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1、生物化學實驗指導書適用專業(yè)：生物科學、食品科學、生物工程、農學、園藝、中藥、環(huán)境科學長春科技學院生物食品系生物化學實驗細則為了保證生物化學實驗的順利進行，培養(yǎng)同學們掌握良好、規(guī)范的生物化學基本實驗技能, 特制定以下實驗細則，請同學們嚴格遵守。1. 實驗前應提前預習實驗指導書并復習相關知識。2. 嚴格按照生物化學實驗分組，分批進入實驗室，不得遲到。非本實驗組的同學不準進入實驗室。3. 進入實驗室必須穿實驗服。各位同學進入各自實驗小組實驗臺后，保持安靜，不得大聲喧嘩和嬉戲，不得無故離開本實驗臺隨便走動。絕對禁止用實驗儀器或藥物嬉耍。4. 實驗中應保持實驗臺的整潔，廢液倒入廢液桶中，用過的濾紙放入垃

2、圾桶中，禁止直接倒入水槽中或隨地亂丟。5. 實驗中要注意節(jié)約藥品與試劑，愛護儀器，使用前應了解使用方法，使用時要嚴格遵守操作規(guī)程，不得擅自移動實驗儀器。否則，因非實驗性損壞，由損壞者賠還。6. 使用水、火、電時，要做到人在使用，人走關水、斷電、熄火。7. 做完實驗要清洗儀器、器皿，并放回原位，擦凈桌面。8. 實驗后，要及時完成實驗報告。3實驗一還原糖和總糖的測定實驗二油脂酸價的測定.實驗三實驗四實驗五實驗六實驗七實驗八實驗九實驗十實驗十3,5-二硝基水楊酸比色法.1蛋白質的提取及濃度測定?（紫外吸收法）.淀粉酶活力的測定.酶的激活和抑制作用.氨基酸的分離鑒定一一紙層析法.基因組DNA的快速提取

3、-碘化鉀法.瓊脂糖凝膠電泳技術DNA羊品檢測.醋酸纖維薄膜電泳法分離血清蛋白質.胡蘿卜素的柱層析分離法.卵磷脂的提取、鑒定和應用.實驗十二淀粉多糖的提取和性質試驗.實驗十三肝糖原的提取和定量.實驗十四蛋白質含量測定（考馬斯亮藍G - 250法）.13.14.16.17.19.22.24.25.26.28實驗還原糖和總糖的測定3,5-二硝基水楊酸比色法一、目的與要求掌握還原糖和總糖測定的基本原理，學習比色法測定還原糖的操作方法和分光光度計的使用。二、實驗原理還原糖的測定是糖定量測定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類，單糖都是 還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖，如乳糖和麥芽糖是還原糖，

4、蔗糖和淀粉是非還原糖。利用 糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來，對沒有還原性的雙糖和多 糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進行測定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量(還原糖以葡萄糖含量計)。還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產物,3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的13-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內，還原糖的量與棕紅色物質顏色的深淺成正比關系，利用分光光度計，在540 nm波長下測定光密度值，查對標準曲線并計算，便可求出樣品中還原糖和總分子水，所以在計算多糖含量時糖的含量。由于多糖水解為單糖時，每斷裂一個糖苷鍵需加入 應乘以0.9。三、實驗材料、

5、主要儀器和試劑1 .實驗材料小麥面粉(1000 g)2.主要儀器(1)具塞玻璃刻度試管:20 mL X 11(2)濾紙(3)燒杯：100 mL X 2(4)三角瓶：100 mL X 1(5 )容量瓶:100 mL X 3(6)刻度吸管：1mL X 1； 2 mL X 2;10 mL X 1(7)恒溫水浴鍋(8)煤氣爐(9)漏斗(10)天平(11)分光光度計3.試劑準確稱取80 C烘至恒重的分析純葡萄糖(1) 1mg/mL葡萄糖標準液100 mg,置于小燒杯中，加少量蒸餾水溶解后，轉移到100 mL容量瓶中，用蒸餾水定容至 100 mL,混勻，4C冰箱中保存?zhèn)溆谩?2) 3,5-二硝基水楊酸(D

