島津LC-20A型高效液相色譜儀操作規(guī)程——相關(guān)操作

1、島津LC-20A型高效液相色譜儀操作規(guī)程1實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備1.1準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相，自動(dòng)進(jìn)樣器用的清洗液（甲醇-水50:50），用合適的有機(jī)濾膜（0.45 m）濾過。流動(dòng)相裝入溶劑儲(chǔ)液瓶，確認(rèn)吸濾頭已置于液面以下。1.2配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用合適的濾膜(0.45 m)濾過。1.3根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的洗脫柱（連接時(shí)注意方向）。2開機(jī)2.1接通電源，打開輸液泵（脫氣機(jī)自動(dòng)打開）、檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱，順序無關(guān)緊要；等待各儀器單元的指示燈變?yōu)榫G色時(shí)進(jìn)行下一步操作。2.2 打開電腦，雙擊桌面“LCsolution”圖標(biāo)，單擊“儀器1”，彈出“登錄”窗口，單擊“確認(rèn)”，聽到兩聲蜂鳴，表示LCs

2、olution色譜工作站與儀器聯(lián)機(jī)正常。2.3在LCSolution工作站 “儀器參數(shù)視圖”中“自動(dòng)排氣”項(xiàng)進(jìn)行排氣時(shí)間設(shè)置，對(duì)輸液泵及自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)行必要的Purge操作，排出相應(yīng)流路中的氣泡；檢查輸液泵在動(dòng)作前的壓力顯示值，必要時(shí)對(duì)此壓力進(jìn)行調(diào)零。3參數(shù)設(shè)定點(diǎn)擊“儀器參數(shù)視圖”進(jìn)入儀器參數(shù)設(shè)置界面：選中“正?！被颉案呒?jí)”項(xiàng)，分別設(shè)定“數(shù)據(jù)采集”、“LC時(shí)間程序”、“檢測(cè)器A”、“柱溫箱”、“控制器”、“自動(dòng)進(jìn)樣器”等參數(shù)。3.1“泵”參數(shù)：“模式”控制送液模式，“泵A總流速”設(shè)定流速，“溶劑B（C、D）濃度”為各相所占百分比，“壓力限制（泵A）” 設(shè)置系統(tǒng)所能承受的壓力范圍，通常將“最大值”

3、設(shè)置為18.0，“最小值”設(shè)為0。3.2“柱溫箱”參數(shù)：若使用柱溫箱，則選中“啟用柱溫箱”復(fù)選框，在“柱溫箱溫度”設(shè)定柱溫，“最高溫度”設(shè)定最高保護(hù)溫度（通常默認(rèn)85）。3.3“檢測(cè)器A”參數(shù)：“燈”項(xiàng)選“D2”表示將燈打開，選“關(guān)”則氘燈關(guān)閉；“波長(zhǎng)通道1（1）”處設(shè)置檢測(cè)波長(zhǎng)；其余保持默認(rèn)值。3.4 “數(shù)據(jù)采集”參數(shù)：選中“采集時(shí)間（檢測(cè)器A）” 復(fù)選框，設(shè)置數(shù)據(jù)采集的“開始時(shí)間”和“結(jié)束時(shí)間”。3.5 “LC時(shí)間程序”參數(shù)：如采用梯度洗脫方式，則須編輯泵梯度洗脫程序，也可以通過時(shí)間程序控制柱溫箱溫度，檢測(cè)波長(zhǎng)等參數(shù)。3.6 *參數(shù)設(shè)定完畢，點(diǎn)擊主菜單中“文件”下的下拉菜單“另存方法文件為

4、”保存方法文件。點(diǎn)擊“下載”傳送參數(shù)。4數(shù)據(jù)采集方法編輯點(diǎn)擊“數(shù)據(jù)采集”進(jìn)入采集數(shù)據(jù)編輯方法界面；點(diǎn)擊主菜單“方法”下的“數(shù)據(jù)分析參數(shù)（檢測(cè)器A）”編輯數(shù)據(jù)分析參數(shù)，設(shè)置“半峰寬”、“斜率”、“最小峰面積”等數(shù)據(jù)積分參數(shù)。保存方法：點(diǎn)擊主菜單中“文件”下的下拉菜單“另存方法文件 ”保存數(shù)據(jù)分析參數(shù)。 5平衡系統(tǒng)點(diǎn)擊“儀器開/關(guān)”（此時(shí)“泵開/關(guān)”同時(shí)開啟），使儀器處于開啟狀態(tài)。系統(tǒng)開始運(yùn)行，檢查各單元參數(shù)應(yīng)與方法設(shè)定一致，等待系統(tǒng)平衡。一般情況下，由于流動(dòng)相不同，交換平衡時(shí)間不同?？梢杂^察檢測(cè)器輸出信號(hào)變化，如果輸出信號(hào)穩(wěn)定不變，即認(rèn)為接近平衡，可以調(diào)零等待，待基線平穩(wěn)，壓力穩(wěn)定，系統(tǒng)平衡后，

