醫(yī)學檢驗畢業(yè)論文正稿

1、體臣衛(wèi)校體臣衛(wèi)校畢業(yè)論文畢業(yè)論文題目題目三種肺炎支原體檢測法三種肺炎支原體檢測法的臨床應用分析的臨床應用分析地地 市市: : 市市 學學 校校: : 體臣衛(wèi)校體臣衛(wèi)校 號號: :考生考生: : 陸施燕陸施燕 指導老師指導老師: :20152015 年年 5 5 月月 2424 日日2 / 11三種肺炎支原體檢測法的臨床應用分析三種肺炎支原體檢測法的臨床應用分析摘摘 要要目的目的 探討肺炎支原體（探討肺炎支原體（MPMP）咽拭子快速液體培養(yǎng)法、咽拭子聚合酶鏈反應）咽拭子快速液體培養(yǎng)法、咽拭子聚合酶鏈反應（PCRPCR）法和血清）法和血清 MPMP 被動凝集法（被動凝集法（MP-AbMP-Ab）等

2、方法在兒童）等方法在兒童 MPMP 感染診斷治療過程感染診斷治療過程中的敏感性方法中的敏感性方法 采用采用 3MP3MP 檢測法對檢測法對 362362 例臨床擬診呼吸道（非細菌性）感染的例臨床擬診呼吸道（非細菌性）感染的患兒的咽拭子和血清標本進行配對研究，每患兒取咽拭子做快速培養(yǎng)和患兒的咽拭子和血清標本進行配對研究，每患兒取咽拭子做快速培養(yǎng)和 PCRPCR，同時取血清做同時取血清做 MP-AbMP-Ab 檢測，對檢測，對 3 3 種方法的檢測結(jié)果與臨床診斷治療病例進行回種方法的檢測結(jié)果與臨床診斷治療病例進行回顧性分析。結(jié)果顧性分析。結(jié)果 回顧臨床病例診斷回顧臨床病例診斷 MPMP 感染患兒感

3、染患兒 152152 例。例。MPMP 快速培養(yǎng)法檢出陽快速培養(yǎng)法檢出陽性性 7878 例，陽性率為例，陽性率為 51.3%51.3%，病程為（，病程為（4.52.64.52.6）天；）天；PCRPCR 法檢測出陽性法檢測出陽性 103103 例，例，陽性率為陽性率為 67.8%67.8%，病程為（，病程為（6.23.56.23.5）天；）天；MP-AbMP-Ab 法檢測出陽性法檢測出陽性 127127 例，陽性率例，陽性率83.5%83.5%，病程（，病程（8.14.58.14.5）天。結(jié)論）天。結(jié)論 3 3 種種 MPMP 檢測法的敏感性與病程有相關(guān)性，檢測法的敏感性與病程有相關(guān)性，臨床醫(yī)

4、生應根據(jù)患兒病程選取檢測方法，以提高陽性檢出率和敏感性。臨床醫(yī)生應根據(jù)患兒病程選取檢測方法，以提高陽性檢出率和敏感性。 關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞 肺炎支原體，快速培養(yǎng)法，咽拭子聚合酶鏈反應，血清抗體，配對肺炎支原體，快速培養(yǎng)法，咽拭子聚合酶鏈反應，血清抗體，配對研究研究3 / 11目目 錄錄前言前言 5第一章第一章 文獻綜述文獻綜述 61.1 肺炎支原體的定義 61.2 肺炎支原體的發(fā)病機制 61.3 肺炎支原體的分類 61.4 肺炎支原體的臨床表現(xiàn) 61.5 肺炎支原體的臨床診斷 71.6 肺炎支原體的實驗室檢查 7第二章材料和方法第二章材料和方法 82.1 樣本 82.2 方法概述 82.3 臨床診斷

5、 MP 感染的診斷標準 82.4 實驗方法 92.5 統(tǒng)計學方法.9第三章結(jié)果第三章結(jié)果 10第四章討論第四章討論 114 / 11結(jié)論結(jié)論 12參考文獻參考文獻 12致致 1313附錄附錄 1414。5 / 11前前 言言肺炎支原體（mycoplasma pneumoniae,MP）是嬰幼兒、青少年急道感染的主要病原體之，臨床上表現(xiàn)為呼吸道感染綜合征，其中約 3%10%可發(fā)展為支原體肺炎。但只根據(jù)臨床癥狀很難鑒別由 MP 或病毒、細菌等病原體引起的兒童呼吸道感染，給臨床治療帶來一定的困難。筆者采用 3 種 MP 檢測法對 362 例臨床擬診為呼吸道（非細菌性）感染患兒的咽拭子和血清標本進行配

