良性前列腺增生組織NO合酶表達的免疫組化研究

1、    良性前列腺增生組織NO合酶 表達的免疫組化研究        摘要 為探討一氧化氮合酶(NOS)在良性前列腺增生(BPH)組織中的表達及其意義,采用免疫組化法對24例BPH組織中NOS表達進行檢測。結(jié)果顯示:NOS在BPH組織神經(jīng)纖維和神經(jīng)節(jié)均有表達,血管內(nèi)皮細胞和腺體上皮細胞亦可見NOS表達。24例BPH中,外周區(qū)強陽性17例,弱陽性7例;移行區(qū)強陽性10例,弱陽性14例,兩者比較有顯著性差異(P<0.05)。提示BPH組織中存在一氧化氮(NO)神經(jīng)

2、傳導(dǎo)通路,NO可影響前列腺平滑肌張力。 關(guān)鍵詞前列腺增生癥氧化氮合酶免疫組織化學(xué)Expression of nitric oxide synthase in human prostatic hyperplasia tissueWang Yinhuai,Huang Xun,Liu Ren,et al.Department of Urology, the Second Affiliated Hospital,Hunan Medical University,Changsha 410011AbstractExpression of nitric oxide synthase(NOS)was dete

3、cted in 24 benign prostatic hyperplasia (BPH) tissue using ABC immunohistochemical technique. NOS was immunohistochemically localized to nerve fibers and ganglia and was also to glandular epithelium and endothelium of vessels.The positive staining was higher in the peripheral zone than in the transi

4、tional zone(P<0.05).The results suggested that NO neuronal pathway does exists in BPH tissues.It is proposed that NO may modulate smooth muscle tone in the human prostate.Key wordsProstatic hypertrophyNitric oxide synthaseImmunohistochemistry一氧化氮(NO)是一種重要的細胞信息分子,近年來研究發(fā)現(xiàn),NO對泌尿生殖系功能有重要調(diào)節(jié)作用1。體內(nèi)NO主要是

5、由L-精氨酸在一氧化氮合酶(NOS)作用下產(chǎn)生的。NOS作為NO合成關(guān)鍵酶,其活性變化直接調(diào)節(jié)NO的生成量及其生物學(xué)效應(yīng)。NOS在良性前列腺增生(BPH)中表達的研究甚少,我們應(yīng)用ABC免疫組織化學(xué)方法研究NOS在BPH組織中的表達,以探討其意義。 材料與方法一、組織標(biāo)本24例BPH組織標(biāo)本取自開放性前列腺摘除手術(shù)中,按照前列腺分區(qū)2,每例分別于前列腺移行區(qū)和外周區(qū)各取材一份。新鮮標(biāo)本均立即置-70冰箱內(nèi)貯存。解凍后Histosta冰凍切片機(-20)組織切片,厚10m,新鮮配制4%多聚甲醛固定15分鐘,一張行HE染色,另一張立即行NOS免疫組化染色。二、抗體來源和免疫組化染色兔抗人NOS抗體

6、為Santa Cruz公司產(chǎn)品,工作濃度140。免疫組織化學(xué)染色用常規(guī)ABC免疫組化法。ABC試劑盒為Sigma公司產(chǎn)品,DAB為瑞士進口分裝。以0.01mol/LPBS(pH7.4)分別替代一抗、二抗作陰性對照。三、結(jié)果判斷和統(tǒng)計分析細胞漿和(或)核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為NOS染色陽性細胞。根據(jù)細胞著色深淺不同分為強陽性和弱陽性染色,切片內(nèi)強陽性細胞數(shù)<10%者為弱陽性,強陽性細胞數(shù)10%者為強陽性。實驗數(shù)據(jù)用2檢驗進行統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果一、NOS在BPH組織中表達定位觀察NOS陽性染色廣泛地分布于支配前列腺平滑肌的神經(jīng)纖維和神經(jīng)節(jié)中,而平滑肌細胞未見NOS陽性染色。分布于BPH組織中的血管

