細(xì)胞工程(基礎(chǔ)和植物部分)

1、胚胎移植實(shí)質(zhì)上是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)換，而胚胎本身的遺傳物質(zhì)并不發(fā)生改變，因此各種性狀均能保持其原來的優(yōu)良特性。植物組織培養(yǎng)（Plant Tissue Culture）：指在無(wú)菌條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞、原生質(zhì)體等培養(yǎng)在人工配置的培養(yǎng)基上，給予適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件，誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織、潛伏芽，或者長(zhǎng)成新的完整植株的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。主要用于植物快速繁殖的組培技術(shù)植物細(xì)胞培養(yǎng)（plant cell Culture）：是指在離體條件下對(duì)植物單個(gè)細(xì)胞或小的細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)并使其增殖，獲得大量細(xì)胞群體的一種技術(shù)。植物細(xì)胞全能性（plant Cell Totipotency）：植物每一

2、個(gè)具有完整細(xì)胞核的體細(xì)胞，都含有植物體的全部遺傳信息，在適當(dāng)條件下，具有發(fā)育成完整植株的潛在能力。分化：細(xì)胞后代在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生穩(wěn)定性的差異的過程。植物脫分化（Plant Cell Dedifferentiation）：也稱去分化，指離體條件下生長(zhǎng)的植物細(xì)胞、組織或器官經(jīng)過細(xì)胞分裂或不分裂逐漸失去原來的結(jié)構(gòu)和功能而恢復(fù)分生狀態(tài)，形成無(wú)組織結(jié)構(gòu)的細(xì)胞團(tuán)或愈傷組織或不分化細(xì)胞的過程。再分化(redifferentiation):脫分化后的分生細(xì)胞（愈傷組織）在特定的條件下，重新恢復(fù)細(xì)胞分化能力，并經(jīng)歷器官發(fā)生形成單極性的芽或根，或經(jīng)歷胚胎發(fā)生形成雙極性的胚狀體，進(jìn)一步發(fā)育成完整植物體的過程。

3、愈傷組織（Callus）：植物受到機(jī)械、動(dòng)物或微生物等傷害后，創(chuàng)傷部位的細(xì)胞脫分化而不斷增殖形成松散排列、無(wú)特定結(jié)構(gòu)和功能的非器官化組織。外植體（explant）： 指將用于離體培養(yǎng)的各種植物材料，如器官、組織、細(xì)胞和原生質(zhì)體等。當(dāng)繼代培養(yǎng)時(shí)，將原培養(yǎng)物切割或不切割轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)基中的部分也稱之為外植體。器官發(fā)生（organogenesis）：培養(yǎng)條件下的組織或細(xì)胞團(tuán)（愈傷組織）分化形成不定根（adventitious roots）、不定芽（ adventitious shoots）等器官的過程體細(xì)胞胚亦稱胚狀體（somatic embryo或embryoid）：在體外，由體細(xì)胞（非合子細(xì)胞）

4、經(jīng)胚胎發(fā)育產(chǎn)生的類似胚胎的結(jié)構(gòu)。形態(tài)建成(morphogenesis)：外植體細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)條件下發(fā)生脫分化、再分化，產(chǎn)生芽和根，或者形成胚狀體，發(fā)育成苗或完整植株。人工種子（Artificial Seeds）：指通過植物組織培養(yǎng)方法獲得發(fā)育完全的個(gè)體（如胚狀體），將其用適當(dāng)?shù)姆椒ūＷo(hù)起來用以代替天然種子的一種結(jié)構(gòu)。人工種子包括：胚狀體、人工種皮、人工胚乳。體細(xì)胞雜交(somatic hybridization)又稱為原生質(zhì)體融合(protoplast fusion)：是指在人工控制條件下，不經(jīng)過有性過程，兩種體細(xì)胞原生質(zhì)體相互融合產(chǎn)生雜種細(xì)胞，并使之分化再生,形成新物種或新品種的技術(shù)?；ㄋ?/p>

5、培養(yǎng)(anther culture)：將發(fā)育到一定階段的花藥剝離下來(切去花絲部分)接種到培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，最終形成完整植株的過程花粉培養(yǎng)(pollen culture)：又稱小孢子培養(yǎng)(microspore culture)，或游離小孢子培養(yǎng)(isolated microspore culture)，是指在無(wú)菌條件下，將花粉從花藥中游離出來，使其分散或游離態(tài)，發(fā)育成單倍體植株的過程。單倍體(haploid)：指細(xì)胞中含有正常體細(xì)胞的一半染色體數(shù)，即具有配子染色體數(shù)目的個(gè)體。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（animal cell culture）是用無(wú)菌操作的方法將動(dòng)物體內(nèi)的組織或器官取出，模擬動(dòng)物體內(nèi)的生理?xiàng)l

6、件，在體外進(jìn)行培養(yǎng)，并觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育及衰老等生命現(xiàn)象的技術(shù)。接觸抑制（contact inhibition）：細(xì)胞從接種到長(zhǎng)滿底物表面后，由于細(xì)胞繁殖數(shù)量增多相互接觸后，不再增加。密度抑制（Density Inhibition）：細(xì)胞密度增大，培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)減少，代謝產(chǎn)物增多，導(dǎo)致細(xì)胞不在增加培養(yǎng)細(xì)胞生命期：細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下持續(xù)增殖和生長(zhǎng)的時(shí)間原代培養(yǎng)（Primary Culture）：亦稱初代培養(yǎng)，指將機(jī)體取出的細(xì)胞或組織進(jìn)行實(shí)效培養(yǎng)的過程。原代細(xì)胞（primary culture cell）：指實(shí)效培養(yǎng)的細(xì)胞大約增殖10代左右，稱為原代細(xì)胞。細(xì)胞系（cell line）：指由初代培

