大腸埃希菌的檢測

1、幻燈片1大腸埃希菌的檢測Error! Reference source not found.幻燈片7甲基傘形酮葡糖苷酸(MUG)培養(yǎng)基l 胨10.0g  硫酸錳0.5mgl 硫酸鋅0.5mg  硫酸鎂0.1g l 氯化鈉5.0g   氯化鈣50.0mg  l 磷酸二氫鉀0.9g  磷酸氫二鈉6.2g l 亞硫酸鈉40.0mg  去氧膽酸鈉1.0g  l MUG 75mg 水1000mLl 除MUG外，取上述成分，混合。微溫溶解，調(diào)節(jié)PH7.2-7.4，加入MUG，溶

2、解，每管分裝5mL，滅菌。幻燈片8實驗步驟：l 取供試供試液1mL，直接或處理后接種在制好的100mL膽鹽乳糖培養(yǎng)基中,在37恒溫箱中培養(yǎng)1824 h，進(jìn)行增菌培養(yǎng)。l 取上述培養(yǎng)物0.2mL,接種至含5mL MUG培養(yǎng)基的試管內(nèi)培養(yǎng)，于5小時，24小時在366nm紫外燈光下觀察，同時用未接種的MUG培養(yǎng)基做本底對照。l 若管內(nèi)培養(yǎng)物呈現(xiàn)熒光，為MUG陽性，不呈現(xiàn)熒光，則為MUG陰性。幻燈片9l 觀察后，沿著培養(yǎng)管的管壁加入數(shù)滴靛基質(zhì)試液，葉面呈玫瑰紅色，為靛基質(zhì)陽性，呈試劑本色，為靛基質(zhì)陰性。l 本底對照應(yīng)為MUG陰性和靛基質(zhì)陰性。l 靛基質(zhì)實驗原理l 某些細(xì)菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲

3、哚。吲哚的存在可用顯色反應(yīng)表現(xiàn)出來。吲哚與對二甲基氨基苯醛結(jié)合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。l幻燈片10伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）l     蛋白胨水瓊脂培養(yǎng)基100ml，20%乳糖溶液2ml，2%伊紅水溶液2ml，0.5%美藍(lán)水溶液1ml，將已滅菌的蛋白胨水瓊脂培養(yǎng)基（pH7.6）加熱溶化，冷卻至60左右時，再把已滅菌的乳糖溶液，伊紅水溶液及美藍(lán)溶液按上述量以無菌操作加入。搖勻后，立即倒平板。乳糖在高溫滅菌易被破壞必須嚴(yán)格控制滅菌溫度，115滅菌20min?；脽羝?1結(jié)果分析：l 1.MUG、靛基質(zhì)結(jié)果判斷l(xiāng) MUG培養(yǎng)結(jié)果：在366nm紫外線下觀

4、察l 靛基質(zhì)結(jié)果：液面呈玫瑰紅色，為靛基質(zhì)陽性；呈試液本色，為靛基質(zhì)陰性l MUG陽性、靛基質(zhì)陽性，判檢出大腸桿菌； l MUG陰性、靛基質(zhì)陰性，判未檢出大腸桿菌；l MUG陽性、靛基質(zhì)陰性或MUG陰性、靛基質(zhì)陽性，需進(jìn)一步做以下檢查l幻燈片12l 2。EMB培養(yǎng)結(jié)果判斷l(xiāng) EMB培養(yǎng)18-24h后，檢查有無疑似大腸埃希菌菌落（大腸埃希菌落形態(tài)特征見表），若無，判供試品未檢出大腸埃希菌；若有，進(jìn)一步做以下試驗大腸埃希菌落形態(tài)特征l培養(yǎng)基菌落形態(tài)EMB呈紫黑色、淺紫色、籃紫色或粉紅色，菌落中心呈深紫色或無明顯暗色中心，圓形，微突起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤，常有金屬光澤?；脽羝?3l 檢驗依據(jù)： 2010年版«中國藥典»二部附錄J 微生物限度檢查法檢驗標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：口服制劑細(xì)菌數(shù)1g不得超過1000個；1ml不得超過100個。霉菌及酵母菌數(shù)1g不得超過100個?？刂凭?g（1ml）不得檢出大腸埃希菌?；脽羝?4注意事項l 1實訓(xùn)過程要嚴(yán)格無菌操作。l 2供試液稀釋及注入培養(yǎng)皿時應(yīng)搖勻再取，供試液從制備至加入培養(yǎng)基不得超過1h.l 3配制MUG培養(yǎng)基時，務(wù)必調(diào)pH，否則pH偏高，MUG分解，本身則顯熒光。l 4.培養(yǎng)時間：供試品培養(yǎng)液接種于MUG培養(yǎng)