢嚴(yán)峻！自2001年日本首次分離到對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥的MP后，世界多 國相繼報道出現(xiàn)MP耐藥株，日本及中國MP耐藥率明顯高于其他國家。日本MP對大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物的耐藥率達(dá)到40%；美國MP耐藥率大約8.3%；多數(shù)歐洲國家，耐藥率低于10%；在中國，有報道住院兒童MP耐藥率80%，成人耐藥率約為69%。精選ppt我國肺炎支原體對大環(huán)內(nèi)酯藥物耐藥嚴(yán)重 我國

8、北京、上海兩家醫(yī)院，兒童呼吸道感染患者中肺炎支原體對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的耐藥率已經(jīng)超過了80%Diagn Microb Infect Dis，2010(in press)/AAC 2009; 53: 21582159 / AAC 2008;52: 348350 Clin Microbiol Infect. 2009 Sep 17. Epub ahead of print /J Clin Microbiol.2007; 45:35343539 精選ppt肺炎支原體對于大環(huán)內(nèi)酯類的耐藥率高達(dá)69% 356例成人患者中共分離到67株肺炎支原體： CAP患者肺炎支原體的分離率顯著高于急性上呼吸道感染患者

9、 69%(46株) 肺炎支原體對于紅霉素耐藥(MIC值32 g/mL)Clin Infect Dis 2010;51:189194 精選ppt大環(huán)內(nèi)脂類抗生素耐藥機(jī)制大環(huán)內(nèi)脂類抗生素耐藥機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，MP的耐藥機(jī)制與大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的的結(jié)合位點有關(guān)，其中在23S rRNA上的2063和2064兩個位點的點突變，是引起 MP對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥的主要原因。研究顯示，發(fā)生耐藥位點（2063位點和2064位點）突變的MP感染患者與未發(fā)生突變的MP感染患者相比，不僅發(fā)熱時間、住院時間和大環(huán)內(nèi)酯類藥物的起效時間更長，且肺外并發(fā)癥的發(fā)生率更高，影像學(xué)結(jié)果顯示病情更嚴(yán)重。耐藥突變給臨床治療帶來眾多問題，如

10、患兒的臨床癥狀加重、肺外并發(fā)癥增多、住院時間延長、治療經(jīng)費增高等。精選ppt非大環(huán)內(nèi)酯類：四環(huán)素類四環(huán)素類 包括：包括：多西環(huán)素、米諾環(huán)素/美滿霉素、替加環(huán)素、 作用作用：對MP強大的抑菌活性。 機(jī)理機(jī)理：作用于MP核糖體30S亞基，抑制蛋白質(zhì)合成的肽鏈延長。 副作用副作用：可能使牙齒發(fā)黃或者牙釉質(zhì)發(fā)育不良等，應(yīng)用于8歲以上患兒。精選ppt非大環(huán)內(nèi)酯類：喹諾酮類喹諾酮類機(jī)理機(jī)理：與MP的DNA 解旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶發(fā)生交替作用，干擾和抑制蛋白質(zhì)合成，對MP有抑制作用。品種品種：呼吸喹諾酮（左氧氟沙星、莫西沙星、吉米沙星）抗MP活性及組織穿透性、吞噬細(xì)胞內(nèi)濃度均良好。環(huán)丙沙星抗MP活性好，但組織穿

11、透性差；諾氟沙星、伊諾沙星抗MP活性差。副作用副作用:可能對骨骼產(chǎn)生不良影響，18歲以下兒童使用受到限制。目前在國內(nèi)外尚未發(fā)現(xiàn)對喹諾酮類、四環(huán)素類耐藥的肺炎支原體菌株報道。成人肺炎支原體肺炎診治專家共識，中華結(jié)核和呼吸雜志，2010,33（9）：643精選ppt耐藥檢測方法體外藥敏方法集患兒的咽拭子標(biāo)本，接種于MP培養(yǎng)基中，混勻后置于37 二氧化碳孵箱中培養(yǎng)，對培養(yǎng)陽性的MP菌株進(jìn)行體外藥敏試驗，測定其紅霉素的最小抑菌濃度(MIC)，從而判斷是否為耐藥株。常規(guī)體外藥敏試驗方法是以MP培養(yǎng)為中心，但由于MP對營養(yǎng)條件要求高，培養(yǎng)所需時間較長(至少20天或更長時間)，分離陽性率低，故此方法不能及時

