枸杞多糖對地塞米松誘導(dǎo)的小鼠脾臟細胞凋亡的影響

1、枸杞多糖對地塞米松誘導(dǎo)的小鼠脾臟細胞凋亡的影響                        【摘要】  目的 探討枸杞多糖（LBP）對地塞米松（DEX）誘導(dǎo)的小鼠脾臟細胞凋亡的影響。方法 以水提取-乙醇沉淀法制備LBP，分別給予實驗小鼠每天口服LBP 25、50、100 mg,10 d后體外實驗取小鼠脾臟細胞與10-5、10-6、10-7 mol

2、L的DEX共同孵育，6 h后檢測細胞凋亡率；體內(nèi)實驗給予小鼠腹腔注射DEX（25 mg/kg），10 h后取脾臟細胞直接檢測凋亡率。結(jié)果 實驗動物預(yù)先口服LPB 10 d后，可使DEX誘導(dǎo)的小鼠脾臟細胞凋亡率顯著降低，并呈現(xiàn)量效關(guān)系。結(jié)論 LPB的免疫調(diào)節(jié)和促進作用與其對免疫細胞的保護、降低免疫細胞凋亡有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  枸杞多糖; 脾臟細胞; 凋亡; 小鼠Abstract:Objective To study the effect of polysaccharide from lycium barbarum (LBP) on spleen cell apoptosis induc

3、ed with dexamethasone in mice. Methods The Kunming mice were orally administrated with 25, 50, and 100 mg LPB everyday respectively for 10 days. Then the mice were divided into two groups (A groups for in vivo experiment and B groups for in vitro experiment). Spleen cells which was separated from mi

4、ce in group A was incubated with dexamethasone at the doses of 10-5, 10-6, and 10-7molL for 6 hours, then the rates of apoptosis were detected. 10 hours after intraperitoneal injection of dexamethasone at the dose of 25 mg/kg in mice in group B, spleen cells were separated and the rates of apoptosis

5、 were detected immediately. Results Oral administration with LBP for 10 days could significantly lower the apoptosis rates of spleen cells of mice induced with dexamethasone with dosedependent effects. Conclusion The upregulation of LBP on immunofunction is related to its effects of low cell apoptos

6、is.Key words:lycium barbarum; polysaccharide;spleen cell;  apoptosis細胞凋亡(apoptosis)又稱程序性細胞死亡，是細胞生理性死亡的主要形式，在控制細胞增殖和分化、腫瘤的發(fā)生和生長等方面都起著重要的作用，也是機體免疫衰老過程中重要的分子機制之一?？梢哉T發(fā)細胞發(fā)生凋亡的因素很多，本研究以地塞米松與小鼠脾臟細胞共同孵育，誘發(fā)脾臟細胞凋亡為模型，探討枸杞多糖（lycium  barbarium palysacharides, LBP）在體外和體內(nèi)對大鼠脾臟細胞凋亡的影響，現(xiàn)報道如下。  &

7、#160; 1材料與方法1.1材料與主要試劑      枸杞多糖（LBP）：寧夏枸杞，購自廣州市藥材公司，乙醇回流提取，LBP含量為48.6%,冷凍干燥備用。    24孔平底細胞培養(yǎng)板：德國Greiner公司。    實驗動物：健康成年昆明種小鼠,體質(zhì)量1822 g，由中山大學(xué)實驗動物中心提供，雌雄兼用,合格證號99A057。1.2方法              &

8、#160;              2結(jié) 果2.1地塞米松對離體小鼠脾臟細胞的凋亡誘導(dǎo)作用      體外實驗中，與小鼠脾臟細胞共同孵育6 h后，10-5、10-6、10-7molL 的地塞米松均有誘發(fā)小鼠脾臟細胞脾臟細胞凋亡的作用，促進其DNA片段化，表現(xiàn)出明顯的凋亡細胞特征。體內(nèi)實驗中，小鼠腹腔注射地塞米松（25 mg/kg）10 h后,表現(xiàn)出明顯地誘發(fā)小鼠脾臟細胞脾臟細胞凋亡的作用，差異具有極顯著性(P0.0