7、養(yǎng)產(chǎn)生的能進(jìn)行無(wú)限次傳代培養(yǎng)的細(xì)胞群。繼代培養(yǎng)（secondary culture）： 指培養(yǎng)物在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間以后，由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)枯竭，水分散失以及代謝產(chǎn)物的積累，必須轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng)，這個(gè)過程叫做繼代培養(yǎng)。器官培養(yǎng)（organ culture）：取出動(dòng)物器官或進(jìn)一步修整成器官型植塊，將其培養(yǎng)使其存活和生長(zhǎng)的過程。細(xì)胞融合（cell fusion）又稱體細(xì)胞雜交,是指將不同來源的原生質(zhì)體相融合并使之分化再生,形成新物種或新品種的技術(shù)。基因型相同的細(xì)胞融合成的雜交細(xì)胞稱為同核體；來自不同基因型的雜交細(xì)胞則稱為異核體同種細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)2個(gè)靠在一起的細(xì)胞自發(fā)合并，稱自發(fā)融合；異種間的細(xì)胞必

8、須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合，稱誘發(fā)融合抗原（antigen，ag）：進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)對(duì)肌體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生刺激作用的外源物質(zhì)?？贵w（antibody，ab）：動(dòng)物免疫系統(tǒng)分泌的中和或消除抗原物質(zhì)的影響的糖蛋白，存在于血清中，本質(zhì)是免疫球蛋白?？乖瓫Q定簇（antigenic determinant）：是指抗原分子中決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)，又稱表位(epitope).多克隆抗體（polyclonal antibody）：針對(duì)多種抗原決定簇的混合抗體單克隆抗體（monoclonal antibody;McAb）：只針對(duì)某一抗原決定簇的抗體分子。單克隆抗體技術(shù)的核心是用骨髓瘤細(xì)胞(myeloma cell

9、)與經(jīng)特定抗源免疫刺激的B淋巴細(xì)胞(antigen stimulated B lymphoblast)融合得到雜交瘤細(xì)胞(hybridoma cell)，雜交瘤細(xì)胞既能象骨髓瘤細(xì)胞那樣在體外無(wú)限增殖，又具有B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體的能力。因此，單克隆抗體技術(shù)又稱為雜交瘤技術(shù)(hybridoma technology ）。胚胎工程（embryo technology）：指在胚胎發(fā)育過程中進(jìn)行的生物技術(shù)。即對(duì)哺乳動(dòng)物的胚胎進(jìn)行某種人為的工程技術(shù)操作，然后讓它繼續(xù)發(fā)育，獲得人們所需要的成體動(dòng)物的新技術(shù)。人工受精（Artificial fertilization）：是指哺乳動(dòng)物的精子和卵子在體外人工控

10、制的環(huán)境中完成受精過程的技術(shù)。胚胎移植（Embryo transplantation）：也稱受精卵移植，是指一頭母畜發(fā)情排卵并經(jīng)過配種后，在一定時(shí)間內(nèi)從其生殖道取出受精卵或胚胎，然后把它們移植到另外一頭與供體同時(shí)發(fā)情排卵、但未經(jīng)配種的母畜的輸卵管或子宮角。這個(gè)來自供體的胚胎能夠在受體的子宮著床，并繼續(xù)生長(zhǎng)和發(fā)育，最后產(chǎn)下供體的后代。胚胎分割（Embryo splitting）：指通過對(duì)胚胎的顯微外科操作，把一個(gè)胚胎分割成兩個(gè)或多個(gè)，由于胚胎發(fā)育早期，每個(gè)卵裂球都具有發(fā)育成一個(gè)完整個(gè)體的潛在可能性，因此通過胚胎分割技術(shù)，可以人工制造同卵雙胎或多胎，可成倍地增加胚胎數(shù)和產(chǎn)犢數(shù)?？煽醋魇莿?dòng)物無(wú)性繁殖

11、或克隆胚胎融合（Embryo fusion）：又稱胚胎嵌合，就是將兩個(gè)不同品種或不同種除去透明帶胚(裸胚)粘合在一起，或者各自一分為二，然后各取一半，融合成新的胚胎，或?qū)⒍鄠€(gè)供體細(xì)胞注射入受體胚胎中，移植給受體，產(chǎn)生具有雜交優(yōu)勢(shì)的新后代嵌合體。性別控制（sex control）：指通過人為干預(yù)或操作手段使母畜繁殖所需要的后代。試管動(dòng)物（In vitro animal）：指將供體的精子和卵子在體外受精、體外培養(yǎng)胚胎，然后將發(fā)育到一定程度的胚胎移植入受體，可以得到各種動(dòng)物。由于體外受精一般在試管中進(jìn)行，所以稱為試管動(dòng)物，也稱“體外受精動(dòng)物”?？寺。╟lone）：克隆是指由一個(gè)細(xì)胞或個(gè)體，通過無(wú)性繁

12、殖手段，獲得遺傳上相同的細(xì)胞群或個(gè)體群。干細(xì)胞（stem cell）：是一類具有自我復(fù)制和分化潛能的細(xì)胞。即是一群尚未完全分化的細(xì)胞，同時(shí)具有分裂增殖成與本身完全相同的細(xì)胞，或分化成為多種特定功能的體細(xì)胞兩種特性。單能干細(xì)胞:只能向一種或密切相關(guān)的兩種類型的細(xì)胞分化。多能干細(xì)胞:具有分化成多種細(xì)胞和組織的潛能，但卻失去了發(fā)育成完整個(gè)體的能力。全能干細(xì)胞:包括胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cells, ES細(xì)胞）生殖干細(xì)胞（embryonic germ cells, EG細(xì)胞），具有全能性，能夠分化成全身200多種細(xì)胞類型，進(jìn)一步形成機(jī)體的任何組織和器官。全能細(xì)胞:（totipote