6、對研究，通過病例回顧來探索對支原體肺炎敏感的實驗室診斷方法，以協(xié)助臨床準確做出診治。6 / 11第一章第一章 文獻綜述文獻綜述1.1 肺炎支原體的定義小兒肺炎支原體肺炎多見于 515 歲兒童，嬰幼兒患病常表現(xiàn)為毛細支氣管炎。多數(shù)為亞急性起病，發(fā)熱無定型，或體溫正常，咳嗽較重，初期為刺激性干咳，常有咽痛，頭痛等癥狀。X 線改變明顯，多為單側(cè)病變，也可見雙側(cè)病變，以下葉為多見，有時病灶呈游走性，少數(shù)呈大葉性陰影；病程 23 周不等，X 線陰影完全消失比癥狀消退更延長 23 周之久，偶有延長至 6 周者。 1.2 肺炎支原體的發(fā)病機制肺炎支原體肺炎（Mycoplasma Pneumoniae Pne

7、umonia，MPP）的發(fā)病機制仍不十分清楚，目前主要有呼吸道上皮吸附作用、MP 直接侵入和免疫學發(fā)病機制等學說，其中免疫調(diào)節(jié)異常在 MPP 的發(fā)生發(fā)展中可能起重要作用 1.3 肺炎支原體的臨床表現(xiàn)1. 多數(shù)為亞急性起病，發(fā)熱無定型，或體溫正常，咳嗽較重，初期為刺激性干咳，常有咽痛，頭痛等癥狀。2. 可出現(xiàn)多系統(tǒng)多器官的損害，皮膚粘膜表現(xiàn)為麻疹樣或猩紅熱樣皮疹；偶見非特異性肌痛和游走性關(guān)節(jié)痛；也有表現(xiàn)心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)損害、血尿與溶血性貧血等。3. 全身癥狀比胸部體征明顯。體檢肺部體征不明顯，偶有呼吸音稍低與少許干濕羅音者 1.4 肺炎支原體的臨床診斷病原學診斷 肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)法優(yōu)于

8、被動凝集法，在肺炎支原體肺炎感染的早期可提供重要的依據(jù)，可做為臨床診斷 MP 感染的優(yōu)先試驗8；氣管肺泡灌洗液MP-DNA 測定不僅能診斷 MP 感染,且支氣管肺泡灌洗術(shù)可促進呼吸道癥狀的改善與體征恢復，且通過纖維支氣管鏡收集支氣管肺泡灌洗液 MP-DNA，痰液 MP-DNA與血清 MP 抗體檢測陽性率沒有差異。CRP 的檢測是肺炎病原體的輔助診斷方法，一定程度可區(qū)分細菌性肺炎和支原體肺炎。聚合酶鏈反應(PCR)技術(shù)檢測 MP 具有可靠、特異性高的特點，逐漸成為早期特異診斷的有力武器。1.5 肺炎支原體的實驗室檢查7 / 11急性期 MPP 患兒血清 hs-CRP、C3、CA、IgM、IgG

9、明顯升高，IgA 明顯降低；而恢復期 hs-CR、IgG 仍然較高，而 IgM 和 IgA 均沒有明顯變化，補體 C3、C4 在恢復期也沒有明顯變化，因此血清 C-反應蛋白、免疫球蛋白和血清補體的監(jiān)測對診斷急性期或恢復期 MPP 有重要意義。MP-IgM 和冷凝集試驗同時檢測可提高小兒支原體肺炎實驗診斷的準確率；支原體肺炎患兒外周血白細胞大多正常占80%，中性粒細胞增高占 61%；65.6%患兒 C-反應蛋白增高；53.6%患兒血沉增快；58.4%患兒心肌酶譜增高；24.0%患兒肝酶增高；16.8%患兒尿酸增高。5 流行病學特點與進展 MP 肺炎發(fā)生率約為 22.3%，912 歲感染率最低,3

