檢驗(yàn)方法驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程STANDARD OPERATING PROCEDURE標(biāo)題檢驗(yàn)方法驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程共7頁(yè)第1頁(yè)制定人頒發(fā)部門GMP辦公室編號(hào)：SOPF004分發(fā)部門質(zhì)量驗(yàn)證小組、質(zhì)量保證部新訂 V替代審核人批準(zhǔn)人生效日期年 月曰目 的：建立檢驗(yàn)方法驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，規(guī)范驗(yàn)證操作。適用范圍：所有檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證。責(zé)任者：質(zhì)量保證部、質(zhì)量控制部程 序：1、檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的基本內(nèi)容檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的基本內(nèi)容包括方案的起草及審批，檢測(cè)儀器的確認(rèn).適用性驗(yàn)證(包括準(zhǔn) 確度試驗(yàn)、精密度測(cè)定.線性范圍試驗(yàn)、專屬性試驗(yàn)等)和結(jié)果評(píng)價(jià)及批準(zhǔn)四個(gè)欠的方而。它 的基本內(nèi)容可以用下圖表示。2、檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的基本步驟首先是制定驗(yàn)

2、證方案，然后對(duì)大型精密儀器進(jìn)行確認(rèn)，最關(guān)鍵的一步是檢驗(yàn)方法的適用性 試驗(yàn)，最后是檢驗(yàn)方法評(píng)價(jià)及批準(zhǔn)。2. 1驗(yàn)證方案的制定檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證方案通常由質(zhì)量驗(yàn)證小組提出。根據(jù)產(chǎn)品的工藝條件、原輔料化學(xué)結(jié)構(gòu)、中間 體、分解產(chǎn)物查閱有關(guān)資料，提出規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)，確定檢查項(xiàng)目，規(guī)定雜質(zhì)限度，即為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草 案。根據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案確定檢查和試驗(yàn)范圍，對(duì)檢驗(yàn)方法擬定具體操作步驟，最后經(jīng)有關(guān) 人員審批方可實(shí)施。2. 2大型精密儀器的確認(rèn)分析測(cè)試中所用的檢測(cè)儀器一般可分為三類(1)普通儀器：崩解儀，折光儀、分析天平、酸度計(jì)、溶點(diǎn)測(cè)定儀、電導(dǎo)儀等:(2)較精密儀器：旋光儀、永停滴定儀、費(fèi)休氏水分測(cè)定儀、自動(dòng)滴定儀、藥物溶出

3、度儀、可共7頁(yè)第2頁(yè)見(jiàn)分光光度計(jì)、電泳儀等；(3)大型精密儀器：紫外分光光度計(jì)、紅外分光光度計(jì)、氣相色譜儀、高效液相色譜儀、薄層 掃描儀等。為了保證分析測(cè)試數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，每臺(tái)檢測(cè)儀器在投入正式使用之前都應(yīng)進(jìn)行確認(rèn)。檢測(cè)儀 器的確認(rèn)是檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的基礎(chǔ)，應(yīng)在其它驗(yàn)證試驗(yàn)開(kāi)始之前首先完成。檢測(cè)儀器確認(rèn)工作內(nèi)容 應(yīng)根據(jù)儀器類型。技術(shù)性能而定，通常包括：安裝確認(rèn)、校正、適用性預(yù)試驗(yàn)和再確認(rèn)。2. 2. 1安裝確認(rèn)同工藝驗(yàn)證中機(jī)械設(shè)備一樣，儀器安裝確認(rèn)的上要內(nèi)容包括如下各點(diǎn)：(1)要登記儀器名稱.型號(hào)。生產(chǎn)廠商的編號(hào)、生產(chǎn)日期.生產(chǎn)廠商名稱，企業(yè)內(nèi)部的固定資產(chǎn) 設(shè)備登記號(hào)及安裝地點(diǎn)：(2)收集匯編和翻譯

4、儀器使用說(shuō)明書和維修保養(yǎng)手冊(cè)；檢查并記錄所驗(yàn)收的儀器是否符合廠方規(guī)定的規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)：檢查并確保有該儀器的使用說(shuō)明書。維修保養(yǎng)手冊(cè)和備件清單：檢查安裝是否恰當(dāng)，氣、電及管路連接是否符合要求：(6)制定儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(S0P)和維修保養(yǎng)制度，建立使用記錄和維修記錄： 制定清洗規(guī)程：明確儀器設(shè)備技術(shù)資抖(圖紙，手冊(cè)，備件清單、各種指南及該機(jī)器設(shè)備有關(guān)的其它文件) 的專管人員及存放地點(diǎn)。除上面提到的內(nèi)容外，在安裝確認(rèn)方案中對(duì)儀器的性能用途應(yīng)有一概述并記錄維修服務(wù)單 位名稱。聯(lián)系人、電話號(hào)碼、傳真號(hào)、銀行帳號(hào)等，以利于日后的維修保養(yǎng)活動(dòng)，這對(duì)大型精 密儀器尤為重要。對(duì)于儀器來(lái)說(shuō)，安裝確認(rèn)中的一項(xiàng)重要內(nèi)容是

