山楂精降脂膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

1、山楂精降脂膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 作者：朱才慶 李艷 吳迪 何南生 曾憲儀 余華 【摘要】 目的以山楂對照藥材和熊果酸作為對照品，分別建立薄層色譜（TLC）鑒別和高效液相色譜（HPLC）法控制山楂精降脂膠囊的質(zhì)量。方法TLC鑒別用甲苯-醋酸乙酯-甲酸（20:4:0.5）為展開劑；HPLC法采用Alltima C18色譜柱（5 m，4.6 mm250 mn），用乙腈-甲醇-水-乙酸銨(70:16:14 :0.5)為流動(dòng)相，檢測波長220 nm；柱溫25；流速1.0 ml/min。結(jié)果TLC鑒別圖譜斑點(diǎn)清晰，陰性無干擾；熊果酸含量1.796 817.968 0 g范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，得回歸方程Y44

2、 820X+5 725.5，r=0.999 9，平均加樣回收率及RSD分別為101.17%和1.02%。結(jié)論以熊果酸為對照品，采用TLC法和HPLC法控制山楂精降脂膠囊質(zhì)量的方法簡便快速、準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好，專屬性強(qiáng)。 【關(guān)鍵詞】 山楂精降脂膠囊 薄層鑒別 高效液相色譜 熊果酸山楂精降脂膠囊是由山楂提取物制成的中藥單方制劑，是由山楂精降脂片經(jīng)劑型改變而來，功能與主治為降血脂，可用于治療高血脂癥，亦可作為冠心病和高血壓病的輔助治療1。文獻(xiàn)報(bào)道山楂主要含黃酮類有機(jī)酸和三萜類等有效成分，其中金絲桃苷、熊果酸是山楂中黃酮和三萜類物質(zhì)的主要成分2，3。研究表明黃酮類成分具有降壓、增加冠脈血流量、降血脂、

3、強(qiáng)心和抗心律失常的藥理作用，而三萜類成分有降低高脂模型小鼠血脂的作用47。原標(biāo)準(zhǔn)只有理化鑒別和UV法測定總黃酮的含量，專屬性不強(qiáng)。為了提高產(chǎn)品的質(zhì)量可控性，以山楂對照藥材及熊果酸對照品為對照，探討TLC鑒別和HPLC法測定熊果酸含量的質(zhì)量控制法。 1 器材 1.1 儀器 高效液相色譜儀(大連依利特分析儀器有限公司)：P200 II型高壓恒流泵，UV200 II 紫外可變波長檢測儀，Rheodyne 7725i 高壓六通進(jìn)樣閥，20 l定量環(huán)；HW色譜工作站（南京千譜軟件有限公司）；百萬分之一電子天平（瑞士Mettler公司M3型）。 1.2 試藥 山楂精降脂膠囊（由本實(shí)驗(yàn)室自制）；山楂對照藥材

4、(中國藥品生物制品檢定所，批號：121138-200403)；熊果酸對照品（供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所，批號:110742-200415）；乙腈、甲醇為色譜純（中國醫(yī)藥集體上?；瘜W(xué)試劑公司）；水為自制的重蒸水，其余試劑均為分析純。 2 方法與結(jié)果 2.1 山楂的薄層鑒別取山楂精降脂膠囊4粒，傾出內(nèi)容物，加甲醇25 ml，超聲30min，濾過，濾液濃縮至2 ml，作為供試品溶液；另取山楂對照藥材1 g，加70乙醇25 ml，回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀? ml溶解并加鹽酸5 ml（6 mol/L），水浴水解30 min，抽濾，濾液棄去，濾渣加水洗至洗滌液呈中性,濾渣連同濾

5、紙80干燥后，加甲醇25 ml，超聲提取30 min，濾過，濾液濃縮至1 ml，作為對照藥材溶液。取熊果酸對照品，加甲醇制成每1毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法8試驗(yàn)，吸取供試品溶液5 l、對照藥材溶液510 l、對照品溶液4 l，分別點(diǎn)于同一含0.2%羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（2040.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10硫酸乙醇試液，105加熱數(shù)分鐘。供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。見圖1。 1,2,3.供試品 4.山楂對照藥材 5.熊果酸對照品 6.陰性對照 圖1 山楂精降脂膠囊薄層鑒別 2

6、.2 熊果酸的含量測定 2.2.1 色譜條件 色譜柱為Alltima 5U C18（5 m，4.6 mm250 mn）；流動(dòng)相為乙腈-甲醇-水-乙酸銨(70:16:14 :0.5)；使用前用孔徑為0.45 m的有機(jī)濾膜減壓過濾，超聲20 min；檢測波長220 nm，柱溫25 ，流速1 ml/min；進(jìn)樣量20 l。 2.2.2 可行性試驗(yàn) 精密稱取熊果酸對照品適量，置棕色量瓶中，加甲醇制成每毫升含熊果酸約400 g的溶液，即得，作為對照品溶液。取本品20粒，傾出內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量（約0.5 g）置50 ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 ml，稱定重量，超聲處理40 min，取出