13、nt cell，TC）是能夠表達(dá)生物體基因組的任何一種基因，并能分化出該生物體內(nèi)任何一種類型的細(xì)胞，進(jìn)而發(fā)育為一個(gè)完全相同的生物體。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（transgenic animal）：指通過基因工程技術(shù)將目的基因?qū)肷臣?xì)胞、早期胚胎干細(xì)胞或早期胚胎，使之整合到受體細(xì)胞的基因組中，經(jīng)發(fā)育而產(chǎn)生的個(gè)體。 動(dòng)物生物反應(yīng)器（Animal bioreactor）:指利用轉(zhuǎn)基因活體動(dòng)物的某種能夠高效表達(dá)外源蛋白的器官或組織來進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)活性功能蛋白的技術(shù)，這些蛋白一般是藥用蛋白或營(yíng)養(yǎng)保健蛋白。用于表達(dá)的生物反應(yīng)器包括動(dòng)物血液、泌尿系統(tǒng)、精囊腺、乳腺等，還包括禽蛋和昆蟲（例如家蠶）個(gè)體等。 以下可能出填空

14、題：無(wú)菌操作儀器設(shè)備：超凈工作臺(tái)、高壓蒸汽滅菌鍋、過濾除菌裝置、干熱滅菌烘箱、接種器械滅菌設(shè)備生長(zhǎng)素類型：2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、IAA（吲哚乙酸）、IBA（吲哚丁酸）、NAA（萘乙酸）、IPA（吲哚丙酸）細(xì)胞分類素類型：6BA（6-芐基氨基嘌呤）、KT（激動(dòng)素）、ZT（玉米素）、2ip、TDZ植物細(xì)胞全能性表達(dá)的條件：離體、一定的刺激植物細(xì)胞全能性實(shí)現(xiàn)的途徑：體細(xì)胞、性細(xì)胞、原生質(zhì)體、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)基因從離體培養(yǎng)到器官發(fā)生經(jīng)歷的三個(gè)時(shí)期：誘導(dǎo)期、分裂期、分化期形態(tài)建成的兩種途徑：器官發(fā)生途徑和體細(xì)胞胚途徑器官發(fā)生途徑的類型：先根后芽、先芽后根、根芽同時(shí)器官分化與植物再生過程：組織（

15、細(xì)胞）（形成愈傷組織）細(xì)胞分化組織分化（擬分生組織和維管組織結(jié)節(jié)）器官分化（芽和根）植株體細(xì)胞胚發(fā)育過程：細(xì)胞分化持續(xù)細(xì)胞分裂增殖原胚期球形胚心形胚魚雷形胚子葉期體細(xì)胞胚的發(fā)生途徑：直接從器官外植體上發(fā)生、愈傷組織發(fā)生、懸浮培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生、單倍體細(xì)胞發(fā)生、原生質(zhì)體發(fā)生離體無(wú)性繁殖的類型：腋生枝型、不定芽型、體細(xì)胞胚型、原球莖型離體無(wú)性繁殖的程序：無(wú)菌培養(yǎng)物的建立中間繁殖體的增殖完整植株的形成(生根培養(yǎng)再生植物的馴化和移栽 再生植株的鑒定?；ㄋ幣囵B(yǎng)的基本程序是：培養(yǎng)材料的選擇材料(花蕾)預(yù)處理外植體消毒滅菌接種培養(yǎng)植株再生誘導(dǎo)生根單倍體植株的染色體加倍及馴化移栽花粉培養(yǎng)：選擇單核中、晚期花粉花粉分

16、離收集：機(jī)械擠壓法（擠壓法、研磨過濾收集法）、自然散落法、機(jī)械游離法（磁攪拌法、小型攪拌法）植物胚胎培養(yǎng)：胚培養(yǎng)(embryo culture)（成熟胚培養(yǎng)、幼胚培養(yǎng)）、胚珠培養(yǎng)(ovule culture)、子房培養(yǎng)(ovary culture)、胚乳培養(yǎng)endosperm culture)、離體受精(in vitro pollination)等胚乳培養(yǎng)（三倍體）的程序:含胚乳的果實(shí)或種子表面消毒無(wú)菌條件下胚乳的剝離接種培養(yǎng)基培養(yǎng)體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特性：相似性、兩重性體外培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)：貼附型細(xì)胞、非貼附型細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程：取幼齡動(dòng)物的組織或器官剪碎組織胰蛋白酶處理細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物培養(yǎng)

17、基的基本條件：營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、緩沖能力、等滲性、無(wú)菌動(dòng)物培養(yǎng)基類型：天然、合成、無(wú)血清動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的傳統(tǒng)方法：懸滴培養(yǎng)法、旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法、灌注小室培養(yǎng)法、培養(yǎng)瓶培養(yǎng)方法、培養(yǎng)板培養(yǎng)法原代培養(yǎng)分為兩種：組織塊培養(yǎng)法、組織消化培養(yǎng)（單層培養(yǎng)法）動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)：懸浮培養(yǎng)技術(shù)、微載體培養(yǎng)技術(shù)、多孔載體培養(yǎng)、微囊化培養(yǎng)技術(shù)、中空纖維法細(xì)胞保存需要考慮問題：冷凍速率、復(fù)溫速率、冷凍保護(hù)劑、冷凍保存溫度原生質(zhì)體融合：非對(duì)稱融合、對(duì)稱融合細(xì)胞融合經(jīng)歷的主要過程：細(xì)胞相互靠近細(xì)胞橋形成胞質(zhì)滲透 細(xì)胞核融合細(xì)胞融合技術(shù)：生物法仙臺(tái)病毒法（HVJ）、化學(xué)法PEG結(jié)合高pH、高Ca 誘導(dǎo)法物理法電融合誘導(dǎo)法細(xì)胞融合的

