常規(guī)植物石蠟制片技術(shù)的改進(jìn)及應(yīng)用_圖文

1、基金項(xiàng)目:成都大學(xué)2011年自然科學(xué)基金,基金號:2011XJZ24。作者簡介:王靜(1981,女,四川冕寧人,博士,講師,主要從事植物學(xué)與環(huán)境的教學(xué)和科研工作。收稿日期:20110509常規(guī)植物石蠟制片技術(shù)的改進(jìn)及應(yīng)用王靜1左幸2黃正文1(1成都大學(xué)城鄉(xiāng)建設(shè)學(xué)院,四川成都610106;2二灘水電開發(fā)有限責(zé)任公司,四川成都610051摘要:石蠟切片技術(shù)在植物科學(xué)技術(shù)研究領(lǐng)域扮演著十分重要的角色,并為植物組織結(jié)構(gòu)的研究做出了巨大貢獻(xiàn),現(xiàn)代植物分子生物學(xué)研究中仍需石蠟切片技術(shù)支持。以凹葉木蘭的雌、雄蕊群及花被片作為實(shí)驗(yàn)材料,通過改良脫水、包埋、染色、分色等制片環(huán)節(jié),設(shè)計(jì)了一種優(yōu)良、易操作的植物組織

2、石蠟制片方法,并對實(shí)驗(yàn)操作中常見的問題和注意事項(xiàng)進(jìn)行了討論。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法簡化了實(shí)驗(yàn)步驟,節(jié)約了實(shí)驗(yàn)藥品,減少了實(shí)驗(yàn)中有毒試劑的使用和接觸,提高了制片質(zhì)量并使同一批制片染色效果統(tǒng)一。關(guān)鍵詞:植物組織學(xué);石蠟切片;改進(jìn)和應(yīng)用中圖分類號Q94文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號10077731(2011113604Improvement and Application of Plant Paraffin SectioningWang Jing 1(1College of Urban and Rual Construction ,Chengdu University ,Chengdu 610106,China

3、Abstract :Paraffin Sectioning not only plays an important role in plant science research ,but also make a tremendous contri-bution to studying composition and structure of plantModern plant molecular biology still needs the techniqueThis study used the gynoecium ,androecium ,tepals of Magnolia sarge

4、ntiana as experimental material ,improved traditional paraffin sec-tioning ,such as dehydration ,embedding ,stain ,separationWe discussed typital problems and caution items in the im-proved Paraffin SectioningThe experimental results that the new technique simplified the process of paraffin sectioni

5、ng ,saved experiment cost ,reduced touching toxic reagent ,obtained quality slidesKey words :Plant histology ;Paraffin sectioning ;Improvement amd application近年來,隨著新設(shè)備的出現(xiàn),在經(jīng)典石蠟切片技術(shù)的基礎(chǔ)上,不斷涌現(xiàn)出一些對植物組織結(jié)構(gòu)研究的新技術(shù),如超薄切片、半薄切片、冰凍切片等技術(shù)13,但這些方法都是在經(jīng)典的石蠟切片技術(shù)上發(fā)展而來的。至今,石蠟切片法仍為制片技術(shù)的經(jīng)典方法,在植物組織學(xué)、比較解剖學(xué)、分類學(xué)、細(xì)胞學(xué)和發(fā)育生物學(xué)研究中

6、得到廣泛應(yīng)用。此外,石蠟切片法能與其他新技術(shù)結(jié)合應(yīng)用于免疫學(xué)、現(xiàn)代植物分子生物學(xué)等學(xué)科中,如將免疫熒光檢測技術(shù)與石蠟切片相結(jié)合,用于抗原定位4;在用于細(xì)孢原位核酸分子雜交技術(shù)中,可對材料中被雜交的DNA 分子進(jìn)行定位、定量分析或觀察分析基因表達(dá)(mRNA 水平56。該法有容易操作和成本低廉的優(yōu)點(diǎn),且標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋后,可進(jìn)行連續(xù)切片或永久保存。經(jīng)典的石蠟切片法基本步驟包括樣品的采集、固定、脫水(、透明(、浸蠟、包埋、切片、貼片、烘片、脫蠟、復(fù)水、染色、脫水(、分色、脫水(、透明(和封片等一系列特殊處理步驟7。由于石蠟材質(zhì)的性狀特點(diǎn)使得經(jīng)典的石蠟切片法存在較多制片難點(diǎn)。其中,影響實(shí)驗(yàn)成敗的主要原因