10、6 歲最高,1012 月是發(fā)病高峰月,小兒支原休肺炎發(fā)病率有所上升,發(fā)病年齡有趨小傾向,秋冬季發(fā)病率高,肺炎支原體只要通過呼吸道進行傳播，尤其發(fā)病率較高的地區(qū)，局部區(qū)域每隔 3-5 年可發(fā)生一次肺炎支原體感染，每 2-6 年可發(fā)生一次大圍的肺炎支原體感染，每次感染的時間都持續(xù)較長，有的感染可持續(xù)一年左右，因此，有關(guān)部門一定要采取相應的預防措施，切斷呼吸道飛沫傳播途徑對控制疾病發(fā)生和流行具有重大意義?？刂浦гw感染的發(fā)生和流行。第二章第二章 材料和方法材料和方法2.1 樣本 收集黃河中心醫(yī)院檢驗科 2013 年 1 月 1 日8 月 6 日在兒科就診住院患兒病例，有呼吸道感染癥狀，已經(jīng)初診為非細

11、菌性感染的患兒 362 例作為研究對象，其中男 175 例，女 187 例；年齡為 2 個月12 歲，病程為 190 天。2.2 方法 具體方法有：（1）用 MP 快速培養(yǎng)法、PCR 法和 MP-Ab 法等 3 種 MP 檢測法對 362 例研究對象同時進行檢測，記錄結(jié)果。 （2）通過研究對象病歷回顧統(tǒng)計MP 感染的例數(shù)，并按年齡、病程和 3 種 MP 檢測法結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。2.3 臨床診斷 MP 感染的診斷標準8 / 11 按文獻1 、臨床癥狀、體征標準，包括回顧性診斷即患兒經(jīng)紅霉素治療有效，經(jīng)青霉素、頭孢菌素治療無效者等；以與實驗室檢查 3 種檢測法至少有一種陽性。病程計算方法：以病歷

12、本記錄為準，即在患兒開始有癥狀或體征時開始計算，到患兒來就診檢測時為止進行計算。2.4 MP 快速培養(yǎng)法支原體分離鑒別培養(yǎng)液由市浪峰生物技術(shù)提供。清晨患兒未洗漱用咽拭子取咽部分泌物，嚴格按說明書進行，將咽拭子用無菌生理鹽水處理，接種到預溫的培養(yǎng)基中，37 培養(yǎng)；培養(yǎng)基液體顏色由紫紅色變?yōu)椴菥G色或嫩綠色且清亮，并且在靜置時，瓶底有藍色顆?；蛭镔|(zhì)沉淀為陽性， 5 天后培養(yǎng)基顏色不變或無藍色顆粒或物質(zhì)沉淀為陰性。PCR 法：試劑由大學達安基因股份提供。應用PCR 法檢測 MP-DNA，嚴格按試劑盒說明書進行，以在紫外燈下出現(xiàn)180 bp 擴增帶結(jié)果判為陽性。每次試驗均設(shè)陽性、陰性對照（陽性對照為MP

13、 質(zhì)粒，陰性對照為無菌生理鹽水），由專人進行操作，質(zhì)量控制。MP-Ab 法：試劑為日本瑞必歐株式會社MP-Ab 檢測試劑 SERODIA-MYCO凝集試驗試劑盒，嚴格按試劑盒說明書操作，抽取患兒靜脈血3 ml，采用明膠顆粒被動凝集法，用血清檢測，結(jié)果以140 判斷為陽性。每次試驗均設(shè)未致敏明膠顆粒、致敏明膠顆粒和陽性、陰性血清進行測定。2.5 統(tǒng)計學方法計量資料用均數(shù)標準差（xs）表示，各年齡組與 3 種檢測方法結(jié)果比較用 Spearman 檢驗；各年齡組間確診病例的陽性率比較用 2 檢驗；3 種檢測方法陽性結(jié)果與病程之間的比較用 q 檢驗。9 / 11第三章第三章 結(jié)果結(jié)果3.1 陽性樣本經(jīng)

14、過回顧性診斷，在配對研究組 362 例研究對象中有 152 例符合 MP 感染的診斷標準，即有 152 例確診病例，其中肺炎 45 例，支氣管炎 56 例，上呼吸感染 49 例，支氣管哮喘 2 例。MP 快速培養(yǎng)法檢測出 78 例陽性，PCR 法檢測出103 例陽性，MP-Ab 法檢測出 127 例陽性。3.2 結(jié)果分析 各確診病例的年齡分布，見表 1。表 1 顯示兒童 MP 感染的年齡以 34歲年齡段的病例最多，為 46 例，陽性率最高，為 70.77%，與其余年齡組段比較 P0.05。不同病程患兒 3 種檢測法的檢測結(jié)果，見表 2，表 2顯示 MP 快速培養(yǎng)法為陽性的患兒病程均值較短為（4