5、功能試驗(yàn)。這項(xiàng)工作在安裝結(jié) 束，檢查合格后即可著手進(jìn)行。儀器功能試驗(yàn)足在不使用樣品的前提下，確認(rèn)儀器達(dá)到設(shè)計(jì)要 求，也可認(rèn)為是空載試驗(yàn)。例如氣相色譜儀的程序升溫設(shè)定后能否按設(shè)定程序執(zhí)行，溶出儀轉(zhuǎn) 速能否達(dá)到規(guī)定的性能要求。紫外分光光度計(jì)的吸收度與透光率的轉(zhuǎn)換是否符合要求。高效液 相色譜儀高壓泵過(guò)壓保護(hù)是否起作用等，這是檢查儀器安裝后能達(dá)到規(guī)定的性能指標(biāo)。對(duì)普通 儀器進(jìn)行的功能試驗(yàn)比較簡(jiǎn)單，有的除儀器校正外，沒(méi)有其它特殊的功能試驗(yàn)要做，如酸度 計(jì)，電導(dǎo)儀，折光儀等。不同的儀器有不同的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)根據(jù)儀器使用說(shuō)明書的要求進(jìn)行試 驗(yàn)。2. 2. 2校正校正是儀器確認(rèn)及檢驗(yàn)方法驗(yàn)證中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，應(yīng)

6、當(dāng)在驗(yàn)證試驗(yàn)以前進(jìn)行校正。紫外 分光光度計(jì)校正包括波長(zhǎng)校正、吸收度測(cè)試、準(zhǔn)確度測(cè)試、雜散光檢查。氣相色譜儀與高效液相色譜儀均要求做系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。在規(guī)定的色譜條件下測(cè)定色譜柱的 最小理論塔板數(shù)。分離度和拖尾因子，并規(guī)定變異系數(shù)應(yīng)不大于2%。對(duì)于化學(xué)檢驗(yàn)中使用的計(jì)量?jī)x器包括容量瓶、移液管、滴定管、分析天平亦均應(yīng)校正。共7頁(yè)第4頁(yè)苑IH要求費(fèi)求不要求注：*表示需根據(jù)實(shí)驗(yàn)特性決定是否作要求。其中：類型I：指用于測(cè)定原料藥中主要成分或制劑中活性組份（包括防腐劑）的定量分析方法。類型II ：指用于測(cè)定原料藥中雜質(zhì)或制劑中降解產(chǎn)物的分析方法，包括定量分析和限度試驗(yàn)。類型in：用于測(cè)定性能特性（如溶解度、溶

7、出度）的分析方法。類型N：鑒別試驗(yàn)。專屬性試驗(yàn)如一種方法不夠?qū)伲捎闷渌治龇椒ㄓ枰匝a(bǔ)充。在儀器確認(rèn)的基礎(chǔ)上，應(yīng)著手驗(yàn)證檢驗(yàn)方法的適用性。適用性驗(yàn)證內(nèi)容包括準(zhǔn)確度試驗(yàn)、精 密度測(cè)定、線性范闈試驗(yàn)、專屬性試驗(yàn)四個(gè)方面。3. 1準(zhǔn)確度試驗(yàn)準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般以回收率（）表示，也 可用平均值與真值間的差異及其可信限表示。測(cè)量值與真值愈接近，測(cè)量值的誤差愈小，測(cè)量就 愈準(zhǔn)確。準(zhǔn)確度的測(cè)定至少要取方法范圍內(nèi)的3個(gè)濃度級(jí)別。每個(gè)濃度級(jí)別至少要3個(gè)結(jié)果。9個(gè)結(jié)果 的精密度應(yīng)符合要求，回收率均應(yīng)在限度內(nèi)。對(duì)于常量分析，回收率至少應(yīng)在95%105%之間：對(duì)于微量或半微量