18、類型：1)同核體同源原生質(zhì)體的融合2)異核體異源原生質(zhì)體的融合體3)多核體含有雙親不同比例核物質(zhì)的融合體比較常用的雜種細(xì)胞篩選方法：遺傳互補(bǔ)篩選法、抗性互補(bǔ)篩選、生長(zhǎng)特性篩選法、物理特性篩選法、其它方法抗原的特點(diǎn)：外源性、結(jié)構(gòu)性、特異性第一章論述題：植物培養(yǎng)基的配置方法與流程：主要包括： 無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 有機(jī)化合物 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì) 水 固化劑和懸浮劑 輔助性物質(zhì)2.貯備液（母液）的配制與保存母液：將所用培養(yǎng)基配方的化學(xué)成分按一定的比例配成濃縮液。配制母液目的：a)方便；b）準(zhǔn)確（有些成分量太?。?。3.詳見書本28頁(yè)- 1).配制溶液 2).調(diào)pH 3).分裝 4).包扎 5).培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基配

19、制流程圖第二章細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室組成及無(wú)菌操作技術(shù)1植物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室的基本組成與要求。 細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室它必須滿足三個(gè)基本的需要，即：實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備，包括培養(yǎng)基配制，洗滌與滅菌等；無(wú)菌操作；控制培養(yǎng)。組成：準(zhǔn)備室、無(wú)菌操作室、培養(yǎng)室2.無(wú)菌操作技術(shù)注意事項(xiàng)有哪些？答：（1）進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷，但又不必太快，以防空氣流動(dòng)，增加污染機(jī)會(huì)。（2）不能用手觸及已消毒器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。 （3）為拿取方便，工作臺(tái)面上的用品要有合理的布局，原則上應(yīng)是右手使用的東西放置在右側(cè)，左手用品在左側(cè)，酒精燈置于中央。（4）工作由始至終要保持一定順序性，組織或細(xì)胞在未做處理之前，勿過早暴露在空

20、氣中。同樣，培養(yǎng)液在未用前，不要過早開瓶；用過之后如不再重復(fù)使用，應(yīng)立即封閉瓶口直立可增加落菌機(jī)會(huì)。（5）吸取營(yíng)養(yǎng)液、細(xì)胞懸液及其它各種用液時(shí)，均應(yīng)分別使用吸管，不能混用，以防擴(kuò)大污染或?qū)е录?xì)胞交叉污染。（6）工作中不能面向操作區(qū)講話或咳嗽，以免唾沫把細(xì)菌或支原體帶入工作臺(tái)面發(fā)生污染。（7）手或相對(duì)較臟的物品不能經(jīng)過開放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液時(shí)如吸管尖碰到瓶口，則應(yīng)將吸管丟掉。3.植物外植體的消毒程序如何？如何選擇外植體？答：外植體消毒步驟：（1）選擇無(wú)病斑、蟲害植株作為取材母株。將采來的植物材料去掉多余的部分后，置于自來水龍頭下沖洗幾分鐘至數(shù)小時(shí)，沖洗時(shí)間視材料清潔程度而定。（2）將

21、流水沖洗干凈的材料置于超凈工作臺(tái)上進(jìn)行邊淼浸潤(rùn)消毒。一般先用70%乙醇浸泡2030s。由于酒精具有使植物材料表面被浸濕的作用，加之70%乙醇穿透力強(qiáng)，也很容易殺傷植物細(xì)胞，所以浸潤(rùn)時(shí)間不能過長(zhǎng)。（3）用消毒劑對(duì)外植體進(jìn)行消毒處理。表面消毒劑種類較多，可根據(jù)情況選擇不同消毒劑。（4）無(wú)菌水沖洗外植體的選擇：(1)選擇優(yōu)良的基因型：試驗(yàn)首先要明確目的。例如，蔬菜、作物等的脫毒快繁，是為了脫去病毒，提高產(chǎn)量和質(zhì)量，就應(yīng)選擇當(dāng)?shù)卦耘啻_認(rèn)的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的品種作為脫毒的材料，并且品種一定要可靠?；ɑ?、觀賞植物的快繁，也應(yīng)選擇有價(jià)值的植物。(2)取材：從生長(zhǎng)旺盛、健壯、無(wú)病蟲害的植株上取材。母柱代謝旺盛期切取的

22、外植體再生能力強(qiáng)，試驗(yàn)容易成功。(3)外植體大小選擇：因外植體不同而不同。如利用莖尖培養(yǎng)，莖尖大小對(duì)脫毒效果非常明顯。再如幼胚培養(yǎng)，胚齡也非常重要。(4)選擇外植體的時(shí)期：外植體的生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)往往與該物種的生長(zhǎng)規(guī)律（生物鐘）有關(guān)。因此，最好在植物生長(zhǎng)的最適宜時(shí)期取材培養(yǎng)。會(huì)得到較好的結(jié)果。4.動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)基的組成成分有哪幾類，在離體培養(yǎng)中的功能是什么？答：植物：無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：培養(yǎng)的動(dòng)植物組織、器官、細(xì)胞或者原生質(zhì)體需要連續(xù)的供給某些無(wú)機(jī)化學(xué)物質(zhì)，除了C、H、O之外，需要量比較多的元素叫大量元素，需要量比較少的元素叫微量營(yíng)養(yǎng)元素。有機(jī)化合物：1、維生素類物質(zhì):維生素類物質(zhì)在酶系統(tǒng)中有催化功能。2、

23、AA類物質(zhì):絕大多數(shù)AA適量時(shí)對(duì)培養(yǎng)效果都有正向效應(yīng)。3.糖類(碳水化合物):糖在培養(yǎng)基的作用：a)為細(xì)胞提供合成新物質(zhì)的碳骨架; b)為細(xì)胞的呼吸代謝提供底物和能量;c)維持滲透壓 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì):植物激素是在植物體內(nèi)合成的，對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育有顯著調(diào)節(jié)作用的微量有機(jī)物，而植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是外源的調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育的物質(zhì)。固化劑：瓊脂、瓊脂糖懸浮劑：Ficoll（聚蔗糖）輔助性物質(zhì)：抗生素、抗氧化物活性炭:具吸附作用；莖尖初代培養(yǎng)可防褐化；促進(jìn)新梢增殖（濃度0.10.2%）；促進(jìn)生根；防止組培苗玻璃化（濃度0.3%）。利于胚胎培養(yǎng)。水：是植物原生質(zhì)體的組成成分，也是一切代謝過程的介質(zhì)和溶媒。動(dòng)物:

24、氨基酸：合成蛋白質(zhì)原料;維生素：調(diào)節(jié)生長(zhǎng)和代謝;糖類：提供碳源和能源;無(wú)機(jī)鹽：作為輔基、維持細(xì)胞的滲透壓和pH生長(zhǎng)類因子及激素5.各種植物激素的作用是什么？如何選擇？答：生長(zhǎng)素的生理作用:促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞分裂；誘導(dǎo)受傷組織表面細(xì)胞恢復(fù)分裂能力；形成愈傷組織，促進(jìn)生根；與一定量的細(xì)胞分裂素配合共同誘導(dǎo)不定芽的分化、側(cè)芽的萌發(fā)與生長(zhǎng)、胚狀體的誘導(dǎo)。細(xì)胞分裂素：a)促進(jìn)細(xì)胞的分裂和分化；b)誘導(dǎo)芽的分化；c)促進(jìn)側(cè)芽的萌發(fā)和生長(zhǎng)；d)抑制衰老赤霉素（GA3）生理作用：a)誘導(dǎo)莖的細(xì)胞伸長(zhǎng)，對(duì)矮生型植物恢復(fù)成高生型特別有效，對(duì)根無(wú)效b)對(duì)形成層的細(xì)胞分化有影響，往往同生長(zhǎng)素有協(xié)同作用。IAA/GA比

25、值高有利于木質(zhì)部的分化，比值低有利于韌皮部的分化。c)破除種子、鱗莖、塊莖休眠，使之提前萌發(fā)。d)對(duì)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的活性有增效作用脫落酸（ABA）生理作用：a)抑制蛋白質(zhì)的合成 b)抵消和抑制生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素、GA的作用c)誘導(dǎo)休眠、促進(jìn)衰老和脫落6如何篩選培養(yǎng)基？篩選合適的培養(yǎng)基組培成功的基礎(chǔ) 在建立一個(gè)新的實(shí)驗(yàn)體系時(shí)，為了能研制出一種適合的培養(yǎng)基，最好先由一種已被廣泛使用的基本培養(yǎng)基（如MS培養(yǎng)基或B5培養(yǎng)基）開始。當(dāng)通過一系列的實(shí)驗(yàn)，對(duì)這種培養(yǎng)基做了某些定性和定量的小變動(dòng)之后，即有可能得到一種能滿足實(shí)驗(yàn)需要的新培養(yǎng)基，選擇最佳培養(yǎng)基。 篩選：在多種培養(yǎng)基上培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)物的生長(zhǎng)情況

26、，確定較適宜的培養(yǎng)基。調(diào)整：根據(jù)培養(yǎng)物的生長(zhǎng)情況或培養(yǎng)目的的不同，對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行調(diào)整，探索新的培養(yǎng)基。如：改良MS、改良B5培養(yǎng)基、N6培養(yǎng)基等。基本培養(yǎng)基：一般在現(xiàn)有培養(yǎng)基配方中選擇?？梢詤⒖记叭说慕?jīng)驗(yàn)，例如：MS是廣譜性培養(yǎng)基，N6用于單子葉植物的培養(yǎng)。豆科多用B5培養(yǎng)基。 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑：必須進(jìn)行篩選試驗(yàn)?？傮w原則-當(dāng)誘導(dǎo)愈傷組織形成時(shí)，細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素相對(duì)平衡；誘導(dǎo)芽分化時(shí)，細(xì)胞分裂素水平應(yīng)高于生長(zhǎng)素，誘導(dǎo)根則要低。天然復(fù)合物：如進(jìn)行器官和組織培養(yǎng)，一般不加復(fù)雜有機(jī)成分，而進(jìn)行細(xì)胞和原生質(zhì)體培養(yǎng)則要加。第三章 植物組織與細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理1.全能性只是一種可能性，要把這種可能性變?yōu)楝F(xiàn)實(shí)

27、性必須滿足兩個(gè)條件：（1）具有較強(qiáng)全能性的細(xì)胞從植物組織抑制性影響下解脫出來，使其處于獨(dú)立發(fā)育的離體條件下； （2）是要給予它們適當(dāng)?shù)拇碳?，即給予它們一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并使它們受到一定的激素的作用。細(xì)胞全能性的表達(dá)，離體是前提，激素是重要調(diào)控方式。2.胚狀體可從離體培養(yǎng)的各種外植體上直接或間接地發(fā)生，大致分為五種：直接從器官外植體上發(fā)生(以葉片為例） 愈傷組織發(fā)生 懸浮培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生 單倍體細(xì)胞發(fā)生 原生質(zhì)體發(fā)生3.人工種子結(jié)構(gòu)：由胚狀體（或芽等）、人工種皮、人工胚乳組成。 胚狀體：是有生命的物質(zhì)結(jié)構(gòu) 人工胚乳：是人工配制的保證胚狀體生長(zhǎng)發(fā)育需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，一般以生成胚狀體的培養(yǎng)基為主，外加一定量

28、的植物激素、抗生素等物質(zhì)，盡可以提供胚狀體正常萌發(fā)所需條件。 人工種皮：提包裹在最外層的膠質(zhì)化合物薄膜。4. 胚狀體發(fā)生途徑與器官發(fā)生途徑形成植株的異同點(diǎn)答：胚狀體發(fā)生途徑與器官發(fā)生途徑(不定芽/根)形成植株的區(qū)別: 胚狀體具有兩極性(double polarity)，即有莖端和根端。器官發(fā)生是單極性. 胚狀體維管組織的分布是獨(dú)立的“Y”字形,與外植體組織無(wú)結(jié)構(gòu)上的聯(lián)系，出現(xiàn)所謂的生殖隔離現(xiàn)象，器官發(fā)生中，不定芽一般在愈傷組織的表面，不定根一般發(fā)生在愈傷組織較深的部位，且兩者與外植體或愈傷組織的維管組織相聯(lián)系 胚狀體形成的再生植株遺傳性相對(duì)穩(wěn)定，變異性小于由器官發(fā)生的植株5. 器官發(fā)生方式再生

