肺炎支原體及耐藥位點(diǎn)核酸檢測(cè)

1、精選ppt肺炎支原體及耐藥位點(diǎn)核酸檢測(cè)肺炎支原體及耐藥位點(diǎn)核酸檢測(cè)精選ppt1流行病學(xué)分析2肺炎支原體耐藥現(xiàn)狀3 大環(huán)內(nèi)酯抗生素耐藥機(jī)制目錄CONTENT5肺炎支原體耐藥與臨床3 體內(nèi)誘導(dǎo)耐藥株精選ppt精選pptPart 141肺炎支原體及耐藥突變檢測(cè)肺炎支原體及耐藥突變檢測(cè)項(xiàng)目簡(jiǎn)介項(xiàng)目簡(jiǎn)介精選ppt p1302精選ppt兒童肺炎支原體肺炎 社區(qū)獲得性肺炎社區(qū)獲得性肺炎(Community acquired pneumonia,CAP)肺炎支原體肺炎肺炎支原體肺炎 (Mycoplasma pneumoniae,MP)MP 占CAP的1040%。支原體支原體：是介于細(xì)菌與病毒之間的微生物。已發(fā)

2、現(xiàn)約60種，14種可致病.致呼吸道感染：肺炎支原體最常見，沙眼衣原體次之。精選ppt實(shí)驗(yàn)室診斷實(shí)驗(yàn)室診斷：病原學(xué)檢查病原學(xué)檢查包括包括：培養(yǎng) 血清學(xué)（特異性：Ag、Ab；非特異性）、 核酸診斷技術(shù)（PCR ）分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)： （1）咽喉、鼻咽、胸水或體液中分離培養(yǎng)出MP是診斷MP感染的可靠標(biāo)準(zhǔn)。 （2）需1014天或更長(zhǎng)，早期診斷意義不大，用于回顧性診斷和研究。 （3）快速培養(yǎng)敏感性和特異性均不高，價(jià)值有限。n兒童肺炎支原體肺炎診治專家共識(shí). 中華實(shí)用兒科臨床雜志.2015，30（17）：1304精選ppt病原學(xué)檢查：血清學(xué)病原學(xué)檢查：血清學(xué)特異性診斷特異性診斷：檢測(cè)抗原和抗體 1. 1.明

3、膠顆粒凝集試驗(yàn)明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）：檢測(cè)IgM和 IgG混合抗體。 單次抗體滴度1:160，診斷近期感染參考價(jià)值。 恢復(fù)期和急性期雙份抗體滴度：4倍/4倍以上增高/減低時(shí)，確診價(jià)值 2.2.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：可分別檢測(cè)IgM和IgG， 單次MP-IgM陽(yáng)性：對(duì)診斷MP的近期感染有價(jià)值。 恢復(fù)期和急性期IgM或IgG抗體滴度呈4倍或者4倍以上增高或減低時(shí)，可以確診為MP感染。 非特異性診斷非特異性診斷：冷凝集試驗(yàn)冷凝集試驗(yàn)（CA），參考價(jià)值。 MP感染時(shí)陽(yáng)性率僅為50%左右； 腺病毒、巨細(xì)胞病毒、EB病毒等感染也可誘導(dǎo)血清冷凝集素的產(chǎn)生。n兒童社區(qū)獲得性肺炎管理

4、指南. 中華兒科雜志.2013，51（10）：745n成人肺炎支原體肺炎診治專家共識(shí)，中華結(jié)核和呼吸雜志，2010,33（9）：643精選ppt病原學(xué)檢查：血清學(xué)病原學(xué)檢查：血清學(xué)MP-IgM：(1) 病程病程：感染后早期抗體，一般感染后45天出現(xiàn)，檢測(cè)太早可假陰性。持續(xù) 13個(gè)月甚至更長(zhǎng)；(2)年齡年齡： 嬰幼兒免疫功能不完善，產(chǎn)生抗體能力低，可出現(xiàn)假陰性或者低滴度的抗體，評(píng)價(jià)結(jié)果時(shí)需考慮患兒的病程及年齡。(3) 廠家及方法廠家及方法：試劑盒生產(chǎn)廠家和檢測(cè)方法不同，判斷的陽(yáng)性結(jié)果值有所差異。精選ppt病原學(xué)診斷：核酸診斷技術(shù)方法：RT-PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）技術(shù)、RNA恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)