7、包括:(1制片周期長,一般從材料固定到封片至少都要一周以上;(2脫水、透明、浸蠟、包埋的過程中操作不慎易使材料變脆、變硬或變形,從而影響染色;(3手續(xù)繁瑣,染色前要脫蠟、水化處理,染色后又需脫水、透明;(4脫蠟后的切片在水化和脫水時(shí),植物組織常由于對載玻片的粘附能力降低而脫落,特別是諸如孢子、花粉及胚囊等孤立分散的細(xì)胞;(5由于一般染料都極易溶于酒精,故染色后脫水時(shí),切片容易褪色,不易把握分色的度,造成染色單一和片面化。20092010年,在采用石蠟切片法對凹葉木蘭(Magnolia sargentiana 的大小孢子發(fā)育進(jìn)行研究期間,針對該法存在的上述問題,通過大量摸索性實(shí)驗(yàn),對傳統(tǒng)石蠟切片

8、技術(shù)進(jìn)行了優(yōu)化和改進(jìn),并取得了較好的效果,制出色彩鮮艷、分色恰當(dāng)、組織結(jié)構(gòu)完整清晰的裝片。本文將詳細(xì)介紹實(shí)際操作中的技術(shù)流程,以便初學(xué)者準(zhǔn)確掌握并能制得滿足要求的高質(zhì)量植物石蠟制片。1材料、儀器設(shè)備與準(zhǔn)備工作1.1材料實(shí)驗(yàn)材料為木蘭科植物凹葉木蘭(Magnolia63安徽農(nóng)學(xué)通報(bào),Anhui Agri.Sci.Bull.2011,17(11sargentiana不同發(fā)育時(shí)期的花蕾,采自四川省雷波縣麻咪澤自然保護(hù)區(qū)及冕寧縣冶勒自然保護(hù)區(qū)。1.2儀器Zeiss Axioskop40光學(xué)顯微鏡、Leica JUNG RM2025切片機(jī)、染色架(銅質(zhì)、鼓風(fēng)干燥箱、展片臺、酒精燈、切片盒等。1.3試劑和

9、準(zhǔn)備工作FAA固定液、系列濃度酒精、1%番紅水溶液、1%固綠溶液(95%酒精做溶劑、粘片劑(鉻礬明膠、二甲苯、石蠟和中性樹膠。粘片劑配制方法:5.0g明膠完全溶解于1000mL溫?zé)岬恼麴s水中,加0.5g鉻礬,冷卻后過濾,貯存于試劑瓶中。蠟粉:用單面刀片刮取石蠟粉末,備用。粘片時(shí)用的載片:用玻棒或滴管取一小滴粘片劑滴在洗凈干燥的載片上,均勻涂抹后放入載片盒,放進(jìn)35鼓風(fēng)干燥箱烘干、備用。注意:抹有粘片劑的一面朝向同側(cè)擺放,并在切片盒上用標(biāo)簽標(biāo)注抹有粘片劑的方向,便于后期粘片使用。2方法2.1取材與固定新鮮采集的凹葉木蘭花蕾直接放入FAA固定液中固定48h后可長時(shí)間保存。將固定好的凹葉木蘭花蕾剝?nèi)?/p>

10、外層苞片和花被片,用解剖刀和鑷子取下雄蕊群和雌蕊群。將每朵花上的雌雄蕊群和幾塊花被片組織(1cm2分別放入50mL廣口試劑瓶,貼上標(biāo)簽,倒入適量70%酒精溶液放置2h,洗去FAA固定液并脫水。2.2脫水與透明2h后,將試劑瓶中70%酒精緩緩倒出,然后倒入適量85%乙醇,放置2h后,依次按前述方法將材料經(jīng)90%乙醇和95%乙醇(每級2 3h、100%乙醇(2次,每次1h逐級脫水。脫水后的材料仍按前述方法經(jīng)11的無水乙醇:二甲苯(過夜、二甲苯(2次,每次2h透明,直到材料完全透明為止。在透明的過程中,若材料周圍出現(xiàn)白色霧狀渾濁,表明材料中的水沒脫凈,應(yīng)退回純酒精中重新脫水,再進(jìn)行透明操作。2.3浸

