啤酒檢驗手冊(微生物檢驗部分)

1、 啤酒檢驗手冊（微生物檢驗部分） 目錄 A、半成品質(zhì)量檢驗 一、冷麥汁2 二、發(fā)酵酒2 三、貯酒 4 四、一濾酒 6 五、清酒7 B、成品質(zhì)量檢驗8 C、原輔材料質(zhì)量檢驗13 附錄1：培養(yǎng)基、中和劑及染色劑的配制和染色方法15 附錄2：玻璃器皿的洗滌、包扎與滅菌19 附錄3：無菌吸樣要求19 附錄4：大腸菌群最可能數(shù)（MPN）檢索表20 A、半成品質(zhì)量檢驗一、冷麥汁1、 抽樣方法1.1傳統(tǒng)發(fā)酵1.1.1 每班至少抽檢一批。1.1.2 取樣時先打開取樣閥排放少量液體，后用70-75%的酒精由內(nèi)至外消毒取樣閥，再用火焰滅菌（酒精火焰外焰灼燒15秒以上）。重新打開閥門排放樣品，待閥門冷卻后，取150

2、200ml入已滅菌的三角瓶。1. 2錐形罐發(fā)酵逐批抽檢，取樣方法同A一、1.1.22、檢驗項目 好氣菌（每班至少抽檢一批） 厭氣菌（每天至少抽檢一批，原則上由日班完成）注：停產(chǎn)搞衛(wèi)生后的第一批麥汁一定要抽樣檢驗好氣菌和厭氣菌。3、檢驗方法3.1好氣菌：無菌操作吸取1ml樣品加入已滅菌的平皿內(nèi)，及時將冷卻至451（手感不燙手）的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿10-15ml，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置361 的電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24或482小時后，在菌落計數(shù)器上計菌落總數(shù)，結(jié)果即是每毫升樣品中所含的好氣菌數(shù)。3.2厭氣菌：無菌操作吸取1ml樣品加入已滅菌的平皿內(nèi)，及時將冷卻至451

3、的UBAD（或NBBD）培養(yǎng)基注入平皿10-15ml，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。待培養(yǎng)基凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置251 的厭氧培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)57天后，在菌落計數(shù)器上計菌落總數(shù)，結(jié)果即是每毫升樣品中所含的厭氣菌數(shù)。4、結(jié)果處理4.1 檢驗結(jié)果以電腦報告單或書面報告單的形式報給企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、生技部和釀造部。二、發(fā)酵酒1、 抽樣方法1.1傳統(tǒng)發(fā)酵1.1.1 0代的酵母，半罐即取樣；滿罐1小時后再取樣。 1代以上（包括1代）的酵母滿罐1小時后取樣。 取樣時先打開取樣閥排放少量液體，后用70-75%的酒精由內(nèi)至外消毒取樣閥，再用火焰滅菌（酒精火焰外焰灼燒15秒以上）。重新打開閥門排放樣品，待閥門冷卻后，取150200

4、ml入已滅菌的三角瓶。1.1.2 滿罐56小時后再取前酵液150200ml檢測高泡時期的酵母數(shù)。1. 2錐形罐發(fā)酵1.2.1 0代的酵母，添加第一批麥汁后1小時及滿罐后1小時取樣；1代以上（包括1代）的酵母滿罐1小時后取樣。無菌操作取樣，方法同A一、1.1.2。1.2.2 滿罐的第四日取樣檢測厭氧菌，方法同A一、1.1.2。1.2.3 滿罐的第20日取發(fā)酵液150200ml檢測酵母數(shù)和死亡率。2、檢驗項目2.1傳統(tǒng)發(fā)酵2.1.1 每罐檢驗項目：酵母數(shù)、出芽率、酵母形態(tài)及厭氣菌；高泡期酵母數(shù)。2.1.2 抽檢項目：0代酵母逐罐檢驗死亡率及好氣菌；1代以上（包括1代）每月至少抽4罐檢驗好氣菌及死亡

