精品資料（2021-2022年收藏）奶粉中雙氰胺的檢測(cè)SPEHPLC法

1、奶粉中雙氰胺的檢測(cè)方法（HPLC-UV和HPLC-MS/MS法）北京時(shí)間1月25日凌晨消息，新西蘭牛奶中發(fā)現(xiàn)了有害物質(zhì)雙氰胺。雙氰胺又名二氰二胺，縮寫DICY或DCD。雖然國際標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)食品中的雙氰胺限量，但高劑量的雙氰胺對(duì)人體是有毒的。本文采用天津博納艾杰爾科技的Cleanert® MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管（貨號(hào)：MS-DI5001）和Venusil® HILIC液相色譜柱，建立了奶粉中雙氰胺的MAS-QuEChERS快速前處理方法和LC-UV以及LC-MS/MS檢測(cè)方法。表1 雙氰胺樣品信息名稱結(jié)構(gòu)式分子量CAS雙氰胺84.08461-58-5實(shí)驗(yàn)部分儀器和試

2、劑高效液相色譜儀，渦旋振蕩器，超聲波清洗機(jī)，氮吹儀。雙氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，Cleanert® MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管，Venusil® HILIC液相色譜柱，微孔濾膜，乙酸銨、乙酸、乙腈為色譜純，實(shí)驗(yàn)用水為超純水。實(shí)驗(yàn)方法提取、凈化稱取1g試樣于50mL具塞離心管中，加入2mL水溶解后，加乙腈定容至10mL，超聲10min，8000r/min離心5min，取2mL上清液加Cleanert® MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管中，渦旋0.5min，8000r/min離心5min，取上清液過0.22µm濾膜，待測(cè)。HPLC法：色譜條件：色譜柱：Ven

3、usil® HILIC 5m 100Å 4.6*250mm；流動(dòng)相：A：10mmol/L乙酸銨（pH=4.0）；B：乙腈； A：B=10:90；檢測(cè)波長：220nm；進(jìn)樣量：10µl；柱溫：30；流速：1mL/min。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：線性關(guān)系和檢出限準(zhǔn)確稱取雙氰胺標(biāo)準(zhǔn)品50mg于50mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液；分別量取一定量的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用乙腈稀釋，配置成濃度為0.1µg/mL，0.5µg/mL，1.0µg/mL，2.0µg/mL，5.0µg/mL和10.0µg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述

4、色譜條件，依次進(jìn)樣檢測(cè)。以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，擬合線性方程，結(jié)果見表2：表2 雙氰胺線性方程和定量限（HPLC法）名稱保留時(shí)間線性方程相關(guān)系數(shù)最低定量限（S/N=10）雙氰胺4.92minY=116.44X+3.26990.99970.1µg/ml檢測(cè)方法穩(wěn)定性考察選用10.0µg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，計(jì)算其保留時(shí)間和峰面積的RSD值，結(jié)果見表3：表3 檢測(cè)方法定性和定量穩(wěn)定性考察考察（HPLC法）標(biāo)號(hào)保留時(shí)間，min峰面積14.9301061.724.9331072.234.9301064.444.9291079.754.9301067.364.

5、9341073.6RSD，%0.040.62準(zhǔn)確度和精密度選取市售某品牌奶粉試樣，進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表4表4 10µg/g添加回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（HPLC法）平行1，%平行2，%平行3，%平均值，%RSD，%98.688.489.892.35.99LC-MS/MS法：色譜條件：色譜柱：Venusil® HILIC 5m 100Å 2.1*150mm；流動(dòng)相：A：0.5mmol/L乙酸銨（pH=4.0） B：乙腈 A：B=10:90進(jìn)樣量：10µL；柱溫：30；流速：0.2 mL/min。質(zhì)譜條件質(zhì)譜儀：API 4000+；離子源：電噴霧離子源；掃描方式：

6、正離子掃描；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；CAD：8.00；CUR：10.00；GS1：60.00；GS2：50.00；IS：5500.00；TEM：500.00。表5 雙氰胺質(zhì)譜信息藥物名稱監(jiān)測(cè)離子對(duì)DPEPCECXP雙氰胺85/68711041685/437110416注：帶“_”的監(jiān)測(cè)離子對(duì)為定量離子對(duì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果線性關(guān)系和檢出限準(zhǔn)確稱取雙氰胺標(biāo)準(zhǔn)品50mg于50mL容量瓶中，加水溶液并稀釋至刻度，作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液；分別量取一定量的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用乙腈稀釋，配置成濃度為5ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，50ng/mL，100ng/mL和500ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述液質(zhì)方法，依次進(jìn)樣

7、檢測(cè)。以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，擬合線性方程，結(jié)果見下表6：表6 雙氰胺線性方程和定量限（LC-MS/MS法）名稱保留時(shí)間線性方程相關(guān)系數(shù)最低定量限（S/N=10）雙氰胺3.15minY=8777.2X+7435.90.99935ng/mL檢測(cè)方法穩(wěn)定性考察選用50.0ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，計(jì)算其保留時(shí)間和峰面積的RSD值，結(jié)果見表7：表7 檢測(cè)方法定性和定量穩(wěn)定性考察考察（LC-MS/MS法）標(biāo)號(hào)保留時(shí)間，min峰面積13.29382950 23.30387950 33.25382840 43.31399820 53.30378580 63.30383810 RSD

8、，%0.651.92準(zhǔn)確度和精密度選取市售某品牌奶粉試樣，進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表8。采用空白樣品稀釋法判斷檢測(cè)方法的基質(zhì)效應(yīng)影響。空白凈化液稀釋和乙腈稀釋的標(biāo)準(zhǔn)溶液，雙氰胺峰面積和相對(duì)豐度比無明顯變化，故判斷該方法無基質(zhì)效應(yīng)的影響。表8 100ng/g添加回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果平行1，%平行2，%平行3，%平均值，%RSD，%84.680.790.285.25.61雙氰胺檢測(cè)方法包訂貨信息產(chǎn)品名稱規(guī)格型號(hào)貨號(hào)MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管100mg/10mL，100支/包 MS-SQA01Venusil HILIC4.6*250mm，5m，100ÅVH952505-02.1*150mm，5m，100ÅVH951502-0微孔濾膜0.22m，直徑13mm,200/PKAM021320雙氰胺對(duì)照品50mg/瓶，含量99.0% DCD-0001離心管50mL，帶螺紋蓋，25個(gè)/包L050025-C一次性無菌注射器5mL,100/pk ZSQ-5ML附圖圖1 定性定量穩(wěn)定性考察譜圖（HPLC法）圖2 雙氰胺0.5µg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液譜