水質(zhì)的細(xì)菌學(xué)檢查

1、水質(zhì)的細(xì)菌學(xué)檢查水質(zhì)的細(xì)菌學(xué)檢查一、目的要求（一）學(xué)習(xí)水質(zhì)的細(xì)菌學(xué)檢查法（二）了解水質(zhì)狀況同細(xì)菌數(shù)量的關(guān)系及大腸菌群的數(shù)量在飲水中的重要性。二、基本原理檢測(cè)水中的細(xì)菌數(shù)量是評(píng)價(jià)水質(zhì)狀況的重要指標(biāo)之一。飲水是否合乎衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，需要進(jìn)行水中細(xì)菌數(shù)量及大腸菌群數(shù)量的測(cè)定。 大腸菌群是腸道最普遍存在 和數(shù)量最多的一群細(xì)菌，由于大腸菌群是一群能發(fā)酵乳糖的革蘭氏陰性、無(wú)芽抱 桿菌，它們?cè)谌樘桥囵B(yǎng)基中經(jīng)37C培養(yǎng)24小時(shí)即能產(chǎn)酸、 產(chǎn)氣， 所以常將其作 為糞便污染的標(biāo)志。飲用水一般規(guī)定：1毫升自來(lái)水中總菌數(shù)不得超過(guò)100個(gè)；1000毫升自來(lái)水 中大腸菌群數(shù)不得超過(guò)3個(gè)。三、實(shí)驗(yàn)材料培養(yǎng)基及器皿、 牛肉膏蛋白胨

2、培養(yǎng)基、乳糖蛋白胨發(fā)酵管（內(nèi)倒置小管）、 三倍乳糖蛋白胨發(fā)酵管（內(nèi)倒置小管）、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、無(wú)菌空瓶、無(wú)菌 水、無(wú)菌培養(yǎng)皿、移液管、試管。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)客（一）采取水樣1、 自來(lái)水：從學(xué)校各生活區(qū)取樣。先將自來(lái)水龍頭用火焰滅菌，再開放水龍頭使水流12分鐘后，用無(wú)菌空瓶接取水樣。2、 池水、湖水或河水：用無(wú)菌空瓶取距水面1015厘米深層水樣。水樣采取 后應(yīng)立即檢驗(yàn)，不得超過(guò)4小時(shí)。（二）水中細(xì)菌總數(shù)測(cè)定1、 自來(lái)水：稀釋水樣：原水樣和10-1水樣，用無(wú)菌移液管分別吸取I毫升原水樣和10-1水樣，分別注入二個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿中。每皿各加13-15毫升已融化并冷卻到4 5- 50C的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，

3、輕輕旋轉(zhuǎn)，使培養(yǎng)基與水樣充分混勻，待凝固后， 將平板倒置于37E恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24小時(shí)進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。制作培養(yǎng)基方法、消毒滅菌、接種、計(jì)數(shù)皆參照參微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)， 具體如下： 培養(yǎng)基制作：實(shí)驗(yàn)五、培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基配方：附錄二、常用培養(yǎng)基之一 培養(yǎng)基滅菌：實(shí)驗(yàn)六、滅菌與消毒 水樣接種：實(shí)驗(yàn)七、土壤微生物的分離與測(cè)數(shù) 細(xì)菌總數(shù)測(cè)定：實(shí)驗(yàn)七、土壤微生物的分離與測(cè)數(shù)2、 池水、湖水或河水等。稀釋水樣：稀釋倍數(shù)視水樣污濁程度而定，使水樣培養(yǎng)后每個(gè)平板中的菌落 數(shù)在30-300之間的的稀釋度最為合適。例如：取湖水稀釋成10-1、10-2、10-3。每個(gè)稀釋度作兩個(gè)培養(yǎng)皿，并依上法傾入培養(yǎng)基制成平板，培養(yǎng)

