大鼠甲狀旁腺素PTHELISA試劑盒使用說明書

1、大鼠甲狀旁腺素PTH ELISA試劑盒使用說明書南京森貝伽現(xiàn)貨供應,質(zhì)量保證,價格優(yōu)惠,試劑盒首選森貝伽.本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中大鼠甲狀旁腺素PT口的含量.實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠甲狀旁腺素PTH水平.用純化的大鼠甲狀旁腺素PTH抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次參加甲狀旁腺 素PTH,再與HRP標記的PTH抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗 滌后加底物TMB顯色.TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終 的黃色.顏色的深淺和樣品中的甲狀旁腺素PTH呈正相關(guān).用酶標儀

2、在450nm波長下測定吸光度OD值,通過標準曲線計算樣品中大鼠甲狀旁腺素 PTH濃度. 試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2 片(48)2 片(96)密封袋1個1個酶標包被板1X481X 962-8 C保存標準品：45ng/L0.5ml X 1 瓶0.5ml X 1 瓶2-8 C保存標準品稀釋液1.5ml X 1 瓶1.5ml X 1 瓶2-8 C保存酶標試劑3 ml X 1 瓶6 ml x 1 瓶2-8 C保存樣品稀釋液3 ml x 1 瓶6 ml x 1 瓶2-8 C保存顯色劑A液3 ml x 1 瓶6 ml x 1 瓶2-8 C保存顯色劑B液3 ml x

3、1 瓶6 ml x 1 瓶2-8 C保存終止液3ml x 1 瓶6ml x 1 瓶2-8 C保存濃縮洗滌液(20ml X 20 倍)X 1 瓶(20ml x 30 倍)x 1 瓶2-8 C保存樣本處理及要求：1 .血清：室溫血液自然凝固 10-20分鐘,離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分.仔細收集上 清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心.2 .血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分.仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次 離,°3 .尿液：用無菌管收集,離心 20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)

4、/分.仔細收集上清,保存過程 中如有沉淀形成,應再次離心.胸腹水、腦脊液參照實行.4 .細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,用無菌管收集.離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分.仔細收集上清.檢測細胞內(nèi)的成份時,用 PBS PH7.2-7.4稀釋細胞懸液,細胞濃度到達100萬/ml左右.通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份.離心 20分鐘左右2000-3000車t/分.仔細收集上清.保存過程中如有沉淀形成,應再次離心.5 .組織標本：切割標本后,稱取重量.參加一定量的PBS, PH7.4.用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?標本融化后仍然保持2-8C的溫度.參加一定量的 PBS PH7.4,用手工或

5、勻漿器將標本勻漿充分.離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分.仔細收集上清.分裝后一份待檢測,其余冷凍備用.6 .標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗.假設(shè)不能馬上 進行試驗,可將標本放于 -20 C保存,但應預防反復凍融.7 .不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的HRP活性.操作步驟：1 .標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在第一、第二孔中分別加標準品100出然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50 4,混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100 d分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50小混勻；然后在第三孔

6、和第四孔中先各取50M棄掉,再各取50 M分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50 M分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50出混勻后從第七、第八孔中分別取50 M加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50 口,混勻后從第九第十孔中各取50 M棄掉.稀釋后各孔加樣量都為50小濃度分別為 30ng/L, 20ng/L , 10ng/L , 5ng/L , 2.5ng/L.2 .加樣：分別設(shè)空白孔空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同、待測樣品孔.在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液

7、40小 然后再加待測樣品10 口樣品最終稀釋度為5倍.加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混 勻.3 .溫育:用封板膜封板后置 37 c溫育30分鐘.4 .配液：將30 48T的20倍倍濃縮洗滌液用蒸儲水 30 48T的20倍倍稀釋后備用.5 .洗滌：小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此 重復5次,拍干.6 .加酶：每孔參加酶標試劑 50 4,空白孔除外.7 .溫育:操作同3.8 .洗滌：操作同5.9 . 顯色：每孔先參加顯色劑A50U,再參加顯色劑 B50M,輕輕震蕩混勻,37c避光顯色15分鐘.10 .終止：每孔加終止液 50聞終止反響此

8、時藍色立轉(zhuǎn)黃色.11 .測定：以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度 OD值.測定應在加終止 液后15分鐘以內(nèi)進行.本卷須知：1 .試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘前方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存.2 .濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果.3 .各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以預防試驗誤差.一次加樣時間最好 限制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣.4 .請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔.如標本中待測物質(zhì)含量過高樣本OD值大于標準品孔第一孔的 OD值,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù) n倍后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)X nX5o5 .封板膜只限一次性使用,以預防交叉污染.6 .底物請避光保存.7 .嚴格根據(jù)說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準8 .所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理.9 .本試劑不同批號組分不得混用.10 .如與英文說明書有異,以英文說明書為準.此圖僅供參考計算：以標準物的濃度為橫坐標, OD值為縱坐標, 在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋 倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值