5、率。2. 2錐形罐發(fā)酵2.2.1 每罐檢驗項目：酵母數(shù)、出芽率、死亡率、酵母形態(tài)、好氣菌及厭氣菌；2.2.2 抽檢項目：20天后的酵母數(shù)；（0代的酵母逐罐檢驗，0代以上的酵母抽檢的罐數(shù)不少于當(dāng)日滿罐總數(shù)的50%） 20天后的死亡率（0代的酵母逐罐檢驗，0代以上的酵母每月至少抽檢4 罐）3、檢驗方法3.1 好氣菌：同A、一、3.1中好氣菌的檢驗方法3.2 厭氣菌：同A、一、3.2中厭氣菌的檢驗方法3.3 酵母形態(tài)與死亡率： 取1:5000的美藍(lán)染色液一滴，滴在一塊潔凈的載玻片中央，用滴管或玻棒加一滴酵母懸浮液，混合均勻，染色3分鐘后蓋上蓋玻片制成水浸片，鏡檢（在3分鐘內(nèi)用高倍鏡觀察）。染上藍(lán)色的

6、細(xì)胞是死細(xì)胞，未著色的是活細(xì)胞。用血球分類計算器計出死亡酵母數(shù)與酵母細(xì)胞總數(shù)（檢酵母死亡率時，要求每個視野不少于50個酵母，數(shù)1000個以上酵母個數(shù)）。同時觀察酵母形態(tài)，主要觀察酵母的形狀、大小、內(nèi)含物、液泡及細(xì)胞壁。（單純觀察酵母形態(tài)時可以用蒸餾水代替美藍(lán)染色液) 死亡酵母數(shù) 酵母死亡率（%）= 100 （計算結(jié)果保留一位小數(shù)） 酵母細(xì)胞總數(shù)3.4 酵母數(shù)與出芽率： 3.4.1 計酵母數(shù)時一般要求用2的H2SO4稀釋10 倍（1ml酵母液加入9ml 2%H2SO4），使血球計數(shù)板每個小方格中平均46個細(xì)胞為宜。但酵母含量少時不用稀釋。3.4.2 取一塊潔凈的血球計數(shù)板，在中央計數(shù)區(qū)的上方加蓋

7、一塊潔凈的蓋玻片。3.4.3 用滴管或玻棒取酵母懸浮液滴于蓋玻片的邊緣，讓菌液靠毛細(xì)作用滲入計數(shù)室，注意不得有氣泡產(chǎn)生。將計數(shù)板置于顯微鏡的載物臺上，靜止5分鐘，使酵母細(xì)胞全部沉降到計數(shù)板的表面。3.4.4 分別統(tǒng)計5個中方格（左上、右上、左下、右下、中央）中細(xì)胞總數(shù)及芽體數(shù)，酵母菌的芽在未脫離母細(xì)胞前，若已達(dá)母細(xì)胞的1/2大小，則不作為芽體而作為成熟的細(xì)胞計數(shù)。在計數(shù)時，若遇到位于中方格間線上的細(xì)胞，只統(tǒng)計位于左線及下線上且在線內(nèi)的體積不少于一半的細(xì)胞。 為盡量減少實(shí)驗誤差，對同一樣品血球計數(shù)板的上下兩個劃線區(qū)域的5個中方格（左上、右上、左下、右下、中央）均要計細(xì)胞總數(shù)及芽體個數(shù)，分別取其平

8、均值（酵母細(xì)胞總數(shù)平均值以A表示、芽體個數(shù)平均值以B表示）。3.4.5 使用完畢后，將血球計數(shù)板沖洗干凈（絕對不能用硬物洗刷），讓其自行晾干。3.4.6 將細(xì)胞總數(shù)平均值A(chǔ)乘以5即得25個中方格中的細(xì)胞總數(shù)3.4.7 細(xì)胞數(shù)/毫升25個中方格中細(xì)胞總數(shù)稀釋倍數(shù)104，即稀釋10倍的計算結(jié)果是25 個中方格中細(xì)胞總數(shù)將其小數(shù)向前移1位106個/毫升，沒稀釋的則向前移兩位小數(shù)。(計算結(jié)果保留一位小數(shù))3.4.8 芽體個數(shù)（B） 出芽率（%）= 100 (計算結(jié)果保留一位小數(shù)) 細(xì)胞總數(shù)（A）4、結(jié)果處理4.1 檢驗結(jié)果以電腦報告單或書面報告單的形式報給企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、生技部和釀造部。三、貯酒（僅對傳統(tǒng)發(fā)