5、準(zhǔn)備進(jìn)樣分析。6進(jìn)樣分析6.1 單針進(jìn)樣分析：點(diǎn)擊“單次運(yùn)行”圖標(biāo)編輯樣品參數(shù)：如“樣品名”、“樣品ID”等樣品信息；在“方法文件”項(xiàng)調(diào)用本次分析的方法文件名，在“數(shù)據(jù)文件”項(xiàng)選擇數(shù)據(jù)存儲(chǔ)路徑；填寫本次分析的“樣品瓶#”、“樣品架#”、“進(jìn)樣體積”，點(diǎn)擊“確定”后，開始進(jìn)樣操作。6.2 批處理分析：點(diǎn)擊“批處理”，出現(xiàn)批處理表的對(duì)話框。使用“向?qū)А眲?chuàng)建批處理表。單擊“向?qū)А?，彈出“批處理表向?qū)А睂?duì)話框，選擇“新建”批處理表，在“方法文件”項(xiàng)選擇方法文件，選擇“開始樣品瓶#”、“樣品架#”，輸入“進(jìn)樣體積”，點(diǎn)擊“下一步”；“樣品組數(shù)”選擇1，樣品類型選擇“僅未知”，點(diǎn)擊“下一步”；輸入“樣品名

6、”、“樣品ID”，在“數(shù)據(jù)文件”項(xiàng)下選擇數(shù)據(jù)存儲(chǔ)路徑，在“每組中的未知樣品瓶數(shù)”項(xiàng)輸入批處理個(gè)數(shù)，點(diǎn)擊“下一步”；批處理向?qū)?匯總報(bào)告不做設(shè)置，點(diǎn)擊“下一步”；選擇“關(guān)機(jī)方法文件”及“冷卻時(shí)間”；點(diǎn)擊完成，初步建立一個(gè)批處理表。在建立好的批處理表中，可以根據(jù)需要，手動(dòng)更改樣品信息及分析方法。單擊“批處理開始”，批處理表開始運(yùn)行。7報(bào)告編輯7.1在“LC再解析”中，點(diǎn)擊“LC數(shù)據(jù)分析”。進(jìn)入數(shù)據(jù)后處理界面。打開一個(gè)數(shù)據(jù)文件，可以在“色譜圖視圖”中觀察LC色譜圖，在色譜圖上單擊右鍵，可以更改積分參數(shù)，調(diào)整色譜圖顯示方式。7.2點(diǎn)擊“數(shù)據(jù)報(bào)告”進(jìn)入報(bào)告界面，調(diào)入報(bào)告格式文件，用鼠標(biāo)將報(bào)告格式文件拖曳

7、到右側(cè)報(bào)告欄內(nèi)。報(bào)告格式，也可以通過內(nèi)容選擇圖標(biāo)，在報(bào)告中確定位置后，添加即可。右鍵功能很強(qiáng)大，可以根據(jù)需要對(duì)報(bào)告進(jìn)行修改。8系統(tǒng)清洗數(shù)據(jù)采集完畢后，關(guān)閉檢測(cè)器，繼續(xù)以工作流動(dòng)相沖洗20min后，（如流動(dòng)相含緩沖鹽，換為不含緩沖鹽的同比例流動(dòng)相再?zèng)_洗20min），可采用以下方式?jīng)_洗系統(tǒng)： 換用純水（至少含5%的有機(jī)相）沖洗系統(tǒng)及色譜柱至少60min，最后用甲醇或乙腈沖洗至少30min； 在“LC時(shí)間程序”中設(shè)置梯度程序清洗系統(tǒng)及色譜柱。 沖洗完成后，將整個(gè)流路都置于有機(jī)溶劑中。注：由于儀器單向閥結(jié)構(gòu)及材質(zhì)原因，建議流路最終保存在甲醇中，若長(zhǎng)期使用乙睛流動(dòng)相或用乙睛沖洗流路，易造成單向閥堵塞。9