5、時(shí)熒光檢測(cè)（SAT）技術(shù)等。優(yōu)點(diǎn)：（1）特異性強(qiáng)、敏感、快速，可用于早期診斷。（2）核酸擴(kuò)增技術(shù)不受年齡、抗體產(chǎn)生能力、病程早晚及用藥因素干擾，感染早期檢測(cè)率最高。注意：與感染后攜帶狀態(tài)鑒別。 有研究顯示，MP感染后1個(gè)月，其DNA的檢出率仍然高達(dá)50%， MP-DNA持續(xù)攜帶的中位數(shù)時(shí)間為7周，個(gè)別達(dá)7個(gè)月之久。聯(lián)合檢測(cè)：血清學(xué)和核酸檢測(cè)聯(lián)合，提高檢出率。精選ppt小結(jié)無論是分離培養(yǎng)， 血清學(xué)檢測(cè)， 還是分子生物學(xué)檢測(cè)， 都存在各自的局限性， 目前學(xué)者多推薦采用 2 種或 2 種以上診斷方法相結(jié)合，以提高診斷的準(zhǔn)確性。針對(duì)不同的診斷方法，具體分析實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的結(jié)果不一致現(xiàn)象，適當(dāng)調(diào)整試驗(yàn)方法，

6、 綜合考慮臨床、 經(jīng)濟(jì)性以及可操作性等問題，探索并制定出更適合于臨床的快速、 準(zhǔn)確、 經(jīng)濟(jì)的診斷方法， 必將推動(dòng) MP 感 染 臨 床 診 斷 和 治 療 的 進(jìn) 一 步 發(fā) 展 。 精選ppt治療肺炎支原體肺炎常用抗菌藥物： 大環(huán)內(nèi)酯類 氟喹諾酮類 四環(huán)素類抗感染治療的療程通常需要10-14天，部分難治性病例的療程可延長(zhǎng)至3周左右用藥治療精選ppt大環(huán)內(nèi)酯類大環(huán)內(nèi)酯類：首選機(jī)理機(jī)理：與MP核糖體的特殊靶位的蛋白質(zhì)結(jié)合，阻斷轉(zhuǎn)肽酶作用，感染mRNA移位，選擇性抑制MP蛋白質(zhì)合成。種類種類： 第一代：紅霉素 第二代：阿奇霉素、克拉霉素、羅紅霉素； 第三代酮內(nèi)酯類：泰利霉素（telithromyc

7、in）,塞紅霉素（cethromycin)用于MP治療的主要是1、2代，三代尚未用于兒童。兒童社區(qū)獲得性肺炎管理指南（2013修訂），中華兒科雜志，2013,51（10）：745精選ppt大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥形勢(shì)嚴(yán)峻！大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥形勢(shì)嚴(yán)峻！自2001年日本首次分離到對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥的MP后，世界多 國(guó)相繼報(bào)道出現(xiàn)MP耐藥株，日本及中國(guó)MP耐藥率明顯高于其他國(guó)家。日本MP對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物的耐藥率達(dá)到40%；美國(guó)MP耐藥率大約8.3%；多數(shù)歐洲國(guó)家，耐藥率低于10%；在中國(guó)，有報(bào)道住院兒童MP耐藥率80%，成人耐藥率約為69%。精選ppt我國(guó)肺炎支原體對(duì)大環(huán)內(nèi)酯藥物耐藥嚴(yán)重 我國(guó)

8、北京、上海兩家醫(yī)院，兒童呼吸道感染患者中肺炎支原體對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的耐藥率已經(jīng)超過了80%Diagn Microb Infect Dis，2010(in press)/AAC 2009; 53: 21582159 / AAC 2008;52: 348350 Clin Microbiol Infect. 2009 Sep 17. Epub ahead of print /J Clin Microbiol.2007; 45:35343539 精選ppt肺炎支原體對(duì)于大環(huán)內(nèi)酯類的耐藥率高達(dá)69% 356例成人患者中共分離到67株肺炎支原體： CAP患者肺炎支原體的分離率顯著高于急性上呼吸道感染患者