9、酵）1、抽樣方法1.1 滿罐后即時取樣1.2 取樣時先打開取樣閥排放少量液體，后用70-75%的酒精由內(nèi)至外消毒取樣閥，再用火焰滅菌（酒精火焰外焰灼燒15秒以上）。重新打開閥門排放樣品，待閥門冷卻后，取150200ml入已滅菌的三角瓶。2、檢驗項目2.1 厭氣菌：每班抽檢的罐數(shù)不小于當(dāng)班滿罐總數(shù)的50%2.2 好氣菌與死亡率：每月至少抽檢4罐2.3 酵母數(shù)：每班抽檢的罐數(shù)不小于當(dāng)班滿罐總數(shù)的50%3、檢驗方法3.1 厭氣菌：同A、一、3.2中厭氣菌的檢驗方法3.2 好氣菌：同A、一、3.1中好氣菌的檢驗方法3.3 酵母數(shù)：3.3.1 同A、二、3.4.13.3.2 同A、二、3.4.23.3.

10、3 同A、二、3.4.33.3.4 分別統(tǒng)計5個中方格（左上、右上、左下、右下、中央）中酵母細(xì)胞總數(shù)，在計數(shù)時，若遇到位于中方格間線上的細(xì)胞，只統(tǒng)計位于左線及下線上且在線內(nèi)的體積不少于一半的細(xì)胞。 為盡量減少實(shí)驗誤差，對同一樣品血球計數(shù)板的上下兩個劃線區(qū)域的5個中方格（左上、右上、左下、右下、中央）均要計數(shù)，取其平均值（數(shù)值以A表示）。3.3.5 將酵母細(xì)胞總數(shù)平均值A(chǔ)乘以5即得25個中方格中的細(xì)胞總數(shù)3.3.6 細(xì)胞數(shù)/毫升25個中方格中細(xì)胞總數(shù)稀釋倍數(shù)104，即稀釋10倍的計算結(jié)果是25 個中方格中細(xì)胞總數(shù)將其小數(shù)向前移1位106個/毫升，沒稀釋的則向前移兩位小數(shù)。計算結(jié)果保留一位小數(shù)。3

11、.4 死亡率：同A、二、3.3中死亡率的檢測方法4、結(jié)果處理4.1 檢驗結(jié)果以電腦報檢單或書面報檢單的形式報給企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、生技部和釀造部。四、一濾酒1、 抽樣方法1.1取樣方法同A一、1.1.22、檢驗項目：2.1 好氣菌：每天日班至少抽檢一罐2.2 厭氣菌：每周至少抽檢一罐3、檢驗方法3.1 好氣菌：同A 一、1.3.13.2 厭氣菌：同A 一、1.3.24、結(jié)果處理4.1 檢驗結(jié)果以電腦報檢單或書面報檢單的形式報給企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、生技部和釀造部五、清酒1、抽樣方法1.1 滿罐后即取樣。1.2 取樣時先打開取樣閥排放少量液體，后用70-75%的酒精由內(nèi)至外消毒取樣閥，再用火焰滅菌（酒精火焰外焰灼燒1

12、5秒以上）。重新打開閥門排放樣品，待閥門冷卻后，取150200ml入已滅菌的三角瓶。2、檢驗項目2.1 每罐檢驗項目：好氣菌（60前及60后）2.2 抽檢項目：60后厭氣菌（每10罐至少檢測1罐）3、檢驗方法3.1 好氣菌： 無菌操作吸取1ml清酒加入已滅菌的平皿內(nèi)，將余下的酒液重新包扎放入電熱恒溫水浴鍋中，601恒溫15分鐘模擬殺菌。再吸取已殺菌的酒液1ml入已滅菌的平皿。及時將冷卻至451的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿10-15ml，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置361 的電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24或482小時后，分別在菌落計數(shù)器上計菌落總數(shù)。3.2 厭氣菌： 無菌操作吸取已模擬