8、關(guān)機(jī)清洗完成后，點(diǎn)擊“儀器開/關(guān)”，觀察“泵A壓力”降至0.0MPa后，拆下色譜柱，連接二通閥；點(diǎn)擊“關(guān)機(jī)”關(guān)閉系統(tǒng)，關(guān)閉儀器各單元電源按鈕。 10、填寫記錄認(rèn)真填寫儀器使用記錄，收拾實(shí)驗(yàn)臺(tái)面。島津LC-20A型高效液相色譜儀操作注意事項(xiàng)流動(dòng)相： 1、 流動(dòng)相應(yīng)選用色譜純?cè)噭⒏呒兯螂p蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過濾后使用，過濾時(shí)注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍；2、 水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換（一般不超過2天），防止長(zhǎng)菌變質(zhì)。樣品：1、 采用過濾或離心方法處理樣品，確保樣品中不含固體顆粒；2、 用流動(dòng)相或比流動(dòng)相弱（若為反相柱，則極性比流動(dòng)相大；若為正相柱，則極性比流動(dòng)相?。┑娜軇┲苽錁悠啡芤?，盡量

9、用流動(dòng)相制備樣品液；3、手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量一般為定量環(huán)的1/2以下，使用定量管定量時(shí)，進(jìn)樣體積應(yīng)為定量管的35倍。色譜柱：1、 使用前仔細(xì)閱讀色譜柱附帶的說明書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動(dòng)相類型等； 2、 使用符合要求的流動(dòng)相；3、 根據(jù)需要決定是否使用保護(hù)柱；4、 如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水（如5甲醇水溶液），再用甲醇沖洗；5、 色譜柱在不使用時(shí)，應(yīng)用甲醇沖洗，取下后緊密封閉兩端保存；6、 不要高壓沖洗柱子；7、 不要在高溫下長(zhǎng)時(shí)間使用硅膠鍵合相色譜柱；8、使用過程中注意輕拿輕放。操作過程：1、 開機(jī)操作：（1）注意各流動(dòng)相所剩溶液的容積設(shè)定，若設(shè)

10、定的容積低于最低限會(huì)自動(dòng)停泵，注意洗泵溶液的體積，及時(shí)加液；（2）、使用過程中要經(jīng)常觀察儀器工作狀態(tài)，及時(shí)正確處理各種突發(fā)事件；2、正式進(jìn)樣分析前30min 左右開啟D燈或W燈，以延長(zhǎng)燈的使用壽命； 3、 建立色譜操作方法，注意保存為自己命名的Method，勿覆蓋或刪除他人的方法及實(shí)驗(yàn)結(jié)果； 4、 使用手動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣時(shí)，在進(jìn)樣前和進(jìn)樣后都需用洗針液洗凈進(jìn)樣針筒，洗針液一般選擇與樣品液一致的溶劑，進(jìn)樣前必須用樣品液清洗進(jìn)樣針筒3遍以上，并排除針筒中的氣泡； 5、 溶劑瓶中的沙芯過濾頭容易破碎，在更換流動(dòng)相時(shí)注意保護(hù)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)過濾頭變臟或長(zhǎng)菌時(shí)，可用異丙醇超聲洗滌；6、 使用者須認(rèn)真履行儀器使用登記

11、制度，出現(xiàn)問題及時(shí)向老師報(bào)告，不要擅自拆卸儀器；7、 操作過程若發(fā)現(xiàn)壓力很小，則可能管件連接有漏，注意檢查。當(dāng)出現(xiàn)錯(cuò)誤警告（各組件指示燈均為紅色），一般為漏液，其中一個(gè)感應(yīng)器中已有溶劑，漏液故障排除后，擦干，點(diǎn)擊“儀器開/關(guān)”即可；8、 連接柱子與管線時(shí)，應(yīng)注意擰緊螺絲的力度，過度用力可導(dǎo)致連接螺絲斷裂。柱接頭處易發(fā)生漏液，可能情況為接頭Fittings中間的管子未和接口處貼緊。不同廠家的管線及色譜柱頭結(jié)構(gòu)有差異，最好不要混用，必要時(shí)可使用PEEK管及活動(dòng)接頭；9、 操作過程若發(fā)現(xiàn)壓力非常高，則可能管路已堵，應(yīng)先卸下色譜柱，然后用分段排除法檢查，確定何處堵塞后解決。若是保護(hù)柱或色譜柱堵塞，可用