11、蠟與包埋室溫浸蠟1 2d:向盛有材料及二甲苯的試劑瓶中加入少許蠟粉,待其完全溶化后再加入一些蠟粉,直至蠟粉不能溶解,與二甲苯形成糊狀的混合物。室溫浸蠟后,打開試劑瓶上的玻璃塞,將試劑瓶移入40鼓風(fēng)干燥箱中,讓二甲苯慢慢蒸發(fā),放置3 4d。此后,將鼓風(fēng)干燥箱調(diào)至65,把原溶液換成熔融的純蠟,每隔2h 換一次純蠟(共換3次。將石蠟及其中的材料倒入預(yù)先貼上和試劑瓶一致標(biāo)簽的紙盒中,用加熱的鑷子把材料整理好。應(yīng)注意切面朝下、位置放正、蠟要充滿。2.4切片與粘片切片前,拆去紙盒,將蠟塊修成上下兩邊平行的正方形或長方形,粘在小木塊支座上。用切片機(jī)夾好小木塊支座,將蠟塊切成5 8m厚的薄片。切下的薄片自然形

12、成蠟帶,用毛筆小心取下蠟帶,放在黑紙上備用。將涂有粘片劑的載片放置在展片臺上,涂有粘片劑的一面朝上,將展片臺溫度調(diào)到40,用記號筆在載片左上角做好編號(如:310,表示第三個(gè)材料的第10張裝片,用膠頭滴管在玻片中央滴少許蒸餾水,蒸餾水的多少視蠟帶長短而定。若蠟帶較窄,可考慮在載片上放置2 3排蠟帶。用單面刀片將黑紙上的蠟帶分成數(shù)小段,長度要略短于玻片上的蒸餾水區(qū),用鑷子和解剖針將蠟帶小心轉(zhuǎn)移到蒸餾水上,蠟帶受熱后會慢慢平展。待完全平展后,用解剖針將切片位置撥正,傾去載片上余水或用吸水紙放在載片邊緣吸去多余水后,按照從上到下的次序從展片臺左上角依次排列載片。展片臺上可容納約60張載片,待最后一批

13、載片(10張一批做好后,最先粘有切片的載片多已烤干。將烤干的載片依編號順序放入染色架中(可放置30張玻片,粘有切片的一面朝上放置,移入37鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)烘12h以上。2.5染色、脫蠟、透明與封片從鼓風(fēng)干燥箱中取出的染色架可直接放入番紅染液中浸染,不經(jīng)過脫蠟和復(fù)水的步驟,染色時(shí)間在12h以上。染好后的載片用流水(自來水或蒸餾水,水流不要太大沖去多余染料,此時(shí)載片上的植物組織被染紅,而石蠟未被染色。將沖洗后的染色架(上有載片再次放入37鼓風(fēng)干燥箱中干燥后,依次浸入二甲苯5min、1%固綠(95%乙醇作溶劑染液2 3s進(jìn)行分色、100%乙醇中5min進(jìn)行脫水、11的無水乙醇:二甲苯中5min進(jìn)行再次脫

14、水和一次透明、純二甲苯5min進(jìn)行二次透明。將二次透明的染色架放置在托盤中以防止二甲苯滴漏。將染色架上一側(cè)的15張裝片取出,按編號順序在干凈白紙上從上到下排好,切片面向上。用玻棒蘸取中性樹膠,在每張裝片中央滴一滴(若切片帶較長或載片上有2 3排切片,可于切片帶中央滴一大滴,兩側(cè)各滴一小滴中性樹膠并加蓋蓋玻片。若樹膠過少,可用蘸有樹膠的玻棒在蓋玻片的邊緣補(bǔ)足。將做好的裝片水平放置在35鼓風(fēng)干燥箱中烘干(1 2d后,用小刀刮去裝片兩側(cè)多余的樹膠,按編號順序放置到切片盒中。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)過上述改進(jìn)方法制得的永久裝片,其組織完整、細(xì)胞界限清晰、色彩鮮艷、顏色對比鮮明、切片干凈,表明改良植物組織石蠟制片法