7、內(nèi)皮細胞呈NOS強陽性染色,移行區(qū)和外周區(qū)的腺體上皮細胞亦見NOS陽性染色,但染色深度不一。這些染色主要表達于細胞漿,部分細胞核亦有NOS陽性染色。二、BPH組織外周區(qū)和移行區(qū)NOS表達差別NOS表達在BPH組織外周區(qū)和移行區(qū)并非均勻性分布。24例BPH中外周區(qū)強陽性17例,弱陽性7例;移行區(qū)強陽性10例,弱陽性14例,經(jīng)2檢驗，BPH組織移行區(qū)與外周區(qū)NOS表達有顯著性差異,P<0.05 。討論NO是一種氣體分子,它參與體內(nèi)眾多生理功能的調(diào)節(jié)。Takeda等3對人和犬離體前列腺平滑肌等長張力研究發(fā)現(xiàn)NO可介導(dǎo)前列腺平滑肌松弛。但由于NO半衰期極短,所以目前主要從NOS或NO降解產(chǎn)物硝酸

8、鹽和亞硝酸鹽間接了解NO的變化。BPH所致膀胱出口梗阻與前列腺平滑肌張力升高有關(guān),已有研究證明前列腺平滑肌張力主要受1腎上腺能受體(1AR)調(diào)節(jié),臨床上應(yīng)用AR阻滯劑治療BPH有一定效果4。Normandin等5研究發(fā)現(xiàn),內(nèi)皮素、組胺等可誘發(fā)離體犬前列腺平滑肌收縮,而NO供體硝普鈉可誘發(fā)前列腺平滑肌舒張。本研究發(fā)現(xiàn)BPH組織中神經(jīng)節(jié)和神經(jīng)纖維NOS呈陽性表達,說明BPH組織中存在一條NO神經(jīng)傳導(dǎo)通路,NO可作為一種非腎上腺能非膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)前列腺平滑肌活動。此外,我們發(fā)現(xiàn)BPH組織腺體上皮細胞NOS呈陽性表達,而平滑肌細胞未見NOS表達,NO可能像其他神經(jīng)內(nèi)分泌肽一樣,以自分泌或旁分泌方式

9、影響前列腺活動,腺體上皮細胞來源的NO可影響其鄰近平滑肌的收縮性。Burnett等6應(yīng)用生化和免疫組化方法對7例根治性前列腺癌切除術(shù)組織標(biāo)本進行研究,探討NOS在前列腺組織中的分布特征,其結(jié)果與本研究結(jié)果相似。前列腺的解剖學(xué)和疾病發(fā)生學(xué)都有明顯的帶性結(jié)構(gòu),Mcneal將前列腺分為移行區(qū)和外周區(qū)。BPH多起源于移行區(qū),而70%的前列腺癌發(fā)生多見于外周區(qū)。本研究發(fā)現(xiàn)BPH組織外周區(qū)和移行區(qū)NOS表達有顯著性差異,移行區(qū)NOS表達水平明顯低于外周區(qū),說明BPH組織中NOS表達并非均勻性分布,其表達水平的差異可能與兩區(qū)域內(nèi)細胞成分不同有關(guān),但這種區(qū)域性差異是否與BPH發(fā)生有關(guān)尚待進一步研究。作者單位：

10、410011長沙，湖南醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院泌尿外科(王蔭槐、黃循、劉任)，膽道研究室(楊竹林)參考文獻1Burnett AL.Nitric oxide control of lower genitourinary tract functions.Urology,1995,451071.2Mcneal J.Pathology of benign prostatic hyperplasia.Urol Clin North Am,1990,17477.3Takeda M,Tang R,Shapiro E,et al.Effects of nitric oxide on human and canine prostates.Urology,1995,45440.4Eri LM,Tveter KJ.-blockade in the treatment of symptomatic benign prostatic hyperplasia.J Urol,1995,154923.5Normandian DE,Jodge NJ.Pharmacological characterization of the isolated canine prostate.J Urol,1996,155