4、，計(jì)數(shù)。菌落計(jì)數(shù)方法：1）先計(jì)算同一稀釋度的平均菌落數(shù)。若其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不應(yīng)采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌落的大小不到培養(yǎng)皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均勻時(shí)， 則可將此一半的菌落數(shù)乘2代表全平板的菌數(shù)，然后再計(jì)算該稀釋度的平均菌落數(shù)。（2）首先選擇平均菌落在30300之間的平板，當(dāng)只有一個(gè)稀釋度的平均菌落 數(shù)符合此范圍時(shí)，則以該平均菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)即為該水樣的細(xì)菌總數(shù)（見(jiàn)表1中例1）。（3）若有兩個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)都在30-300之間，則按兩者菌落總數(shù)之比 值來(lái)決定。若其比值小于2則應(yīng)取兩者的平均數(shù)；若大于2則取其中較小的菌落

5、 總數(shù)（表1中例2及3）。表一計(jì)算菌落總數(shù)方法舉例例次不同稀釋度的 平均菌落數(shù)兩稀度菌數(shù)比個(gè)釋落之菌落數(shù)10-110210-3113616201600或254461.61.6*104327629602.238000或4055133.8*104528927527000或601122.7*104無(wú)465.1*105數(shù)50270或27112.7*102無(wú)3031000或數(shù)53.1*104（4）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于 乘以稀釋倍數(shù)（表1中例4）。（5）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于 以稀釋倍數(shù)（表1中例5）（6）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在 平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù) （表一中例300，則應(yīng)按稀

6、釋度最咼的平均菌落數(shù)30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘30-300之間。則以最接近300或30的（三）用發(fā)酵法檢查大腸菌群1、自來(lái)水：分三個(gè)步驟進(jìn)行檢查(1)初發(fā)酵試驗(yàn)：在2個(gè)裝有50毫升三倍乳糖蛋白胨發(fā)酵管中，各加入100毫升水樣，在10支裝有5毫升三倍乳糖蛋白胨發(fā)酵管中，各加入10毫升 水樣?；靹蚝?7C培養(yǎng)24小時(shí)。(2) 平板分離：經(jīng)24小時(shí)培養(yǎng)后，將產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸的發(fā)酵管，分別劃線接 種于伊紅美藍(lán)平板上，于37C培養(yǎng)18-24小時(shí)，將符合下例特征的菌落的一部 分，進(jìn)行涂片、革蘭氏染色、鏡檢。a深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；b.紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；c.淡紫紅色，中心色

7、較深的菌落。(3) 復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)：經(jīng)涂片、染色、鏡檢為革蘭氏陰性無(wú)芽抱桿菌時(shí)，則挑取該 菌落的另一部分，再接種于普通濃度的乳糖蛋白胨發(fā)酵管中， 每管可接種來(lái)自同 一發(fā)酵管的同類型菌落1-3個(gè)。37C培養(yǎng)24小時(shí)，結(jié)果若產(chǎn)酸產(chǎn)氣，即證實(shí)有 大腸菌群存在。證實(shí)有大腸菌群存在后，再根據(jù)發(fā)酵試驗(yàn)的陽(yáng)性管數(shù)查表二，即得大腸菌群數(shù)。2.池水，湖水或河水等分別取湖水10-2、10-1的稀釋液及原水樣各1毫升，加到裝有10毫升普通 乳糖蛋白胨發(fā)酵液試管中。另取10毫升和100毫升原水樣，分別加到裝有5毫 升和50毫升三倍乳糖蛋白胨發(fā)酵液的試管中。以下步驟同上述自來(lái)水的平板分離和復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。若證實(shí)有大腸菌群存在，

8、則根據(jù)大腸菌群陽(yáng)性管數(shù)查表三或表四即得每升水 樣中的大腸菌群數(shù)。表二大腸菌群檢數(shù)表接種水樣總量300毫升(100毫升2份,10毫升10分)00毫升水量012Y勺每升水每升水每升水樣中樣中樣中陽(yáng)性管大腸菌大腸菌大腸菌數(shù)群數(shù)群數(shù)群數(shù)10 毫升水量為勺陽(yáng)性管數(shù)10230表二大腸菌群檢數(shù)表接種水樣總量111.1毫升（100毫升、10毫升、0.1毫升各1份）接每升種水樣量（毫升）水樣1001010.1中 大腸菌群數(shù)-2380表四大腸菌群檢數(shù)表接種水樣總量11.1毫升（10毫升、1毫升、0.1毫升、0.01毫升各1份）接種水樣量（毫升）每升1010.10.01水樣 中大腸 菌群 數(shù)-23800五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