13、殺菌的酒液1ml入已滅菌的平皿。及時將冷卻至451的UBA（或NBB）培養(yǎng)基注入平皿10-15ml，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置251 的厭氧培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)57天后，在菌落計數(shù)器上計菌落總數(shù)，結(jié)果即是每毫升酒液中所含的厭氣菌數(shù)。4、結(jié)果處理4.1 檢驗結(jié)果以電腦報告單或書面報告單的形式報給企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、釀造部、生技部和包裝部。 B、成品質(zhì)量檢驗1抽樣方法1.1 瓶/罐裝酒1.1.1 正常生產(chǎn)情況下，每批取前、中、后期三個酒樣；當(dāng)同一個清酒桶包兩條線時，各取前、后期兩個酒樣。1.1.2 同一批酒，如包裝時間超過8小時，除按正常取樣外，每3小時加取1個微檢樣。1.1.3 同一批酒，如

14、包裝時間小于6小時，則可只取前、中期或前期酒樣。1.1.4 如一批酒中有頭板酒、PU或殺菌溫度偏低、殺菌運(yùn)行時間偏短部分，則各取兩支酒樣。1.1.5 以上酒樣均由包裝線檢驗人員提供給微檢檢驗人員。1.2 桶裝啤酒1.2.1 同一個清酒桶包出來的桶裝啤酒為一批，每批取第三桶作前期酒樣；同一個清酒桶的酒未包完而停包4個小時以上的，再重包時作另一批，也取第三桶的酒樣，由車間通知取樣。1.2.2 正常生產(chǎn)情況下，每班至少抽檢一桶。2檢驗項目2.1 瓶/罐裝啤酒2.1.1 每支酒檢驗項目：好氣菌（前期要做平行樣）2.1.2 抽檢項目：活酵母（每批至少抽檢前期酒樣；640ml瓶裝線使用舊瓶包裝 時加抽后期

15、酒樣，抽檢批數(shù)不低于當(dāng)月總批數(shù)的80%）（頭板、 PU偏低、殺菌溫度偏低、殺菌時間偏短至少抽檢一支） 大腸菌群（每批至少抽檢前期酒樣） 厭氣菌（連續(xù)生產(chǎn)時至少批數(shù)逢“0”抽檢，停產(chǎn)一段時間后包返的第一批要求抽檢，每批抽檢前期酒樣）2.2 桶裝啤酒2.2.1 每桶酒檢驗項目：好氣菌（前期要做平行樣） 活酵母2.2.2 抽檢項目：大腸菌群（每批至少抽檢前期酒樣） 厭氣菌（連續(xù)生產(chǎn)時每3批至少抽檢1批，停產(chǎn)一段時間后包返的第一批要求抽檢，每批抽檢前期酒樣）3檢驗方法3.1 好氣菌、活酵母與厭氣菌3.1.1樣品處理3.1.1.1瓶/罐裝啤酒：在無菌狀態(tài)下，用70-75%的酒精棉抹干凈開瓶器、瓶口（或罐

16、裝拉環(huán)部分），再用酒精火焰滅菌。無菌操作開啟瓶/罐蓋，迅速倒出2/3左右的酒液后馬上用酒精棉蓋住瓶/罐口，并輕輕搖蕩，使CO2逸出后備用。3.1.1.2 桶裝啤酒：依次用1%的碘液與70-75%的酒精棉抹干凈酒閥，再用酒精火焰對酒閥及取樣器與酒閥接觸的部分殺菌，連接好取樣器（已用1%的碘液浸泡滅菌）及酒閥。打開取樣閥排放100-150ml的酒液，用70-75%的酒精棉由內(nèi)至外抹干凈取樣口，再用酒精火焰滅菌（灼燒15秒鐘以上），打開取樣閥排放液體，待取樣口冷卻后，無菌操作接取400500ml的樣品入已滅菌的三角瓶中備用。3.1.2 檢驗程序：見下圖1： 檢樣 加1ml入滅菌平皿內(nèi) 平皿內(nèi)加入適量