12、的指導(dǎo)臨床治療，僅能作為回顧性的診斷和研究。分子藥敏試驗直接提取所采集咽拭子標(biāo)本的DNA，運用PCR方法擴(kuò)增與大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥有關(guān)的靶位基因，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA測序，測得序列與NCBI登錄的MP標(biāo)準(zhǔn)株M129的相應(yīng)基因序列作比對，檢測耐藥基因的變化。此方法能直接檢測臨床標(biāo)本中的MP及其耐藥性，具有特異性強、敏感性高、快速等優(yōu)點，應(yīng)用在分離難度大、耗時長的MP更有意義，有非常廣泛的應(yīng)用前景。實時PCR檢測方法法國Peuchant O等應(yīng)用實時PCR檢測MP的耐藥性，制定了一種雙重實時PCR檢測與大環(huán)內(nèi)酯類耐藥有關(guān)的23S rRNA的6種突變和一種單一實時PCR鑒定A2063G突變。這兩種方法

13、依賴于熒光共振能量轉(zhuǎn)移結(jié)合熔解曲線分析，、并直接適用于檢測呼吸道I臨床標(biāo)本。但兩種實時PCR方法的局限性在于，對每種探針來講，檢測低限均為10拷貝ml。該方法具有特異性強、準(zhǔn)確、快速等優(yōu)點，但由于對實驗室條件和技術(shù)人員要求較高、經(jīng)濟(jì)耗費高等原因，尚不適宜廣泛應(yīng)用精選ppt精選ppt檢測檢測MP-DNA及耐藥突變位點意義及耐藥突變位點意義m采用熒光PCR技術(shù)，可以一步檢測，同時解決兩大問題，明確病原體的同時確定是否耐藥，即時給出用藥指導(dǎo)。意義：m1、直接檢測病原體，早期、快速、特異診斷；有利于臨床癥狀分析及病情監(jiān)測； 2、對患者進(jìn)行MP耐藥基因突變檢測，不僅可以輔助臨床醫(yī)生及時診斷和監(jiān)測病情，同

14、時有利于指導(dǎo)醫(yī)生合理用藥，避免濫用抗生素 ， 3、有利于選擇合理治療方案，針對性治療；有利于預(yù)判病程發(fā)展，向病人及家屬解釋病程情況 精選ppt耐藥MP感染的治療抗生素治療對于耐藥MP感染來說，目前可應(yīng)用為紅霉素、阿奇霉素序貫療法，即紅霉素靜滴37天，口服阿奇霉素3天，停4天，7天為一個療程，根據(jù)病情按此方案重復(fù)24次，此治療方案不良反應(yīng)小、依從性好，效果滿意。對于重癥病例也可聯(lián)合使用利福平和大環(huán)內(nèi)酯類藥物，兩者對MP有著協(xié)同的抑蔚作用。如患兒年齡大于8歲，使用大環(huán)內(nèi)酯類藥物治療效果不滿意時，可使用四環(huán)素類藥物如米諾環(huán)素，因其作用機(jī)制不同，故對耐藥MP有一定療效。精選ppt耐藥MP感染的治療中醫(yī)

15、藥治療中醫(yī)認(rèn)為肺炎屬于溫病范疇，肺炎的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸與毒無不相關(guān)，因此治療肺炎的首要措施是祛邪解毒；同時肺為多氣多血之臟，易出現(xiàn)氣郁血瘀，可加用活血化瘀藥。故肺炎的治療主要以清熱解毒及活血化瘀為主。中藥的作用機(jī)制有別于大環(huán)內(nèi)酯類抗牛素，而且單味藥本身含多種成分并具有多種藥理作用，雖不十分清楚，但I(xiàn)臨床上已取得良好的療效，故挖掘我同中醫(yī)藥偉大寶庫，探索有效的中藥，也是耐藥MP肺炎防治工作的當(dāng)務(wù)之急。精選ppt耐藥MP感染的治療免疫治療目前研究認(rèn)為MP肺炎是由于病原體本身及其激發(fā)的免疫反應(yīng)共同所致。對耐藥MP感染且具有多種肺外并發(fā)癥的重癥病例，及時、早期、短程應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素是必要的，這對阻止炎性反應(yīng)的發(fā)展、減輕感染中毒癥狀、預(yù)防和控制哮喘及其他并發(fā)癥等有重要臨床價值，可縮短治療療程和減少后遺癥。其應(yīng)用指征為：急性期病情嚴(yán)鶯的MP感染；肺部病變遷延而出現(xiàn)肺不張、肺間質(zhì)纖維化、支氣管擴(kuò)張及肺外并發(fā)癥者。對于有明顯免疫功能缺陷、藥物性