29、植株的三種方式： 可能先長(zhǎng)芽后長(zhǎng)根（常見）。 形成根，根上再長(zhǎng)出芽（少見）。 在愈傷組織不同部位分別形成根和芽。 以上三種方式，可通過器官直接發(fā)生途徑外植體器官(不定芽)或器官間接發(fā)生途徑外植體愈傷組織 器官完成第4章 植物離體無(wú)性繁殖和脫毒技術(shù)離體無(wú)性繁殖(clonal propagation in vitro)又稱微繁殖(micropropagation)或離體快繁(rapid vegetative progagation),指利用組織培養(yǎng)方法進(jìn)行將優(yōu)良植株的莖尖、腋芽、葉片、鱗片等器官、組織和細(xì)胞進(jìn)行離體 ，在短期內(nèi)獲得大量遺傳性一致個(gè)體的方法。所獲得的株群稱單株無(wú)性系或單芽無(wú)性系1.

30、植物離體無(wú)性繁殖的概念、類型、程序答：離體無(wú)性繁殖又稱微繁殖或離體快繁指利用組織培養(yǎng)方法進(jìn)行將優(yōu)良植株的莖尖、腋芽、葉片、鱗片等器官、組織和細(xì)胞進(jìn)行離體，在短期內(nèi)獲得大量遺傳性一致個(gè)體的方法。所獲得的株群稱單株無(wú)性系或單芽無(wú)性系。離體無(wú)性繁殖的類型： 腋生枝型(腋芽萌發(fā))；不定芽型；原球莖型；體細(xì)胞胚型（前3個(gè)為器官發(fā)生型）程序：1.無(wú)菌培養(yǎng)物的建立 2.中間繁殖體的增殖； 3.完整植株的形成(生根培養(yǎng)）； 4.再生植物的馴化和移栽 ；5.再生植株的鑒定。2. 無(wú)性繁殖過程中三大問題產(chǎn)生的原因及防治方法答：三大問題：污染、褐變和玻璃化。（1）污染的途徑，主要是由外植體帶菌（主要原因）、培養(yǎng)基及

31、器皿滅菌不徹底或操作人員未遵守操作規(guī)程而引起；培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)室內(nèi)不潔凈，培養(yǎng)容器內(nèi)外氣體交換也會(huì)引起污染。防治方法：在建立培養(yǎng)體系時(shí)，對(duì)初期培養(yǎng)物要進(jìn)行嚴(yán)格審查，除去任何已污染的培養(yǎng)物。對(duì)那些緩慢生長(zhǎng)或難以直接觀察到的污染的檢測(cè)，可利用一些細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)基，通過微生物方法進(jìn)行檢測(cè)。通過采取外植體熱處理、取小的莖尖培養(yǎng)或使用抗生素等方法可以防止外植體帶菌引起的污染。（2）外植體褐變是指在接種后，其表面開始褐變，有時(shí)甚至?xí)拐麄€(gè)培養(yǎng)基褐變的現(xiàn)象。它的出現(xiàn)是由于植物組織中的多酚氧化酶被激活，而使細(xì)胞的代謝發(fā)生變化所致。褐變的避免方法：向培養(yǎng)基中添加抗氧化劑或吸附劑；用抗氧化劑溶液預(yù)處理外植體，或在抗氧

32、化劑溶液中切割、剝離外植體；將褐變外植體及時(shí)地轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上；將培養(yǎng)物置于相對(duì)較低溫度及黑暗或弱光條件下有助于減輕褐變。（3）培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)條件等多種因素對(duì)玻璃化苗的產(chǎn)生有重要影響。玻璃化避免方法：增加培養(yǎng)基中蔗糖和瓊脂的濃度或加入滲透劑，降低培養(yǎng)基滲透勢(shì)； 降低銨態(tài)氮、提高硝態(tài)氮的含量； 降低培養(yǎng)溫度，增加自然光照； 改善容器的氣體交換情況，降低容器內(nèi)的相對(duì)濕度； 在培養(yǎng)基中添加間苯三酚、根皮苷或生長(zhǎng)抑制劑等物質(zhì)； 降低培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素含量，可以考慮加入適量脫落酸，調(diào)整激素配比。3. 植物脫毒的方法及原理 （1）物理方法：熱處理法：依據(jù)病毒對(duì)高溫（3540）的敏感，寄主耐高溫。利用這

33、一差異，選擇適當(dāng)?shù)臏囟群吞幚頃r(shí)間，進(jìn)行高溫處理，就能使寄主體內(nèi)病毒濃度降低，傳遞速度減慢或失去活性，而寄主細(xì)胞仍然存活，并加快分裂和生長(zhǎng)。熱處理不能殺死病毒。只能鈍化病毒的活性，使病毒在植物體內(nèi)增殖減緩或增殖停止，而失去浸染能力。低溫處理法（2）化學(xué)方法（3）生物學(xué)方法1.莖尖分生組織培養(yǎng)：主要是利用病毒在植物體內(nèi)分布的不均勻性：植物體病毒的移動(dòng)主要靠2條途徑：一是通過維管系統(tǒng)，而分生組織中尚未形成維管系統(tǒng)；二是通過胞間連絲，但這條途徑病毒移動(dòng)速度非常慢，趕不上莖尖和根尖細(xì)胞不斷分裂和活躍的生長(zhǎng)速度。當(dāng)植物細(xì)胞分裂DNA復(fù)制時(shí)，病毒DNA隨著復(fù)制。因此，植物細(xì)胞分裂和病毒繁殖之間存在相互競(jìng)爭(zhēng)。