9、1)。見表1。表1DEX對小鼠脾臟細胞的凋亡誘導(dǎo)作用 略2.2枸杞多糖對地塞米松誘導(dǎo)小鼠脾臟細胞凋亡的影響      將胃飼不同含量枸杞多糖10 d的小鼠脾臟細胞懸液，加入10-6molL地塞米松孵育6 h后，觀察枸杞多糖對小鼠脾臟細胞凋亡的影響，結(jié)果表明，25 mgd枸杞多糖即可去除地塞米松在體外對小鼠脾臟細胞凋亡的誘導(dǎo)作用，實驗組與對照組比較，差異具有極顯著性。 隨著LPB濃度的增加，實驗動物脾臟細胞的凋亡率進一步下降；對胃飼不同含量枸杞多糖10 d的小鼠腹腔注射地塞米松（25 mg/kg）,10 h后觀察枸杞多糖對小鼠脾臟細胞凋亡的調(diào)節(jié)作用，結(jié)果如

10、表2所示，胃飼100 mgd枸杞多糖10 d后,能顯著降低地塞米松對小鼠脾臟細胞凋亡的誘導(dǎo)作用（P0.05）。表2LPB對DEX誘導(dǎo)小鼠脾臟細胞凋亡的影響略3討 論    細胞凋亡是體內(nèi)細胞的一種生理性調(diào)節(jié)機制，它與有絲分裂功能相反，是調(diào)節(jié)細胞群體減少。細胞凋亡不僅在胚胎發(fā)生、器官發(fā)育及保持機體自穩(wěn)狀等過程中至關(guān)重要，而且在控制細胞增殖和分化、腫瘤的發(fā)生和生長以及在機體的免疫調(diào)節(jié)中有重要作用，因此對細胞凋亡的研究引起了人們極大的興趣，并不斷向基因水平深入1，2。 迄今已證實許多因素都可誘導(dǎo)細胞發(fā)生凋亡，本研究結(jié)果進一步證實，無論是腹腔注射或在體外與細胞共同孵育，地

11、塞米松都可以誘導(dǎo)小鼠脾臟細胞出現(xiàn)顯著的凋亡現(xiàn)象，提示糖皮質(zhì)激素對機體免疫細胞具有明顯的抑制作用。    枸杞為傳統(tǒng)中藥之一，研究表明枸杞中含有多種營養(yǎng)成分和微量元素，其主要有效成分為枸杞多糖。枸杞多糖具有廣泛的生物學(xué)作用，包括促進和調(diào)節(jié)機體免疫功能、抗腫瘤、抗輻射3，4等。文獻表明，枸杞多糖對實驗動物的胰島細胞、肝臟細胞、腎臟細胞和心肌細胞等多種細胞有保護作用5。枸杞提取物在體外與實驗動物細胞共同孵育時，能解除糖皮質(zhì)激素對免疫細胞的凋亡誘導(dǎo)作用6。本研究采用地塞米松誘導(dǎo)小鼠脾臟細胞凋亡為模型，證明了在預(yù)先給予實驗動物口服枸杞多糖25、50、100 mg 10 d后

12、，其脾臟細胞對體外與地塞米松共同孵育時所誘導(dǎo)產(chǎn)生的凋亡率明顯降低（P0.01）；將地塞米松給藥方式改為腹腔注射（25 mg/kg）時，預(yù)先口服枸杞多糖100 mg 10 d后，能解除地塞米松對實驗動物脾臟細胞的凋亡誘導(dǎo)作用，使細胞凋亡率明顯降低（P0.05）。枸杞多糖在體內(nèi)和體外對地塞米松誘導(dǎo)脾臟細胞的凋亡，均有明顯的解除作用，提示枸杞多糖對脾臟細胞具有強大的保護作用。枸杞多糖對機體免疫細胞的保護作用，與其免疫促進和免疫調(diào)節(jié)作用有密切關(guān)系，但其機理目前尚不清楚，有待進一步研究。  【參考文獻】  1 蔡宇，余紹蕾，張榮華. 枸杞多糖對染鉛小鼠行為功能保護及腦細胞Fas抗原表達的影響J.環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué),2005,22(6):533.2 李德遠,湯堅,徐現(xiàn)波,等.枸杞多糖對慢性輻射小鼠細胞凋亡及Bcl-2基因表達的影響 J.營養(yǎng)學(xué)報,2005,27(3)：235.3 劉彥平，李積東. 枸杞多糖對小鼠NK細胞和白細胞活性的免疫調(diào)節(jié)作用J.青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2001,22(1):1.4 徐曼艷,王煜飛,張紅峰,等.枸杞多糖對四氧嘧啶損傷離體大