蘋果中多酚氧化酶特性的測定不完全2

1、 有關于蘋果中多酚氧化酶的實驗 原理：多酚氧化酶是引起果蔬酶促褐變的主要酶類。在蘋果中，酶促褐變主要是因多酚氧化酶氧化內源的酚類物質生成鄰醌，鄰醌再相互聚合或鄰醌與蛋白質，氨基酸等作用生成高分子絡合物而導致褐色素的生成，色素分子量愈高，顏色愈暗，嚴重影響制品的營養(yǎng)、風味及外觀品質。PPO的來源不同，它們的理化性質也存在較大的差異，因而對同一物理或化學處理的敏感性不同。在生產實踐中，根據(jù)原料的不同種類，來源和加工特點，合理選擇PPO活性的抑制方法，對提高產品質量有重要作用。 材料：無傷痕，無病害，品質良好的成熟蘋果，品種為酸王，于4貯藏備用。 試劑：丙酮，磷酸鹽緩沖溶液，鄰苯二酚溶液，PVPP，

2、Triton-100.Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚) 免疫細胞化學中，Triton X-100常用濃度為1%和0.3%，但通常是先配制成30%的Triton X-100儲備液，臨用時稀釋至所需濃度。30% Triton X-100的配制： 試劑：Triton X-100 :, 0.05mol/L PBS(pH配制方法：取Triton X-100及PBS混合，置3740水浴中23h，使其充分溶解混勻。用前取該儲備液稀釋至所需濃度。 所需實驗測出的數(shù)據(jù)及相關內容：ph對PPO的影響及其穩(wěn)定性，最適反應溫度及其它的熱穩(wěn)定性，對底物專一性的高低，不同抑制劑對反應的抑制程度，PPO的酶促

3、動力學參數(shù)。 實驗步驟設計:(1) 蘋果洗凈后在4保溫，再去皮后取果肉200g，立即加入冷凍丙酮500ml,用高速組織搗碎機勻漿2min；用布氏漏斗抽濾，濾餅用200ml冷凍丙酮再次提取抽濾，白色粉末在蒸發(fā)皿中，在室溫下干燥，即得PPO丙酮粉。(2) 稱取丙酮粉的預冷磷酸鹽緩沖液溶液，用磁力攪拌器攪拌20min,5000r/min離心10min,上清液過濾，即得蘋果PPO粗酶液。選取方法：稱取100g蘋果果肉加入含1%PVP的mol/L，pH磷酸鹽緩沖液(一5C，250ml)，然后用勻漿機打碎，再l0000r/min轉速下?lián)v碎3min，將糊狀的蘋果混合物用FL一20型冷凍離心機，在0C，600

4、00r/min條件下離心15min，將清液和沉淀分離，沉淀中再加入含1%PVP的0.2mol/L，pH7.0磷酸鹽緩沖液(一5C，250ml)，然后再與第一次搗碎相同的條件下?lián)v碎3min，再冷凍離心(條件同第一次);所得的沉淀排除，而所得的清液與第一次得到的清液混合(約為500ml)。即粗酶液。在混合清液中加入已在一18C下冷卻的丙酮(一15C，1000ml);丙酮要慢慢地加入，一邊加入，一邊慢慢地攪拌，加入完畢保持15min，然后冷凍離心(條件同上);所得的清液進行丙酮回收，而所得的沉淀1000ml，一5C的，搗碎5，然后用磁力攪拌機3C下攪拌lh，最后進行冷凍離心(條件同上)，所得的沉淀排

5、除，而所得的清液即為多酚氧化酶液，稱PPO，其量約為1000ml.（成功提?。?， 1cm比色皿中，加入鄰苯二酚溶液1ml,PPO粗酶液0.5ml,混勻后在400mm處比色，酶液加入后開始計時，每30s記錄一次OD隨時間的變化值，以最初直線段的斜率(D/t)計算酶活力，一個酶活力單位定義為：在測定條件下，每分鐘引起吸光度改變0.01所需的酶量。2， ph對PPO活性及穩(wěn)定性的影響 配制醋酸鈉緩沖液(ph 3.5/5.6),磷酸鹽(KH2PO4NAOH)緩沖溶液（ph 5.8/8.0）在1cm比色皿中，加入食鹽所設定的緩沖溶液1.5ml,鄰苯二酚溶液1ml,PPO粗酶液0.5ml,混勻，在室溫下

6、測定PPO的活性。采用常規(guī)方法，在不同溫度（范圍1060，間隔為2，ph為6.2）和不同ph(9.0，間隔為0.2，溫度28)條件下測定PPO活性（最大活性管為100相對活性）。0）于30反應，測定PPO的殘留活力。3， 溫度對PPO活性的影響及其熱穩(wěn)定性的影響 在1cm比色皿中，加入磷酸鹽緩沖液（ph6.6）1.5ml,鄰苯二酚溶液1ml,在某一溫度（20/50）保溫5min,加入相同溫度下保溫5min粗酶液0.5ml，迅速測定PPO的活性。熱穩(wěn)定性 PPO粗酶液在100 水浴處理一定時間后立即置于水浴中，然后再反應體系Ph6.0室溫下測定PPO的活性。4， 抑制劑對PPO活性的影響 用0.

7、2mol/L磷酸鹽緩沖溶液（ph6.0），配制不同濃度的黃酮化合物和抗壞血酸抑制劑溶液，在反應體系ph6.0，室溫下測定PPO的活性。第一次實驗失敗原因：1， 鄰苯二酚已經被氧化，所以測出的實驗數(shù)據(jù)不正確；2， 對紫外可見分光光度儀的應用不熟練；3， 在實驗過程中Ph的調節(jié)不是非常正確，應該有較大的誤差；4， 在溶液的配制中，存在著某些不確定因素，因而對實驗造成的誤差；5， 在制取出PPO后，有較長時間沒有進行處理，所以存在較大誤差；6， 在研磨時溫度沒有控制好，造成酶的失活可能性較大；7， 澳洲青蘋，富士，紅星，金帥，8， 如何測酶活力？在紫外可見分光光度儀上怎樣辨別？吸光度和酶活力有什么關系？該如何去對應？在最大吸收峰處（首先如何測定較為準確的最大吸收峰）怎樣測定酶活力？相對酶活力?9， 對PVPP的配制，要找出確定的值，因不考慮其對實驗的影響因素，所以不做詳細的實驗，只加進去適量就可10， 峰值高度和酶活力呈正相關。11， 以吸光度為豎坐標，不用一酶活力為豎坐標，進行比較，因其與酶活力呈正相關。12， PPO活性測定時，底物鄰苯二酚與PPO酶的用量之間的比例？13， 在進行單因素實驗時，試驗因素的機動性如何安排？間隔為多少？溫度，Ph,以多大為間隔，需要多少組數(shù)據(jù)可以完成實驗安排？14， 酶的比