9、內(nèi)容（一）我校各生活區(qū)水樣中，細(xì)菌總數(shù)每毫升多少？經(jīng)大腸菌群 檢查每升水中含多少？水源被污染，出現(xiàn)什么情況？（二）在湖水（或河水）水樣中細(xì)菌總數(shù)及大腸菌群數(shù)是多少？ 不同區(qū)域取樣有無(wú)區(qū)別，為什么？六、思考題（一）大腸菌群中的細(xì)菌種類一般并非是病原菌，為什么要選大 腸菌群作為水源被污染的指標(biāo)？（二）伊紅美蘭培養(yǎng)基中的哪些成分有助于我們鑒別大腸桿菌附錄：所需培養(yǎng)基配方、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基:（300ml/桌，用500ml三角瓶做）3克10克5克20克牛肉膏蛋白胨NaCI瓊脂自來(lái)水PH滅菌121C, 30分鐘二、乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（單倍）（200ml/桌，用500ml瓷缸子做）蛋白胨10克牛肉膏3克乳糖

10、5克NaCl5克1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1毫升將蛋白胨、牛肉膏、乳糖及NaCl加熱溶解于1000毫升蒸餾水中，調(diào)pH至7.2-7.4。加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1毫升，混勻，分裝于有倒置杜氏小 管的試管中。115C滅菌20分鐘。、三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液：（600ml/桌，用1000ml瓷缸子做）上述培養(yǎng)液中成分各按三倍量配制，蒸餾水仍為四、 伊紅美蘭培 養(yǎng)基 （ 蛋白胨 乳糖 磷酸二氫鉀 瓊脂 蒸餾水*2%伊紅水溶液*0.5%美蘭水溶液pH滅菌*為滅完菌再加水質(zhì)細(xì)菌學(xué)檢查實(shí)驗(yàn)時(shí)間安排1000毫升200ml/桌，用300ml三角瓶做）10克10克2克20克1000毫升20毫升13毫升7.2-

11、7.4 115C, 20分鐘第一次：講實(shí)驗(yàn)第二次：準(zhǔn)備器皿、洗器皿、準(zhǔn)備無(wú)菌水管、滅菌 第三次：做培養(yǎng)基、米樣、接種、初發(fā)酵實(shí)驗(yàn)（第三次應(yīng)在下午 1 時(shí)準(zhǔn)時(shí)開始）第四次：平板計(jì)數(shù)、接種于伊紅培養(yǎng)基中第五次： 革蘭氏染色、 復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn) 第六次：分析結(jié)果10水質(zhì)細(xì)菌學(xué)檢查需要器皿（共分六個(gè)組）培養(yǎng)皿：18副/組，配鐵桶2個(gè)/組試管架：1個(gè)/組（能插入大試管的）大試管：22支/組，配塞子小試管：5支/組，配塞子500毫升礦泉水瓶：2個(gè)/組150毫升三角瓶：4個(gè)/組，配塞子300毫升三角瓶：1個(gè)/桌，配塞子（做伊紅美蘭培養(yǎng)基用）500毫升三角瓶：1個(gè)/桌，配塞子（做細(xì)菌培養(yǎng)基用）100毫升容量瓶：2個(gè)/組（滅菌）（接種水樣用）5毫升槍頭：5支/組（其中需滅菌3支）1毫升槍頭：6支/組（全部火菌）50毫升量筒：1個(gè)/組酒精燈：1個(gè)/組指形試管：4支/組玻璃紙：3張/桌杜氏小管：22支/組鐵絲筐：1個(gè)/組瓷缸：1000毫升1個(gè)/桌500毫升2個(gè)/桌玻璃棒：2支/桌pH廣泛試紙：1個(gè)/桌涼開水：1鍋洗衣粉革蘭氏染色盤：1套