15、所制得的裝片和常規(guī)方法在制得的裝片質(zhì)量上無明顯差別甚至更好。不脫蠟就進(jìn)行染色的裝片,由于石蠟本身對光的反射和折射,液泡中或細(xì)胞質(zhì)與液泡的界面可見許多形狀不規(guī)則的較明顯條紋,且由于凝固的石蠟本身不透明,細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)分辨較模糊,但大多數(shù)細(xì)胞中仍可見到細(xì)胞核甚至核仁,細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)間的界限也較清楚(圖1中a、b。而在染色后脫蠟的裝7317卷11期王靜等常規(guī)植物石蠟制片技術(shù)的改進(jìn)及應(yīng)用片中,不會觀察到上述條紋,且細(xì)胞結(jié)構(gòu)更清楚(圖1中c 、d 、e 、f 。凹葉木蘭雌雄蕊的細(xì)胞核染成紅色,細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)綠色、藍(lán)綠色或藍(lán)紫色,組織細(xì)胞的纖維素細(xì)胞壁呈現(xiàn)粉紅色(圖1中c ,且不論是幼嫩花還是成熟花的組織結(jié)構(gòu)都

16、比較清晰(例如發(fā)育早期的大孢子孢原細(xì)胞和小孢子母細(xì)胞、成熟的花粉囊及其中的花粉粒。此外,花被片縱切面的結(jié)構(gòu)也很清楚(圖1中f 。在傳統(tǒng)方法制片的過程中,由于粘片劑對表面凹凸的花粉附著能力較差,造成發(fā)育成熟的花粉囊和散粉后的花粉囊中所含花粉極易掉落。同時(shí),在脫蠟、復(fù)水、染色和反復(fù)脫水、透明的過程中,附著能力差的花粉極易從載片上脫落。但在改良的制片方法中,切片不脫蠟就進(jìn)行染色,由于石蠟的支撐、固著作用和切片反復(fù)浸入溶液的次數(shù)減少,使得最后制得的裝片中不但發(fā)育成熟的花粉粒沒有掉落,而且死亡解體的花粉空殼、敗育花粉粒和散粉后殘留在花粉囊中的花粉粒都沒有丟失(圖1中b 、c 、d 。圖1凹葉木蘭的花器官

17、組織切片注:a :經(jīng)過一次染色未脫蠟的切片,孢原細(xì)胞;b :經(jīng)過一次染色未脫蠟的切片,散粉后的花粉囊,示殘留空殼花粉粒;c :分色后脫蠟的切片,成熟花粉囊;d :分色后脫蠟的切片,小孢子母細(xì)胞;e :分色后脫蠟的切片,孢原細(xì)胞;f :分色后脫蠟的切片,花被片橫切面。4討論4.1常規(guī)石蠟制片方法與改良方法的比較從表l 看出,實(shí)驗(yàn)中2種方法在時(shí)間安排和步驟上有所不同,改良石蠟制片法在“脫水、透明、浸蠟、染色、分色”上進(jìn)行了簡化和優(yōu)化,使得整個(gè)制片程序更易操作,并且節(jié)省了藥品、縮短了與有毒物品接觸時(shí)間。此外,常規(guī)方法的時(shí)間安排具有連續(xù)性和不可中斷性,對試驗(yàn)工作者精力要求較高。改良方法可解決該問題,即

18、:包埋前的脫水和透明過程中最后一步都可以過夜,因此這兩步可各花1d 時(shí)間進(jìn)行;浸蠟時(shí)可以一天分3次加蠟粉(早,中,晚,其余時(shí)間自行安排;由于包埋材料的蠟塊可永久保存且不脫蠟染色的載片也可保存很長時(shí)間,故包埋后的工作也可自由安排時(shí)間進(jìn)行,試驗(yàn)者可同步處理其他工作,提高了試驗(yàn)效率。表1兩種植物石蠟制片方法比較制片步驟傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法改良方法脫水(經(jīng)70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、100%乙醇、100%乙醇梯度脫水(,每級2h縮短在無水乙醇中脫水時(shí)間,增加90%的乙醇作為一個(gè)梯度濃度進(jìn)行脫水透明經(jīng)11乙醇二甲苯、二甲苯(、二甲苯(透明,每級lh ;材料在每級透明劑中浸泡時(shí)間不同浸蠟37二甲苯飽和石蠟