17、培養(yǎng)基 一定的培養(yǎng)條件與時間 菌落計數(shù) 報告 （圖1） 3.1.3 操作步驟 無菌操作吸取1ml的酒液加入已滅菌的平皿內(nèi)，及時將冷卻至451的培養(yǎng)基注入平皿10-15ml，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)一定時間，在菌落計數(shù)器上計菌落總數(shù)。3.1.4 培養(yǎng)條件 檢驗項目 培養(yǎng)基 培養(yǎng)條件 培養(yǎng)時間 培養(yǎng)箱好氣菌營養(yǎng)瓊脂 361 24或482小時 電熱恒溫培養(yǎng)箱活酵母麥汁瓊脂 301 482小時 電熱恒溫培養(yǎng)箱厭氣菌UBA或NBB 251 57天 厭氧培養(yǎng)箱3.2 大腸菌群3.2.1 樣品處理：同3.1.1，詳細(xì)見3.1.1.1及3.1.1.23.2.2 檢驗程序：見

18、下圖2： 檢樣 乳糖膽鹽發(fā)酵管 361242h 不產(chǎn)氣 產(chǎn)氣 大腸菌群陰性 伊紅美藍(lán)瓊脂平板 3611824h 革蘭氏染色 乳糖發(fā)酵管 361242h革蘭氏陽性 革蘭氏陰性無芽孢桿菌 產(chǎn)氣 不產(chǎn)氣大腸菌群陰性 大腸菌群陽性 大腸菌群陰性 報告 報告 報告 （圖2）3.2.3 操作步驟3.2.3.1 乳糖發(fā)酵試驗 將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量為10ml者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1ml及0.1ml者，用單料乳糖發(fā)酵管。每一接種量各接種3管，加2%NaOH中和至中性。置361電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)242小時，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進(jìn)行。3

19、.2.3.2 分離培養(yǎng) 將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置361電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)1824小時，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗。3.2.3.3 證實(shí)試驗 在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落12個進(jìn)行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酵管，置361電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)242小時，觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌，即為大腸菌群陽性。3.2.4 大腸菌群含量判定 根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，即可得到每100ml酒樣中大腸菌群的MPN值。（附MPN檢索表）4、結(jié)果判定與處理4.1檢驗結(jié)果以電腦報告單或書面報告單的形式報給企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、生技

20、部、釀造部、包裝部。4.2電腦報檢時成品前、中、后期的好氣菌及活酵母取其各自的平均值（保留整數(shù)位）；如前、中、后期好氣菌檢驗結(jié)果均為零，則整批酒的好氣菌結(jié)果為“3MPN，則為不合格品，由有關(guān)部門按不合格品控制程序處理。 C 原輔材料質(zhì)量檢驗一、硅藻土等過濾材料1、抽樣方法1.1 新購進(jìn)硅藻土等過濾材料，以同一天同一單位進(jìn)貨并且同一類型為一批，每批按進(jìn)貨量抽樣： 進(jìn)貨量 20噸以下（含20噸） 2040噸（含40噸） 4060噸（含60噸） 以此類推抽樣包數(shù) 1包 2包 3包1.2 現(xiàn)場使用的硅藻土等過濾材料，每月至少抽檢兩次，每次至少抽一包。1.3 取樣時先用70-75%的酒精棉抹干凈開包處包

21、表面及開包工具（剪刀或刀片等），再用酒精火焰滅菌，用已滅菌的勺子在每包內(nèi)采樣（150200ml），裝入采樣容器內(nèi)混勻加蓋封好。要求整個操作過程在火焰旁進(jìn)行，并且手不得接觸樣品。2、檢驗項目2.1 好氣菌3、檢驗方法3.1 無菌操作稱取1g樣品放入已滅菌的平皿內(nèi)，吸取10ml無菌水注入平皿，并轉(zhuǎn)動使混合均勻。3.2 無菌操作吸取1ml樣品的稀釋液加入已滅菌的平皿內(nèi)，及時將冷卻至451的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿10-15ml，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置361 的電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24或482小時后，在菌落計數(shù)器上計菌落總數(shù)，結(jié)果乘以10即得每克樣品中所含的好氣菌數(shù)。4、結(jié)果處

