夜寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究(一)

1、夜寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究(一)作者：丁青龍李瑩周其蔡春亞、【摘要】 目的：研究制定夜寧膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法和HPLC法。結(jié)果：大黃素在5-25/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回歸方程為y=39931.1A-22660.4，r=0.9998。每粒首烏藤以大黃素計(jì)，不得少于0.05mg。結(jié)論：樣品的重復(fù)性和精密度檢查證明本法穩(wěn)定、可靠、快速、準(zhǔn)確，可為本品質(zhì)量控制方法之一。 【關(guān)鍵詞】 夜寧膠囊大黃素TLCHPLC；含量測(cè)定夜寧膠囊為2005年版中國藥典一部所收載的“夜寧糖漿”的改型制劑；主要由合歡皮、首烏藤、靈芝等藥物組成。本方中主藥合歡皮、靈芝、首烏藤等均有不同程度的鎮(zhèn)靜、安神的作用；

2、在制定本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，我們采用薄層色譜分別鑒別合歡皮、靈芝、首烏藤、甘草4味藥材，并同時(shí)選用大黃素作為本品的含量控制指標(biāo)，因?yàn)樵诒酒分写簏S素為臣藥首烏藤所獨(dú)有成分并且檢測(cè)方法成熟、可靠；故我們最終選擇大黃素為本品的含量測(cè)定控制指標(biāo)。1 儀器及試劑1.1 儀器 日本島津公司LC10ATvp型高效液相色譜儀(日本島津公司)，RE52C型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海青浦滬西儀器廠)，F(xiàn)QC100超聲波清洗機(jī)(無錫福尼達(dá)電子公司 頻率為40KHZ)，SC2021型電熱恒溫干燥箱(通州市滬通制藥機(jī)械設(shè)備廠)，F(xiàn)A1004型十萬分之一電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，電熱恒溫水浴鍋(上海醫(yī)療器械五廠)1.2 試

3、樣 夜寧膠囊(江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：030410、030510、030526)，合歡皮對(duì)照藥材(中國藥品生物制品檢定所提供編號(hào)121549200501)，靈芝對(duì)照藥材(中國藥品生物制品檢定所提供，編號(hào)120968200505)，甘草次酸對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所提供，編號(hào)110723200411)，大黃素對(duì)照品(中國生物制品研究所 批號(hào)0756200110供含量測(cè)定用)，乙醇(分析純)，氯仿(分析純)，濃鹽酸，蒸餾水，甲醇(色譜純)，0.1%磷酸，重蒸蒸餾水(高純度蒸餾水)。2 薄層鑒別1-42.1 合歡皮 取本品內(nèi)容物2g，加甲醇30ml溶解，超聲提取30min，濾過，濾液蒸干

4、，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取合歡皮對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄 B )試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5l，分別點(diǎn)樣于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷甲醇甲酸(60.50.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)5-6。2.2 靈芝 取本品內(nèi)容物2g，加水20ml溶解，用乙酸乙酯振搖提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取靈芝對(duì)照藥材1g，加乙醇10ml浸泡24h，濾過，濾液

5、作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法( 中國藥典2005年版一部附錄 B )試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5l，分別點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷乙酸乙酯(41)的為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下視檢。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)7,1。2.3 甘草 取本品內(nèi)容物2g，置100ml圓底燒瓶中，加入50ml氯仿，3ml濃鹽酸，置水浴上加熱回流1h，放冷，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取甘草次酸對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄 B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5l，分

6、別點(diǎn)于同一硅膠G254薄層板上，以石油醚(30-60)甲酸乙酯甲酸(1371)的上層溶液為展開劑，展開，展距15cm，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下視檢。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。2.4 首烏藤 取本品內(nèi)容物2g，加石油醚50ml回流提取1h，濾過、揮去石油醚，殘?jiān)眉状?ml溶解，作為供試品溶液。另取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法( 中國藥典2005年版一部附錄 B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和對(duì)照品溶液各10l，分別點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30-60)甲酸乙酯甲酸(15:5:1)的上