12、小流量流動(dòng)相或以小流量異丙醇沖洗，還可采用小流量反沖的辦法（新柱不提倡），若還是無法通暢，則需換柱；10、 運(yùn)行過程中自動(dòng)停泵，可能為壓力超過上限或流動(dòng)相用完； 11、 樣品瓶中樣品較少，自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣針無法到達(dá)液面，可采用調(diào)低進(jìn)樣針進(jìn)樣高度的辦法，注意設(shè)置時(shí)不要使進(jìn)樣針碰到瓶底，微量樣品分析應(yīng)使用微量樣品瓶；12、 自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣針未與樣品瓶瓶口對(duì)準(zhǔn)時(shí)，需重新定位；13、 泵壓不穩(wěn)或流量不準(zhǔn)，可能為柱塞桿密封圈問題或seal wash墊圈問題，需更換；14、 基線產(chǎn)生不規(guī)則噪聲，可能原因?yàn)橄到y(tǒng)不穩(wěn)定或沒達(dá)到化學(xué)平衡（使其平衡，若用離子對(duì)試劑，在首次使用使需要足夠的時(shí)間和溶劑體積，色譜柱才能達(dá)

13、到足夠的平衡），流動(dòng)相被污染（更換流動(dòng)相，清洗儲(chǔ)液器、過濾器，沖洗并重新平衡系統(tǒng)），色譜柱被污染（為證明可能的原因更換系統(tǒng)的色譜柱或使用一根同類的被證明性能好的色譜柱），檢測(cè)器不穩(wěn)定；15、 短期有規(guī)則的噪聲，可能原因?yàn)楸脡翰环€(wěn)或泵脈沖，調(diào)節(jié)溶劑不適當(dāng)（如兩種溶劑的互溶性問題），泵入口管路松或堵塞，泵太臟，泵柱塞磨損，檢測(cè)器不穩(wěn)定；16、 長(zhǎng)期有規(guī)則噪聲，可能原因?yàn)槭覝夭环€(wěn)（未使用柱溫箱）或使用柱溫箱不當(dāng)；17、 基線漂移，可能原因?yàn)橄到y(tǒng)不穩(wěn)或沒有達(dá)到化學(xué)平衡，室溫不穩(wěn)（未使用柱溫箱），流動(dòng)相污染或分解，柱污染，檢測(cè)池泄漏，系統(tǒng)泄漏，固定相流失（另選流動(dòng)相，另選色譜柱），測(cè)定的波長(zhǎng)選擇錯(cuò)誤（對(duì)

14、溶劑有吸收），樣品組分保留太長(zhǎng)（用強(qiáng)度合適的溶劑清洗色譜柱），檢測(cè)器不穩(wěn)定；18、 每次進(jìn)樣時(shí)的保留時(shí)間不重復(fù)，可能原因?yàn)橄到y(tǒng)不穩(wěn)或未達(dá)到化學(xué)平衡，由于氣泡、各部件磨損等原因引起的泵壓或泵脈沖輸液不穩(wěn)定，進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高平衡被破壞，溶劑配比不合適，柱被污染；19、 無峰，可能原因?yàn)闄z測(cè)器選擇錯(cuò)誤，使用錯(cuò)誤的流動(dòng)相，樣品降解； 20、 色譜峰比預(yù)計(jì)的小，可能原因?yàn)檫M(jìn)樣體積錯(cuò)誤，檢測(cè)器燈故障，進(jìn)樣問題（瓶號(hào)錯(cuò)、進(jìn)樣體積不合適、進(jìn)樣錯(cuò)誤、針頭堵塞）；21、 峰變寬，可能原因?yàn)檫M(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高，過濾器、保護(hù)柱入口、柱入口或連接管路有部分堵塞，檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)置錯(cuò)誤，進(jìn)樣器問題（如閥漏、針頭堵塞或損壞），柱或保護(hù)柱被污染，對(duì)流動(dòng)相來說樣品溶劑太強(qiáng)，使用錯(cuò)誤的色譜柱，溫度變化；22、 出現(xiàn)雙峰/肩峰，可能原因?yàn)楸Ｗo(hù)柱或柱入口部分阻塞，柱或保護(hù)柱被污染，柱性能下降，保護(hù)柱失效，進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高（樣品過載），平衡破壞；23、