8、分析，回收率可根據(jù)儀器本身?xiàng)l件適當(dāng)放寬。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)建立。在準(zhǔn)確度試驗(yàn)中有三種試驗(yàn)方法即對(duì)照試驗(yàn)、回收試驗(yàn)，空白試驗(yàn)。（1）對(duì)照試驗(yàn)：把標(biāo)準(zhǔn)樣品或純凈物質(zhì)作樣品，以所用的方法對(duì)它進(jìn)行定量分析，從分析結(jié) 果與標(biāo)準(zhǔn)樣品或純凈物的含量差值就可知道誤差，這種試驗(yàn)叫對(duì)照試驗(yàn)。（2）回收試驗(yàn)：在樣品中加入已知含量的被測(cè)組分，用同一方法進(jìn)行定量分析，由分析結(jié)果 中被測(cè)組分的增大值與加入量之差就可知道誤差，這種試驗(yàn)叫做回收試驗(yàn)。（3）空白試驗(yàn)：用空白代替樣品，以所用方法進(jìn)行定量分析，從分析結(jié)果減去空白值以提高 其準(zhǔn)確度，這樣的試驗(yàn)叫做空白試驗(yàn)。在檢驗(yàn)方法驗(yàn)證中，方法的準(zhǔn)確度通常用回收率（%）表示。原

9、料藥用已知含量的對(duì)照品或 標(biāo)準(zhǔn)品作樣品，以所用的方法進(jìn)行檢驗(yàn)。而制劑是用已知含量的原料和處方中相應(yīng)的輔料按比例 模擬配制成制劑后做試驗(yàn)，取樣量應(yīng)在標(biāo)示量的90. 0%110. 0%范闈內(nèi)。原料藥的含量分析：通過(guò)分析已知含量的參比標(biāo)準(zhǔn)來(lái)確定此方法的準(zhǔn)確度?；蛘甙汛朔椒ǖ?分析結(jié)果與另一有確定準(zhǔn)確度的方法的分析結(jié)果進(jìn)行比較來(lái)確定準(zhǔn)確度。制劑中各組份的含量分析：按制劑處方取適量各組份進(jìn)行有機(jī)混合得一混合物，在方法的范 國(guó)內(nèi)，往此混合物中加入己知量的被分析物進(jìn)行分析，從而確定方法的準(zhǔn)確度。若不可能得到制 劑中所有組份的樣品，可用以下方法確定準(zhǔn)確度：a.往制劑中加入巳知量的被分析物：b.將此方法的分析結(jié)

10、果與另一有確定準(zhǔn)確度的方法的分析結(jié)果進(jìn)行比較。雜質(zhì)的定量分析：通過(guò)往樣品中加入已知量的雜質(zhì)來(lái)確定。共7頁(yè)第6頁(yè)若不可能得到某種雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的參比標(biāo)準(zhǔn)品，可把此方法的分析結(jié)果與另一已驗(yàn)證的 方法的結(jié)果進(jìn)行比較來(lái)確定。若雜質(zhì)為未知物，可通過(guò)計(jì)算雜質(zhì)與主藥響應(yīng)值的比值來(lái)確定：若響應(yīng)因子（等量的雜質(zhì)和 主藥的響應(yīng)比值）是已知的，應(yīng)使用響應(yīng)因子進(jìn)行計(jì)算。3. 2精密度測(cè)定待驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法還必須通過(guò)精密度測(cè)定試驗(yàn)。精密度系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè) 均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度，即一組測(cè)量值彼此符合的程度。測(cè)量值 彼此愈接近，測(cè)量值的偏差愈小，測(cè)量就愈精密。所以也稱為重現(xiàn)性，亦稱為變

11、異系數(shù)，一般 可用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。但是測(cè)量的精密度不能說(shuō)明測(cè)量值與真值的關(guān)系， 亦即精密度高并不等于準(zhǔn)確度就一定高。精密的測(cè)量值不一定是準(zhǔn)確的，因?yàn)橐饻y(cè)量值遠(yuǎn)離 真值的誤差會(huì)對(duì)一系列的測(cè)量發(fā)生相同的影響，因而不影響精密度。對(duì)常用的檢驗(yàn)方法來(lái)說(shuō)，至少應(yīng)使用樣品（每個(gè)樣品均應(yīng)經(jīng)過(guò)從樣品制備到最終測(cè)定的過(guò)程） 測(cè)定6次。一般地，對(duì)于化學(xué)分析方法，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于1. 0%；對(duì)于儀器分析方法， RSD應(yīng)不大于2. 0%或根據(jù)儀器自身參數(shù)確定。不僅要測(cè)定一天內(nèi)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差，而且還應(yīng)測(cè)定 不同測(cè)定日之間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差，一般要求做平行試驗(yàn)4次以上，進(jìn)行計(jì)算。 日內(nèi)、日間相對(duì)標(biāo)