34、在旺盛分裂的分生組織中，代謝活動(dòng)很高，正常核蛋白合成占優(yōu)勢(shì)，使病毒無(wú)法進(jìn)行復(fù)制。莖尖中存在高水平內(nèi)源激素，可抑制病毒的增殖。在植物體內(nèi)存在有一種“病毒鈍化系統(tǒng)”，在分生組織中的活性最高，因而使分生組織不受侵染是一種將莖尖脫毒與嫁接結(jié)合的方法。微莖尖嫁接脫毒主要程序： 無(wú)菌砧木培養(yǎng)莖尖準(zhǔn)備嫁接嫁接苗培養(yǎng)移植 愈傷組織細(xì)胞帶病毒不均一，部分細(xì)胞不帶病毒。多次繼代的愈傷組織中病毒濃度下降。甚至檢測(cè)不出病毒。愈傷組織細(xì)胞生長(zhǎng)比病毒復(fù)制更迅速；愈傷組織細(xì)胞在增殖過程中發(fā)生了抗病毒突變。柑橘類多胚品種中除了一個(gè)受精胚以外，尚有多個(gè)由珠心細(xì)胞形成的無(wú)性胚，稱為珠心胚。珠心胚與維管束系統(tǒng)無(wú)聯(lián)系，因此由珠心胚產(chǎn)

35、生的植株全部均無(wú)病毒。但珠心胚 大多是不育的，必須分離培養(yǎng)才能發(fā)育成正常的幼苗。第五章 植物細(xì)胞培養(yǎng)和次生代謝產(chǎn)物生產(chǎn)答：分離：1)機(jī)械法：指通過機(jī)械磨碎、切割植物體從而獲得游離的單細(xì)胞。 優(yōu)點(diǎn)：細(xì)胞不受酶?jìng)Α?缺點(diǎn)：只適合于排列松散的薄壁細(xì)胞、效率低、產(chǎn)量少。 2）酶解法：指用專一的水解酶(纖維素酶、果膠酶、瓊脂酶等）在溫和條件下分解胞間層，分離細(xì)胞。優(yōu)點(diǎn)：最有效的一種方法。缺點(diǎn)：成本較高，酶對(duì)細(xì)胞有一定傷害。（1）（2）是從完整細(xì)胞中分離3） 由培養(yǎng)組織分離單細(xì)胞：指將愈傷組織反復(fù)繼代，再轉(zhuǎn)移至液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)。添加生長(zhǎng)素或酶有利。 培養(yǎng)：（1）平板培養(yǎng)法：指將一定量細(xì)胞接種到或混合到

36、一薄層固體培養(yǎng)基里進(jìn)行培養(yǎng)的方法。（2）看護(hù)培養(yǎng)：是指用一塊活躍生長(zhǎng)的愈傷組織來促進(jìn)培養(yǎng)細(xì)胞持續(xù)分裂和增殖的培養(yǎng)方法。（3）懸浮培養(yǎng)：指將細(xì)胞接種于液體培養(yǎng)基中，在保持良好的分散狀態(tài)下培養(yǎng)（4）微室培養(yǎng)：是指在人工制造的無(wú)菌小室中，將一滴懸浮細(xì)胞液培養(yǎng)在少量培養(yǎng)基上，使其分裂增殖形成細(xì)胞團(tuán)的方法。補(bǔ)充：飼養(yǎng)層培養(yǎng)：是用處理過的、無(wú)活性或分裂慢的細(xì)胞來飼養(yǎng)所需培養(yǎng)的細(xì)胞，使其分裂和生長(zhǎng)。液體淺層靜置培養(yǎng)法：指將一定密度的懸浮細(xì)胞放在培養(yǎng)皿中形成一淺薄層，封口靜止培養(yǎng)。該方法優(yōu)點(diǎn)：易于補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基，便于鏡檢2. 植板率植板率是能長(zhǎng)出細(xì)胞團(tuán)的單細(xì)胞在接種單細(xì)胞總和中所占的比例。3. 植物細(xì)胞大規(guī)模

37、培養(yǎng)的方法及其優(yōu)缺點(diǎn)主要有懸浮培養(yǎng)（成批培養(yǎng)、連續(xù)培養(yǎng)和半連續(xù)培養(yǎng)）和固定化培養(yǎng)（包埋法和吸附法）植物細(xì)胞大規(guī)模懸浮培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn) 1）可以增加培養(yǎng)細(xì)胞與培養(yǎng)液的接觸面，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)吸收。 2）可帶走培養(yǎng)物產(chǎn)生的有害代謝產(chǎn)物，避免高濃度積聚對(duì)細(xì)胞的傷害。 3）保證良好的混合狀態(tài)，從而獲得良好的氣體傳遞效果細(xì)胞固定化指將游離的細(xì)胞包埋在多糖或多聚化合物制備成的網(wǎng)狀支持物中，培養(yǎng)液呈流動(dòng)狀態(tài)，進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)的一種技術(shù)。優(yōu)點(diǎn)：1） 細(xì)胞生長(zhǎng)較慢，有利于次生代謝物的積累。2） 易控制化學(xué)環(huán)境、收獲次生代謝產(chǎn)物。3） 細(xì)胞經(jīng)包埋后受剪切力損傷小。4） 有利于進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)和生物轉(zhuǎn)化。4. 細(xì)胞株的指標(biāo)答：細(xì)胞株指標(biāo)