7、，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得，作為供試品溶液。分別取熊果酸對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見圖24，從圖24中可知熊果酸保留時(shí)間為15.8 min左右，陰性對照在相應(yīng)的位置處無干擾峰，說明本品在上述色譜條件下熊果酸與其它組分分離較好。理論板數(shù)以熊果酸計(jì)算不低于3 000。 2.2.3 線性關(guān)系考察 精密稱取熊果酸對照品22.460 mg，置25 ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得0.8984 mg/ml的對照品溶液。分別精密量取上述對照品溶液1，2，4，6，8 ml至10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻

8、，即得不同濃度的對照品溶液。分別吸取上述各對照品溶液及母液各20l注入色譜儀，測定其峰面積，以熊果酸對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明在1.796 817.968 0 g范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=44 820X+5 725.5，r=0.999 9（n=5）。百事通 2.2.4 樣品超聲時(shí)間考察 取裝量差異下的內(nèi)容物約0.5 g，精密稱定，稱取4份，分別置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，稱定重量，分別超聲20，30，40，50 min250W，（26.51）kHz，放冷，再稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾

9、液，即得。依上方法測定，結(jié)果表明超聲20，30，40，50 min的熊果酸含量分別為18.998 6，19.304 7，19.992 8，19.454 4 mg/g，可知樣品超聲提取40 min即可。 2.2.5 精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取對照品溶液20 l，重復(fù)進(jìn)樣6次，求得熊果酸峰面積積分值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.0%。 2.2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取20 l供試品溶液，以第1次進(jìn)針為0 h，分別在0，1，2，4，8，12 h進(jìn)針，測定其中熊果酸峰面積積分值，結(jié)果表明樣品在12 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為1.8。 2.2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 按樣品測定項(xiàng)下方法，取同一批號山楂精降脂膠囊樣品6份, 精密稱定

10、，按供試品制備方法制備供試品溶液，照上述測試方法實(shí)驗(yàn)，6個(gè)實(shí)驗(yàn)樣本平均含量為16.797 5 mg/g，RSD為2.3，結(jié)果表明本法的重復(fù)性很好。 2.2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)取本品已知含量，同一批號（批號：20040701）樣品共6份，每份約0.25 g，精密稱定，精密加入一定量熊果酸溶液，照上述供試品制備方法制備供試品溶液，按含量測定方法測定熊果酸含量（見表1）。結(jié)果表明本法回收率較高，方法可行。表1 山楂精降脂膠囊的熊果酸含量測定加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果 回收率（%）=實(shí)測量-樣品中的量對照品加入量100% 2.2.9 樣品測定 按上述方法制備供試品溶液和對照品溶液，分別精密吸取對照品溶液和供試品

11、溶液各20 l，依上述色譜條件測定，計(jì)算1粒（0.15 g/粒）毛冬青膠囊中原兒茶醛含量，先后測定了10批樣品，每批測2次，結(jié)果見表2。依據(jù)測定的結(jié)果暫定本品每粒含山楂以熊果酸（C30H48O3）計(jì)不得少于2.3 mg。 表2 山楂精降脂膠囊樣品的熊果酸含量測定結(jié)果 3 討論 山楂精降脂膠囊是由山楂藥材提取物組成的單方制劑。山楂中含有山楂酸、酒石酸、胡蘿卜素、維生素B1、維生素B2、維生素C、黃酮類、內(nèi)酯、糖類及苷類、有機(jī)酸、鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)、脂肪、鈣、磷、鐵等。迄今為止，國內(nèi)外學(xué)者從山楂中已分離得到槲皮素、金絲桃苷、蘆丁等。原片劑標(biāo)準(zhǔn)中有兩個(gè)理化鑒別和1個(gè)含量測定指標(biāo)（以槲皮素為對照品，運(yùn)用UV

12、法進(jìn)行總黃酮的含量測定），理化鑒別由于專屬性不強(qiáng)而被刪去，而總黃酮含量在山楂提取物原料中已控制，制劑中再控制同一指標(biāo)意義不大，且供試品處理方法繁瑣，故在新制劑中未采用該法。山楂中有機(jī)酸類含有熊果酸，它有抗腫瘤、抗菌、抗病毒、保肝、降血脂等作用，選擇其作為控制質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的指標(biāo)之一，具有一定的實(shí)際意義。因此，本研究中選用熊果酸對照品和山楂對照藥材為對照，新建立了制劑薄層鑒別，彩照斑點(diǎn)清晰，陰性無干擾，與理化鑒別相比，專屬性大大增加，提高了制劑質(zhì)量的可控性。結(jié)合本制劑的實(shí)際情況，通過對流動(dòng)相不斷摸索，采用高效液相色譜法測定制劑中熊果酸的含量，取得成功，方法簡便可行，準(zhǔn)確可靠，使制劑的質(zhì)量更加可控?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)?中藥成方制劑,第9冊S.2 石巖鵬, 丁杏苞. 山楂化學(xué)成分的研究J. 中草藥, 2000, 31 (3) :173.3 孫敬勇, 楊書斌, 謝鴻霞, 等.山楂化學(xué)成分研究J. 中草藥, 2002, 33(6):483.4 羅玉梅, 王賀振. 山楂的化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展J. 時(shí)珍國醫(yī)國藥, 2004, 15(1):53.5 王