12、準(zhǔn)差應(yīng)接近。在不同實(shí)驗(yàn)室，用不同廠商牌號(hào)的儀器（儀器性能試驗(yàn)均達(dá)到某一規(guī)定指標(biāo)），以 同一檢驗(yàn)方法分析同一樣品，從分析結(jié)果采比較它們相互一致的程度稱之為再現(xiàn)性試驗(yàn)（協(xié)作分 析測(cè)試），這是以往法定檢驗(yàn)方法常用的復(fù)核檢驗(yàn)方法。例如紫外分光光度法中吸收系數(shù)及小、 的確定，通過(guò)5個(gè)以上實(shí)驗(yàn)室分析，測(cè)定結(jié)果符合數(shù)理統(tǒng)計(jì)要求，才能采納使用。3. 3線性范圍試驗(yàn)線性是指所用分析方法在給定范闈內(nèi)獲取與樣品中供試物濃度成正比的試驗(yàn)結(jié)果的能力。 所謂范闈是指利用給定分析方法取得精密度、準(zhǔn)確度、線性均符合要求的供試物濃度的變化范 圍（最大值與最小值間的間隔），通常用百分?jǐn)?shù)或mg/ml表示。在檢驗(yàn)過(guò)程中取樣量或樣品濃

13、度是允許在一定范圍內(nèi)變化的，測(cè)定的結(jié)果也應(yīng)隨著取樣量 或樣品濃度成正比的變化，這樣的檢驗(yàn)方法才能達(dá)到準(zhǔn)確度和精密度的要求。取樣量在一定范 圍內(nèi)變化時(shí)，測(cè)定含量的結(jié)果也成正比的變化，這樣的取樣范圍稱之為線性范圍。在紫外分光 光度法中樣品濃度與吸收度成正比關(guān)系，線性范闈寬，用重鋁酸鉀溶液作儀器吸收度的準(zhǔn)確度 檢查中采用與規(guī)定吸收系數(shù)比較。絕大多數(shù)的品種含量測(cè)定中也采用吸收系數(shù)法計(jì)算含量。氣 相色譜和高效液相色譜分析中進(jìn)樣量與峰而積的線性范圍視檢測(cè)器的種類和具體品種而異。檢驗(yàn)方法的準(zhǔn)確度是隨著所測(cè)定的含量范圍而發(fā)生變化的。超過(guò)一定的范圍，準(zhǔn)確度就受 影響。線性的確定要在標(biāo)準(zhǔn)的。150%范圍內(nèi)至少使用

14、5個(gè)濃度。濃度與其對(duì)應(yīng)的測(cè)定值經(jīng)二 次回歸得到相關(guān)系數(shù)r,對(duì)于化學(xué)分析，相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0. 9990：對(duì)于儀器分析，相關(guān)系 數(shù)值不小于0. 990.對(duì)此的任何偏離都將說(shuō)明這一檢驗(yàn)方法在這一濃度范圍是不適用的，在這種情況下, 應(yīng)該修改檢驗(yàn)方法。線性范圍是用實(shí)驗(yàn)證實(shí)樣品中含有此范圍內(nèi)濃度的樣品時(shí)，共7頁(yè)第6頁(yè)能符合規(guī)定的準(zhǔn)確度、精密度和線性的要求。具體要求如下:現(xiàn) II含敬酒定雜質(zhì)測(cè)定含量:均勻度溶出慢他相對(duì)P樣品標(biāo)御80% y8 外50% 720%20%3. 4專屬性試驗(yàn).專屬性是指在樣品介質(zhì)中有其它組份共存時(shí)，檢驗(yàn)方法對(duì)供試物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力。定吐分析（鑒別試驗(yàn)）：需證明（可與一已知參

15、比物進(jìn)行對(duì)照）當(dāng)樣品中含有被分析物時(shí)呈陽(yáng) 性反應(yīng)，不含被分析物時(shí)呈陰性反應(yīng)。必要時(shí)，要證明與被分析物結(jié)構(gòu)相似或相近的物質(zhì)不呈 陽(yáng)性反應(yīng)。雜質(zhì)：取含一定雜質(zhì)量的樣品進(jìn)行分析，證明其具有適宜的準(zhǔn)確度和精密度。含量分析：加入一定量的雜質(zhì)或賦形劑至產(chǎn)品中，通過(guò)分析證明結(jié)果不受影響。若雜質(zhì)或 降解產(chǎn)物為未知物，可將樣品在一定的光、熱、濕度、酸堿度或氧化劑等條件下存放，而后將 此分析方法與藥典方法或經(jīng)驗(yàn)證的方法的結(jié)果進(jìn)行比較。含量分析可比較結(jié)果數(shù)據(jù)，譜圖可比 較圖譜的形狀及結(jié)構(gòu)。檢驗(yàn)方法的專屬性試驗(yàn)應(yīng)根據(jù)被測(cè)樣品中主藥的中間體或可能的分解產(chǎn)物以及所用的輔料 對(duì)檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的影響進(jìn)行試驗(yàn)。為排除主藥的中間體