38、有 （1）分散性好，適合大規(guī)模懸浮培養(yǎng)。 （2）均一性好，細(xì)胞大小、生理狀態(tài)一致。 （3）生長(zhǎng)速度快，培養(yǎng)周期短，不易染菌。 （4）目標(biāo)產(chǎn)物含量高，容易分離提取。 （5）細(xì)胞遺傳穩(wěn)定。5. 影響次生代謝產(chǎn)物生產(chǎn)的影響和提高次生代謝產(chǎn)物生產(chǎn)效率的途徑與方法影響次級(jí)代謝產(chǎn)物的因素1)生物因素-細(xì)胞株、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞團(tuán)、生物合成機(jī)制2)化學(xué)因素：主要通過合適的培養(yǎng)基選擇來控制，包括營(yíng)養(yǎng)鹽、前體、誘導(dǎo)子（狹義誘導(dǎo)子和 廣義誘導(dǎo)子）、反饋抑制和調(diào)節(jié)因子等。3)物理因素：主要包括：光照、溫度、通氣、攪拌、pH值等4)工程技術(shù)問題：培養(yǎng)液的流變特性、氣體傳遞、攪拌與剪切力、泡沫與器壁表面粘附性培養(yǎng)設(shè)備：選擇

39、或設(shè)計(jì)合適的生物反應(yīng)器。 培養(yǎng)工藝：誘導(dǎo)子添加、前體喂養(yǎng)、添加競(jìng)爭(zhēng)途徑代謝產(chǎn)物抑制劑、培養(yǎng)條件（培養(yǎng)基、環(huán)境條件）優(yōu)化與控制、流加培養(yǎng)、起始材料的選擇。培養(yǎng)技術(shù)：固定化培養(yǎng)技術(shù)、兩相培養(yǎng)技術(shù)、兩步法培養(yǎng)（第1步細(xì)胞生長(zhǎng)；第2步產(chǎn)物積累）、毛狀根培養(yǎng)技術(shù)、冠癭培養(yǎng)技術(shù)、反義技術(shù)）。5.植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝物的基本程序： 誘導(dǎo)植物產(chǎn)生旺盛生長(zhǎng)的愈傷組織和懸浮細(xì)胞系； 篩選高產(chǎn)細(xì)胞系(株)； 在生物反應(yīng)器中進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，獲得所需次生代謝物；第六章 植物原生質(zhì)體培養(yǎng)和體細(xì)胞雜交原生質(zhì)體（protoplast）是指除去細(xì)胞壁后裸露的有生活力的原生質(zhì)團(tuán)。原生質(zhì)體的特性：去壁的原生質(zhì)體容易實(shí)現(xiàn)外

40、源遺傳物質(zhì)的導(dǎo)入和吸收。原生質(zhì)體具有細(xì)胞全能性。不同來源的原生質(zhì)體具有彼此融合的能力。答：原生質(zhì)體的純化方法有：1)過濾-離心法：利用比重原理，在具有一定滲透壓的溶液中，先進(jìn)行過濾然后低速離心，使純凈完整的原生質(zhì)體沉積于試管底部。優(yōu)缺點(diǎn)：純化原生質(zhì)體比較簡(jiǎn)單。由于原生質(zhì)體沉積于試管底部，造成相互 擠壓，常引起原生質(zhì)體的破碎。2)漂浮法：采用比原生質(zhì)體密度大的高滲溶液（蔗糖、Percoll、Ficoll），使原生質(zhì)體漂浮在液體表層的純化方法。優(yōu)點(diǎn)：(1)可以避免分離的原生質(zhì)體因震蕩被組織碎片撞擊而破損。(2) 所用藥品簡(jiǎn)單，成本低。缺點(diǎn)及補(bǔ)救措施：對(duì)離心力要求比較嚴(yán)格，掌握不好，原生質(zhì)體則不易漂

41、浮?？刹捎貌煌瑵舛群筒煌x心速度分次漂浮的方法。3）界面法：又稱不連續(xù)梯度法，采用兩種密度不同的溶液形成不連續(xù)梯度，通過離心使原生質(zhì)體與破損細(xì)胞分別處于不同液相中，從而純化原生質(zhì)體的方法。 優(yōu)點(diǎn)：可以收集到數(shù)量較大的純凈原生質(zhì)體，同時(shí)避免收集過程中原生質(zhì)體因相互擠壓而破碎。2.制備和培養(yǎng)原生質(zhì)體的步驟（不確定）答：3. 原生質(zhì)體融合的類型答：原生質(zhì)體融合的類型有 1)自發(fā)融合：同種細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)2個(gè)靠在一起的細(xì)胞自發(fā)合并，稱自發(fā)融合； 2)誘發(fā)融合：指將植物原生質(zhì)體制備出來后，再加入誘導(dǎo)劑或用其他方法促使兩親本原生質(zhì)體融合的方法。4.原生質(zhì)體融合有哪幾種方法？答：1)化學(xué)誘導(dǎo)融合：無(wú)機(jī)鹽誘導(dǎo)融合

42、法、高pH-高Ca2+誘導(dǎo)融合法、PEG誘導(dǎo)融合法、PEG-高pH-高Ca2+誘導(dǎo)融合法2)電誘導(dǎo)融合法：利用改變電場(chǎng)來誘導(dǎo)原生質(zhì)體彼此連接成串，再施以瞬間強(qiáng)脈沖使質(zhì)膜發(fā)生可逆性電擊穿而使原生質(zhì)體融合的方法。3)自發(fā)融合：同種細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)2個(gè)靠在一起的細(xì)胞自發(fā)合并，稱自發(fā)融合第七章 植物花藥和花粉培養(yǎng)及單倍體育種答：花藥培養(yǎng)(anther culture)：將發(fā)育到一定階段的花藥剝離下來(切去花絲部分)接種到培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，最終形成完整植株的過程。（屬于器官培養(yǎng)）花粉培養(yǎng)(pollen culture)：又稱小孢子培養(yǎng)(microspore culture)，或游離小孢子培養(yǎng)(isolated microspore culture)，是指在無(wú)菌條件下，將花粉從花藥中游離出來，使其分散或游離態(tài)，發(fā)育成單倍體植株的過程。（屬于細(xì)胞培養(yǎng)）兩者之間的異同：培養(yǎng)目的相同，均獲得小孢子植株?；ㄋ幣囵B(yǎng)其外植