麥芽醇對大鼠腦缺血再灌注損傷后NO的影響

1、麥芽醇對大鼠腦缺血再灌注損傷后NO的影響         【摘要】  目的 觀察麥芽醇對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后NO的影響。方法 建立大鼠大腦中動脈阻塞（MCAO）再灌注模型，應(yīng)用亞硝酸鹽還原法測定腦組織中NO的含量。結(jié)果 腦缺血再灌注損傷后，腦組織中NO水平異常增高，給予麥芽醇后，NO水平明顯下降。結(jié)論 麥芽醇可抑制NO水平，對腦缺血再灌注損傷有保護作用。 【關(guān)鍵詞】  麥芽醇；腦缺血再灌注；一氧化氮；大鼠   ABSTRACT：Objective To investi

2、gate the effects of maltol on NO content after focal cerebral ischemia/reperfusion in rats.Methods The model of ischemia/reperfusion Injury was established by temporary middle cerebral artery occlusion (MCAO). The content of NO was measured by nitrite reduction.Results The content of NO was increase

3、d significantly after cerebral ischemia/ reperfusion. Application of maltol could significantly inhibit the content of NO. Conclusion  Maltol may protect cerebral ischemia/reperfusion injury by decreasing the content of NO.   KEY WORDS:Maltol;Cerebral ischemia reperfusion;NO；Rat 

4、  腦缺血再灌注損傷實質(zhì)是一個涉及多方面因素的復(fù)雜的病理生理過程。NO作為一種神經(jīng)毒性分子，可通過與超氧化物陰離子結(jié)合形成過氧化亞硝酸鹽，以及通過干擾鐵離子代謝促進氧化損害在腦缺血再灌注損傷中發(fā)揮著重要的作用。麥芽醇是從紅參中提取的單體化合物，其在體內(nèi)外可與自由基結(jié)合，對腦缺血再灌注損傷有保護作用1，2。為了深入研究麥芽醇抗腦缺血的機制，本實驗觀察了麥芽醇對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后NO的影響。   1  材料與方法   1.1  試驗動物和分組   成年健康雄性SD大鼠36只，體質(zhì)量230280g，清

5、潔級，武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院試驗動物中心提供。隨機分為對照組、缺血再灌注組和麥芽醇組，每組12只。   1.2  MCAO及再灌注模型的建立   參照Koizumi等方法制作大鼠左側(cè)MCAO及再灌流模型。采用10水合氯醛（0.3ml/100g）麻醉,術(shù)中維持動物肛溫(36.6±0.5)，頸部正中切口，分離并結(jié)扎左側(cè)頸總動脈、頸外動脈, 注意避免刺激迷走神經(jīng)。從頸總動脈分叉處插入4.0號絲線,沿頸內(nèi)動脈進入距頸總動脈分叉處1.82.0cm 略感阻力時停止，30min 后拔出絲線缺血再灌流24h。術(shù)后在約20的空調(diào)環(huán)境下單籠飼養(yǎng),自由進食、進

6、水。對照組只暴露血管。   1.3  麥芽醇給藥   參考有關(guān)文獻，麥芽醇組分別在缺血前和缺血后30min經(jīng)尾靜脈注射2ml 700mol/L麥芽醇生理鹽水。   1.4  腦組織NO含量測定   再灌流24h后動物處死，取出全腦迅速置于冰盤上，分離左側(cè)海馬及皮質(zhì)缺血中心區(qū)，分別稱重，后置于勻漿機上制成10%的腦勻漿，3000r/min離心10min，取0.5ml上清液作檢測標本。檢測標本加1.5ml 55nm NaOH和1ml 75nm ZnSO4溶液混勻，靜置10min，3000r/min離

7、心5min，取1.5ml上清液，再加0.08M甘氨酸NaOH緩沖液1ml，混勻后加進4g活化鎘，放置90min后取1ml，加進0.5ml 1%黃胺和0.5ml 0.1%的N1萘基乙二胺鹽酸顯色，靜置反應(yīng)20min，用721分光光度計，以=546nm，靈敏度1，空白調(diào)0，測OD值。   1.5  統(tǒng)計學(xué)處理   所有實驗數(shù)據(jù)以均值±標準差(±s) 表示。采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件處理。各組組間差異比較采用t 檢驗, 以P0.05 為差異有顯著性。      

8、60;      2   結(jié)  果   腦缺血再灌注24h后，缺血再灌注組皮層、海馬的NO含量異常升高，與正常對照組相比有顯著性差異 (P0.05)；麥芽醇組皮層、海馬的NO含量明顯下降，與缺血再灌組比較有顯著性差異(P0.05),見表1。表1  3組大鼠皮層、海馬亞硝酸鹽 OD值的比較與對照組比較，*P0.05；與缺血再灌注組比較，P0.05    3   討  論   NO是一種自由性質(zhì)的氣體，為較小的生物活性分

9、子，可自由穿過細胞膜，作用于細胞內(nèi)的靶分子。在生物體內(nèi)，NO生成后很快被氧化，以硝酸根和亞硝酸根的形式存在于細胞的內(nèi)外液中，使NO失去生物學(xué)活性。低濃度的NO能使血管擴張，抑制血小板集聚與粘附，使谷氨酸調(diào)控的離子通道下調(diào),防止細胞內(nèi)鈣超載，因而對細胞有保護作用；但在高濃度下，NO可與超氧陰離子反應(yīng)生成超氧亞硝酸根離子，超氧亞硝酸根離子可以降解為OH-和NO2-自由基，使細胞膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化作用，在細胞的膜水平造成強烈的神經(jīng)毒性，甚至導(dǎo)致神經(jīng)元死亡等5，6。研究表明NO在腦缺血性損傷的發(fā)病中起重要作用，缺血后數(shù)分鐘NO含量明顯增高,之后緩慢下降，于再灌注期NO再次升高。NO含量增加的機制可能為：

10、腦缺血后神經(jīng)元受損，細胞膜去極化過程增強，突觸前谷氨酸等興奮性氨基酸生成大量增加，使細胞外谷氨酸濃度升高，激活N甲基D天門冬氨酸(NMDA)受體，NMDA受體激活后使突觸后Ca2+內(nèi)流增加，激活NOS，促進NO的生成；再次，腦缺血后，ATP大量消耗，使能量代謝障礙及cAMP依賴蛋性白激酶活性下降，使NOS脫磷酸化，NOS的活性增強，促進NO的生成。   本實驗的研究結(jié)果表明，大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后，腦組織中NO含量顯著增加，說明NO參與了腦缺血再灌注損傷的發(fā)病機制，給予麥芽醇治療后，NO含量明顯下降。表明麥芽醇對腦缺血再灌注損傷的保護作用與其對NO生成含量的調(diào)節(jié)有關(guān)，

11、我們推測麥芽醇對NO生成的關(guān)鍵酶NOS也進行調(diào)節(jié)，麥芽醇通過對NOS活性和NO含量進行調(diào)節(jié)從而發(fā)揮腦缺血再灌注損傷的保護作用，詳細機制有待進一步研究?！緟⒖嘉墨I】  1高艷，戴冀斌，李應(yīng)續(xù).麥芽醇對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)元凋亡的影響J. 咸寧學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版), 2007,21(01):4甘云波, 胡松林, 王亞威. 麥芽醇治療大鼠不完全性腦缺血再灌注損傷的實驗研究J. 咸寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2001,15(01):14Koizumi J, Yoshida Y, Nakazawa T,et al.Experimental studies of ischemic brain ed

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