15、.52.6）天，PCR 法為陽性的患兒病程均值為（6.23.5）天，MP-Ab 法為陽性的患兒病程均值較長為（8.14.5）天。3 組之間兩兩比較，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05） 。表 1 不同年齡組 MP 感染確診病例和 3 種檢測方法結(jié)果對比分析注：代表與年齡組34 歲組段比較結(jié)果表 2 不同病程患兒 3 種檢測方法陽性結(jié)果對比分析注：代表三組之間的兩兩比較第四章第四章 討論討論 MP 感染的臨床表現(xiàn)常無特異性，臨床的實際工作中，容易與一般病毒性感冒相混淆。在臨床上患兒有下列癥狀：（1）發(fā)熱呈弛熱或不規(guī)則熱。刺激性咳嗽非膿性痰，偶帶血絲。 （2）可有咽痛、頭痛、胸痛，全身癥狀比體征明顯。（

16、3）肺部體征不典型而胸片炎癥顯著，可見云霧狀大片陰影。 （4）WBC 正?；蛏摺?（5）青霉素類、磺胺類抗生素治療無效，改用或一開始用大環(huán)酯類抗生素有效。 （6）實驗室 MP 檢驗有 1 項或 1 項以上陽性具備以上 2 個條件或以上者可初步診斷為 MP 感染。多時候，臨床醫(yī)生為了盡快緩解患兒的癥狀，需根據(jù)患兒的癥狀、體征和病史做 MP 感染的診斷性治療，但應與肺結(jié)核相互鑒別。2 2 近年來由于診斷技術(shù)的提高，MP 感染報道日漸增多，一般認為 MP 感染以年10 / 11長兒發(fā)病較多，本文表 1 資料顯示，28 歲年齡段是發(fā)病的高峰期2 。占同期呼吸免疫科住院患兒的 9.3%，比有關(guān)文獻報道

17、各年齡組支原體肺炎占肺炎發(fā)病的 10%20%低。說明 MP 感染的發(fā)病年齡有提前，且年齡越小，臨床表現(xiàn)愈不典型。3 3臨床實驗室檢測 MP 的方法很多，過去所用的冷凝集試驗法診斷 MP 感染缺乏特異性，敏感性也差，易受病程的影響3 。本文采用配對資料研究，對疑為MP 感染的患兒進行 3 種 MP 檢測法，以探討 MP 快速培養(yǎng)法、PCR 法和 MP-Ab 法等方法在兒童支原體肺炎診斷治療過程中的敏感性。提示臨床醫(yī)生根據(jù)患兒不同的病程選取不同的檢測方法，以提高實驗室的陽性檢出率。4 4 MP 快速培養(yǎng)法是利用 MP 生長代產(chǎn)物使培養(yǎng)基液體中指示劑顏色發(fā)生改變來判斷 MP 生長；標本中的其他支原體

18、和細菌則因培養(yǎng)基中加入了青霉素和醋酸陀均被抑制。該法陽性結(jié)果可 48 h 檢出。結(jié)果顯示，培養(yǎng)法陽性率為51.3%（78/152） ，低于另外兩種方法的陽性率?？赡芘c在檢測前患兒已經(jīng)用了MP 敏感藥物有關(guān)。表 2 結(jié)果顯示，該法陽性病例病程最短。提示病程時間較短的患兒選擇此方法對檢測的陽性率較高。MP 培養(yǎng)是診斷 MP 的金標準4 。5 5 咽拭子 PCR 法檢測質(zhì)粒核酸，該法快速、敏感和特異，通過一技術(shù)可從患兒痰中檢測 MP-DNA。由于此方法相當敏感，易受污染，故實驗室操作時應特別小心。統(tǒng)計結(jié)果顯示，該法的陽性率為 67.76%（103/152） ，高于快培法。此法彌補了極微量的和被藥物殺死的 MP 不能通過快速培養(yǎng)法檢出的病例。表 2 結(jié)果顯示，該法陽性病例，病程為（6.23.5）天。詳細資料顯示，有病程在 30 天以上的患兒經(jīng)抗 MP 治療，該法仍可為陽性，說明 MP 的生存力相當強，要系統(tǒng)化治療。 血清 MP-Ab 法陽性率是 3 種檢測方法中最高