9、 69%(46株) 肺炎支原體對(duì)于紅霉素耐藥(MIC值32 g/mL)Clin Infect Dis 2010;51:189194 精選ppt大環(huán)內(nèi)脂類抗生素耐藥機(jī)制大環(huán)內(nèi)脂類抗生素耐藥機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，MP的耐藥機(jī)制與大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的的結(jié)合位點(diǎn)有關(guān)，其中在23S rRNA上的2063和2064兩個(gè)位點(diǎn)的點(diǎn)突變，是引起 MP對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥的主要原因。研究顯示，發(fā)生耐藥位點(diǎn)（2063位點(diǎn)和2064位點(diǎn)）突變的MP感染患者與未發(fā)生突變的MP感染患者相比，不僅發(fā)熱時(shí)間、住院時(shí)間和大環(huán)內(nèi)酯類藥物的起效時(shí)間更長(zhǎng)，且肺外并發(fā)癥的發(fā)生率更高，影像學(xué)結(jié)果顯示病情更嚴(yán)重。耐藥突變給臨床治療帶來眾多問題，如

10、患兒的臨床癥狀加重、肺外并發(fā)癥增多、住院時(shí)間延長(zhǎng)、治療經(jīng)費(fèi)增高等。精選ppt非大環(huán)內(nèi)酯類：四環(huán)素類四環(huán)素類 包括：包括：多西環(huán)素、米諾環(huán)素/美滿霉素、替加環(huán)素、 作用作用：對(duì)MP強(qiáng)大的抑菌活性。 機(jī)理機(jī)理：作用于MP核糖體30S亞基，抑制蛋白質(zhì)合成的肽鏈延長(zhǎng)。 副作用副作用：可能使牙齒發(fā)黃或者牙釉質(zhì)發(fā)育不良等，應(yīng)用于8歲以上患兒。精選ppt非大環(huán)內(nèi)酯類：喹諾酮類喹諾酮類機(jī)理機(jī)理：與MP的DNA 解旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶發(fā)生交替作用，干擾和抑制蛋白質(zhì)合成，對(duì)MP有抑制作用。品種品種：呼吸喹諾酮（左氧氟沙星、莫西沙星、吉米沙星）抗MP活性及組織穿透性、吞噬細(xì)胞內(nèi)濃度均良好。環(huán)丙沙星抗MP活性好，但組織穿

11、透性差；諾氟沙星、伊諾沙星抗MP活性差。副作用副作用:可能對(duì)骨骼產(chǎn)生不良影響，18歲以下兒童使用受到限制。目前在國(guó)內(nèi)外尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)喹諾酮類、四環(huán)素類耐藥的肺炎支原體菌株報(bào)道。成人肺炎支原體肺炎診治專家共識(shí)，中華結(jié)核和呼吸雜志，2010,33（9）：643精選ppt耐藥檢測(cè)方法體外藥敏方法集患兒的咽拭子標(biāo)本，接種于MP培養(yǎng)基中，混勻后置于37 二氧化碳孵箱中培養(yǎng)，對(duì)培養(yǎng)陽(yáng)性的MP菌株進(jìn)行體外藥敏試驗(yàn)，測(cè)定其紅霉素的最小抑菌濃度(MIC)，從而判斷是否為耐藥株。常規(guī)體外藥敏試驗(yàn)方法是以MP培養(yǎng)為中心，但由于MP對(duì)營(yíng)養(yǎng)條件要求高，培養(yǎng)所需時(shí)間較長(zhǎng)(至少20天或更長(zhǎng)時(shí)間)，分離陽(yáng)性率低，故此方法不能及時(shí)

12、的指導(dǎo)臨床治療，僅能作為回顧性的診斷和研究。分子藥敏試驗(yàn)直接提取所采集咽拭子標(biāo)本的DNA，運(yùn)用PCR方法擴(kuò)增與大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥有關(guān)的靶位基因，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序，測(cè)得序列與NCBI登錄的MP標(biāo)準(zhǔn)株M129的相應(yīng)基因序列作比對(duì)，檢測(cè)耐藥基因的變化。此方法能直接檢測(cè)臨床標(biāo)本中的MP及其耐藥性，具有特異性強(qiáng)、敏感性高、快速等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用在分離難度大、耗時(shí)長(zhǎng)的MP更有意義，有非常廣泛的應(yīng)用前景。實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)方法法國(guó)Peuchant O等應(yīng)用實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)MP的耐藥性，制定了一種雙重實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)與大環(huán)內(nèi)酯類耐藥有關(guān)的23S rRNA的6種突變和一種單一實(shí)時(shí)PCR鑒定A2063G突變。這兩種方法