19、溶液48h 浸蠟,65間隔2h 換2次純蠟增加常溫浸蠟步驟,延長37浸蠟時(shí)間包埋常規(guī)包埋與常規(guī)方法相同切片輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)8 10m 切片與常規(guī)方法相同脫蠟(經(jīng)二甲苯2次、每次10min 無此步驟復(fù)水經(jīng)l1二甲苯乙醇15min ,100%乙醇5min ,100%乙醇5min ,95%乙醇5min ,85%乙醇5min ,70%乙醇5min ,蒸餾水5min 無此步驟染色經(jīng)1%番紅過夜與常規(guī)方法相同脫水(經(jīng)35%乙醇lmin ,50%乙醇lmin ,60%乙醇lmin ,70%乙醇lmin ,85%乙醇lmin ,90%乙醇lmin ,95%乙醇lmin 無此步驟脫蠟(無此步驟經(jīng)二甲苯中5min分色

20、1%固綠6s縮短在1%固綠中的時(shí)間,2 3s 脫水(經(jīng)100%乙醇(1min ,100%乙醇(1min100%乙醇中5min透明(經(jīng)11二甲苯乙醇1min ,二甲苯(1min ,二甲苯(11無水乙醇二甲苯中5min ,純二甲苯中5min 封片中性樹膠封片與常規(guī)方法相同注:傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法710。4.2樣品脫水、透明步驟的優(yōu)化處理石蠟切片法是否成功最重要的就是脫水和包埋步驟,若植物組織中水未脫盡,殘留的水分與二甲苯和石蠟不相溶,會使包埋、切片失敗。因此,采用帶塞的玻璃廣口試劑瓶對實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行脫水處理可有效避免吸收空氣中的水分。此外,通過更換杯中溶液來代替將材料在不同溶液試劑瓶轉(zhuǎn)移的方式可使操作更為簡

21、便,且避免了由于頻繁移動材料而造成損壞或丟失的問題。與常規(guī)方法相比,改良方法為避免材料在無水乙醇中浸泡時(shí)間過長造成材料收縮變形,并提高脫水效率,增加了90%的乙醇作為一個(gè)梯度濃度進(jìn)行脫水的步驟。在改良方法透明的步驟中,因?yàn)槎妆接卸尽⒁孜?、易揮發(fā),因此使用二甲苯時(shí)要隨時(shí)蓋緊蓋子并迅速完成更換每級透明劑操作。4.3浸蠟及包埋技術(shù)的優(yōu)化浸蠟是將包埋劑替代透明劑且滲透、支撐整個(gè)組織并穩(wěn)定其結(jié)構(gòu)的過程。改良方法中的浸蠟步驟采用直接向試劑瓶中加蠟粉法,蠟粉會充分和試劑瓶中二甲苯接觸并快速溶解。在不斷加蠟粉的過程中,由于溶液迅速成為二甲苯的石蠟飽和溶液,使得石蠟會均勻地滲透到組織內(nèi)部,浸蠟效果更好。浸蠟

22、期間要保持恒溫箱的溫度恒定,切忌忽高忽低。除去透明劑是一件極其重要的工作,一定要徹底、干凈,否則包埋時(shí)石蠟中有結(jié)晶現(xiàn)象,影響后期切片,因此在40恒溫浸蠟后將溫箱溫度上調(diào)至65,采用多次換蠟的措施保證將試劑瓶83安徽農(nóng)學(xué)通報(bào),Anhui Agri.Sci.Bull.2011,17(11中溶液換成純蠟,且要在最短時(shí)間內(nèi)完成浸蠟,以免引起材料變硬、變脆、收縮。浸蠟時(shí)間也應(yīng)該根據(jù)材料的性狀和大小進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整,一般情況下,體積小且幼嫩的材料浸蠟時(shí)間要比體積大、質(zhì)地堅(jiān)硬的材料短些。此外,浸蠟與包埋要一次完成,以防操作過程中出現(xiàn)溫差。4.4切片和展片時(shí)的注意事項(xiàng)切片成敗不僅與切片前的系列處理有關(guān),而且與切片