6、NS)試劑3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑：稱取6.5 g DNS溶于少量熱蒸餾水中， 溶解后移入1000 mL容量瓶中，加入2 mol/L氫氧化鈉溶液325 mL ,再加入45 g丙三醇，搖勻，冷卻后定容至1000 mL。(3)碘-碘化鉀溶液：稱取 5 g碘和10 g碘化鉀，溶于100 mL蒸餾水中。(4)酚酞指示劑：稱取 0.1 g酚酞，溶于250 mL 70%乙醇中。(5)6 M HCI 和 6 M NaOH 各 100 mL。(分別取 59.19 mL 37% 濃鹽酸和 24 克 NaOH 定容至 100mL)四、操作步驟1. 制作葡萄糖標準曲線取7支20 mL具塞刻度試管編號，按表

7、1分別加入濃度為1 mg/mL的葡萄糖標準液、 蒸餾水和3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑，配成不同葡萄糖含量的反應液。表1葡萄糖標準曲線制作管號1mg/mL葡萄糖標準液(mL)蒸餾水葡萄糖含量(mg)光密度值(OD540nm)(mL)DNS (mL)0021.5010.21.81.50.220.41.61.50.430.61.41.50.640.81.21.50.851.01.01.51.061.20.81.51.2將各管搖勻，在沸水浴中準確加熱 5 min，取出，用冷水迅速冷卻至室溫，用蒸餾水定容至20 mL ,加塞后顛倒混勻。 調分光光度計波長至 540 nm,用0號管調零點，等后面71

8、0號管準備mg )為橫坐標，在坐標好后，測出16號管的光密度值。以光密度值為縱坐標，葡萄糖含量(紙上繪出標準曲線。葡萄糖標準曲線光密度值5葡萄糖含量(mg2. 樣品中還原糖和總糖的測定(1)還原糖的提取準確稱取3.00 g食用面粉，放入100 mL燒杯中，先用少量蒸餾水調成糊狀，然后加入50 mL蒸餾水，攪勻，置于 50 C恒溫水浴中保溫 20 min，不時攪拌，使還原糖浸出。過濾，將濾液全部收集在100 mL的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，即為還原糖提取液。(2) 總糖的水解和提取力口 15 mL蒸餾水及10 mL 6 M HCI，置沸1滴I-KI溶液檢查水解是否完全。如已準確稱取1.00

9、g食用面粉，放入100 mL三角瓶中,水浴中加熱水解 30 min,取出12滴置于白瓷板上，加水解完全，則不呈現藍色。水解畢。冷卻至室溫后加入1滴酚酞指示劑，以 6 moI/L NaOH溶液10 mL于100 mL容量瓶中，定容至刻度,中和至溶液呈微紅色，并定容到100 mL,過濾取濾液混勻，即為稀釋1000倍的總糖水解液，用于總糖測定。(3) 顯色和比色取4支20 mL具塞刻度試管，編號，按表2所示分別加入待測液和顯色劑，將各管搖勻，在沸水浴中準確加熱 5 min，取出，冷水迅速冷卻至室溫， 用蒸餾水定容至 20 mL,加塞后顛倒混勻,在分光光度計上進行比色。調波長540 nm，用0號管調零

10、點，測出 710號管的光密度值。表2樣品還原糖測定管號還原糖待測液(mL)總糖待測液(mL)蒸餾水(mL)DNS(mL)光密度值(OD540nm)查曲線葡萄糖量(mg)平均值70.51.51.580.51.51.59111.510111.5五、結果與計算計算出7、8號管光密度值的平均值和9、10管光密度值的平均值，在標準曲線上分別查出相應的葡萄糖毫克數,按下式計算出樣品中還原糖和總糖的百分含量(以葡萄糖計)。還原糖(% =未曰卄卄亠擊Wr提取液總體積查曲線所得葡萄糖靈克數X 100 =總糖(% =查曲線所得水解后葡萄糖毫克數X稀釋倍數樣品毫克數X 0.9 X 100 =六、注意1.標準曲線制作與樣品測定