7、層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下視檢。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果：同法制備陰性樣品，陰性無干擾；證明薄層色譜法具有很好的專屬性。3 含量測(cè)定3.1 色譜條件8 色譜柱C18柱；流動(dòng)相：甲醇0.1%磷酸溶液(82：18)，流速1mlmin-1；檢測(cè)波長254nm，柱溫40。理論板數(shù)為1000以上，進(jìn)樣體積為10l。3.2 供試液樣品的制備取本品5粒，將內(nèi)容物倒入錐型瓶中并用乙醚洗凈，揮去乙醚；分別加95%乙醇40、40、40、40ml超聲提取30、20、20、10min，抽濾，合并濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收乙醇。殘?jiān)盟?次(

8、20、20、10、10ml)。合并洗液用鹽酸調(diào)pH為2-3于水浴鍋上水解1h(80)后于分液漏斗中用氯仿萃取4次(20、20、10、10ml)。充分振蕩，最后一次萃取液應(yīng)呈無色。合并氯仿液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收氯仿。殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?0ml。用0.45m的微孔濾膜濾過，備用。83.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取大黃素對(duì)照品4mg用甲醇超聲溶解制成2mlmin-1的對(duì)照品溶液，備用。3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定 精密吸取對(duì)照品液5、10、15 、20、 25l分別置于2ml的量瓶中，用甲醇定容、搖勻。以對(duì)照品進(jìn)樣量濃度為縱坐標(biāo)，峰面積值為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果大黃素在525g/ml范圍內(nèi)呈良好的線

9、性關(guān)系，回歸方程為y=39931.1A-22660.4；r=0.99985。3.5 精密度試驗(yàn) 對(duì)同一對(duì)照品溶液，連續(xù)測(cè)定5次，結(jié)果其峰面積值的RSD為0.16%。3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在制備后的0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣，測(cè)定大黃素峰面積，得RSD為2.38%，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 對(duì)同一批號(hào)樣品，分別取6份，按供試品液的提取方法提取，依法測(cè)定，結(jié)果夜寧膠囊中大黃素的含量平均值為0.0521mg/粒；RSD=2.11%。3.8 樣品含量測(cè)定 按3.2項(xiàng)制備供試液，依法進(jìn)性測(cè)定，結(jié)果見表1。表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果（略）3.9 加樣回收率測(cè)定

10、精密量取已知含量(1mg/ml)的對(duì)照品溶液10l加入到樣品中按3.2項(xiàng)下方法提取制備供試品液，依法測(cè)定9-10，結(jié)果見表2。表2 加樣回收率試驗(yàn)（略）結(jié)論：本品每粒含首烏藤以大黃素(C15H10O5)計(jì)，不得少于0.05mg。4 討論4.1 試驗(yàn)提取條件的選擇：(1)本研究在進(jìn)行提取時(shí)將傳統(tǒng)回流提取法、索氏回流提取法、超聲提取法進(jìn)行了簡單的比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲提取較為方便、簡單；(2)關(guān)于水解條件的選擇：本研究結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道以不同的pH值、不同的水解溫度及不同的水解時(shí)間進(jìn)行了正交篩選，得出在pH為2-3、溫度80、水解1h為本實(shí)驗(yàn)的最佳水解條件;(3)對(duì)提取后的殘?jiān)龠M(jìn)行不同處理：分別為水溶解、

11、酸水解、用氯仿萃取后、回收氯仿用甲醇定容，依法測(cè)定9-10。4.2 流動(dòng)相的pH值對(duì)實(shí)驗(yàn)有較大的影響，因?yàn)檩祯惢衔锍嗜跛嵝裕谒嵝詶l件下色譜行為得到明顯改善，采用0.1%的磷酸代替水取得了較好的分離效果。本方法測(cè)定樣品中大黃素，方法靈敏、可靠，可作為本品的含量測(cè)定方法。9【參考文獻(xiàn)】1洪 馨,宓穗卿.心脈安顆粒劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究J.中藥新藥與臨床藥理,1999,10(4)：228.2黃舒麗,黃舒婭.香砂養(yǎng)胃軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究J.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2000,(4)：30.3焦愛軍,李如敏.胃樂膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究J.廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2000,(5)：45.4黃瑞松.小兒瀉痢靈顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究J.廣西中醫(yī)藥,1997,(2)：24.5梁生旺,王淑美,李永軍,等.通淋膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究J.中國藥學(xué)雜志,1998,33(11)：675.6宗玉英.益欣康泰膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究J.高原醫(yī)學(xué)雜志,1999,(2):24.7鄭 怡.感冒炎咳靈片質(zhì)