16、或可能的分解產(chǎn)物、輔料對(duì)主藥測(cè)定的 干擾，定量測(cè)定分解產(chǎn)物或雜質(zhì)時(shí)用氣相色譜法或高效液相色譜法已成為常用的測(cè)定方法。這 足因?yàn)闅庀嗌V、高效液相色譜可利用不同填料，選擇不同的流動(dòng)相，采用程序升溫或梯度淋 洗，把分解產(chǎn)物或雜質(zhì)分離出來(lái)，氣相色譜和高效液相色譜對(duì)分解產(chǎn)物或雜質(zhì)有很好的選擇性， 其原因也在于此。3. 5檢測(cè)限檢測(cè)限用以表示測(cè)量方法在所達(dá)條件下對(duì)樣品中供試物的最低檢出濃度，無(wú)需定量測(cè)定只 需指出高于或低于該規(guī)定濃度即可，常用百分?jǐn)?shù)，mg/ml或mg/L表示。非儀器分析方法：通過(guò)已知濃度的樣品分析來(lái)確定可檢出的最低水平作為檢測(cè)限。儀器分析方法：可用已知濃度的樣品與空白試驗(yàn)對(duì)照，以信噪比為

17、2： 1或3： 1來(lái)確定檢 測(cè)限的最低水平：也可通過(guò)多次空白試驗(yàn)，求得其背景響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)差，乘以2或3,作為檢測(cè) 限的估計(jì)值。不論用哪種方法，均需制備相應(yīng)檢測(cè)限濃度的樣品，反復(fù)測(cè)試來(lái)進(jìn)行確定。3. 6定量限定量限是指在樣品介質(zhì)中可定量測(cè)得的某一物質(zhì)的最低水平的參數(shù)，例如原料藥中的雜質(zhì) 或制劑中的降解產(chǎn)物等。定量限規(guī)定的最低測(cè)得濃度應(yīng)符合一定的精密度和準(zhǔn)確度的要求。定量限用百分?jǐn)?shù)、mg/ml或u g / ml表示o對(duì)于非儀器分析方法，與檢測(cè)限的非儀器分析方法所用方法相同，只足所得結(jié)果需符合一 定的準(zhǔn)確度和精密度；對(duì)于儀器分析方法，將多次空白試驗(yàn)測(cè)得的背景響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)差，乘以共7頁(yè)第7頁(yè)10,作為定量

18、限的估計(jì)值，然后配制相應(yīng)定量限濃度的樣品，反復(fù)測(cè)試來(lái)進(jìn)行確定。3. 7應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題在檢驗(yàn)方法的適用性驗(yàn)證中，最重要的是準(zhǔn)確度、精密度。為了順利完成驗(yàn)證試驗(yàn)，還 應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：(1)取樣和稱量。分析檢驗(yàn)所使用的部分樣品應(yīng)該代表整個(gè)抽取樣品，理想的樣品能代表整 個(gè)批，即樣品的這一部分和其它部分應(yīng)具有同一性，樣品和相應(yīng)的批也應(yīng)該具有同一性，這就是 我們常說(shuō)的樣品的代表性。可以用這樣的方法來(lái)檢查樣品的代表性。將某一樣品測(cè)定得到的精密度與同一批號(hào)其它樣品 測(cè)得的精密度數(shù)據(jù)加以對(duì)比，不相符合表示樣品的代表性存在問(wèn)題，需進(jìn)一步調(diào)查原因。稱量的準(zhǔn)確與否對(duì)分析檢驗(yàn)的成敗起著決定性的作用，為保證稱量的準(zhǔn)確，除了定期檢查 校驗(yàn)分析天平外，應(yīng)考慮稱量使用的天平等級(jí)，稱取幾亳克的樣品或?qū)φ掌?，必須用十萬(wàn)分之 一的分析天平。(2)分析檢驗(yàn)中對(duì)照試驗(yàn)、空白試驗(yàn)應(yīng)同時(shí)進(jìn)行；在復(fù)核測(cè)定中，分析檢