23、的操作也密切相關(guān)。切片時(shí)用力應(yīng)均勻,不宜過重過快,否則易造成切片厚薄不均。如果出現(xiàn)蠟帶彎曲不直,應(yīng)將蠟塊取下,將兩邊修平且調(diào)節(jié)夾物隔,使蠟塊和刀片平行。若切片不能連成帶或卷起成圓筒狀,可能是由于室溫過低或刀的傾角太大等原因,可在切片機(jī)旁邊安置一盞白熾臺燈用以升高切片機(jī)周邊溫度,同時(shí)減小刀的傾角;若切片還卷成筒,可用毛筆筆尖將初次切出的1 2片切片輕輕壓住,隨后即可切成連續(xù)蠟帶。如果切片粘附于切片刀上或不能成帶皺縮在一起,可能是由于室溫過高或石蠟過軟,可將蠟塊放入冰箱中1min左右或投入冷水中浸泡片刻取出,并用蘸有二甲苯的綢布清潔刀口。若此法不行,應(yīng)選用質(zhì)地較硬的石蠟對材料進(jìn)行重新包埋。若切片發(fā)

24、生縱裂,可能是刀口出現(xiàn)缺口或蠟塊含有較硬的顆粒物質(zhì),可移動刀片,使蠟塊置于新的無缺的刀口下,或去除蠟塊中的異物。展片時(shí),若展片臺溫度過高,將使石蠟熔化并浮于材料表面,造成冷卻后在材料表面形成一層蠟?zāi)?使材料無法染色。因此,展片的溫度不宜超過50。4.5染色程序的簡化和封片過程中的注意事項(xiàng)由于染料不能進(jìn)入石蠟,常規(guī)的石蠟切片染色方法要在脫蠟和復(fù)水后進(jìn)行。但在切片過程中發(fā)現(xiàn),切片的植物組織斷面上無石蠟覆蓋,且染料可經(jīng)植物組織斷面吸收。通過反復(fù)嘗試,發(fā)現(xiàn)切片不經(jīng)脫蠟和復(fù)水也可染色,制成的裝片比脫蠟后染色的裝片效果好,且很少發(fā)生在傳統(tǒng)切片法中出現(xiàn)的花粉母細(xì)胞脫落和胚囊脫落的現(xiàn)象。不脫蠟就進(jìn)行番紅的染色

25、對比傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法有不少優(yōu)點(diǎn),即:(1省去常規(guī)脫蠟染色法中脫蠟后水化(經(jīng)下行梯度酒精及染色后脫水(經(jīng)上行梯度酒精的步驟,這樣既大大簡化了染色手續(xù),同時(shí)又節(jié)省了藥品和時(shí)間;(2載片接觸溶液的次數(shù)較傳統(tǒng)方法少,因此,有些在常規(guī)染色過程中極易脫落丟失的成分(如孢子、花粉粒、胚囊等,在改進(jìn)方法中較完整地保留下來;(3切片在不脫蠟時(shí),其機(jī)械強(qiáng)度比脫蠟后要高很多,因此,在直接染色過程中,不脫蠟的切片可以反復(fù)地經(jīng)受染色、水洗、干燥,也能耐受擦拭,不會出現(xiàn)由于一時(shí)操作不慎將切片擦脫、劃傷等情況;(4常規(guī)染色的切片在顯微鏡下觀察染色效果時(shí),最忌諱切片干燥而引起組織、細(xì)胞結(jié)構(gòu)的收縮或破壞。因此,只能在染色過程中匆忙

26、、大略地檢查染色效果,而在封片后發(fā)現(xiàn)染色效果差難以補(bǔ)救。不脫蠟染色的切片不怕干燥,在染色后脫蠟以前,可以在顯微鏡下仔細(xì)檢查切片,正確地決定切片是否需要繼續(xù)染色或是進(jìn)行下一步脫蠟、分色。此外,對連續(xù)切片的材料在染色之后,脫蠟前就可以在顯微鏡下進(jìn)行初步挑選,只揀出有用的切片脫蠟、封藏,提高了工作效率;(5染色的切片可以放在切片盒中不脫蠟長期保存,或?qū)ξ疵撓炓讶旧那衅峙M(jìn)行處理,這樣既節(jié)省時(shí)間又可得到一致的染色效果。切片染上紅色后,在流水上沖去多余染料,烘干后可直接脫蠟,然后不復(fù)水進(jìn)行分色。經(jīng)過反復(fù)實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)盡管第一次不脫蠟染色效果好,但若不脫蠟進(jìn)行分色,會造成第二次染色上色不均勻,效果不好。為使染出的切片效果統(tǒng)一,建議使用染色架,每次染數(shù)10張甚至上百張載片(同時(shí)準(zhǔn)備數(shù)個(gè)染缸,每個(gè)染缸可放1個(gè)染色架,1個(gè)染色架上可放30張載片