22、理4.1 檢驗結(jié)果以電腦報告單或書面報告單的形式報給企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、生技部、釀造部、供應(yīng)部。二、無菌水、脫氧水1、抽樣方法1.1 取樣時先打開取樣閥排放少量液體，后用70-75%的酒精由內(nèi)至外消毒取樣閥，再用火焰滅菌（酒精火焰外焰灼燒15秒以上）。重新打開閥門排放樣品，待閥門冷卻后，取150200ml樣品入已滅菌三角瓶。2、檢驗項目2.1 好氣菌：每月至少抽檢8次2.2 厭氣菌：每月至少抽檢1次2.3 大腸菌群：每月至少抽檢1次3、檢驗方法3.1 好氣菌：同A、一、3.1中好氣菌的檢驗方法3.2 厭氣菌：同A、四、3.2中厭氣菌的檢驗方法3.3 大腸菌群：同B、3.2.2及B、3.2.3中大腸菌群的

23、檢驗方法4、結(jié)果處理4.1 檢驗結(jié)果以電腦報告單或書面報告單的形式報給企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、生技部和釀造部。注：以上樣品的細(xì)菌檢驗結(jié)果如每平板中的菌落總數(shù)1500時，即判為樣品中的細(xì)菌含量無法計數(shù)，電腦報告單中以“9999”表示。 附錄1：培養(yǎng)基、中和劑及染色劑的配制和染色方法1、營養(yǎng)瓊脂1.1 配制方法 稱取40克(當(dāng)瓶身標(biāo)簽上的定量與之有出入時,按照標(biāo)簽上所規(guī)定的量配制)營養(yǎng)瓊脂加入1000ml蒸餾水，邊加熱邊攪動，使培養(yǎng)基全部溶解，待培養(yǎng)基沸騰后分裝入干燥潔凈的三角瓶，裝入三角瓶的培養(yǎng)基的量一般為三角瓶容積的1/31/2。在分裝時應(yīng)注意不得使培養(yǎng)基沾污瓶口，以免浸濕棉塞，造成污染。1.2 滅菌條件

24、121濕熱高壓滅菌20分鐘。1.3 保存條件 低溫保存2、UBA培養(yǎng)基2.1 配制方法 稱取62克（當(dāng)瓶身標(biāo)簽上的定量與之有出入時,按照標(biāo)簽上所規(guī)定的量配制）UBA粉末培養(yǎng)基加入750ml蒸餾水，邊加熱邊攪動，使培養(yǎng)基全部溶解，待培養(yǎng)基沸騰后加入250ml未除氣的啤酒混勻，分裝入干燥潔凈的三角瓶，裝入三角瓶的培養(yǎng)基的量一般為三角瓶容積的1/31/2。在分裝時應(yīng)注意不得使培養(yǎng)基沾污瓶口，以免浸濕棉塞，造成污染。2.2 滅菌條件 121濕熱高壓滅菌15分鐘（當(dāng)瓶身標(biāo)簽上的規(guī)定與之有出入時,按照標(biāo)簽上的規(guī)定滅菌）。2.3 保存條件 低溫保存3、NBB培養(yǎng)基3.1 配制方法 稱取66.3克NBB粉末培

25、養(yǎng)基加入500ml蒸餾水及500ml已除氣的啤酒， 邊加熱邊攪動，煮沸后維持沸騰狀態(tài)1分鐘使培養(yǎng)基全部溶解。分裝入干燥潔凈的三角瓶，裝入三角瓶的培養(yǎng)基的量一般為三角瓶容積的1/31/2。在分裝時應(yīng)注意不得使培養(yǎng)基沾污瓶口，以免浸濕棉塞，造成污染。3.2 滅菌條件 121濕熱高壓滅菌15分鐘。3.3 保存條件 低溫保存4、1000PPM放線菌酮溶液4.1 配制方法 精確稱取0.5g放線菌酮溶于500ml蒸餾水，分裝于三角瓶。4.2 滅菌條件 115濕熱高壓滅菌15分鐘。4.3 保存條件 密封保存5、UBAD（或NBBD）培養(yǎng)基 無菌操作每100ml已滅菌的UBA（或NBB）培養(yǎng)基中加入1ml 1