13、依賴于熒光共振能量轉(zhuǎn)移結(jié)合熔解曲線分析，、并直接適用于檢測(cè)呼吸道I臨床標(biāo)本。但兩種實(shí)時(shí)PCR方法的局限性在于，對(duì)每種探針來講，檢測(cè)低限均為10拷貝ml。該方法具有特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確、快速等優(yōu)點(diǎn)，但由于對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件和技術(shù)人員要求較高、經(jīng)濟(jì)耗費(fèi)高等原因，尚不適宜廣泛應(yīng)用精選ppt精選ppt檢測(cè)檢測(cè)MP-DNA及耐藥突變位點(diǎn)意義及耐藥突變位點(diǎn)意義m采用熒光PCR技術(shù)，可以一步檢測(cè)，同時(shí)解決兩大問題，明確病原體的同時(shí)確定是否耐藥，即時(shí)給出用藥指導(dǎo)。意義：m1、直接檢測(cè)病原體，早期、快速、特異診斷；有利于臨床癥狀分析及病情監(jiān)測(cè)； 2、對(duì)患者進(jìn)行MP耐藥基因突變檢測(cè)，不僅可以輔助臨床醫(yī)生及時(shí)診斷和監(jiān)測(cè)病情，同

14、時(shí)有利于指導(dǎo)醫(yī)生合理用藥，避免濫用抗生素 ， 3、有利于選擇合理治療方案，針對(duì)性治療；有利于預(yù)判病程發(fā)展，向病人及家屬解釋病程情況 精選ppt耐藥MP感染的治療抗生素治療對(duì)于耐藥MP感染來說，目前可應(yīng)用為紅霉素、阿奇霉素序貫療法，即紅霉素靜滴37天，口服阿奇霉素3天，停4天，7天為一個(gè)療程，根據(jù)病情按此方案重復(fù)24次，此治療方案不良反應(yīng)小、依從性好，效果滿意。對(duì)于重癥病例也可聯(lián)合使用利福平和大環(huán)內(nèi)酯類藥物，兩者對(duì)MP有著協(xié)同的抑蔚作用。如患兒年齡大于8歲，使用大環(huán)內(nèi)酯類藥物治療效果不滿意時(shí)，可使用四環(huán)素類藥物如米諾環(huán)素，因其作用機(jī)制不同，故對(duì)耐藥MP有一定療效。精選ppt耐藥MP感染的治療中醫(yī)

15、藥治療中醫(yī)認(rèn)為肺炎屬于溫病范疇，肺炎的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸與毒無不相關(guān)，因此治療肺炎的首要措施是祛邪解毒；同時(shí)肺為多氣多血之臟，易出現(xiàn)氣郁血瘀，可加用活血化瘀藥。故肺炎的治療主要以清熱解毒及活血化瘀為主。中藥的作用機(jī)制有別于大環(huán)內(nèi)酯類抗牛素，而且單味藥本身含多種成分并具有多種藥理作用，雖不十分清楚，但I(xiàn)臨床上已取得良好的療效，故挖掘我同中醫(yī)藥偉大寶庫(kù)，探索有效的中藥，也是耐藥MP肺炎防治工作的當(dāng)務(wù)之急。精選ppt耐藥MP感染的治療免疫治療目前研究認(rèn)為MP肺炎是由于病原體本身及其激發(fā)的免疫反應(yīng)共同所致。對(duì)耐藥MP感染且具有多種肺外并發(fā)癥的重癥病例，及時(shí)、早期、短程應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素是必要的，這對(duì)阻止炎性反應(yīng)的發(fā)展、減輕感染中毒癥狀、預(yù)防和控制哮喘及其他并發(fā)癥等有重要臨床價(jià)值，可縮短治療療程和減少后遺癥。其應(yīng)用指征為：急性期病情嚴(yán)鶯的MP感染；肺部病變遷延而出現(xiàn)肺不張、肺間質(zhì)纖維化、支氣管擴(kuò)張及肺外并發(fā)癥者。對(duì)于有明顯免疫功能缺陷、藥物性