26、000PPM的放線菌酮溶液，重新煮沸以混合均勻。6、麥汁培養(yǎng)基6.1配制方法 每1000mL已煮沸的麥汁緩慢加入已充分?jǐn)嚢璧牡扒?個，邊加邊攪拌，持續(xù)沸騰3040分鐘（加熱過程要不斷攪拌），待麥汁冷卻后過濾，加蒸餾水調(diào)整糖度為11勃力克司，然后加入1.71. 8瓊脂， 繼續(xù)加熱使瓊脂全部溶解后過濾分裝入干凈三角瓶。6.2 滅菌條件 115濕熱高壓滅菌25分鐘。6.3 保存條件 低溫保存7、乳糖膽鹽發(fā)酵管（初發(fā)酵用）7.1 配制方法 稱取66克(當(dāng)瓶身標(biāo)簽上的定量與之有出入時,按照標(biāo)簽上所規(guī)定的量配制)乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基溶入1000ml蒸餾水（如配單料，蒸餾水量加倍），加熱至沸，分裝入10ml的

27、試管，裝入培養(yǎng)基的量為3-4ml。在分裝時應(yīng)注意不得使培養(yǎng)基沾污試管口。7.2 滅菌條件 115濕熱高壓殺菌15分鐘。7.3 貯存條件 低溫保存8、乳糖發(fā)酵管(復(fù)發(fā)酵用)8.1 成分 蛋白胨 20g 乳糖 10g 0.04%溴甲酚紫水溶液 25ml 蒸餾水 1000ml pH 7.48.2 配制方法 將蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示劑，按檢驗要求分裝，方法同7.1。（雙料乳糖發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成份加倍）8.3 滅菌條件同7.28.4 貯存條件 同7.39、伊紅美藍(lán)瓊脂平板9.1 配制方法 稱取伊紅美藍(lán)瓊脂31g(當(dāng)瓶身標(biāo)簽上的定量與之有出入時,按照標(biāo)簽上所規(guī)定的量配制)加入100

28、0ml冷蒸餾水，微火加熱至溶解，115高壓滅菌15min，冷至56左右傾注無菌平皿備用。平皿即制即用。10、革蘭氏染色法10.1 結(jié)晶紫染色液（1:100） 配制方法： a、準(zhǔn)確稱取1.000g結(jié)晶紫 b、準(zhǔn)確稱取1.000g草酸銨溶于50ml蒸餾水，再加水定容至100ml 將結(jié)晶紫溶解于20ml 95%的乙醇中，然后與80ml 1%的草酸銨溶液 混合至100ml。 保存方法：密封保存 保存期： 3個月10.2革蘭氏碘液（1:300） 配制方法：碘 1 g 碘化鉀 2g 蒸餾水 300ml 將碘與碘化鉀先進(jìn)行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全 溶解后，再加蒸餾水至300ml。 保存方法：密

29、封避光保存 保存期： 3個月。10.3 復(fù)紅染色液（1:400） 配制方法： 稱取0.2500g堿性復(fù)紅（或品紅）溶于10ml無水乙醇，再加水 稀釋至100毫升。 保存方法： 密封保存 有 效 期： 六個月10.4 染色法10.4.1 將涂片在火焰上干燥固定，滴加結(jié)晶紫染色液，染1分鐘，水洗。10.4.2 滴加革蘭氏碘液，作用1分鐘，水洗。10.4.3 滴加95%乙醇脫色，約30s；或?qū)⒁掖嫉螡M整個涂片，立即傾去，再用 乙醇滴滿整個涂片，脫色10s。10.4.4 水洗，滴加復(fù)紅染色液，復(fù)染1分鐘。水洗，待干，鏡檢。10.4.5 結(jié)果 革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。11、美藍(lán)染色液（比例：1:5000)11.1配制方法：a、準(zhǔn)確稱取0.1000g亞甲基藍(lán)溶于100ml蒸餾水，再加水稀釋 至 500ml b、準(zhǔn)確稱取5.4436g磷酸二氫鉀溶于100ml蒸餾水，再加水